本發(fā)明涉及生物保存液領域，特別涉及一種體外分析檢測用細胞保存液及其制備方法。

背景技術：

1、在現(xiàn)代醫(yī)學診斷和科學研究中，體外分析檢測技術發(fā)揮著至關重要的作用。其中，細胞保存液作為一種關鍵的輔助工具，它為細胞的保存、運輸和分析提供了適宜的環(huán)境，確保細胞的完整性和活性，為疾病診斷、治療以及科學研究提供了可靠的基礎，對于確保檢測結果的準確性和可靠性具有重要意義。

2、細胞保存液的發(fā)展經歷了漫長的過程，細胞保存液中含有多種營養(yǎng)成分和保護劑，能夠為細胞提供適宜的生存環(huán)境，維持細胞的代謝活動，從而延長細胞的存活時間；細胞保存液能夠保持細胞的形態(tài)和結構完整，避免細胞在保存過程中發(fā)生變形、破裂等現(xiàn)象。細胞保存液通常具有良好的穩(wěn)定性和耐受性，可以在常溫或低溫下運輸和儲存，方便了細胞樣本的采集、運輸和保存。這對于遠程醫(yī)療、大規(guī)模樣本采集和長期保存等場景非常有利。細胞保存液可以適用于多種類型的細胞，包括動物細胞、植物細胞、微生物細胞等。雖然細胞保存液中的成分通常是經過嚴格篩選和優(yōu)化的，但仍然存在一定的潛在毒性。一些保存液中的成分如dmso、抗生素等可能會對細胞產生毒性作用，影響細胞的活性和功能。盡管細胞保存液可以延長細胞的存活時間，但仍然存在一定的保存時間限制。細胞保存時間越長，對長時間的測試數據越不準確。

3、目前為了提高細胞檢測的靈敏度，將膠體金標記物與細胞保存液結合使用，可以提高細胞成像的分辨率，也可以促進某些細胞治療的效果，細胞保存液與膠體金的結合為細胞分析提供了新的方法和手段。例如，在單細胞分析中，使用膠體金標記的抗體可以對單個細胞進行多參數分析，提高分析的準確性和可靠性，同時也可以減少背景干擾。但是細胞保存液可能會膠體金的穩(wěn)定性，例如，保存液中的離子強度、ph值等因素可能會導致膠體金顆粒發(fā)生聚集、沉淀或粒徑變化。如果膠體金變得不穩(wěn)定，可能會影響其在檢測中的性能，如顯色效果、靈敏度等。

4、針對現(xiàn)有技術存在的問題，本申請要解決體外分析檢測用的細胞保存液在保存細胞過程中，細胞會發(fā)生一定的自溶腐敗，使得細胞保存的完整性較差，細胞存活率低，細胞保存時間短，與膠體金結合使用時，細胞保存液影響膠體金的穩(wěn)定性，干擾檢測等問題。

技術實現(xiàn)思路

1、發(fā)明目的：本發(fā)明的目的是提供一種體外分析檢測用細胞保存液及其制備方法，解決體外分析檢測用細胞保存液無法使口氣變清新，無法有效的掩蓋口臭；殺菌消炎效果不理想，對口腔炎癥無明顯改善效果等問題。

2、本發(fā)明的技術方案：

3、一種體外分析檢測用細胞保存液，所述體外分析檢測用細胞保存液包括如下濃度范圍的組分：酰化糖胺聚糖0.5-1g/100ml、谷胱甘肽三肽0.05-0.15g/100ml、細胞固定劑60-75v/v％、滲透壓調節(jié)劑0.5-1g/100ml、抗凝劑0.2-0.5g/100ml；溶劑為超純水，ph為7.0-7.6。

4、進一步的，所述制備?；前肪厶堑脑习ǎ?-氨基-2-脫氧-d-半乳糖鹽酸鹽、d-葡糖醛酸酯、乙酸酐。

5、所述?；前肪厶堑闹苽浞椒ǎ韵虏襟E：

6、s1：在一反應瓶中，將2-氨基-2-脫氧-d-半乳糖鹽酸鹽和d-葡糖醛酸酯溶解在適量二氯甲烷中，混合均勻；

7、s2：在步驟s1中加入催化劑和縮合劑升高溫度為25-40℃，反應12-24小時；

8、s3：步驟s2反應完后，通過過濾、離心、分離去除雜質，得到糖胺聚糖；

9、s4：另取一反應瓶，加入步驟s3制得的糖胺聚糖，然后加入二甲基甲酰胺，加熱攪拌完全溶解；

10、s5：在步驟s4中加入乙酸酐，升高溫度為60-80℃，反應6-8小時，反應完后，加入去離子水，調節(jié)ph值至7-7.5，分離純化后，制得?；前肪厶恰?/p>

11、進一步的，所述2-氨基-2-脫氧-d-半乳糖鹽酸鹽、d-葡糖醛酸酯的質量比為1：1-1.5。

12、進一步的，所述步驟s4中的糖胺聚糖與步驟s5中的乙酸酐的質量比為1：1-5。

13、進一步的，所述催化劑為1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽；所述縮合劑為4-二甲氨基吡啶。

14、進一步的，所述谷胱甘肽三肽為谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸的混合物；所述谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸的質量比為2-2.5：1.5-2.5：1.5-2.5。

15、進一步的，所述細胞固定劑為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇中的一種或多種混合。

16、進一步的，所述滲透壓調節(jié)劑為氯化鈉與氯化鉀的混合物；所述氯化鈉和氯化鉀的質量比為7-9：1。

17、進一步的，所述抗凝劑為乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸鉀、肝素鈉中的一種或多種混合。

18、本發(fā)明還提供一種體外分析檢測用細胞保存液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

19、步驟一：取適量超純水，加入設定量的酰化糖胺聚糖、谷胱甘肽三肽、透壓調節(jié)劑、抗凝劑，攪拌至完全溶解，得到初混液；

20、步驟二：往步驟一得到的初混液中加入設定量的細胞固定劑，然后調節(jié)ph值至7.0-7.6，最后定容，得到終混液；

21、步驟三：將步驟二得到的終混液經滅菌工序后分裝，制得所述體外分析檢測用細胞保存液。

22、本發(fā)明提供了一種體外分析檢測用細胞保存液，?；前肪厶窃诩毎車纬梢粚颖Ｗo膜，通過與細胞表面的受體相互作用，穩(wěn)定細胞膜結構。這有助于防止細胞在保存過程中受到機械損傷和滲透壓變化的影響。其分子結構中的負電荷可以與細胞表面的正電荷相互作用，增強細胞間的黏附力，減少細胞的分散和脫落，從而保持細胞的整體結構。?；前肪厶强梢哉{節(jié)細胞保存液的離子濃度和滲透壓，保持細胞內外環(huán)境的穩(wěn)定。這有助于維持細胞的正常代謝功能，防止細胞因離子失衡或滲透壓變化而死亡。為細胞提供營養(yǎng)物質和能量來源。它可以與細胞保存液中的營養(yǎng)成分結合，形成復合物，便于細胞吸收和利用，從而維持細胞的代謝活動。膠體金表面通常帶有負電荷，而酰化糖胺聚糖也具有負電荷。在適當的條件下，兩者之間的靜電斥力可以防止膠體金顆粒的聚集和沉淀，保持膠體金的穩(wěn)定性。谷胱甘肽三肽由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸組成的三肽，具有很強的抗氧化作用，能夠清除細胞內的自由基，保護細胞免受氧化損傷。同時，谷胱甘肽三肽可以參與細胞內的代謝過程，維持細胞內的氧化還原平衡。它還能促進細胞內蛋白質的合成和修復，增強細胞的抗逆性，提高細胞存活率。

23、有益效果：

24、本發(fā)明提供一種體外分析檢測用細胞保存液，可增強體外分析檢測用細胞保存液對細胞的保護作用，提高細胞的保存完整性，提高細胞的存活率，加入膠體金對細胞進行測試時，細胞保護液與膠體金兼容性好，使得測試結果更加精準。

技術特征：

1.一種體外分析檢測用細胞保存液，其特征在于，所述體外分析檢測用細胞保存液包括如下濃度范圍的組分：?；前肪厶?.5-1g/100ml、谷胱甘肽三肽0.05-0.15g/100ml、細胞固定劑60-75v/v％、滲透壓調節(jié)劑0.5-1g/100ml、抗凝劑0.2-0.5g/100ml；溶劑為超純水，ph為7.0-7.6。

2.根據權利要求1所述的體外分析檢測用細胞保存液，其特征在于，所述制備?；前肪厶堑脑习ǎ?-氨基-2-脫氧-d-半乳糖鹽酸鹽、d-葡糖醛酸酯、乙酸酐。

3.根據權利要求1所述的體外分析檢測用細胞保存液，其特征在于，所述酰化糖胺聚糖的制備方法，包含以下步驟：

4.根據權利要求3所述的體外分析檢測用細胞保存液，其特征在于，所述2-氨基-2-脫氧-d-半乳糖鹽酸鹽、d-葡糖醛酸酯的質量比為1：1-1.5。

5.根據權利要求3所述的體外分析檢測用細胞保存液，其特征在于，所述步驟s4中的糖胺聚糖與步驟s5中的乙酸酐的質量比為1：1-5。

6.根據權利要求3所述的體外分析檢測用細胞保存液，其特征在于，所述催化劑為1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽；所述縮合劑為4-二甲氨基吡啶。

7.根據權利要求2所述的體外分析檢測用細胞保存液，其特征在于，所述谷胱甘肽三肽為谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸的混合物；所述谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸的質量比為2-2.5：1.5-2.5：1.5-2.5。

8.根據權利要求3所述的體外分析檢測用細胞保存液，其特征在于，所述細胞固定劑為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇中的一種或多種混合。

9.根據權利要求2所述的體外分析檢測用細胞保存液，其特征在于，所述滲透壓調節(jié)劑為氯化鈉與氯化鉀的混合物；所述氯化鈉和氯化鉀的質量比為7-9：1；所述抗凝劑為乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二鈉、乙二胺四乙酸鉀、肝素鈉中的一種或多種混合。

10.權利要求1-9任意一項所述的體外分析檢測用細胞保存液的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

技術總結
本發(fā)明提供了一種體外分析檢測用細胞保存液及其制備方法，所述體外分析檢測用細胞保存液包括如下濃度范圍的組分：?；前肪厶?.5?1g/100mL、谷胱甘肽三肽0.05?0.15g/100mL、細胞固定劑60?75v/v％、滲透壓調節(jié)劑0.5?1g/100mL、抗凝劑0.2?0.5g/100mL；溶劑為超純水，pH為7.0?7.6。?；前肪厶桥c谷胱甘肽三肽協(xié)同作用可增強體外分析檢測用細胞保存液對細胞的保護作用，提高細胞的保存完整性，提高細胞的存活率，加入膠體金對細胞進行測試時，細胞保護液與膠體金兼容性好，使得測試結果更加精準。

技術研發(fā)人員：鄔榮杰
受保護的技術使用者：湖南杰菲特生物科技有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/5/15