一種小鼠模擬運(yùn)輸應(yīng)激模型的建立方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種小鼠模擬運(yùn)輸應(yīng)激模型的建立方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 在大多數(shù)應(yīng)激條件下，動(dòng)物機(jī)體的生物學(xué)功能會(huì)受到不同程度損傷，如生長(zhǎng)發(fā)育 受阻、生產(chǎn)力及繁殖力下降，這是機(jī)體為保證其基本的生命活動(dòng)所必須付出的代價(jià)。動(dòng)物在 應(yīng)激狀態(tài)下，如果體內(nèi)固有的貯備不足以應(yīng)對(duì)應(yīng)激，機(jī)體就會(huì)動(dòng)用本該用于其他生物功能 的資源，進(jìn)而導(dǎo)致這些生物功能的損傷。在運(yùn)輸途中的饑渴、混群、擁擠、高溫、顛簸、噪聲等 運(yùn)輸應(yīng)激源的綜合作用下，牛、豬等動(dòng)物機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)、水分大量消耗和免疫力降低，不僅導(dǎo) 致動(dòng)物生長(zhǎng)速度和生產(chǎn)性能降低，還可能繼發(fā)病原性疾病，對(duì)動(dòng)物的身體健康和生產(chǎn)性能 產(chǎn)生極大影響，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)產(chǎn)生嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。
[0003] 為預(yù)防牛、豬等動(dòng)物的運(yùn)輸應(yīng)激所造成的危害，研宄人員開(kāi)展了大量的試驗(yàn)研宄， 由于開(kāi)展動(dòng)物運(yùn)輸應(yīng)激試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物費(fèi)用較高和激發(fā)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物運(yùn)輸應(yīng)激過(guò)程比較繁瑣， 在一定程度上影響了動(dòng)物運(yùn)輸應(yīng)激的試驗(yàn)研宄。
[0004] 根據(jù)小鼠的生理生化特點(diǎn)，摸索建立運(yùn)輸應(yīng)激模型，對(duì)于研宄運(yùn)輸應(yīng)激機(jī)制，篩選 有效的干預(yù)措施，減小或避免運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)動(dòng)物的危害必要。但直接使用現(xiàn)有的牛、豬等大動(dòng) 物來(lái)建立應(yīng)激模型，面臨的最大難題是保證運(yùn)輸應(yīng)激條件一致性是相當(dāng)困難的。運(yùn)輸應(yīng)激 刺激是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，運(yùn)輸應(yīng)激刺激因素包括實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自身因素及運(yùn)輸 應(yīng)激刺激因素和動(dòng)物保定因素，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物越大，上述因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響的不確定性就越 明顯。此外所需實(shí)驗(yàn)動(dòng)物費(fèi)的開(kāi)支也會(huì)明顯增加。建立低成本、特征穩(wěn)定可靠的模擬運(yùn)輸 應(yīng)激模型方法可以促進(jìn)運(yùn)輸應(yīng)激機(jī)制和干預(yù)措施的研宄。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明為了解決上述問(wèn)題，設(shè)計(jì)了一種小鼠模擬運(yùn)輸應(yīng)激模型的建立方法，具體 技術(shù)方案是：
[0006] 一種小鼠模擬運(yùn)輸應(yīng)激模型的建立方法，關(guān)鍵是：本方法步驟中包括：
[0007] A、應(yīng)激時(shí)間的確定
[0008] 將2N只體重為18-22g的實(shí)驗(yàn)小鼠平均分為實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組兩組，其中N為整數(shù)， 在22~25°C溫度下將實(shí)驗(yàn)組小鼠于160-180次/分的搖床上，每搖動(dòng)滿1小時(shí)即刻從實(shí)驗(yàn) 組、對(duì)照組中各取小鼠采血取樣，并繪制兩組小鼠的血糖、血清乳酸脫氫酶、促腎上腺皮質(zhì) 激素隨時(shí)間變化的規(guī)律曲線，根據(jù)規(guī)律曲線確定合適的應(yīng)激時(shí)間T ;
[0009] B、驗(yàn)證試驗(yàn)
[0010] 再取2M只體重為18-22g的實(shí)驗(yàn)小鼠平均分為實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組兩組，其中M為整 數(shù)，在22~25°C溫度下將實(shí)驗(yàn)組小鼠于160-180次/分的搖床上，搖床連續(xù)搖動(dòng)時(shí)間為T， 期間觀察小鼠行為表現(xiàn)，在T-I及T時(shí)刻，分別從實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組中各取小鼠采血取樣，檢測(cè) 兩組小鼠的血清皮質(zhì)醇、肌酸磷酸水平并進(jìn)行比較，確定應(yīng)激時(shí)間T的準(zhǔn)確性。
[0011] 實(shí)驗(yàn)證明，優(yōu)選地，所述的搖床的振蕩速度為170次/分。
[0012] 還有，步驟A中搖床連續(xù)搖動(dòng)不少于8小時(shí)。
[0013] 步驟A中所述的應(yīng)激時(shí)間T為4小時(shí)。
[0014] 所述的采血取樣方式為先將小鼠斷頭采血，再將血樣靜置，待凝集后進(jìn)行離心處 理。
[0015] 所述的離心處理按3000rpm/min進(jìn)行離心，離心時(shí)間為5min。
[0016] 所述的實(shí)驗(yàn)小鼠中雌、雄各半。
[0017] 本發(fā)明的關(guān)鍵在于：本發(fā)明根據(jù)小鼠的生理生化特點(diǎn)，而建立運(yùn)輸應(yīng)激模型，對(duì)于 研宄運(yùn)輸應(yīng)激機(jī)制，篩選有效的干預(yù)措施，減小或避免運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)動(dòng)物的危害有著非常重 要的作用；另外，本方法的實(shí)驗(yàn)過(guò)程保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自身因素、運(yùn)輸應(yīng)激刺激因素和動(dòng)物保定 因素的穩(wěn)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果更加可靠。
[0018] 本發(fā)明的有益效果是：本運(yùn)輸應(yīng)激模型成本低廉、特征穩(wěn)定可靠，有效地避免了利 用牛、豬等大動(dòng)物來(lái)建立應(yīng)激模型而面臨的難以保證運(yùn)輸應(yīng)激條件一致性的難題。實(shí)驗(yàn)動(dòng) 物越大，運(yùn)輸應(yīng)激刺激因素包括實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自身因素及運(yùn)輸應(yīng)激刺激因素和 動(dòng)物保定因素，上述因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響的不確定性就越明顯，且所需實(shí)驗(yàn)動(dòng)物費(fèi)用的開(kāi) 支也會(huì)明顯增加。所以本發(fā)明建立的低成本、特征穩(wěn)定可靠的模擬運(yùn)輸應(yīng)激模型方法可以 促進(jìn)運(yùn)輸應(yīng)激機(jī)制和干預(yù)措施的研宄。
【附圖說(shuō)明】
[0019] 圖1是小鼠的血糖變化規(guī)律。
[0020] 圖2是小鼠的腎上腺皮質(zhì)激素變化規(guī)律。
[0021] 圖3是小鼠的乳酸脫氫酶變化規(guī)律。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。
[0023] 實(shí)驗(yàn)一：運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)小鼠血糖、血清腎上腺皮質(zhì)激素、乳酸脫氫酶影響規(guī)律觀察：
[0024] 將50只Km小白鼠（雌、雄各半，體重在18-22g之間）隨機(jī)分成二組，分別放置在 小鼠籠內(nèi)。在室溫（22~25°C )下將一組小鼠于170次/分的搖床上，連續(xù)搖動(dòng)8小時(shí)。 搖動(dòng)間隔1小時(shí)后，各組取3只小鼠斷頭采血，放置30min，血標(biāo)本凝集后，按3000rpm/min 進(jìn)行離心，離心時(shí)間為5min。應(yīng)用ELISAL試劑盒檢測(cè)血糖、腎上腺皮質(zhì)激素和血清乳酸脫 氫酶的水平。
[0025] 試驗(yàn)結(jié)果：
[0026] 血糖、血清腎上腺皮質(zhì)激素和乳酸脫氫酶的檢測(cè)結(jié)果如圖1、圖2、圖3,在受運(yùn)輸 應(yīng)激后，應(yīng)激小鼠的血糖、腎上腺皮質(zhì)激素、乳酸脫氫酶均升高，4h后與正常對(duì)照組相比，均 有顯著性差異（P〈〇. 05) ;7h后其濃度都高于正常對(duì)照組。
[0027] 實(shí)驗(yàn)二：運(yùn)輸應(yīng)激對(duì)小鼠血清皮質(zhì)醇、肌酸磷酸影響：
[0028] 將12只Km小白鼠，雌、雄各半，體重在18-22g之間，隨機(jī)分成二組，分別放置在小 鼠籠內(nèi)。在室溫22~25°C下將一組小鼠于170次/分的搖床上，連續(xù)搖動(dòng)4h，試驗(yàn)過(guò)程 中，觀察小鼠行為表現(xiàn)。然后分別在搖動(dòng)3h、4h時(shí)，各組取3只小鼠斷頭采血，放置30min， 血標(biāo)本凝集后，按3000rpm/min進(jìn)行離心，離心時(shí)間為5min。應(yīng)用ELISAL試劑盒檢測(cè)血清 皮質(zhì)醇和肌酸磷酸水平。
[0029] 試驗(yàn)結(jié)果：行為觀察結(jié)果為小鼠受應(yīng)激刺激40min后開(kāi)始產(chǎn)生明顯的行為變化， 如毛須樹(shù)立、排便、站立不安、尖叫；3h后眼睛開(kāi)始流淚，眼周皮毛不潔。
[0030] 血清檢測(cè)指標(biāo)見(jiàn)表1
[0031] 表1血清皮質(zhì)醇、肌酸磷酸的檢測(cè)結(jié)果
[0032]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種小鼠模擬運(yùn)輸應(yīng)激模型的建立方法，其特征在于：本方法步驟中包括： A、 應(yīng)激時(shí)間的確定 將2N只體重為18-22g的實(shí)驗(yàn)小鼠平均分為實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組兩組，其中N為整數(shù)，在 22~25°C溫度下將實(shí)驗(yàn)組小鼠于160-180次/分的搖床上，每搖動(dòng)滿1小時(shí)即刻從實(shí)驗(yàn)組、 對(duì)照組中各取小鼠采血取樣，并繪制兩組小鼠的血糖、血清乳酸脫氫酶、促腎上腺皮質(zhì)激素 隨時(shí)間變化的規(guī)律曲線，根據(jù)規(guī)律曲線確定合適的應(yīng)激時(shí)間T ; B、 驗(yàn)證試驗(yàn) 再取2M只體重為18-22g的實(shí)驗(yàn)小鼠平均分為實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組兩組，其中M為整數(shù)，在 22~25°C溫度下將實(shí)驗(yàn)組小鼠于160-180次/分的搖床上，搖床連續(xù)搖動(dòng)時(shí)間為T，期間觀 察小鼠行為表現(xiàn)，在T-I及T時(shí)刻，分別從實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組中各取小鼠采血取樣，檢測(cè)兩組小 鼠的血清皮質(zhì)醇、肌酸磷酸水平并進(jìn)行比較，確定應(yīng)激時(shí)間T的準(zhǔn)確性。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小鼠模擬運(yùn)輸應(yīng)激模型的建立方法，其特征在于：所述 的搖床的振蕩速度為170次/分。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小鼠模擬運(yùn)輸應(yīng)激模型的建立方法，其特征在于：步驟A 中搖床連續(xù)搖動(dòng)不少于8小時(shí)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小鼠模擬運(yùn)輸應(yīng)激模型的建立方法，其特征在于：步驟A 中所述的應(yīng)激時(shí)間T為4小時(shí)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小鼠模擬運(yùn)輸應(yīng)激模型的建立方法，其特征在于：所述 的采血取樣方式為先將小鼠斷頭采血，再將血樣靜置，待凝集后進(jìn)行離心處理。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種小鼠模擬運(yùn)輸應(yīng)激模型的建立方法，其特征在于：所述 的離心處理按3000rpm/min進(jìn)行離心，離心時(shí)間為5min。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種小鼠模擬運(yùn)輸應(yīng)激模型的建立方法，其特征在于：所述 的實(shí)驗(yàn)小鼠中雌、雄各半。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種小鼠模擬運(yùn)輸應(yīng)激模型的建立方法，利用搖床模擬運(yùn)輸應(yīng)激刺激來(lái)分別進(jìn)行應(yīng)激時(shí)間的確定和驗(yàn)證試驗(yàn)。本運(yùn)輸應(yīng)激模型成本低廉、特征穩(wěn)定可靠，有效地避免了利用牛、豬等大動(dòng)物來(lái)建立應(yīng)激模型而面臨的難以保證運(yùn)輸應(yīng)激條件一致性的難題。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物越大，運(yùn)輸應(yīng)激刺激因素包括實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自身因素及運(yùn)輸應(yīng)激刺激因素和動(dòng)物保定因素，上述因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響的不確定性就越明顯，且所需實(shí)驗(yàn)動(dòng)物費(fèi)用的開(kāi)支也會(huì)明顯增加。所以本發(fā)明建立的低成本、特征穩(wěn)定可靠的模擬運(yùn)輸應(yīng)激模型方法可以促進(jìn)運(yùn)輸應(yīng)激機(jī)制和干預(yù)措施的研究。
【IPC分類】A01K67-027
【公開(kāi)號(hào)】CN104737985
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510094866
【發(fā)明人】石玉祥, 安永福, 索慧娜, 王曉芳, 李英, 欒英凡, 王艷梅
【申請(qǐng)人】河北工程大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年7月1日
【申請(qǐng)日】2015年3月3日