一種易著色蘋果品種培育法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種易著色蘋果品種培育法。
【背景技術】
[0002] 農村貧困人口實現脫貧是全面建成小康社會的關鍵，也是我國"十三五"期間最艱 巨的目標任務之一。而經濟下行，農產品價格持續(xù)走低，農業(yè)補貼的"黃箱"政策也基本到 了"天花板"，生產成本的"地板"不斷抬升；在"天花板"和"地板"的雙重擠壓下，蘋果產業(yè) 的可持續(xù)高效發(fā)展及農民持續(xù)增收，一要擴大蘋果消費市場，二降低成本和價格，提高勞動 生產效率和土地產出率，節(jié)本增效。
[0003] 蘋果套袋栽培在我國大面積應用已有10多年的歷史，是我國現階段優(yōu)質蘋果生 產的一項關鍵技術，對提高果實外觀品質、控制病蟲危害、降低農藥殘留發(fā)揮了重要作用。 但近年來，隨著勞動力成本的逐年增加，由果實套袋、摘袋造成的果園用工成本已成為目前 蘋果生產主要的投入成本；調研結果表明，目前我國蘋果園的生產成本大約平均5000元/ 畝，其中套袋、摘袋造成的成本為2600元，占生產總成本的50%以上；我國目前蘋果園總面 積3700萬畝，每年投入套袋、摘袋的費用高達962億元；而且套袋蘋果的可溶性固形物含 量、總糖含量降低，酸度提高，香物質含量減少，風味變淡；去皮硬度降低，果面角質層、蠟質 層變薄，呼吸代謝和水分損失加劇，貯藏性能變差，蘋果內在品質下降；同時，套袋蘋果苦痘 病、黑點病、紅點病等發(fā)生嚴重。因此，如何進行蘋果無袋化栽培，減少果園用工量和勞動成 本，提高果實內在品質，已成果農迫切需要解決的問題。無袋化栽培并不是簡單的不套袋， 而是通過研究建立現代寬行高干栽培模式、改善果園通風透光條件、減少病蟲害發(fā)生指數、 加大有機肥投入及減少化肥（N肥）使用量等一系列措施，使不套袋的蘋果在果面光潔度、 著色等方面達到或基本達到套袋蘋果的標準。其中培育著色能力強的蘋果品種是免套袋栽 培的關鍵措施之一。
[0004] 蘋果耐貯性好，供應周期長，果實含有較高比例的、人體較容易吸收的游離多酚 (類黃酮），具有很好的抗氧化、抗腫瘤、預防心腦血管疾病及護肝等作用，營養(yǎng)保健價值 高，有"一天一蘋果，醫(yī)生遠離我"的美譽，世界上相當多的國家都將其列為主要消費果品而 大力推薦；花青苷是類黃酮的重要組分，不僅具有營養(yǎng)保健價值，是營養(yǎng)品質的構成因素， 而且是紅色蘋果品種紅色性狀發(fā)育即外觀品質形成的主要物質。因此，蘋果花青苷生物合 成的研究收到廣泛關注，取得了諸多重要進展。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種易著色蘋果品種培育法。
[0006] 本發(fā)明提供的蘋果育種方法，包括如下步驟：
[0007] (1)將蘋果品種A和蘋果品種B進行雜交，獲得雜交種子；所述蘋果品種A為基因 型為R6R6純合型或R1R6雜合型的蘋果品種；所述蘋果品種B為基因型為R1R1純合型的蘋 果品種；
[0008] (2)將步驟（1)得到的雜交種子播種并育苗，得到實生苗；
[0009] (3)將步驟（2)得到的實生苗移栽至大田，待其長出果實后不對果實進行套袋，篩 選得到具有特定性狀的植株；所述特定性狀為：果實的果肉花青苷含量為〇. 〇l〇mg·g 以上；
[0010] 判斷蘋果品種的所述基因型的方法如下：
[0011] 以待測蘋果的基因組DNA為模板，采用序列表的序列1所示的單鏈DNA分子和序 列表的序列2所示的單鏈DNA分子組成的引物對進行PCR擴增，然后按如下標準判讀基因 型：如果PCR擴增產物為一種且為500bp，待測蘋果的基因型為R6R6純合型；如果PCR擴增 產物為一種且為382bp，待測蘋果的基因型為R1R1純合型；如果PCR擴增產物為兩種且為 500bp和382bp，待測蘋果的基因型為R1R6雜合型。
[0012] 所述特定性狀具體可為：果實的果面光潔、光亮，果實的果肉花青苷含量為 0·OlOmg·g以上。
[0013] 所述基因型為R6R6純合型的蘋果可為紫紅1號、紫紅2號或紫紅3號。
[0014] 所述基因型為R1R6雜合型的蘋果可為紅脆1號。
[0015] 所述步驟⑵中，進行所述播種前，先將所述雜交種子進行1_3°C層積處理以打破 休眠。所述層積處理的時間具體可為60天。
[0016] 所述步驟（2)中，進行所述育苗的條件為：25°C、每天光照12小時、光照強度 30001x，從種子萌發(fā)開始每7-10天澆一次營養(yǎng)液。
[0017] 所述步驟（2)中，進行所述育苗的條件具體為：將所述雜交種子播種于裝有育苗 基質的營養(yǎng)缽（每個營養(yǎng)缽播種3-5粒種子）培養(yǎng)至實生苗高度為8-15cm且根頸處木質 化（通常為播種2-3個月），然后將實生苗移栽至新的裝有育苗基質的營養(yǎng)缽（每個營養(yǎng)缽 移栽1株）進行培養(yǎng)；所述培養(yǎng)的條件為：25°C、每天光照12小時（光照強度30001x)，從 種子萌發(fā)開始每7-10天澆一次營養(yǎng)液（將MS基本培養(yǎng)基的大量元素母液用水稀釋至10 倍體積即為營養(yǎng)液）、每次每個營養(yǎng)缽澆40-50ml。
[0018] 所述步驟（3)中，在所述大田中進行栽培管理的方法如下：在擬定植實生苗的 大田中每畝施入有機肥6000kg并澆水沉實，定植實生苗后在大田中每畝再施入有機肥 6000kg并及時澆水。所述有機肥具體可為充分腐熟的奶牛糞。
[0019] 所述方法中，移栽第4年，在離地面20cm處對實生苗的主干進行環(huán)剝，環(huán)剝寬度為 0· 5-1. 0cm，深達木質部。
[0020] 所述方法中，移栽第5年，在實生苗的盛花期進行如下操作：每個花序的5朵花僅 保留中心花，其他全部疏除。
[0021] 所述基因型為R1R1純合型的蘋果品種可為'金帥'蘋果、'新紅星'蘋果、'寒富' 蘋果、'嘎啦'蘋果或'紅富士'蘋果。
[0022] 所述方法中，所述蘋果品種A作為父本，所述蘋果品種B作為母本。
[0023] 本發(fā)明還保護一對特異引物對，由序列表的序列1所示的單鏈DNA分子和序列表 的序列2所示的單鏈DNA分子組成。所述特異引物對的功能為蘋果育種。
[0024] 本發(fā)明還保護所述特異引物對在蘋果育種中的應用。
[0025]采用本發(fā)明的方法可以得到蘋果新品系，該蘋果新品系，在栽培過程中無需套袋， 大大節(jié)省了人力成本與物質成本，對于蘋果產業(yè)具有重大的經濟價值，非常值得大力推廣 應用。采用本發(fā)明提供的方法，培育綜合品質優(yōu)良、易著色的蘋果品種，對我國蘋果免套袋 栽培體系的建立、節(jié)本增效具有重要意義。結果表明，本發(fā)明所提供的蘋果育種法是十分有 效的。本發(fā)明對于蘋果育種具有重大價值。
【附圖說明】
[0026] 圖1為紫紅1號、紫紅2號、紫紅3號、紅脆1號、紅脆2號、紅脆4號、紅脆8號和 紅脆9號的果實性狀的比較。
[0027] 圖2為紫紅3號的枝、葉、花、果實以及基因型鑒定結果。
[0028] 圖3為紫紅2號、紅脆1號、紅脆2號和紅脆4號果實性狀比較。
[0029] 圖4為868株雜種實生苗中部分單株的基因型鑒定結果和果肉提取液照片。
[0030] 圖5為易著色蘋果新品系'紅心2號'果實特征。
[0031] 圖6為易著色蘋果新品系'紅心31號'果實特征。
[0032] 圖7為易著色蘋果新品系'紅心40號'果實特征。
[0033] 圖8為易著色蘋果新品系'紅心41號'果實特征。
[0034] 圖9為易著色蘋果新品系'紅心42號'果實特征。
[0035] 圖10為易著色平果新品系'紅;L·、43號'果實特征。
[0036] 圖11為易著色平果新品系'紅;L·、44號'果實特征。
【具體實施方式】
[0037] 以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗 方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自 常規(guī)生化試劑商店購買得到的。以下實施例中的定量試驗，均設置三次重復實驗，結果取平 均值。實施例中所用的營養(yǎng)缽容積約為350mL。光潔的含義為：蘋果果皮沒有疤痕。
[0038] '塔爾阿爾瑪'蘋果及'夏紅肉'蘋果為新疆紅肉蘋果（R6R1)的2個品系，提及'塔 爾阿爾瑪'和'夏紅肉'的參考文獻：陳學森，張晶等，新疆紅肉蘋果雜種一代果實性狀遺傳 變異及功能型蘋果優(yōu)株評價，中國農業(yè)科學，2014,47 (11) :2193-2204。
[0039] '金帥'蘋果、'新紅星'蘋果、'嘎啦'蘋果及'紅富士'蘋果均有現有的蘋果品種， 提及它們的參考文獻：陳學森，辛培剛等，元帥和金帥在蘋果新品種選育中的作用，山東農 業(yè)大學學報，1994, 25(2) :236-248。
[0040] '寒富'蘋果，提及它的參考文獻：李懷玉，喬鳳岐，寒富蘋果的育成及其社會效應， 沈陽農業(yè)大學學報，1998, 29(1) : 37-40。
[0041]MS基本培養(yǎng)基的大量元素母液的制備方法：將1650mgNH4N03、1900mgKN03、440mg CaCl2 · 2H20、370mgMgS04 · 7H20 和 170mgΚΗ2Ρ04溶于水并用水定容至 1L。
[0042] 育苗基質：本發(fā)明的實施例中采用的育苗基質為山東藝景園林有限公司生產的用 于花卉苗木栽植的穴盤基質，一般各花卉苗木公司均有生產和銷售。
[0043] 單個植株稱為株系，可從上面剪取枝條嫁接，得到新品系。
[0044] 可