一種含有丁酸梭菌的鯽魚飼料的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物飼料領(lǐng)域，具體涉及一種含有丁酸梭菌的鯽魚飼料，將丁酸梭菌與鯽魚基礎(chǔ)飼料按質(zhì)量比為0.0001:1～0.0005:1的比例添加。不僅可以促進(jìn)鯽魚腸道蛋白消化吸收，提高鯽魚增重率，減少病患，還可以減少鯽魚糞便中氨氮含量和飼料資源的浪費(fèi)，促進(jìn)我國(guó)水產(chǎn)業(yè)的健康養(yǎng)殖和高效生產(chǎn)。
【專利說明】一種含有丁酸梭菌的鯽魚飼料【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及微生物在生物飼料中的應(yīng)用，具體地說，涉及一種含有丁酸梭菌的鯽魚詞料。
【背景技術(shù)】
[0002]蛋白質(zhì)是決定魚類生長(zhǎng)的關(guān)鍵營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，也是飼料成本花費(fèi)最大的部分。水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物大多數(shù)都要求較高的飼料蛋白質(zhì)水平，一般蛋白質(zhì)原料在水產(chǎn)動(dòng)物飼料配方中的比重占到50%以上。魚類對(duì)飼料中蛋白質(zhì)的消化吸收水平不僅會(huì)影響魚類的生長(zhǎng)性能，而且還關(guān)系到魚類糞便中氮的含量以及對(duì)環(huán)境的污染程度。因此，研究開發(fā)能提高魚類對(duì)飼料中蛋白質(zhì)的消化吸收能力，從而使飼料配方得到優(yōu)化的新型促蛋白吸收調(diào)節(jié)劑具有重要的科學(xué)意義和應(yīng)用前景。
[0003]為了維持生存和正常生長(zhǎng)，動(dòng)物必須從食物中不斷地?cái)z入蛋白質(zhì)，飼料蛋白質(zhì)對(duì)魚類的必要性不能被其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代替。魚類飼料中的蛋白質(zhì)在魚體內(nèi)經(jīng)胃蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶等作用最終降解成短鏈的小肽和游離氨基酸，然后被小肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體和氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞內(nèi)吸收利用，特別是蛋白質(zhì)的消化產(chǎn)物60%以上是以小肽的形式被動(dòng)物腸道小肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體PepTl蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)，因此，鯽魚腸道PepTlmRNA表達(dá)水平反映其對(duì)蛋白消化吸收的能力。
[0004]血清中一些生理生化指標(biāo)可以反映魚類機(jī)體蛋白質(zhì)代謝的狀況。血清總蛋白、白蛋白和球蛋白的含量與機(jī)體蛋白質(zhì)的吸收`和代謝狀況有關(guān)；谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶是廣泛存在于魚類線粒體中重要的氨基酸轉(zhuǎn)氨酶，當(dāng)魚類肝臟細(xì)胞沒有被損傷時(shí)，谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的提高可反映出機(jī)體蛋白質(zhì)合成和分解代謝的增強(qiáng)。
[0005]魚類飼料干物質(zhì)和蛋白質(zhì)表觀消化率的提高直接反映魚類對(duì)飼料中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和蛋白質(zhì)消化吸收率的增強(qiáng)。蛋白代謝能影響蛋白消化吸收，蛋白消化吸收的狀況直接關(guān)系到魚類生長(zhǎng)的好壞。而魚類生長(zhǎng)的好`壞又影響魚類養(yǎng)殖效益的提高。鯽魚蛋白飼料的消化吸收，以及調(diào)節(jié)鯽魚蛋白飼料消化吸收的飼料添加劑篩選已成為淡水魚類營(yíng)養(yǎng)與飼料研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)，迫切需要篩選能夠增強(qiáng)腸道消化吸收相關(guān)酶和有機(jī)酸的分泌，以及功能基因表達(dá)的飼料添加劑，從而利用該飼料添加劑優(yōu)化鯽魚飼料配方，以此獲得促蛋白質(zhì)消化吸收的鯽魚飼料添加劑及其相應(yīng)飼料。
[0006]丁酸梭菌屬于芽孢桿菌科，梭菌屬，革蘭氏陽性，孢子卵圓，偏心或次端生，室溫生長(zhǎng)，耐酸和高溫。在魚類飼料中，丁酸梭菌與飼料原料配伍對(duì)動(dòng)物蛋白消化吸收和增重產(chǎn)生作用效果，這種作用效果可以從魚類對(duì)蛋白消化吸收、蛋白代謝相關(guān)血清生化指標(biāo)、以及小肽轉(zhuǎn)運(yùn)載體PepTl基因的表達(dá)等指標(biāo)表現(xiàn)出來，但是丁酸梭菌與飼料原料配伍具有劑量效應(yīng)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種含有丁酸梭菌的鯽魚飼料，以及丁酸梭菌作為促蛋白吸收調(diào)節(jié)劑在促進(jìn)鯽魚腸道蛋白消化吸收、提高鯽魚增重率上的應(yīng)用。
[0008]本發(fā)明首先提供了一種含有丁酸梭菌的鯽魚飼料，所述飼料為將丁酸梭菌與鯽魚基礎(chǔ)飼料按質(zhì)量比為0.0001:1?0.0005:1的比例添加。
[0009]其中，所述鯽魚基礎(chǔ)飼料的原料組份按重量百分比為:豆柏20%、麩皮8%、次粉6%、一級(jí)面粉7%、玉米酒糟6%、中國(guó)菜柏18%、棉柏14%、全脂魚粉6%、肉骨粉4%、棕櫚柏3%、一級(jí)豆油3%、氯化膽堿0.5%、磷酸二氫鈣1%、三氧化二鉻0.5%、預(yù)混料2%、大蒜素0.05%、防霉劑
0.1%、乙氧基喹啉0.05%、膨潤(rùn)土 0.8%。
[0010]進(jìn)一步地，所述丁酸梭菌的活菌數(shù)為1.0X 108cfu/g。
[0011]進(jìn)一步地，所述丁酸梭菌從土壤或動(dòng)物糞便中分離培養(yǎng)，包括如下步驟:
[0012]I)制備土壤或糞便樣品稀釋液:以無菌操作，將樣品加入裝有無菌水的錐形瓶中，振蕩10-20分鐘，使樣品與水充分混合，再稀釋成濃度分別為10_4、10_5和10_6的樣品稀釋液，分別加到無菌培養(yǎng)皿內(nèi)；
[0013]2)平板的制作:將固體培養(yǎng)基融化，待冷卻至45_50°C左右，分別傾入到已盛有10_4、10_5、IO-6稀釋液的無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，迅速輕輕搖勻，靜置凝固；凝固后將平板倒置于30°c恒溫箱中，培養(yǎng)24-48小時(shí)，此菌即在所固定的位置長(zhǎng)成肉眼能見的菌落；
[0014]3 )接種:平板培養(yǎng)48h后，用接種針挑取單個(gè)菌落插入深層固體培養(yǎng)基內(nèi)，再沿原路拔出，在28-32°C溫度下培養(yǎng)48h后轉(zhuǎn)入4-7°C冰箱中保藏。
[0015]更進(jìn)一步地,所述步驟I)具體為以無菌操作，稱取樣品lg，加入裝有99ml無菌水的錐形瓶中，振蕩10-20分鐘，使樣品與水充分混合，即成10_2樣品稀釋液，然后用無菌移液管吸取9ml無菌水的試管內(nèi)，制成10_3的稀釋液，用同樣方法再制成10_4、10_5、10_6的稀釋液，稀釋完畢后，可用原來的移液管，從菌液濃度最小的10_6的稀釋液開始吸取lmllO—6稀釋液，加到相應(yīng)編號(hào)10_6的無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，以相同方法分別吸取lmllO'lO—4的稀釋液加到相應(yīng)編號(hào)為10_5、10_4的無菌培養(yǎng)皿內(nèi)。
[0016]本發(fā)明還提供了前述飼料在促進(jìn)鯽魚腸道蛋白消化吸收中的應(yīng)用。
[0017]本發(fā)明還提供了前述飼料在提高鯽魚增重率中的應(yīng)用。
[0018]本發(fā)明還提供了丁酸梭菌在促進(jìn)鯽魚腸道PepTl基因的表達(dá)上的應(yīng)用。
[0019]本發(fā)明還提供了 丁酸梭菌在促進(jìn)鯽魚腸道蛋白消化吸收中的應(yīng)用。
[0020]本發(fā)明還提供了丁酸梭菌在提高鯽魚增重率中的應(yīng)用。
[0021]本發(fā)明的有益效果在于:
[0022]本發(fā)明提出一種含有丁酸梭菌的鯽魚飼料，丁酸梭菌作為促蛋白吸收添加劑，不僅可以促進(jìn)鯽魚的生長(zhǎng)，減少病患，還可以減少鯽魚糞便中氨氮含量和飼料資源的浪費(fèi)，促進(jìn)我國(guó)水產(chǎn)業(yè)的健康養(yǎng)殖和高效生產(chǎn)。
[0023]丁酸梭菌在動(dòng)物腸道中可以分泌蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶和有機(jī)丁酸等物質(zhì)，能促進(jìn)動(dòng)物腸道細(xì)胞增殖，改善腸道消化吸收功能，同時(shí)能提高鯽魚蛋白代謝水平及其相關(guān)基因的表達(dá)。同時(shí)，丁酸梭菌由于無污染、無殘留和無耐藥性，也成為較具潛力的抗生素替代品之一。
[0024]本發(fā)明的有益效果在于:本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)了丁酸梭菌作為鯽魚蛋白消化吸收促進(jìn)劑的用途，并研究得到丁酸梭菌作為蛋白消化吸收促進(jìn)劑在鯽魚飼料中的最適添加劑量，發(fā)現(xiàn)其能提聞?dòng)|魚蛋白代謝相關(guān)血清生化指標(biāo)和小妝轉(zhuǎn)運(yùn)載體PepTl基因的表達(dá)。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0025]圖1為丁酸梭菌對(duì)鯽魚腸道PepTl基因相對(duì)表達(dá)量的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0026]以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
[0027]實(shí)施例1 丁酸梭菌作為促蛋白吸收調(diào)節(jié)劑制備鯽魚飼料
[0028]丁酸梭菌由大北農(nóng)集團(tuán)提供，在鯽魚基礎(chǔ)飼料中分別添加0.0g/kg、0.lg/kg、
0.25g/kg、0.5g/kg、l.0g/kg五種劑量，以混合方式直接添加，配制5種等氮等能的飼料(粗蛋白32.06%，粗脂肪6.33%)，丁酸梭菌的活菌數(shù)為1.0X 108cfu/g。
[0029]鯽魚基礎(chǔ)飼料配方如下:各原料組份按重量百分比為:豆柏20%、麩皮8%、次粉6%、一級(jí)面粉7%、玉米酒糟(DDGS) 6%、中國(guó)菜柏18%、棉柏14%、國(guó)產(chǎn)全脂魚粉6%、肉骨粉4%、棕櫚柏3%、一級(jí)豆油3%、氯化膽堿0.5%、磷酸二氫鈣1%、三氧化二鉻0.5%、預(yù)混料2%、大蒜素
0.05%、防霉劑0.1%、乙氧基喹啉0.05%、膨潤(rùn)土 0.8%。
[0030]實(shí)施例2 丁酸梭菌對(duì)鯽魚生長(zhǎng)、蛋白質(zhì)消化吸收的影響研究
[0031]試驗(yàn)材料:實(shí)施例1所制備的添加有五種不同劑量丁酸梭菌的鯽魚飼料。
[0032]試驗(yàn)地點(diǎn):養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)在長(zhǎng)沙學(xué)院產(chǎn)學(xué)研基地進(jìn)行，室內(nèi)循環(huán)流水控溫玻璃水族缸規(guī)格為 120cm x80cm x80cm。
[0033]試驗(yàn)設(shè)計(jì):選用初始體質(zhì)量(2.0±0.04) g，大小規(guī)格一致和體質(zhì)健壯的同批孵化芙蓉鯽作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，進(jìn)行8周的攝食生長(zhǎng)試驗(yàn)。共設(shè)5個(gè)處理，每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20尾魚。
[0034]試驗(yàn)環(huán)境與條件:實(shí)驗(yàn)開始后，每日于8:30，12:30，16:30投喂3次，養(yǎng)殖過程均采用魚體質(zhì)量3% - 5%投喂量投喂，飼料在投喂20分鐘后基本被攝食完全。實(shí)驗(yàn)期間水族箱24h不間斷充氣，水溫24-26°C，pH值6.5-7.5。每天記錄水溫、投喂量和攝食情況等。
[0035]試驗(yàn)結(jié)果:生長(zhǎng)性能指標(biāo)見表1，血清生化指標(biāo)結(jié)果見表2，飼料表觀消化率見表
3。在飼料中添加丁酸梭菌對(duì)鯽魚有明顯的促生長(zhǎng)作用，并顯著提高了鯽魚增重率、特定生長(zhǎng)率、血清總蛋白和蛋白質(zhì)表觀消化率(P〈0.05)。當(dāng)丁酸梭菌添加量為0.5g/kg時(shí)，鯽魚增重率、血清總蛋白、白蛋白和蛋白質(zhì)表觀消化率最聞，比對(duì)照組分別提聞了 36.4%、18.82%、
18.13% 和 10.98%ο
[0036]表1本發(fā)明飼料對(duì)鯽魚生產(chǎn)性能的影響11=3;.TiSD
[0037]
【權(quán)利要求】
1.一種含有丁酸梭菌的鯽魚飼料，其特征在于，所述飼料為將丁酸梭菌與鯽魚基礎(chǔ)飼料按質(zhì)量比為0.0001:1?0.0005:1的比例添加。
2.如權(quán)利要求1所述的飼料，其特征在于，所述丁酸梭菌的活菌數(shù)為1.0X108cfU/g。
3.如權(quán)利要求1所述的飼料，其特征在于，所述丁酸梭菌從土壤或動(dòng)物糞便中分離培養(yǎng)，包括如下步驟: 1)制備土壤或糞便樣品稀釋液:以無菌操作，將樣品加入裝有無菌水的錐形瓶中，振蕩10-20分鐘，使樣品與水充分混合，再稀釋成濃度分別為10_4、10_5和10_6的樣品稀釋液，分別加到無菌培養(yǎng)皿內(nèi)； 2)平板的制作:將固體培養(yǎng)基融化，待冷卻至45-50°C左右，分別傾入到已盛有10_4、10_5、10_6稀釋液的無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，迅速輕輕搖勻，靜置凝固；凝固后將平板倒置于30°C恒溫箱中，培養(yǎng)24-48小時(shí)，此菌即在所固定的位置長(zhǎng)成肉眼能見的菌落； 3 )接種:平板培養(yǎng)48h后，用接種針挑取單個(gè)菌落插入深層固體培養(yǎng)基內(nèi)，再沿原路拔出，在28-32°C溫度下培養(yǎng)48h后轉(zhuǎn)入4-7°C冰箱中保藏。
4.如權(quán)利要求1所述的飼料，其特征在于，所述步驟I)具體為以無菌操作，稱取樣品lg，加入裝有99ml無菌水的錐形瓶中，振蕩10-20分鐘，使樣品與水充分混合，即成10_2樣品稀釋液，然后用無菌移液管吸取9ml無菌水的試管內(nèi)，制成10_3的稀釋液，用同樣方法再制成10_4、10_5、10_6的稀釋液，稀釋完畢后，可用原來的移液管，從菌液濃度最小的10_6的稀釋液開始吸取lmll0_6稀釋液，加到相應(yīng)編號(hào)10_6的無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，以相同方法分別吸取lmll0_5、10_4的稀釋液加到相應(yīng)編號(hào)為10_5、10_4的無菌培養(yǎng)皿內(nèi)。
5.如權(quán)利要求1所述的飼料，其特征在于，所述鯽魚基礎(chǔ)飼料的原料組份按重量百分比為:豆柏20%、麩皮8%、次粉6%、一級(jí)面粉7%、玉米酒糟6%、中國(guó)菜柏18%、棉柏14%、全脂魚粉6%、肉骨粉4%、棕櫚柏3%、一級(jí)豆油3%、氯化膽堿0.5%、磷酸二氫鈣1%、三氧化二鉻0.5%、預(yù)混料2%、大蒜素0.05%、防霉劑0.1%、乙氧基喹啉0.05%、膨潤(rùn)土 0.8%。
6.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的飼料在促進(jìn)鯽魚腸道蛋白消化吸收中的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的飼料在提高鯽魚增重率中的應(yīng)用。
8.丁酸梭菌在促進(jìn)鯽魚腸道PepTl基因的表達(dá)上的應(yīng)用。
9.丁酸梭菌在促進(jìn)鯽魚腸道蛋白消化吸收中的應(yīng)用。
10.丁酸梭菌在提高鯽魚增重率中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A23K1/16GK103583900SQ201310546212
【公開日】2014年2月19日 申請(qǐng)日期:2013年11月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月6日
【發(fā)明者】劉臻, 魯雙慶, 周毅, 孫浪, 伍琴 申請(qǐng)人:長(zhǎng)沙學(xué)院