微生物復(fù)合菌劑在種植茄果類(lèi)蔬菜中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于農(nóng)業(yè)和生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種茄果類(lèi)蔬菜微生物復(fù)合菌劑、其制備 方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 化肥的誕生在一定的時(shí)間里給農(nóng)民帶來(lái)了豐收的希望。然而長(zhǎng)期使用化肥產(chǎn)生的 弊端隨之而來(lái)，土地板結(jié)、化學(xué)元素殘留、環(huán)境污染等等一系列問(wèn)題浮出水面?；室呀?jīng)不 能滿(mǎn)足可持續(xù)發(fā)展的需要，更不能成為綠色農(nóng)業(yè)的支柱。
[0003] 而茄果類(lèi)蔬菜是一類(lèi)以食用鮮嫩果實(shí)為主、生長(zhǎng)周期相對(duì)較長(zhǎng)的蔬菜，主要包括 黃瓜、番茄、辣椒等。這些蔬菜對(duì)養(yǎng)分需求有相似之處，與葉菜類(lèi)蔬菜比較，在氮磷鉀三要素 中對(duì)磷、鉀需求量相對(duì)較多，而需氮量較少，同時(shí)由于它們生長(zhǎng)期長(zhǎng)，所以要求養(yǎng)分釋放期 長(zhǎng)，以免后期脫肥。現(xiàn)有的生產(chǎn)模式是采用化肥等為主，一般是將所有的原料一起發(fā)酵，使 有機(jī)物中養(yǎng)分大部分釋放出來(lái)，這對(duì)于茄果類(lèi)蔬菜的后期果實(shí)生長(zhǎng)不利。要解決上訴問(wèn)題 就要改變現(xiàn)有的生產(chǎn)模式，從而使養(yǎng)分釋放符合茄果類(lèi)蔬菜養(yǎng)分吸收要求。隨著科學(xué)的發(fā) 展，微生物在農(nóng)業(yè)中的作用漸漸顯露出來(lái)。利用微生物制劑改良土壤、降解化學(xué)殘留、改善 生態(tài)環(huán)境、作物增產(chǎn)、抑菌防病等，已經(jīng)成為農(nóng)業(yè)科學(xué)研究的熱點(diǎn)。微生物復(fù)合菌劑是發(fā)展 "高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、高效、生態(tài)、安全"農(nóng)業(yè)的保證。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明所要解決的問(wèn)題是采用多種菌種制備復(fù)合菌劑，以及利用該復(fù)合菌劑制成 植物生物調(diào)節(jié)劑應(yīng)用在農(nóng)作物的種植中。充分利用菌種之間的相互作用，起到刺激植物生 長(zhǎng)、緩解土地板結(jié)、改良土壤生態(tài)環(huán)境、防病抗病等作用，從而達(dá)到解決增產(chǎn)、高產(chǎn)的目的。
[0005] 本發(fā)明保護(hù)一種微生物復(fù)合菌劑在茄果類(lèi)蔬菜種植中的應(yīng)用。
[0006] 上文所述的微生物菌劑的應(yīng)用，是將微生物菌劑用水稀釋500倍，于茄果類(lèi)蔬菜 的坐果期、果實(shí)膨大期、著色期各噴施一次。
[0007] 上文所述的微生物菌劑的應(yīng)用中，所述的微生物菌劑茄果類(lèi)蔬菜微生物復(fù)合菌 劑，其采用膠質(zhì)芽孢桿菌（Bacillus mucilaginosus) CGMCC1. 153發(fā)酵液，巨大芽孢桿菌 (Bacillus megaterium)ACCC10010 發(fā)酵液，褐色球形固氮菌（Azotobacter chroococcum) CGMCC1. 142發(fā)酵液，枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis) ACCC01183發(fā)酵液混合后作為混 合菌劑，經(jīng)再次發(fā)酵制得。
[0008] 其中：所述的膠質(zhì)芽孢桿菌（Bacillus mucilaginosus) CGMCCL 153發(fā)酵液，巨 大芽抱桿菌（Bacillus megaterium) ACCC10010發(fā)酵液，褐色球形固氮菌（Azotobacter chroococcum) CGMCCL 142 發(fā)酵液，枯草芽抱桿菌（Bacillus subtilis) ACCC01183 混合的 質(zhì)量百分比分別為30~40%、30~40%、10~20%、5~10%。
[0009] 所述再次發(fā)酵的發(fā)酵培養(yǎng)基為：玉米粉2~20g/100mL、豆栢粉1~ 10g/100mL、酵母膏 0· 05 ~0· 2g/100mL、KH2PO4O. 2 ~2g/100mL、K2HPO4O. 5 ~2g/100mL、 MgSO4 ·7Η200· OOl ~0· 02g/100mL、NaC10. 5 ~0· 8g/100mL、（NH4)2SO4O. OOl ~0· Olg/lOOmL， 溶劑為蒸餾水。
[0010] 對(duì)于上文所述的技術(shù)方案，優(yōu)選的情況下：所述的混合菌劑經(jīng)再次發(fā)酵的接種量 為混合菌劑占總發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)量的1~5%。
[0011] 對(duì)于上文所述的技術(shù)方案，優(yōu)選的情況下：所述的膠質(zhì)芽孢桿菌（Bacillus mucilaginosus) CGMCCL 153 發(fā)酵液，巨大芽抱桿菌（Bacillus megaterium) ACCC10010 發(fā) 酵液，褐色球形固氮菌（Azotobacter chroococcum) CGMCC1. 142發(fā)酵液的菌種數(shù)量均不低 于 IO8 個(gè) /mL。
[0012] 對(duì)于上文所述的技術(shù)方案，優(yōu)選的情況下：所述的再次發(fā)酵制得的終產(chǎn)物總菌數(shù) 量 6 ~10 X IO8 個(gè)/mL。
[0013] 對(duì)于上文所述的技術(shù)方案，優(yōu)選的情況下：所述再次發(fā)酵的條件為30°C下培養(yǎng) 4~7天。
[0014] 對(duì)于上文所述的技術(shù)方案，優(yōu)選的情況下：制備膠質(zhì)芽孢桿菌（鉀細(xì)菌） (Bacillus mucilaginosus)CGMCCl. 153發(fā)酵液所用的一級(jí)和二級(jí)發(fā)酵液體培養(yǎng)基配方為： KH2PO40.0 6g、MgSO4 · 7Η200· 05g、CaSO4 · 5Η200· 004g、蛋白胨 5g、玉米漿（50% 干重）2. 5g、乳 糖 15g、NaC14g、蒸饋水 1000mL、pH7. 1 ;
[0015] 制備巨大芽孢桿菌（Bacillus megaterium) ACCC10010發(fā)酵液所用的一級(jí)和二級(jí) 發(fā)酵液體培養(yǎng)基配方為：牛肉膏3g、蛋白胨5g、NaC15g、蒸餾水1000 mU pH7.0 ;
[0016] 制備褐色球形固氣菌（Azotobacter chroococcum)CGMCCl. 142發(fā)酵液所用的一級(jí) 和二級(jí)發(fā)酵液體培養(yǎng)基配方為：KH2PO4O. 2g、K2HP040. 8g、MgS04 ·7Η20(λ 2g、CaS04 ·2Η20(λ lg、 Na2MoO4 · 2H20 微量、酵母膏 0. 5g、甘露醇 20g、FeCl3 微量、蒸餾水 1000 mU pH7. 2 ;
[0017] 制備枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)ACCC01183發(fā)酵液所用的一級(jí)和二級(jí)發(fā) 酵液體培養(yǎng)基配方為：牛肉膏l(xiāng)〇g、蛋白胨10g、NaC15g、葡萄糖10g，蒸餾水1000mL，pH7. 0，
[0018] 所述微生物復(fù)合菌劑作為植物生物調(diào)節(jié)劑在農(nóng)作物種植中應(yīng)用。
[0019] 本發(fā)明的有益效果是：這種茄果類(lèi)蔬菜微生物復(fù)合菌劑采用巨大芽孢桿菌、褐色 圓形固氮菌、膠質(zhì)芽孢桿菌(鉀細(xì)菌)、枯草芽孢桿菌作為制備菌種。以上菌種分別經(jīng)過(guò)一級(jí) 菌種培養(yǎng)，二、三級(jí)發(fā)酵，使發(fā)酵液中菌數(shù)達(dá)到6~10 X IO8個(gè)/mL，即得茄果類(lèi)蔬菜微生物 復(fù)合菌劑。本產(chǎn)品經(jīng)長(zhǎng)期實(shí)地驗(yàn)證，配方合理，功效穩(wěn)定，能促進(jìn)作物生長(zhǎng)、改善果實(shí)品質(zhì)、 促早熟、增加產(chǎn)量，提高肥料利用率，改良土壤生態(tài)環(huán)境，并且有一定的防病抗病功效。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 本發(fā)明采用膠質(zhì)芽孢桿菌（鉀細(xì)菌）（Bacillus mucilaginosus) CGMCCL I53, 巨大芽抱桿菌（Bacillus megaterium) ACCC10010，褐色球形固氮菌（Azotobacter chroococcum) CGMCCL 142,枯草芽抱桿菌（Bacillus subtilis)ACCC01183,均可由商業(yè)途 徑購(gòu)買(mǎi)獲得，后文中為方便描述，分別簡(jiǎn)寫(xiě)為膠質(zhì)芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、褐色球形固氮 菌、枯草芽孢桿菌。
[0021] 實(shí)施例1 :
[0022] 所述的茄果類(lèi)蔬菜微生物復(fù)合菌劑制備步驟如下：
[0023] 1.接種：將所述各菌種(膠質(zhì)芽孢桿菌、巨大芽孢桿菌、褐色球形固氮菌、枯草芽 孢桿菌)分別接于斜面培養(yǎng)基上；巨大芽孢桿菌為27~37°C，pH為6. 5~7. 5,培養(yǎng)時(shí)間為 4天；褐色球形固氮菌培養(yǎng)溫度25~30°C，pH為7. O~8. 0,培養(yǎng)時(shí)間為5天；枯草芽孢桿 菌培養(yǎng)溫度27~37°C，pH為6. 5~7. 5,培養(yǎng)時(shí)間為4天；膠質(zhì)芽孢桿菌(鉀細(xì)菌）培養(yǎng)溫 度25~35°C，pH為7. 5~8. 0,培養(yǎng)時(shí)間為5天；
[0024] 2. -級(jí)菌種培養(yǎng)：將所述步驟1制備的菌種分別按接種環(huán)一環(huán)的量接種于盛有 相應(yīng)液體培養(yǎng)基的50mL錐形瓶中，培養(yǎng)基pH為6. 5~7. 5,錐形瓶放入搖床振蕩，溫度為 30°C，振蕩24~48h ;采用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，菌液中菌種數(shù)量分別達(dá)到IO8個(gè)/mL ;
[0025] 3.二級(jí)發(fā)酵：將所述步驟2制備的菌種分別按5%接種于盛有液體培養(yǎng)基的 1000 mL錐形瓶中，培養(yǎng)基pH6. 5~7. 5,放入搖床振蕩，溫度為30°C，振蕩48~72h ;使菌種 數(shù)量分別達(dá)到IO8個(gè)/mL以上，從而制得膠質(zhì)芽孢桿菌（鉀細(xì)菌）發(fā)酵液、巨大芽孢桿菌發(fā) 酵液、褐色球形固氮菌發(fā)酵液和枯草芽孢桿菌發(fā)酵液。
[0026] 將各菌種按質(zhì)量百分比混合后進(jìn)行再次發(fā)酵：膠質(zhì)芽孢桿菌（鉀細(xì)菌）發(fā)酵液 30~40%、巨大芽孢桿菌發(fā)酵液30~40%、褐色球形固氮菌發(fā)酵液10~20%、枯草芽孢桿菌 發(fā)酵液5~10%，如表1常用配方表。
[0027] 表1.常用配方表
[0028]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種微生物復(fù)合菌劑在茄果類(lèi)蔬菜種植中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的微生物菌劑的應(yīng)用，其特征在于：將微生物菌劑用水稀釋500 倍，于茄果類(lèi)蔬菜的坐果期、果實(shí)膨大期、著色期各噴施一次。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的微生物菌劑的應(yīng)用，其特征在于：所述微生物菌劑采用膠 質(zhì)芽抱桿菌（Bacillus mucilaginosus) CGMCCL 153發(fā)酵液，巨大芽抱桿菌（Bacillus megaterium)ACCC10010發(fā)酵液，褐色球形固氮菌（Azotobacter chroococcum) CGMCCL 142 發(fā)酵液，枯草芽孢桿菌（Baci I lus subti I is ) ACCCOl 183發(fā)酵液混合后作為混合菌劑，經(jīng)再 次發(fā)酵制得；其中： 所述的膠質(zhì)芽孢桿菌（Bacillus mucilaginosus) CGMCC1. 153發(fā)酵液，巨大芽孢桿菌(Bacillus megaterium)ACCC10010發(fā)酵液，褐色球形固氮菌（Azotobacter chroococcum) CGMCC1. 142發(fā)酵液，枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)ACCC01183混合的質(zhì)量百分比分 別為30~40%、30~40%、10~20%、5~10% ; 所述再次發(fā)酵的發(fā)酵培養(yǎng)基為：玉米粉2~20g/100mL、豆栢粉1~10g/100mL、酵母膏 0? 05 ~0? 2g/100mL、KH2PO4O. 2 ~2g/100mL、K2HPO4O. 5 ~2g/100mL、MgSO4 ? 7H200. 001 ~ 0? 02g/100mL、NaClO.5 ~0? 8g/100mL、（NH4)2SO4O. 001 ~0? 01g/100mL，溶劑為蒸餾水。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的微生物菌劑的應(yīng)用，其特征在于：所述的混合菌劑經(jīng)再次發(fā) 酵的接種量為混合菌劑占總發(fā)酵培養(yǎng)基質(zhì)量的1~5%。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的微生物菌劑的應(yīng)用，其特征在于：所述的膠質(zhì)芽孢桿菌 (Bacillus mucilaginosus) CGMCCL 153發(fā)酵液，巨大芽抱桿菌（Bacillus megaterium) ACCC10010發(fā)酵液，褐色球形固氣菌（Azotobacter chroococcum) CGMCCL 142發(fā)酵液的菌 種數(shù)量均不低于IO8個(gè)/mL。
6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的微生物菌劑的應(yīng)用，其特征在于：所述的再次發(fā)酵制得的終 產(chǎn)物總菌數(shù)量6~10XIO8個(gè)/mL。
7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的微生物菌劑的應(yīng)用，其特征在于：所述再次發(fā)酵的條件為 30°C下培養(yǎng)4~7天。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)一種微生物復(fù)合菌劑在茄果類(lèi)蔬菜種植中的應(yīng)用；其采用膠質(zhì)芽孢桿菌（Bacillus mucilaginosus）CGMCC1.153發(fā)酵液，巨大芽孢桿菌（Bacillus megaterium）ACCC10010發(fā)酵液，褐色球形固氮菌（Azotobacter chroococcum）CGMCC1.142發(fā)酵液，枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）ACCC01183發(fā)酵液混合后作為混合菌劑，經(jīng)再次發(fā)酵制得。本復(fù)合菌劑充分利用了各菌種之間的相互作用，起到刺激植物生長(zhǎng)、緩解土地板結(jié)、改良土壤生態(tài)環(huán)境、防病抗病等作用，能改善果實(shí)外觀(guān)質(zhì)量和提高果實(shí)品質(zhì)，增產(chǎn)效果明顯，能顯著提高經(jīng)濟(jì)效益，達(dá)到增產(chǎn)、高產(chǎn)的目的。
【IPC分類(lèi)】A01N63-02, A01P21-00
【公開(kāi)號(hào)】CN104686584
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201310665868
【發(fā)明人】崔國(guó)臣, 周悅, 顧艷麗, 崔昌娜
【申請(qǐng)人】大連三科生物工程有限公司
【公開(kāi)日】2015年6月10日
【申請(qǐng)日】2013年12月6日