本發(fā)明屬于微生物應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種植物白絹病的微生物防治方法。
背景技術(shù)：
白絹?。⊿cleritiumrolfsii）又稱(chēng)菌核性根腐病和菌核性苗枯病，是一種在熱帶、亞熱帶地區(qū)普遍發(fā)生的植物病害。自1891 年美國(guó)弗羅里達(dá)州首次報(bào)道了番茄白絹?。戏娇菸。┮詠?lái)，關(guān)于各種植物白絹病的研究報(bào)道一直是植物病害研究中的熱點(diǎn)問(wèn)題。
白絹病病菌能為害多種植物，但感病植物的癥狀基本相似。病害主要發(fā)生在幼苗近地面的根莖部。初發(fā)生時(shí)，病部的皮層變褐，逐漸向四周發(fā)展。在病斑上產(chǎn)生白色絹絲狀的菌絲，菌絲體多呈輻射狀擴(kuò)展，蔓延至附近的土表上。植株發(fā)病后，莖基部及根部皮層腐爛，水分和養(yǎng)分的輸送被阻斷，葉片變黃凋萎，全株枯死?？菟栏o僅剩下木質(zhì)纖維組織，似"亂麻"狀，極易從土中拔出。在土壤較干燥的條件下，病部呈灰白色干朽狀，有時(shí)可見(jiàn)白色霉層；潮濕時(shí), 病部布滿(mǎn)白色菌絲體，甚至周?chē)乇硪哺采w一層菌絲體，并形成油菜籽狀菌核。
白絹病病原的無(wú)性階段是半知菌亞門(mén)的孢目(Mycelia Sterilia) 小菌核菌屬( SclerotiumTode ex Fr.)齊整小菌核菌（ScleritiumrolfsiiSacc.），該菌是腐生性很強(qiáng)的土壤習(xí)居菌。病原的有性階段屬于擔(dān)子菌亞門(mén)、伏革菌屬的白絹伏革菌[Corticiumrolfsii (Sacc.) Curzi.]。該病自然條件下很少出現(xiàn)，只在濕熱環(huán)境中，偶見(jiàn)病斑邊緣產(chǎn)生擔(dān)子和擔(dān)孢子。
對(duì)于土傳性病害，輪作是一條重要防治措施。合理輪作，禁止連作或與其他感病寄主輪作，與禾本科作物輪作，或者是水旱輪作，對(duì)預(yù)防該病很有作用。研究發(fā)現(xiàn)，花生與美洲雀稗輪作對(duì)白絹病有很好的防治作用。藥農(nóng)們?cè)陂L(zhǎng)期的生產(chǎn)實(shí)踐中也認(rèn)識(shí)到與玉米、紅薯、油菜等作物輪作3年以上，可有效地防治白絹病。
在藥劑防治方面，柳惠慶等室內(nèi)藥效測(cè)定發(fā)現(xiàn)，退菌特、克腐特、甲醛、代森錳鋅對(duì)菌核萌發(fā)有很強(qiáng)的抑制作用，多菌靈、甲基托布津、百菌清亦有一定效果。藥劑進(jìn)一步試驗(yàn)結(jié)果表明，50%多菌靈、75%百菌清、36%甲醛抑菌圈明顯（抑制菌絲生長(zhǎng)）。
在生物防治方面，很多報(bào)導(dǎo)認(rèn)為木霉菌對(duì)白絹病有良好效果。何可佳用綠色木霉防治辣椒白絹病，防效達(dá)69%~72%；防治魔芋白絹病，防效為65.1%~69.6%。另一種有用的生防真菌是綠粘帚霉，研究發(fā)現(xiàn)綠粘帚霉有防治蕃茄、甜椒和馬鈴薯、胡椒白絹病的效果。熒光假單胞菌能抑制大豆白絹病和棉、馬鈴薯枯萎病的發(fā)生。
白絹病是一種普發(fā)性、毀滅性的病害，其寄主范圍廣，嚴(yán)重危害時(shí)可導(dǎo)致作物嚴(yán)重減產(chǎn)。由于人們對(duì)環(huán)境問(wèn)題的日益關(guān)注和對(duì)綠色食品的需求，生物防治是一個(gè)很有發(fā)展前途的領(lǐng)域。因此，急需篩選出高效、環(huán)保、安全的生防菌，控制白絹病的發(fā)病和危害，從而取得良好的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明為解決現(xiàn)有技術(shù)問(wèn)題，提供了一種白絹病的微生物防治方法。所述方法是通過(guò)施用拜萊青霉（Penicillium bilaji）抑制白絹病致病菌小核菌的繁殖，進(jìn)而達(dá)到防治白絹病的效果。
本發(fā)明一方面提供了一種植物白絹病的防治方法，是通過(guò)在土壤中和/或在植物根部和/或在植物全株施用拜萊青霉菌液實(shí)現(xiàn)的。
所述植物白絹病的防治方法，包括：
（1）在植物播種或栽植前，按40-60mL/m2的用量將拜萊青霉菌液均勻噴灑在土壤上，將表層10-20cm厚的土壤進(jìn)行有效混勻；
（2）在植物栽植后，按100-500mL/株的用量將拜萊青霉菌液灌施于植物根部，15-30天后再按相同用量灌施一遍，連用3-5次；
（3）在白絹病發(fā)病初期，按50-100mL/m2的用量將拜萊青霉菌液均勻噴灑在植物全株和土壤中，5-10天后再按相同用量噴灑一遍；連用3-5次。
進(jìn)一步的，所述拜萊青霉優(yōu)選拜萊青霉VLD-11（Penicillium bilaji VLD-11），篩選自山東省萊州市彭家磷礦區(qū)的土壤，已于2015年11月23日保藏于中國(guó)武漢 武漢大學(xué)的中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC NO：M2015690。
所述拜萊青霉菌液中孢子含量不低于106CFU/mL。
所述植物優(yōu)選胡蘿卜、花生和茉莉中的任意一種。
所述拜萊青霉菌液的制備方法，具體為：先將上述拜萊青霉VLD-11接種到PDA固體培養(yǎng)基上，30℃培養(yǎng)3-4天至孢子成熟，將長(zhǎng)好的孢子用適量無(wú)菌生理鹽水洗下，轉(zhuǎn)接入馬鈴薯液體培養(yǎng)基中，充分混合均勻，于30℃培養(yǎng)4-6天，即得拜萊青霉菌液。
本發(fā)明提供的方法是通過(guò)施用拜萊青霉菌液實(shí)現(xiàn)對(duì)植物白絹病的防治。所述拜萊青霉VLD-11對(duì)翠雀小核菌和齊整小核菌的抑制率分別達(dá)到85.9％和82.6%，抑菌效果顯著。所述拜萊青霉VLD-11能有效防治植物白絹病。在對(duì)胡蘿卜白絹病的防治中，通過(guò)向全株和土壤噴施所述拜萊青霉100倍稀釋液，可將胡蘿卜白絹病的發(fā)病率降低到0.5%以下，防治效率超過(guò)88%；在對(duì)花生白絹病的防治中，先利用所述拜萊青霉對(duì)土壤進(jìn)行處理，在白絹病發(fā)病初期，再對(duì)全株和土壤進(jìn)行合理噴施，能有效降低花生白絹病的病情指數(shù)，50倍稀釋液對(duì)花生白絹病的平均防治效率高達(dá)83.6%；在對(duì)茉莉白絹病的防治中，通過(guò)在茉莉花苗根部直接灌施所述拜萊青霉VLD-11，能有效減少后期茉莉白絹病的發(fā)病率， 100倍稀釋液對(duì)白絹病的防治效率高于85%，效果顯著。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明實(shí)施例中選用的拜萊青霉VLD-11（Penicillium bilaji VLD-11），篩選自山東省萊州市彭家磷礦區(qū)的土壤，已于2015年11月23日保藏于中國(guó)武漢 武漢大學(xué)的中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC NO：M2015690。
本發(fā)明所應(yīng)用的試劑可以應(yīng)用任一款市售產(chǎn)品，下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的方法進(jìn)行詳細(xì)描述。
實(shí)施例1拜萊青霉抑菌實(shí)驗(yàn)
1、拜萊青霉VLD-11菌液的制備：
先將上述拜萊青霉VLD-11接種到PDA固體培養(yǎng)基上，30℃培養(yǎng)3-4天至孢子成熟，將長(zhǎng)好的孢子用適量無(wú)菌生理鹽水洗下，轉(zhuǎn)接入馬鈴薯液體培養(yǎng)基中，充分混合均勻，于30℃培養(yǎng)4天，發(fā)酵液中孢子含量約為109CFU/mL。
2、拜萊青霉VLD-11對(duì)小核菌的抑制作用 1、將拜萊青霉VLD-11接種至PDA培養(yǎng)基平板，30℃培養(yǎng)7d；
2、取完成步驟1的PDA培養(yǎng)基平板，在菌落前沿用打孔器打取直徑為5mm的菌餅(生防菌餅)； 3、分別將翠雀小核菌和齊整小核菌單菌落接種至PDA培養(yǎng)基平板，30℃培養(yǎng)7d； 4、取完成步驟3的PDA培養(yǎng)基平板，在菌落前沿用打孔器打取直徑為5mm的菌餅(致病菌餅)； 5、取新的PDA培養(yǎng)基平板，用打孔器打取直徑為5mm的培養(yǎng)基，作為對(duì)照物。 6、分組處理 （1）試驗(yàn)組：取新的PDA培養(yǎng)基平板，在上面放置1個(gè)生防菌餅和1個(gè)致病菌餅，兩個(gè)菌餅中心的直線(xiàn)距離為3cm，30℃培養(yǎng)； （2）對(duì)照組：取新的PDA培養(yǎng)基平板，在上面放置1個(gè)對(duì)照物和1個(gè)致病菌餅，兩者中心的直線(xiàn)距離為3cm，30℃培養(yǎng)。 7、培養(yǎng)3天后分別測(cè)量致病菌的菌落直徑，計(jì)算抑制率。
抑制率＝(對(duì)照組致病菌菌落直徑-試驗(yàn)組致病菌菌落直徑)÷對(duì)照組致病菌菌落直徑×100％。
結(jié)果顯示：拜萊青霉VLD-11對(duì)翠雀小核菌和齊整小核菌的抑制率分別達(dá)到85.9％和82.6%(三次重復(fù)的平均值)，說(shuō)明所述拜萊青霉VLD-11對(duì)小核菌的生長(zhǎng)繁殖具有較強(qiáng)的抑制作用，有望應(yīng)用于白絹病的防治。
實(shí)施例2拜萊青霉對(duì)胡蘿卜白絹病的防治效果
1、實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：青島平度南村鎮(zhèn)胡蘿卜發(fā)病區(qū)
2、實(shí)驗(yàn)方法
選取三個(gè)處理組，每個(gè)處理組3壟胡蘿卜，每壟約100棵胡蘿卜，處理組之間設(shè)立保護(hù)行。將上述拜萊青霉VLD-11發(fā)酵液分別加水稀釋100倍、200倍、400倍。在胡蘿卜發(fā)病初期，按50-100mL/m2的用量用靜電噴霧器將拜萊青霉菌液對(duì)全株及土壤進(jìn)行充分噴施，間隔5天再按相同用量噴施1次，共防治3次。對(duì)照組為噴施相同用量的清水。最后一次防治6天后，檢查胡蘿卜白絹病的治療情況。
3、結(jié)果分析
防治效率的計(jì)算公式=［1－（處理的病株率/對(duì)照的病株率）］×100%
結(jié)果如表1所示：
表1 拜萊青霉VLD-11對(duì)胡蘿卜白絹病的防治效果
從表1的數(shù)據(jù)可以看出，在胡蘿卜白絹病發(fā)病初期，通過(guò)向全株和土壤噴施拜萊青霉VLD-11，能顯著抑制白絹病的發(fā)病率，100倍發(fā)酵液稀釋液可將胡蘿卜白絹病的發(fā)病率降低到0.5%以下，防治效率超過(guò)88%，效果顯著。
實(shí)施例3 拜萊青霉VLD-11對(duì)花生白絹病的防治效果
1、實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：青島膠南市花生種植發(fā)病區(qū)
2、實(shí)驗(yàn)方法：
將拜萊青霉VLD-11發(fā)酵液加水分別稀釋50倍、100倍、200倍，在花生播種期，先按40-60mL/m2的用量將拜萊青霉菌液均勻噴灑在土壤上，將表層10-20cm厚的土壤進(jìn)行有效混勻，然后再進(jìn)行播種；在花生白絹病發(fā)病初期，按50-100mL/m2的用量用靜電噴霧器將拜萊青霉菌液對(duì)全株及土壤進(jìn)行充分噴施，間隔5天再按相同用量噴施1次，共噴施3次。最后一次防治6天后，檢查花生白絹病的治療情況。對(duì)照組使用清水。
3、結(jié)果分析：
病情指數(shù)=［∑（病級(jí)值×該級(jí)發(fā)病株樹(shù)）/(發(fā)病總株數(shù)×最高病級(jí)值)］×100%
防治效率=［1-（處理的病情指數(shù)/對(duì)照的病情指數(shù)）］×100%
結(jié)果如表2所示：
表2 拜萊青霉VLD-11對(duì)花生白絹病的防治效果
從表2的數(shù)據(jù)可以看出，在花生播種時(shí)，先利用本發(fā)明提供的拜萊青霉VLD-11對(duì)土壤進(jìn)行處理，在白絹病發(fā)病初期，再對(duì)全株和土壤進(jìn)行合理噴施，能有效降低花生白絹病的病情指數(shù)。拜萊青霉VLD-11發(fā)酵液稀釋50倍時(shí)對(duì)花生白絹病的平均防治效率高達(dá)83.6%，效果顯著。
實(shí)施例4 拜萊青霉VLD-11對(duì)茉莉白絹病的防治效果
1、實(shí)驗(yàn)地點(diǎn)：
青島市嶗山區(qū)枯桃花卉市場(chǎng)茉莉園。
2、實(shí)驗(yàn)設(shè)置
設(shè)三個(gè)處理組，將拜萊青霉VLD-11發(fā)酵液加水分別稀釋100倍、200倍、400倍。
2016年4月初，在移栽茉莉花苗后，按300 mL/株的用量分別將拜萊青霉VLD-11稀釋液直接施用到花苗的根部，20天后再施用1次，共施4次。每處理組3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)50株茉莉花。對(duì)照組施用清水。
3、茉莉白絹病防治效果統(tǒng)計(jì)
2016年11月初，調(diào)查各處理組茉莉發(fā)病情況，計(jì)算茉莉白絹病的防治效果。
病情分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：0級(jí)-未見(jiàn)枯黃病葉病枝；1級(jí)-染病枯黃枝葉比例占25%以下；3級(jí)-染病枯黃枝葉比例≥25%，但≤50%；5級(jí)-染病枯黃枝葉比例>50%，但植株未枯死；7級(jí)-整株枯死。
病情指數(shù)=［∑（病級(jí)值×該級(jí)發(fā)病株樹(shù)）/(發(fā)病總株數(shù)×最高病級(jí)值)］×100%；
防治效率=［1-（處理的病情指數(shù)/對(duì)照的病情指數(shù)）］×100%；
結(jié)果如表3所示：
表3 拜萊青霉VLD-11對(duì)茉莉白絹病的防治效果
從表3的結(jié)果可以看出，通過(guò)在茉莉花苗根部直接灌施本發(fā)明提供的拜萊青霉VLD-11，能有效減少后期茉莉白絹病的發(fā)病率，拜萊青霉VLD-11 100倍稀釋液對(duì)白絹病的防治效率高于85%，效果顯著。
除了胡蘿卜，花生和茉莉之外，本發(fā)明提供的拜萊青霉VLD-11還可以對(duì)辣椒、大蔥、核桃、馬尾松、蘋(píng)果、柑橘等植物的白絹病具有顯著的防治效果，防治效率達(dá)到80%以上，應(yīng)用前景廣泛。