一種鐵皮石斛的組培繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及石斛種植的技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種鐵皮石斛的組培繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，隨著生物技術(shù)的迅猛發(fā)展，一些珍稀菌類和珍稀植物已逐漸走向產(chǎn)業(yè)化人工馴養(yǎng)和規(guī)模栽植，例如珍稀植物金線蓮、半光植物石斛等，鐵皮石斛為多年生珍稀中草藥，在野生環(huán)境下繁殖率和成活率低，現(xiàn)市場(chǎng)上出售的鐵皮石斛大多為人工繁殖培養(yǎng)成熟后晾曬而成的，而鐵皮石斛對(duì)人工培養(yǎng)的生長(zhǎng)環(huán)境要求也是十分苛刻的，現(xiàn)有的鐵皮石斛培養(yǎng)技術(shù)是將鐵皮石斛的培養(yǎng)器皿放在培養(yǎng)室的培養(yǎng)架上，待其生長(zhǎng)成幼苗后，再移植到大棚內(nèi)栽培。
[0003]中國(guó)專利CN103053425B公開(kāi)了一種鐵皮石斛莖段組培快速繁殖方法，包括以下步驟:外植體準(zhǔn)備、腋芽及原球莖誘導(dǎo)、增殖培養(yǎng)和生根壯苗培養(yǎng)。中國(guó)專利CN103843662A公開(kāi)了一種促進(jìn)石斛蘭組培苗壯苗及生根的方法，包括如下步驟:1)將石斛蘭組培苗轉(zhuǎn)入壯苗及生根特定培養(yǎng)基中光照培養(yǎng)，壯苗并誘導(dǎo)生根；2)將已生根的組培苗經(jīng)煉苗后即可進(jìn)行移栽；3)將已生根的石斛蘭組培苗再生植株移栽于樹(shù)皮與蛭石混合的栽培基質(zhì)里。
[0004]有鑒于此，本發(fā)明人研宄和設(shè)計(jì)了一種鐵皮石斛的組培繁殖方法，本案由此產(chǎn)生。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種鐵皮石斛的組培繁殖方法，以獲得成活率高、生長(zhǎng)快、產(chǎn)量高、營(yíng)養(yǎng)成分高的鐵皮石斛。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題的技術(shù)方案是:
一種鐵皮石斛的組培繁殖方法，包括如下步驟:
步驟一、培養(yǎng)基準(zhǔn)備:
以MS為基本培養(yǎng)基，每升添加6-芐氨基嘌呤0.1-0.5mg、萘乙酸0.2-0.5mg、香蕉100g、土豆25g和瓊脂6.5g，混合后的培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)至5.6 ;將配制后的培養(yǎng)基加熱至瓊脂完全溶解，趁熱均勻地分裝于干凈的培養(yǎng)瓶中，稍涼后加蓋；高壓鍋滅菌，滅菌條件為:121°C、105kPa下滅菌15分鐘，滅菌后及時(shí)取出培養(yǎng)瓶，冷卻備用；
步驟二、外植體處理和接種:
采用自然生長(zhǎng)的植株作為外植體，包括清洗，消毒，接種三步，其中:
清洗:選擇自然生長(zhǎng)、無(wú)病蟲(chóng)害的健壯植株，用加入少許肥皂粉的水清洗植株，后用流水沖洗2-3小時(shí)；
消毒:在無(wú)菌條件下，去除葉片，將植株莖段在75%的酒精中浸潤(rùn)8-10秒后，放入10%的氯化汞溶液中消毒10-15分鐘，用無(wú)菌水清洗3-6遍，瀝干水分，放入無(wú)菌的培養(yǎng)皿中備用；
接種:將消毒后備用的莖在無(wú)菌條件下切成長(zhǎng)8-12cm、含一個(gè)莖節(jié)的若干莖段，接于所述培養(yǎng)基上，每瓶接I個(gè)莖段； 步驟三、培養(yǎng):
該步驟將接好種的培養(yǎng)瓶移入培養(yǎng)室進(jìn)行幼苗的誘導(dǎo)與培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，采用波長(zhǎng)在520-680的可見(jiàn)光譜作為光源，并采用循環(huán)交替的方式進(jìn)行照射，即照射6小時(shí)后，停止光照6小時(shí)，再照射6小時(shí)，如此循環(huán)交替照射，光照強(qiáng)度1200-3000流明，培養(yǎng)時(shí)間2-3個(gè)月左右，培養(yǎng)期間要勤檢查，發(fā)現(xiàn)污染的要及時(shí)去除；
步驟四、移栽:
選苗高6-8cm、具葉3張以上、莖基直徑約2mm、發(fā)根2_3條的試管苗，煉苗4天后，洗凈附著在植株上的培養(yǎng)基，并晾干洗滌水后移栽至大棚種植基質(zhì)中栽培，按株距3-7cm、行距3-7cm的標(biāo)準(zhǔn)種植，填土壓實(shí)。
[0007]作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述種植基質(zhì)包括無(wú)機(jī)基質(zhì)層及有機(jī)基質(zhì)層，采用泥炭土作為無(wú)機(jī)基質(zhì)層，烈日下暴曬2-6天；將暴曬后所述泥炭土裝在標(biāo)準(zhǔn)種植盤(pán)上，厚度為3-5cm ;再在所述泥炭土上方鋪設(shè)有機(jī)基質(zhì)層，厚度為2-3cm ;所述機(jī)基質(zhì)層的制備方法為:稱取如下重量份數(shù)的原料:牛糞200-300、落葉20-30、秸桿20-35、鋸末15-20及樹(shù)皮25-30 ;將上述原料混合均勻，加入適量的水，接種酵母菌，堆積發(fā)酵20-25天，消毒制得。
[0008]作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，大棚栽培的條件為:
1)溫度的控制:所述鐵皮石斛在15-30°C內(nèi)可以正常生長(zhǎng)，當(dāng)溫度超過(guò)28°C以上，通過(guò)噴霧裝置降溫；冬天放下塑料薄膜、保溫至6°C以上；
2)濕度的控制:所述鐵皮石斛生長(zhǎng)空氣濕度為55-80%;
3)光度的控制:所述鐵皮石斛光度為1200-1800流明。
[0009]本發(fā)明采用上述技術(shù)方案后，本發(fā)明具有以下有益效果:
1.本發(fā)明人在一次偶然地試驗(yàn)中，意外地發(fā)現(xiàn)采用波長(zhǎng)在520-680的可見(jiàn)光譜作為光源，并采用循環(huán)交替的方式進(jìn)行照射，可以大大提高鐵皮石斛的生長(zhǎng)速度及產(chǎn)量，這可能與激發(fā)其生長(zhǎng)激素有關(guān)，傳統(tǒng)鐵皮石斛組培的時(shí)間一般要在4個(gè)月以上，而本發(fā)明3個(gè)月即可，且本發(fā)明組培的鐵皮石斛鮮重都明顯大于傳統(tǒng)的組培苗，每苗平均重于傳統(tǒng)組培苗5克以上；
2.在培養(yǎng)基中加入香蕉對(duì)于促進(jìn)幼苗生長(zhǎng)非常有利，葉片凈增量、發(fā)根數(shù)和鮮重凈增量尚;
3.經(jīng)過(guò)組培試驗(yàn)，增殖率可達(dá)6.8倍。
【具體實(shí)施方式】
[0010]實(shí)施例1
一種鐵皮石斛的組培繁殖方法，包括如下步驟:
步驟一、培養(yǎng)基準(zhǔn)備:
以MS為基本培養(yǎng)基，每升添加6-節(jié)氨基嘌呤0.lmg、萘乙酸0.2mg、香蕉100g、土豆25g和瓊脂6.5g，混合后的培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)至5.6 ;將配制后的培養(yǎng)基加熱至瓊脂完全溶解，趁熱均勻地分裝于干凈的培養(yǎng)瓶中，稍涼后加蓋；高壓鍋滅菌，滅菌條件為:121°C、105kPa下滅菌15分鐘，滅菌后及時(shí)取出培養(yǎng)瓶，冷卻備用；
步驟二、外植體處理和接種:
采用自然生長(zhǎng)的植株作為外植體，包括清洗，消毒，接種三步，其中: 清洗:選擇自然生長(zhǎng)、無(wú)病蟲(chóng)害的健壯植株，用加入少許肥皂粉的水清洗植株，后用流水沖洗2小時(shí)；
消毒:在無(wú)菌條件下，去除葉片，將植株莖段在75%的酒精中浸潤(rùn)8秒后，放入10%的氯化汞溶液中消毒10分鐘，用無(wú)菌水清洗3-6遍，瀝干水分，放入無(wú)菌的培養(yǎng)皿中備用；接種:將消毒后備用的莖在無(wú)菌條件下切成長(zhǎng)8cm、含一個(gè)莖節(jié)的若干莖段，接于所述培養(yǎng)基上，每瓶接I個(gè)莖段；
步驟三、培養(yǎng):
該步驟將接好種的培養(yǎng)瓶移入培養(yǎng)室進(jìn)行幼苗的誘導(dǎo)與培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度25±2°C，采用波長(zhǎng)在520的可見(jiàn)光譜作為光源，并采用循環(huán)交替的方式進(jìn)行照射，即照射6小時(shí)后，停止光照6小時(shí)，再照射6小時(shí)，如此循環(huán)交替照射，光照強(qiáng)度1200流明，培養(yǎng)時(shí)間3個(gè)月左右，培養(yǎng)期間要勤檢查，發(fā)現(xiàn)污染的要及時(shí)去除；
步驟四、移栽:
選苗高6-8cm、具葉3張以上、莖基直徑約2mm、發(fā)根2_3條的試管苗，煉苗4天后，洗凈附著在植株上的培養(yǎng)基，并晾干洗滌水后移栽至大棚種植基質(zhì)中栽培，按株距3-7cm、行距3-7cm的標(biāo)準(zhǔn)種植，填土壓實(shí)。
[0011]作為實(shí)施例的優(yōu)選方式，所述種植基質(zhì)包括無(wú)機(jī)基質(zhì)層及有機(jī)基質(zhì)層，采用泥炭土作為無(wú)機(jī)基質(zhì)層，烈日下暴曬2-6天；將暴曬后所述泥炭土裝在標(biāo)準(zhǔn)種植盤(pán)上，厚度為3-5cm ;再在所述泥炭土上方鋪設(shè)有機(jī)基質(zhì)層，厚度為2-3cm ;所述機(jī)基質(zhì)層的制備方法為:稱取如下重量份數(shù)的原料:牛糞200-300、落葉20-30、秸桿20-35、鋸末15-20及樹(shù)皮25-30 ;將上述原料混合均勻，加入適量的水，接種酵母菌，堆積發(fā)酵20-25天，消毒制得。
[0012]實(shí)施例2
一種鐵皮石斛的組培繁殖方法，包括如下步驟:
步驟一、培養(yǎng)基準(zhǔn)備:
以MS為基本培養(yǎng)基，每升添加6-節(jié)氨基嘌呤0.5mg、萘乙酸0.5mg、香蕉100g、土豆25g和瓊脂6.5g，混合后的培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)至5.6 ;將配制后的培養(yǎng)基加熱至瓊脂完全溶解，趁熱均勻地分裝于干凈的培養(yǎng)瓶中，稍涼后加蓋；高壓鍋滅菌，滅菌條件為:121°C、105kPa下滅菌15分鐘，滅菌后及時(shí)取出培養(yǎng)瓶，冷卻備用；
步驟二、外植體處理和接種:
采用自然生長(zhǎng)的植株作為外植體，包括清洗，消毒，接種三步，其中:
清洗:選擇自然生長(zhǎng)、無(wú)病蟲(chóng)害的健壯植株，用加入少許肥皂粉的水清洗植株，后用流水沖洗3小時(shí)；
消毒:在無(wú)菌條件下，去除葉片，將植株莖段在75