殺蚊蘇云金芽孢桿菌顆粒劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種生物農(nóng)藥及其制備方法，具體涉及一種殺蚊蘇云金芽孢桿菌顆粒 劑及其制備方法，屬于生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 蘇云金芽孢桿菌Bt)，是一種革蘭氏陽性細(xì)菌，蘇云金 芽孢桿菌在芽孢形成階段產(chǎn)生的伴孢晶體（即S-內(nèi)毒素）具有殺蟲活性。利用Bt制成的 商業(yè)化殺蟲劑，被廣泛地應(yīng)用于農(nóng)林業(yè)以及媒介害蟲的生物防治。Bt具有不污染環(huán)境、對人 畜無害、不易產(chǎn)生抗性等優(yōu)點(diǎn)，是目前研宄最深入、應(yīng)用最廣泛的微生物殺蟲劑。Bt以色列 亞種（漢簡稱Bti)對多種蚊蟲具有高效活性，已成功 開發(fā)為生物殺蟲劑用于蚊蟲等衛(wèi)生害蟲的防治，在瘧疾、登革熱、黃熱病等蚊媒疾病的控制 上發(fā)揮了重要的作用。但是，目前市面上流通的Bt制劑產(chǎn)品應(yīng)用受限，主要是由于在使用 過程中其活性成分芽孢和晶體易受環(huán)境中紫外線的照射而使其殺蟲活性下降或喪失。從而 降低產(chǎn)品的殺蟲活性以及持效期。
[0003]目前提高Bt殺蟲劑抗紫外輻射能力的方式主要是利用劑型研宄或添加助劑的方 法，通過包裹等制劑形式或者在菌劑中添加紫外吸收劑和保護(hù)劑，以減少紫外線對菌體的 直接輻射。主要是著色劑和熒光增白劑等。這些添加劑對Bt制劑起到了很好的紫外保護(hù) 作用，大大延長了 Bt制劑的有效期。目前報道已上市商品化的Bt劑型主要分為固體型和 液體型，固體有粉劑、顆粒劑、粉末劑、球劑；液體有懸浮劑、乳劑、膠囊劑等。微膠囊漂浮劑 是目前新劑型中被認(rèn)為最有效和最具開發(fā)前景的一種劑型形式。這些劑型不僅使得顆粒劑 可以穩(wěn)定的運(yùn)輸與保存，而且對紫外線輻射等不利的環(huán)境因素具有很好的保護(hù)作用。因此， Bt制劑加工程度與其殺蟲劑開發(fā)應(yīng)用密切相關(guān)。
[0004] Bt顆粒劑是目前農(nóng)藥劑型中技術(shù)含量最高的一種，它是針對孑孓生活習(xí)性而設(shè)計 的一種專用劑型，具有漂浮和持續(xù)釋放能力。目前的常規(guī)劑型在投入孑孓的滋生地后，由于 其大部分有效物質(zhì)密度比水大，經(jīng)一段時間便會因為重力作用沉入水底并吸附在塘泥上， 減少了 Bt與幼蚊的接觸時間，而降低藥效。在適宜的溫度和環(huán)境條件下，蚊蟲完成一個周 期通常只需7天左右。需頻繁施藥才能較理想的控制害蟲數(shù)量，但容易增大對環(huán)境的壓力， 并且造成浪費(fèi)。
[0005]微膠囊化顆粒劑是解決Bt菌野外使用的最佳方法，它可以減少紫外線輻射，增強(qiáng) 制劑漂浮、緩慢釋放能力，并延長Bt菌使用的持效期。目前海藻酸鈉微膠囊化最常用的方 法是銳孔滴入法，即將含有微生物的海藻酸鈉溶液通過不同孔徑的針頭滴入到二價交聯(lián)溶 液中，微膠囊的大小取決于海藻酸鈉溶液的粘度以及針頭的大小。該方法工藝簡單、操作方 便。本文采用銳孔滴入法并且添加漂浮劑、紫外保護(hù)劑等，不僅起到漂浮保護(hù)作用，而且還 增強(qiáng)制劑毒力，從而延長了持效期。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的在于提供一種殺蚊蘇云金芽孢桿菌顆粒劑及其制備方法。
[0007]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下： 本發(fā)明的殺蚊蘇云金芽孢桿菌顆粒劑的制備方法，其特征在于操作步驟如下： (1) 配料：取海藻酸鈉、空心玻璃微珠、蘇云金芽孢桿菌原粉、黑色素、苯甲酸鈉和水， 配制成混合溶液，各原料占制劑的重量百分比分別為0. 5%~1. 0%、2. 0%~4. 0%、2. 5%~3. 5%、 0? 01%~0. 02%、0. 1%~0. 3%、其余水； (2) 配氯化鈣溶液：配制重量百分濃度為P/p5%的氯化鈣水溶液； (3) 制備顆粒劑：用無菌注射器將步驟（1)的混合溶液逐滴加入到步驟（2)的氯化鈣水 溶液中，液滴形成顆粒狀微珠并凝固； (4) 硬化并干燥：步驟（3)的液滴在氯化鈣溶液中硬化時間不少于5. 2 h，棄氯化鈣溶 液，將硬化的顆粒狀微珠用蒸餾水清洗，風(fēng)干，即可。
[0008] 所述海藻酸鈉、苯甲酸鈉、氯化鈣為分析純；殺蚊蘇云金桿菌為Bt以色列亞種（已 公開，菌株保藏號為：CGMCC 1. 1754);蘇云金芽孢桿菌原粉，純度為5400ITU/mg ;空心玻璃 微珠的規(guī)格為0LH-D，粒度范圍15~120微米；上述原料均由市場購得。
[0009] 本發(fā)明還保護(hù)利用上述方法制備的殺蚊蘇云金芽孢桿菌漂浮劑。
[0010] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)及技術(shù)原理：本發(fā)明以海藻酸鈉為載體，氯化鈣為交聯(lián)劑。加入蘇云 金芽孢桿菌原粉為有效活性成分，具有高效的殺蚊活性。由于玻璃微珠的作用，使得劑型具 有漂浮緩釋作用，并且能夠有效減少紫外線的輻射，延長了 Bt產(chǎn)品的持效期。黑色素是產(chǎn) 品的紫外保護(hù)添加劑，增強(qiáng)了蘇云金芽孢桿菌的抗紫外能力。為了避免蘇云金芽孢桿菌漂 浮劑因為水體物質(zhì)變質(zhì)發(fā)霉而致使漂浮能力下降等情況發(fā)生，苯甲酸鈉對菌具有一定的防 腐保護(hù)作用。蘇云金芽孢桿菌制劑的配方與殺蟲效果關(guān)聯(lián)緊密，對產(chǎn)品的實際野外殺蚊效 果及經(jīng)濟(jì)效益具有顯著影響。本漂浮劑為固體顆粒劑，配方合理且殺蟲毒力高；使用時只需 將本顆粒劑灑入蚊蟲滋生的水面上，防治效果好，并且抗紫外能力強(qiáng)，延長野外持效期，為 產(chǎn)品的開發(fā)與推廣應(yīng)用提供了有力的支持。
【具體實施方式】
[0011] 為了充分公開本發(fā)明的殺蚊蘇云金芽孢桿菌顆粒劑及其制備方法，以下結(jié)合實施 例加以說明。 實施例1: 一種殺蚊蘇云金芽孢桿菌顆粒劑制備方法，包括以下步驟： (1) 取海藻酸鈉、、空心玻璃微珠、蘇云金芽孢桿菌原粉、黑色素、苯甲酸鈉和水，配制成 混合溶液，各原料占制劑的重量百分比分別為0. 7%、2. 9%、3. 1%、0. 015%、0. 2%、其余水； (2) 配制重量百分濃度為4. 3%的氯化鈣水溶液； (3) 用無菌注射器將步驟（1)的混合溶液逐滴加入到步驟（2)的氯化鈣水溶液中，液滴 形成顆粒狀并凝固； (4) 步驟（3)的液滴在氯化鈣溶液中硬化時間為5. 2 h，棄氯化鈣水溶液，將硬化的顆 粒狀微珠用蒸餾水清洗2次，風(fēng)干。
[0012] 稱取2g本發(fā)明的殺蚊蘇云金芽孢桿菌顆粒劑加入到8L的水中，放入500只致倦 庫蚊IV齡幼蟲，實驗重復(fù)3次并對照。觀察24h死亡率，當(dāng)處理死亡率超過50%時，更換新 鮮水及移入新的試蟲；每24h統(tǒng)一更換新鮮水和新鮮試蟲。本發(fā)明的殺蚊蘇云金桿菌顆粒 劑殺蟲效果如表1所示，其漂浮率如表2所示。
[0013]表1殺蚊蘇云金芽孢桿菌顆粒劑處理后不同時間內(nèi)對致倦庫蚊III齡幼蟲平均校 正死亡率
備注：以上數(shù)據(jù)結(jié)果為3次重復(fù)的平均值。
[0014] 表2殺蚊蘇云金芽孢桿菌顆粒劑處理后不同時間內(nèi)平均漂浮率
備注：以上數(shù)據(jù)結(jié)果為3次重復(fù)的平均值。
[0015] 如表1所示，殺蚊蘇云金芽孢桿菌顆粒劑處理后，隨著處理時間的延長，試蟲平均 相對死亡率呈逐漸升高趨勢，至192h試蟲相對死亡率達(dá)到99%。如表2所示，殺蚊蘇云金芽 孢桿菌顆粒劑有著較好的機(jī)械性能和持久的漂浮性，直到120h才開始出現(xiàn)下沉，到192h漂 浮率仍保持84. 00%。
[0016] 以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與 修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明的涵蓋范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種殺蚊蘇云金芽孢桿菌顆粒劑制備方法，其特征在于操作步驟如下： (1) 配料：取海藻酸鈉、空心玻璃微珠、蘇云金芽孢桿菌原粉、黑色素、苯甲酸鈉和水，配 制成混合溶液，各原料占顆粒劑的重量百分比分別為0. 5%~1. 0%、2. 0%~4. 0%、2. 5%~3. 5%、 0? 01%~0. 02%、0. 1%~0. 3%，其余為水； (2) 配氯化鈣溶液：配制重量百分濃度為P/p5%的氯化鈣水溶液； (3) 制備漂浮劑：用無菌注射器將步驟（1)的混合溶液逐滴加入到步驟（2)的氯化鈣水 溶液中，液滴形成顆粒狀微珠并凝固； (4) 硬化并干燥：步驟（3)的液滴在氯化鈣溶液中硬化時間不少于5. 2h，棄氯化鈣溶 液，將硬化的顆粒狀微珠用蒸餾水清洗，風(fēng)干，即可。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種殺蚊蘇云金芽孢桿菌顆粒劑制備方法，其特征在于所述 配料，取海藻酸鈉、蘇云金芽孢桿菌原粉、空心玻璃微珠、黑色素、苯甲酸鈉和水，配制成混 合溶液，各原料占制劑的重量百分比分別為〇. 7%、2. 9%、3. 1%、0. 015%、0. 2%，其余為水。3. 由權(quán)利要求1或2所述的方法制備的殺蚊蘇云金芽孢桿菌顆粒劑。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種殺蚊蘇云金芽孢桿菌顆粒劑及其制備方法。殺蚊蘇云金芽孢桿菌顆粒劑的制備方法，包括配料、配制氯化鈣溶液、制備漂浮劑、硬化并干燥。本發(fā)明以海藻酸鈉為載體，氯化鈣為交聯(lián)劑；加入蘇云金芽孢桿菌原粉為有效活性成分，具有高效的殺蚊活性。通過空心玻璃微珠使劑型達(dá)到漂浮緩釋作用，減少了紫外線的輻射，延長了持效期。加入黑色素為紫外保護(hù)添加劑，增強(qiáng)了該菌的抗紫外輻射能力。本發(fā)明的產(chǎn)品為固體，配方合理，殺蟲毒力高；使用時只需將本產(chǎn)品灑入蚊蟲滋生的水面上，防治效果好，為開發(fā)推廣與普及應(yīng)用提供了方便。
【IPC分類】A01P7/04, A01N25/22, A01N25/18, A01N25/12, A01N63/00
【公開號】CN104886151
【申請?zhí)枴緾N201510318234
【發(fā)明人】張靈玲, 朱小麗, 陳慧成, 劉健楠, 徐卓吟, 郭雅潔
【申請人】福建農(nóng)林大學(xué)
【公開日】2015年9月9日
【申請日】2015年6月11日