專(zhuān)利名稱(chēng)：防治小麥赤霉病的地衣芽孢桿菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物菌劑，具體地涉及防治小麥赤霉病的地衣芽孢桿菌及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
禾谷鐮刀菌(Fusarium graminearum),又稱(chēng)禾谷鐮孢,可引起小麥、大麥、水稻、燕麥的穗枯或“穗瘡痂”病和玉米的莖腐病與穗腐爛病，也稱(chēng)為赤霉病。禾谷鐮刀菌引起的小麥赤霉病是世界性流行病害。小麥?zhǔn)艿胶坦如牭恫【那秩竞?，病穗上往往出現(xiàn)粉紅色或橘紅色的霉?fàn)钗铮虼吮环Q(chēng)為赤霉病。赤霉病是溫暖潮濕麥區(qū)廣泛發(fā)生的一種病害，已在世界上五大洲30多個(gè)國(guó)家發(fā)生和流行。近年來(lái)，隨著全球氣候的變暖，還有蔓延擴(kuò)散的趨勢(shì)。在我國(guó)，小麥赤霉病造成的損失僅次于小麥條銹病，且分布范圍廣泛。在世界范同內(nèi)，赤霉病在美國(guó)中北 部、加拿大南部、歐洲和南美地區(qū)都呈蔓延趨勢(shì)。赤霉病會(huì)造成糧食嚴(yán)重減產(chǎn)和籽粒品質(zhì)下降；同時(shí)，感病籽粒帶有真菌毒素，導(dǎo)致小麥不適于磨粉和食用，也不能當(dāng)作飼料麥銷(xiāo)售，從而造成雙重的經(jīng)濟(jì)損失。隨著化學(xué)農(nóng)藥不斷施用所造成的病原菌抗藥性產(chǎn)生、耐藥性增強(qiáng)和農(nóng)藥殘留等問(wèn)題的出現(xiàn)，赤霉病的生物防治的優(yōu)點(diǎn)逐漸顯現(xiàn)，禾谷鐮刀菌拮抗菌株的開(kāi)發(fā)和抗菌株生物防治的研究已成為熱點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種地衣芽孢桿菌及其在防治小麥赤霉病中的應(yīng)用。本發(fā)明從活性污泥中，分離純化得到地衣芽孢桿菌Bacillus licheniformis UTM110菌株。UTMl 10菌株于2013年I月8日保存于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(簡(jiǎn)稱(chēng)CGMCCJia:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，郵編 100101)，保藏號(hào)=CGMCC N0.7098。所述地衣芽孢桿菌UTM 110菌株的鑒定特征是:菌落形狀不規(guī)則，具有波浪狀邊緣，表面粗糙不透明，有粘液珠，污白色；革蘭氏陽(yáng)性桿菌，能運(yùn)動(dòng)；芽孢橢圓或柱狀，位于菌體中央或稍偏。SEQ ID N0.1為地衣芽孢桿菌UTM 110的16S rDNA序列。所述菌株通過(guò)R2A培養(yǎng)基(蛋白胨0.5g,淀粉0.5g,葡萄糖0.5g,酵母粉0.5g,干酪素水解物0.5g，磷酸氫二鉀0.3g，丙酮酸鈉0.3g，硫酸鎂0.024g,水1L，瓊脂粉20%)分尚培養(yǎng)。生產(chǎn)菌株采用LB培養(yǎng)基(蛋白胨10g，酵母粉10g，氯化鈉IOg,水1L)，28_35°C，培養(yǎng)24小時(shí)，發(fā)酵液5000rpm離心5分鐘，得到上清液即可。本發(fā)明還提供一種含有所述地衣芽孢桿菌UTM 110的菌劑。所述菌劑的制備方法包括以下步驟:接種地衣芽孢桿菌UTM 110于LB培養(yǎng)液培養(yǎng)基中，置于28-35°C下培養(yǎng)24小時(shí)。其他培養(yǎng)基也可以使用，培養(yǎng)溫度及時(shí)間可做適當(dāng)調(diào)整，其他培養(yǎng)如R2A、PDA、KB等。擴(kuò)繁后的菌液可做成水劑或粉劑，向有機(jī)肥中添加。菌劑含有地衣芽孢桿菌UTM 110的活菌數(shù)為108/ml。
本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明菌株經(jīng)平板對(duì)峙實(shí)驗(yàn)證實(shí)該地衣芽孢桿菌能夠有效抑制谷鐮刀病菌的生長(zhǎng)，環(huán)境安全性好，經(jīng)發(fā)酵后可加入有機(jī)肥中，作為的微生物肥料使用，也可作為好氧堆肥的微生物菌種。


圖1為地衣芽孢桿菌UTMllO菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)；圖2為地衣芽孢桿菌UTMllO光學(xué)顯微鏡照片；圖3為地衣芽孢桿菌UTMllO對(duì)禾谷鐮刀菌絲的抑制作用，A顯示地衣芽孢桿菌UTMllO對(duì)禾谷鐮刀菌絲較強(qiáng)的抑制作用，B為陰性對(duì)照。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。在不背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對(duì)本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。實(shí)施例1菌株的分離和培養(yǎng)取污水處理廠活性污泥l(xiāng)g，溶于IOml無(wú)菌蒸餾水中，梯度稀釋后涂布于R2A培養(yǎng)基(蛋白胨0.5g，淀粉0.5g，葡萄 糖0.5g，酵母粉0.5g，干酪素水解物0.5g，磷酸氫二鉀
0.3g，丙酮酸鈉0.3g，硫酸鎂0.024g,水1L，瓊脂粉20%), 28°C培養(yǎng)，分離單菌落。將禾谷鐮刀菌接種在PDA平板上(去皮馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂10g，水1000ml)，28°C培養(yǎng)5-7天后備用。挑取活性污泥分離平板上的細(xì)菌單菌落接種到20ml LB培養(yǎng)液中，置于28°C下150rpm/min的搖床上發(fā)酵培養(yǎng)10小時(shí)，取100 μ I發(fā)酵液涂布于LB瓊脂平板上，28°C培養(yǎng)10小時(shí)。使用直徑4_打孔器取I塊禾谷鐮刀菌菌塊，置于PDA平板中央，用打孔器在平板四周打4個(gè)孔，注入待測(cè)拮抗菌發(fā)酵液上清液100 μ L，28°C下培養(yǎng)，觀察結(jié)果，篩選拮抗效果好的單菌落，進(jìn)行菌種鑒定。實(shí)施例2菌株的鑒定1、分離方法UTMllO菌株，分離于活性污泥。2、菌株特征經(jīng)廣州工業(yè)微生物檢測(cè)中心鑒定為地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis),菌株編號(hào)UTM110。該菌株的培養(yǎng)特征是菌落形狀不規(guī)則，具有波浪狀邊緣，表面粗糙不透明，有粘液珠，污白色；革蘭氏陽(yáng)性桿菌，能運(yùn)動(dòng)；芽孢橢圓或柱狀，位于菌體中央或稍偏。SEQID N0.1地衣芽孢桿菌UTMl 10的16S rDNA序列。圖1為地衣芽孢桿菌UTMllO菌株的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)。圖2為地衣芽孢桿菌UTMllO光學(xué)顯微鏡照片。3、菌株生化檢測(cè)指標(biāo)
權(quán)利要求
1.地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis) UTM110，其保藏號(hào)為=CGMCC N0.7098。
2.含有權(quán)利要求1所述地衣芽孢桿菌UTMllO的菌劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的菌劑，其特征在于，含有地衣芽孢桿菌UTMllO的活菌數(shù)為108/mlo
4.權(quán)利要求2或3所述菌劑的制備方法，其特征在于，在LB培養(yǎng)基中發(fā)酵地衣芽孢桿菌UTMllO制得。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述發(fā)酵條件為:28-35°C下培養(yǎng)24小時(shí)。
6.權(quán)利要求1所述地衣芽孢桿菌UTMllO或權(quán)利要求2或3所述菌劑在防治小麥赤霉病中的應(yīng)用 。
全文摘要
本發(fā)明涉及防治小麥赤霉病的地衣芽孢桿菌及其應(yīng)用。所述地衣芽孢桿菌保藏號(hào)為CGMCC No.7098。本發(fā)明的地衣芽孢桿菌能夠有效抑制禾谷鐮刀病菌的生長(zhǎng)，環(huán)境安全性好，可作為的微生物肥料使用，也可作為好氧堆肥的微生物菌種。
文檔編號(hào)A01N63/00GK103184178SQ201310076629
公開(kāi)日2013年7月3日 申請(qǐng)日期2013年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2013年3月11日
發(fā)明者劉永躍, 周順桂, 許宜北, 汪涌 申請(qǐng)人:大地綠源環(huán)?？萍?北京)有限公司