一種一步法完成梨微嫁接并生根的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微嫁接技術(shù)，尤其涉及一種提高梨微嫁接成活率、縮短嫁接苗培養(yǎng)周 期的一步法完成梨微嫁接并生根的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 嫁接具有改良作物品種生長表現(xiàn)等作用，以達(dá)到提早結(jié)果、調(diào)整生長勢、增強(qiáng)適應(yīng) 性、回避病蟲害、提高產(chǎn)量和品質(zhì)、恢復(fù)樹勢等目的，因而被廣泛應(yīng)用于梨等果樹作物中。但 由于木本植物本身的特性，限制了對梨等果樹優(yōu)質(zhì)多抗砧木品種及種質(zhì)的規(guī)?；焖俸Y 選，嫁接親和性砧穗組合的快速篩選，以及嫁接愈合及砧穗互作機(jī)理的深入研究。
[0003] 微嫁接是一種植物組織培養(yǎng)與嫁接相結(jié)合的技術(shù)，避免了植物材料的木質(zhì)化對優(yōu) 質(zhì)砧木、嫁接親和砧穗組合的篩選，嫁接愈合及砧穗互作機(jī)制深入研究的限制，且具有材料 一致性好，出苗量大，占用空間少等優(yōu)點。但現(xiàn)有技術(shù)中的微嫁接技術(shù)操作繁瑣，培養(yǎng)周期 長，嫁接口愈合率低，造成梨嫁接苗木的成活率低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 鑒于上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供的一種一步法完成梨微嫁接并生根的方 法，在提高梨嫁接苗木成活率的基礎(chǔ)上，縮短梨微嫁接成苗時間。
[0005] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明技術(shù)方案包括：
[0006] -種提高梨微嫁接成活率的方法，其包括以下步驟：
[0007] A、選擇高2厘米至3厘米、生長健壯一致的梨組培苗作為砧木，在無菌條件下，于 頂部斜切去頭，切面長度為〇. 3厘米至0. 7厘米，留1. 5厘米至2. 5厘米莖段，摘除砧木底 部側(cè)芽；
[0008] B、選擇與砧木生長勢相近的組培苗作為接穗，于基部斜切，接穗頂部留2片-4片 幼葉，切面長度為0. 3厘米至0. 7厘米，保證接穗基部與砧木頂部斜切面相吻合；
[0009] C、將砧木頂部斜切面和接穗基部斜切面靠在一起，然后用塑料管固定嫁接部位形 成嫁接苗，再將嫁接苗接種在pH值為5. 8-6的MS+NAA 0. 5mg噸-1+308蔗糖+7-8g瓊脂培 養(yǎng)基上，在25°C ±2°C的條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)的光照強(qiáng)度為1500x-20001x，每天光照條件下培 養(yǎng)十二小時，然后在黑暗條件下培養(yǎng)十二小時，在嫁接口愈合的同時進(jìn)行生根培養(yǎng)。
[0010] 所述的方法，其中，上述步驟A之前還包括：
[0011] 將梨組培苗培養(yǎng)在 MS+6-BA1. Omg ? L-1+IBA0. 3mg ? L-l+40g 蔗糖 +7-8g 瓊脂上， 在pH值為5. 8-6的條件下培養(yǎng)25天-30天，以備挑選砧木與接穗。
[0012] 所述的方法，其中，該方法還包括步驟D :將步驟C中生根30天至40天的嫁接苗 于馴化室馴化3天-4天后，移栽于育苗基質(zhì)中培養(yǎng)，按常規(guī)栽培方式栽培。
[0013] 本發(fā)明提供的一種提高梨微嫁接成活率的方法，通過生長素與細(xì)胞分裂素的合理 添加、蔗糖濃度的適當(dāng)提高可以對植株高度及莖干粗度有一定的促進(jìn)作用，便于微嫁接操 作；嫁接過程中使用'套管微嫁接技術(shù)'，操作簡單，固定效果好，可以及時觀察到嫁接口的 愈合情況和排除死嫁接苗；嫁接后通過生根培養(yǎng)基使植株生根的同時進(jìn)行嫁接口愈合的誘 導(dǎo)，誘導(dǎo)生根可以增強(qiáng)植株對營養(yǎng)物質(zhì)吸收的能力，對嫁接口的愈合有促進(jìn)作用；所有操作 避免了植物材料的木質(zhì)化對篩選優(yōu)質(zhì)砧木、嫁接親和砧穗組合的限制，具有材料一致性好， 出苗量大，嫁接苗培養(yǎng)周期短，成活率高，占用空間少等優(yōu)點。
【具體實施方式】
[0014] 本發(fā)明提供了一種一步法完成梨微嫁接并生根的方法，為使本發(fā)明的目的、技術(shù) 方案及效果更加清楚、明確，以下對本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的具體 實施例僅僅用以解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0015] 本發(fā)明提供了一步法完成梨微嫁接并生根的方法，本方法嫁接成活率為95. 27%， 嫁接愈合與生根一步完成的效率為87. 23%，分別高于傳統(tǒng)嫁接中80%與56%的成活率， 其包括以下步驟：
[0016] 步驟101 :選擇生長健壯一致的梨組培苗，在無菌條件下，將該梨組培苗作為砧木 并將該砧木去頭，留1. 5厘米至2. 5厘米的莖段，摘除砧木底部側(cè)芽，沿砧木頂部斜切，切面 長度為〇. 3厘米至0. 7厘米；
[0017] 步驟102 :選擇長度為1. 5厘米至2. 5厘米的梨組培苗作為接穗，接穗的粗度與砧 木相近，接穗的頂部留2片-4片幼葉，并將接穗基部斜切，切面長度為0. 3厘米至0. 7厘米， 使接穗基部斜切與砧木頂部斜切相吻合；
[0018] 步驟103 :將砧木頂部斜切面和接穗基部斜切面靠在一起，然后用塑料管固定 嫁接部位形成嫁接苗，再將嫁接苗接種在pH值為5. 8-6的MS+6-BA1.Omol?L-1+IBA 0. 3mol?L-l+30g蔗糖+7-8g瓊脂培養(yǎng)基中，在25°C±2°C的條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)的光照強(qiáng)度 為1500X-20001x，每天光照條件下培養(yǎng)十二小時，然后在黑暗條件下培養(yǎng)十二小時，待培養(yǎng) 20天-30天時轉(zhuǎn)入下一步：
[0019] 步驟104 :將步驟103中培養(yǎng)的嫁接苗轉(zhuǎn)移到生根用1/2MS+NAA0. 5mg?L-l+30g 蔗糖+7_8g瓊脂培養(yǎng)基上，在pH值為5. 8-6條件下在該培養(yǎng)基上進(jìn)行生根。
[0020] 尤其是將梨組培苗培養(yǎng)在含不同濃度6-BA及IBA的MS培養(yǎng)基上，篩選最適的砧 木、接穗誘導(dǎo)培養(yǎng)基。不同濃度的6-BA和IBA配比對山梨不定芽伸長增粗生長和增殖影響 不同，在IBA濃度一定的情況下，隨著6-BA濃度的增高，山梨不定芽的伸長量和增殖數(shù)都 逐漸增大，當(dāng)6-BA濃度達(dá)到1. 5mg?L-1時伸長量達(dá)到最高，之后隨著濃度的增高不定芽 的伸長量減少；當(dāng)6-BA濃度達(dá)到2.Omg?L-1時增殖數(shù)達(dá)到最高，之后隨著濃度的增高不 定芽的增殖數(shù)減少且試管苗有玻璃化現(xiàn)象。在6-BA濃度一定的情況下，隨著IBA濃度的增 加，山梨不定芽的伸長量和增殖數(shù)也逐漸增大，當(dāng)IBA濃度為0. 3mg?L-1時達(dá)伸長量到最 高；當(dāng)IBA濃度為0. 2mg?L-1時不定芽增殖數(shù)最大。就微嫁接而言，當(dāng)6-BA1. 5mg?L-1， IBAO. 3mg?L-1時，繼代28d后試管苗的增高值最大，但從長勢上看，試管苗的節(jié)間比較短； 當(dāng)6-BA1.Omg?L-l，IBAO. 3mg?L-1時，試管苗平均增長高度相對較小，但是，從長勢上看， 試管苗節(jié)間正常，莖生長粗壯，葉平展，因此，6-BA1.Omg?L-l，IBAO. 3mg?L-1培養(yǎng)的試管 苗更適合用于嫁接，表1為不同濃度6-BA與IBA對山梨試管苗生長的影響。
[0021] 表 1
[0022]
[0023] 同時，嫁接后通過生根培養(yǎng)基使植株生根的同時進(jìn)行嫁接口愈合的誘導(dǎo)，誘導(dǎo)生 根可以增強(qiáng)植株對營養(yǎng)物質(zhì)吸收的能力，對嫁接口的愈合有促進(jìn)作用。因此，對不同的生根 培養(yǎng)基進(jìn)行生根及促進(jìn)嫁接口愈合效率的篩選。將完成嫁接操作的嫁接體接種在分別添加 不同濃度的IBA，NAA及IAA的1/2MS或1/4QL培養(yǎng)基上，觀察嫁接體的愈合與生根效率。 經(jīng)觀察，本專利提供的嫁接方法最高可以獲得95. 27%的嫁接愈合效率。1/2MS+0. 5mg*L-1 NAA可誘導(dǎo)最高的愈合且生根效率，為69. 52%，嫁接體單株的平均生根數(shù)也表現(xiàn)出較高優(yōu) 勢，為10. 4,且生根嫁接體的愈合速度及生長勢明顯高于未生根的嫁接體。表2為不同生根 培養(yǎng)基對梨嫁接體愈合生根效率的影響。
[0024] 有報道表明，聚乙烯醇（PVA)可提高植物的生根效率，故在篩選出的 1/2MS+0. 5mg?L-lNAA愈合生根培養(yǎng)基中添加不同濃度的PVA，觀察嫁接體的愈合及生根 效率。經(jīng)觀察，在添加PVA的培養(yǎng)基上生長的嫁接體愈合效率沒有明顯的提升，但接種于 1/2MS+0. 5mg*L-1NAA+2.OOmg.L-1PVA培養(yǎng)基上的嫁接體愈合且生根效率明顯提升，最高 可達(dá)87. 23 %，但生根數(shù)量沒有明顯提升。表3為添加不同濃度PVA對梨嫁接體愈合生根效 率的影響。
[0025] 表 2
[0026]

[0028] 表 3
[0029]
[0031] 更進(jìn)一步的，上述步驟101之前還包括：
[0032] 將梨組培苗培養(yǎng)在 MS+6-BA1. Omg ? L-1+IBA0. 3mg ? L-l+30g 蔗糖 +7-8g 瓊脂上， 在pH值為5. 8-6的條件下培養(yǎng)25天-30天，以備挑選砧木與接穗。
[0033] 而且該方法還包括步驟105 :將步驟D中生根20天至30天的嫁接苗于馴化室馴 化3天-4天后，移栽于育苗基質(zhì)中培養(yǎng)，按常規(guī)栽培方式栽培。
[0034] 當(dāng)然，以上說明僅僅為本發(fā)明的較佳實施例，本發(fā)明并不限于列舉上述實施例，應(yīng) 當(dāng)說明的是，任何熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員在本說明書的教導(dǎo)下，所做出的所有等同替代、明 顯變形形式，均落在本說明書的實質(zhì)范圍之內(nèi)，理應(yīng)受到本發(fā)明的保護(hù)。
【主權(quán)項】
1. 一種一步法完成梨微嫁接并生根的方法，其包括以下步驟： A、 選擇高2厘米至3厘米、生長健壯一致的梨組培苗作為砧木，在無菌條件下，于頂部 斜切去頭，切面長度為0. 3厘米至0. 7厘米，留1. 5厘米至2. 5厘米莖段，摘除砧木底部側(cè) 芽； B、 選擇與砧木生長勢相近的組培苗作為接穗，于基部斜切，接穗頂部留2片-4片幼葉， 切面長度為0. 3厘米至0. 7厘米，保證接穗基部與砧木頂部斜切面相吻合； C、 將砧木頂部斜切面和接穗基部斜切面靠在一起，然后用塑料管固定嫁接部位形成嫁 接苗，再將嫁接苗接種在PH值為5. 8-6的MS+NAA 0. 5mg ? L-l+30g蔗糖+7-8g瓊脂培養(yǎng) 基上，在25°C ±2°C的條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)的光照強(qiáng)度為1500x-20001x，每天光照條件下培養(yǎng) 十二小時，然后在黑暗條件下培養(yǎng)十二小時，在嫁接口愈合的同時進(jìn)行生根培養(yǎng)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，上述步驟A之前還包括： 將梨組培苗培養(yǎng)在MS+6-BA1. Omg ? L-1+IBA0. 3mg ? L-l+40g蔗糖+7-8g瓊脂上，在pH 值為5. 8-6的條件下培養(yǎng)25天-30天，以備挑選砧木與接穗。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，該方法還包括步驟D :將步驟C中生根30 天至40天的嫁接苗于馴化室馴化3天-4天后，移栽于育苗基質(zhì)中培養(yǎng)，按常規(guī)栽培方式栽 培。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種一步法完成梨微嫁接并生根的方法，其包括以下步驟：于增殖培養(yǎng)基上培養(yǎng)高度、粗度、生長勢達(dá)到嫁接要求的梨組培苗，選擇高2厘米至3厘米、生長健壯一致的組培苗，在無菌條件下，于頂部斜切去頭作為砧木；選擇與砧木生長勢相近的組培苗作為接穗，于基部斜切留梢；將砧木頂部斜切面和接穗基部斜切面緊密靠在一起，用塑料套管固定嫁接部位形成嫁接苗，再將嫁接苗接種于培養(yǎng)基中，在25℃±2℃，每天光照十二小時，黑暗十二小時條件下進(jìn)行嫁接口愈合的同時也進(jìn)行生根培養(yǎng)。避免了植物材料的木質(zhì)化對篩選優(yōu)質(zhì)砧木、嫁接親和砧穗組合的限制，具有材料一致性好，出苗量大，嫁接苗培養(yǎng)周期短，成活率高，占用空間少等優(yōu)點。
【IPC分類】A01G1/06
【公開號】CN105103968
【申請?zhí)枴緾N201510570474
【發(fā)明人】王然, 楊英杰, 宋健坤, 黃曼娜, 李志軍
【申請人】青島農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開日】2015年12月2日
【申請日】2015年9月9日