本發(fā)明屬于動(dòng)物模型，尤其是涉及一種具有nk細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型的構(gòu)建方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、免疫療法是一種革命性的癌癥治療方法，人類的免疫應(yīng)答需要在體內(nèi)進(jìn)行，由于受到倫理限制，不能直接以人為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。嚙齒類動(dòng)物是廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)研究的小動(dòng)物模型，目前免疫系統(tǒng)發(fā)育分化及功能研究大多來源于這些模型，盡管其前景廣闊，但在將其從臨床前研究轉(zhuǎn)化到臨床應(yīng)用的過程中面臨著一個(gè)根本性挑戰(zhàn)：小鼠和人類免疫系統(tǒng)之間存在根本差異，因?yàn)榉N屬特異性的存在，嚙齒類動(dòng)物模型得到的結(jié)論并不能直接推導(dǎo)于人類免疫系統(tǒng)，因此，一種能夠應(yīng)用于人類免疫應(yīng)答的動(dòng)物模型——免疫系統(tǒng)人源化小鼠應(yīng)運(yùn)而生，該動(dòng)物模型是了解人類免疫系統(tǒng)及其免疫應(yīng)答的重要工具。

2、目前在免疫系統(tǒng)人源化小鼠中相對(duì)完整地構(gòu)建出髓系細(xì)胞和淋系細(xì)胞的主要方式是在超重度免疫缺陷小鼠體內(nèi)植入人源造血干細(xì)胞，使小鼠具有相對(duì)完整的人源免疫系統(tǒng)。具體的，日本ciea的mamoru?ito(ciea?nog小鼠的創(chuàng)始人)將huhsc-cd34+移植到nog-exl小鼠后重建的免疫系統(tǒng)人源化模型huhsc-nog-exl，會(huì)呈現(xiàn)更完整的人類免疫系統(tǒng)，將會(huì)更加有利于研究抗腫瘤藥物中人的免疫系統(tǒng)與腫瘤的相互作用，進(jìn)行炎癥和過敏反應(yīng)的研究以及免疫毒性的研究。但研究表明，該模型中缺乏nk細(xì)胞，嚴(yán)重限制了nk細(xì)胞免疫領(lǐng)域的研究。因此，利用免疫系統(tǒng)人源化小鼠模型huhsc-nog-exl重建具有nk細(xì)胞的人類免疫系統(tǒng)的臨床前模型是迫切被需要的。這一模型有望將通過提供更準(zhǔn)確的人類免疫反應(yīng)表征來改變臨床前研究，構(gòu)建這樣的模型不僅需要將人類nk細(xì)胞成功整合到小鼠宿主中，還需要協(xié)調(diào)其激活和功能。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種具有nk細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型的構(gòu)建方法和應(yīng)用。

2、本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種具有nk細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，向人源化免疫系統(tǒng)模型動(dòng)物注射人源細(xì)胞因子hil-2和hil-15，得到具有nk細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型。

3、優(yōu)選地，采用腹腔注射方式注射人源細(xì)胞因子hil-2和hil-15。

4、優(yōu)選地，模型動(dòng)物為小鼠，hil-2每天注射1次，連續(xù)注射5-7天，每次注射4-6μg；hil-15每5天注射1次，共注射3次，每次注射2-4μg。

5、優(yōu)選地，具體步驟如下：

6、步驟一：制備常規(guī)的人源化免疫重建模型動(dòng)物；

7、步驟二：制備hil-2和hil-15細(xì)胞因子溶液；

8、步驟三：通過外源性方式向常規(guī)的人源化免疫重建模型動(dòng)物體內(nèi)注射細(xì)胞因子溶液，得到具有nk細(xì)胞及adcc能力的人源化免疫系統(tǒng)動(dòng)物模型。

9、優(yōu)選地，選取6～8周齡雌性nog-exl小鼠，進(jìn)行全身輻照清髓，輻照處理后5h-24h內(nèi)，對(duì)小鼠尾靜脈注射cd34陽性的人源造血干細(xì)胞；8周后檢測該人源化免疫重建小鼠的外周血中人源免疫細(xì)胞的比例，當(dāng)外周血中人源免疫細(xì)胞占總免疫細(xì)胞數(shù)量約20％時(shí)，視為常規(guī)的人源化免疫重建小鼠構(gòu)建成功。

10、優(yōu)選地，對(duì)注射細(xì)胞因子的人源化免疫重建模型動(dòng)物進(jìn)行流式檢測，當(dāng)模型動(dòng)物外周血中nk細(xì)胞比例占所有人源白細(xì)胞比例不少于5％時(shí)，證明具有nk細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型構(gòu)建成功。

11、具有nk細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型的構(gòu)建方法構(gòu)建得到的具有nk細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型。

12、優(yōu)選地，模型動(dòng)物為nog-exl小鼠。

13、具有nk細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型在非疾病診斷治療目的腫瘤免疫治療研究中的應(yīng)用。

14、具有nk細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型在nk細(xì)胞研究中的應(yīng)用。

15、本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是：通過本發(fā)明方法進(jìn)一步完善人源化免疫重建模型動(dòng)物，使其具有更加完整的免疫系統(tǒng)；通過促進(jìn)nk細(xì)胞的誘導(dǎo)分化，免疫系統(tǒng)中增加了具有殺傷作用的人源nk細(xì)胞的比例，彌補(bǔ)了nk細(xì)胞免疫的缺失，顯著增強(qiáng)了nk細(xì)胞介導(dǎo)的adcc效應(yīng)。

技術(shù)特征：

1.一種具有nk細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于：向人源化免疫系統(tǒng)模型動(dòng)物注射人源細(xì)胞因子hil-2和hil-15，得到具有nk細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有nk細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于：采用腹腔注射方式注射人源細(xì)胞因子hil-2和hil-15。

3.根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有nk細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于：模型動(dòng)物為小鼠，hil-2每天注射1次，連續(xù)注射5-7天，每次注射4-6μg；hil-15每5天注射1次，共注射3次，每次注射2-4μg。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有nk細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于：具體步驟如下：

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的具有nk細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于：選取6～8周齡雌性nog-exl小鼠，進(jìn)行全身輻照清髓，輻照處理后5h-24h內(nèi)，對(duì)小鼠尾靜脈注射cd34陽性的人源造血干細(xì)胞；8周后檢測該人源化免疫重建小鼠的外周血中人源免疫細(xì)胞的比例，當(dāng)外周血中人源免疫細(xì)胞占總免疫細(xì)胞數(shù)量約20％時(shí)，視為常規(guī)的人源化免疫重建小鼠構(gòu)建成功。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的具有nk細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于：對(duì)注射細(xì)胞因子的人源化免疫重建模型動(dòng)物進(jìn)行流式檢測，當(dāng)模型動(dòng)物外周血中nk細(xì)胞比例占所有人源白細(xì)胞比例不少于5％時(shí)，證明具有nk細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型構(gòu)建成功。

7.由權(quán)利要求1-6中任一所述的具有nk細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型的構(gòu)建方法構(gòu)建得到的具有nk細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的具有nk細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型，其特征在于：模型動(dòng)物為nog-exl小鼠。

9.權(quán)利要求7或8所述的具有nk細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型在非疾病診斷治療目的腫瘤免疫治療研究中的應(yīng)用。

10.權(quán)利要求7或8所述的具有nk細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型在nk細(xì)胞研究中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及一種具有NK細(xì)胞分化的人源化免疫重建動(dòng)物模型的構(gòu)建方法和應(yīng)用，通過對(duì)人源化免疫重建動(dòng)物模型注射外源IL?2和IL?15細(xì)胞因子，使得模型動(dòng)物重建NK細(xì)胞，從而獲得具有NK細(xì)胞及ADCC能力的人源化免疫系統(tǒng)動(dòng)物模型。通過本方法進(jìn)一步完善人源化免疫重建模型動(dòng)物，使其具有更加完整的免疫系統(tǒng)；通過促進(jìn)NK細(xì)胞的誘導(dǎo)分化，免疫系統(tǒng)中增加了具有殺傷作用的人源NK細(xì)胞的比例，彌補(bǔ)了NK細(xì)胞免疫的缺失，顯著增強(qiáng)了NK細(xì)胞介導(dǎo)的ADCC效應(yīng)。

技術(shù)研發(fā)人員：郗日沫,王超坤
受保護(hù)的技術(shù)使用者：希美萊（天津）生物醫(yī)藥科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/4/7