一種利用魔芋復(fù)合寡糖誘導(dǎo)制備大豆抗毒素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種利用魔芋復(fù)合寡糖誘導(dǎo)制備大豆抗毒素的方法，屬于抗毒素制備領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]寡糖，或稱低聚糖，是由2?10個(gè)相同或不同的單糖單位，通過糖苷鍵連接形成的直鏈或支鏈低度聚合糖。它的相對(duì)分子質(zhì)量為200?2000 Da，可以分為功能性寡糖和普通寡糖兩大類。比如蔗糖、乳糖、麥芽糖等屬于普通寡糖，它們可被機(jī)體消化吸收;而果寡糖、木寡糖、甘露寡糖等則屬于功能性寡糖。人體胃腸道內(nèi)沒有水解這些寡糖的酶系統(tǒng)，它們不被消化吸收而直接進(jìn)入大腸內(nèi)優(yōu)先為雙歧桿菌所利用，是雙歧桿菌的增殖因子。因此，功能性寡糖是指具有特殊的生理學(xué)功能，特別是不被人和動(dòng)物腸道吸收并能促進(jìn)雙歧桿菌的增殖、有益于腸道健康的一類寡糖。
[0003]近年來，寡糖由于其功能的多樣性和獨(dú)特性，越來越引起人們重視并得到迅速發(fā)展，在食品、飼料、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。復(fù)合寡糖是指兩種或者多種不同的寡糖組合而成的寡糖。目前，常見的復(fù)合寡糖大多是由幾種寡糖復(fù)配而成，未見同時(shí)生產(chǎn)復(fù)合寡糖方面的公開報(bào)道。
[0004]大豆抗毒素是Keen等人在給大豆下胚軸接種大豆疫霉菌時(shí)發(fā)現(xiàn)并確認(rèn)的具有抗菌活性的物質(zhì)。大豆抗毒素是大豆中主要的植物抗毒素，當(dāng)大豆在受到外源壓力刺激時(shí)會(huì)大量積累。大豆抗毒素是能夠與雌激素受體相結(jié)合的抗雌激素物質(zhì)，進(jìn)而抑制雌激素誘導(dǎo)的腫瘤進(jìn)程。大豆抗毒素在治療婦女乳腺癌和子宮癌方面具有很好的療效。大豆抗毒素在調(diào)節(jié)血糖和血脂新陳代謝方面有顯著功效。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題:針對(duì)目前制備大豆抗毒素多是以硝酸銀作為誘導(dǎo)劑進(jìn)行誘導(dǎo)制備，但其誘導(dǎo)過程中誘導(dǎo)溫度、濕度等條件比較苛刻，且大豆抗毒素的誘導(dǎo)產(chǎn)率低，誘導(dǎo)時(shí)間長(zhǎng)導(dǎo)致大豆腐爛的問題，提供了一種利用魔芋復(fù)合寡糖作誘導(dǎo)劑，制備大豆抗毒素的方法，該方法以預(yù)處理后的魔芋為原材料，用復(fù)合酶進(jìn)行酶解，酶解物經(jīng)高速離心后收集上清液濃縮得復(fù)合寡糖，并以寡糖作誘導(dǎo)劑，制備得到大豆抗毒素，本發(fā)明提供的制備方法，反應(yīng)條件溫和，大豆抗毒素產(chǎn)率高，誘導(dǎo)時(shí)間短，有效避免了大豆腐爛問題，降低生產(chǎn)成本。
[0006]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
(1)取1?2kg新鮮魔芋洗凈，去皮，用刀切成1X 1 X 1cm的小塊，放入氣流粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，按固液比為1: 1000將魔芋碎片和蒸餾水進(jìn)行混合，放入高剪切混合乳化機(jī)中，以7000?8000r/min的轉(zhuǎn)速剪切乳化3?5次，每次剪切5?15min;
(2)再將剪切后的魔芋放入超高壓均質(zhì)機(jī)，先在150?200MPa下均質(zhì)5?lOmin，再于450?550MPa下均質(zhì)處理2?3次，每次均質(zhì)10?20min，用紗布過濾得到濾渣，放入恒溫干燥器中以60?80°C的溫度干燥1?2h，得魔芋粗粉；
(3)稱取50?100g上述制得的魔芋粗粉倒入陶瓷發(fā)酵罐中，加入700?800mL蒸餾水，用質(zhì)量濃度為9%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至3?4，加入5?8g復(fù)合酶，用玻璃棒攪拌均勻后，用保鮮膜密封罐口，放置在恒溫箱中，在40?50°C下酶解反應(yīng)6?8h;
(4)將酶解產(chǎn)物移入沸水浴中，在95?100°C下滅活5?15min，再放入臥式離心機(jī)，以3000?5000r/min的轉(zhuǎn)速離心30?50min，分離得到上清液，將其放入濃縮罐，減壓至1200?1400Pa濃縮處理10?20min，得到的濃縮液即復(fù)合寡糖溶液；
(5)稱取50?60g大豆，浸入200?300mL質(zhì)量濃度為80%的乙醇溶液中滅菌5?7min，將滅菌后大豆放入1L燒杯中，加入500?600mL無菌水浸泡大豆4?6h，使大豆充分溶脹，將溶脹后的大豆分成兩片子葉，向每片子葉上滴加0.5?0.6mL上述制得的復(fù)合寡糖溶液，放入十旦溫培養(yǎng)箱中，在25?35°C下誘導(dǎo)培養(yǎng)5?7天；
(6)將誘導(dǎo)培養(yǎng)后的大豆倒入研缽研磨后，按固液比為1:3將其和質(zhì)量濃度為80%的乙醇溶液混合均勾，放置在超聲振蕩儀中，升溫至50?60°C，超聲提取1?2h后，移入高速離心機(jī)，以11000?13000r/min的轉(zhuǎn)速離心10?20min，分離得到上清液經(jīng)濃縮后即為大豆抗毒素濃縮液。
[0007]所述的復(fù)合酶為β-葡聚糖酶和多聚半乳糖醛酸酶的混合物，其中兩者質(zhì)量比為3:2。
[0008]本發(fā)明的具體實(shí)施步驟:將大豆消毒后倒入無菌水浸泡直至大豆溶脹，將其分開成兩片子葉，之后在每片子葉上滴加適量復(fù)合寡糖，恒溫誘導(dǎo)后超聲振蕩醇提，濃縮制得大豆抗毒素，本發(fā)明的制備方法，誘導(dǎo)時(shí)間短比硝酸銀誘導(dǎo)時(shí)間縮短20?30%，大豆抗毒素的產(chǎn)率提升15?25%，有效避免了因誘導(dǎo)時(shí)間長(zhǎng)引起的大豆腐爛問題。
[0009]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明制備大豆抗毒素的方法，誘導(dǎo)時(shí)間短，誘導(dǎo)產(chǎn)率高，反應(yīng)條件溫和，提高了生產(chǎn)效率。
【具體實(shí)施方式】
[0010]取1?2kg新鮮魔芋洗凈，去皮，用刀切成1X 1 X 1cm的小塊，放入氣流粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，按固液比為1: 1000將魔芋碎片和蒸餾水進(jìn)行混合，放入高剪切混合乳化機(jī)中，以7000?8000r/min的轉(zhuǎn)速剪切乳化3?5次，每次剪切5?15min;再將剪切后的魔芋放入超高壓均質(zhì)機(jī)，先在150?200MPa下均質(zhì)5?lOmin，再于450?550MPa下均質(zhì)處理2?3次，每次均質(zhì)10?20min，用紗布過濾得到濾渣，放入恒溫干燥器中以60?80°C的溫度干燥1?2h，得魔芋粗粉;稱取50?100g上述制得的魔芋粗粉倒入陶瓷發(fā)酵罐中，加入700?800mL蒸餾水，用質(zhì)量濃度為9%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至3?4，加入5?8g復(fù)合酶，用玻璃棒攪拌均勻后，用保鮮膜密封罐口，放置在恒溫箱中，在40?50°C下酶解反應(yīng)6?8h;將酶解產(chǎn)物移入沸水浴中，在95?100°C下滅活5?15min，再放入臥式離心機(jī)，以3000?5000r/min的轉(zhuǎn)速離心30?50min，分離得到上清液，將其放入濃縮罐，減壓至1200?1400Pa濃縮處理10?20min，得到的濃縮液即復(fù)合寡糖溶液;稱取50?60g大豆，浸入200?300mL質(zhì)量濃度為80%的乙醇溶液中滅菌5?7min，將滅菌后大豆放入1L燒杯中，加入500?600mL無菌水浸泡大豆4?6h，使大豆充分溶脹，將溶脹后的大豆分成兩片子葉，向每片子葉上滴加0.5?0.6mL上述制得的復(fù)合寡糖溶液，放入恒溫培養(yǎng)箱中，在25?35°C下誘導(dǎo)培養(yǎng)5?7天;將誘導(dǎo)培養(yǎng)后的大豆倒入研缽研磨后，按固液比為1:3將其和質(zhì)量濃度為80%的乙醇溶液混合均勻，放置在超聲振蕩儀中，升溫至50?60°C，超聲提取1?2h后，移入高速離心機(jī)，以11000?13000r/min的轉(zhuǎn)速離心10?20min，分離得到上清液經(jīng)濃縮后即為大豆抗毒素濃縮液。
[0011]所述的復(fù)合酶為β-葡聚糖酶和多聚半乳糖醛酸酶的混合物，其中兩者質(zhì)量比為3:2。
[0012]實(shí)例1
取lkg新鮮魔芋洗凈，去皮，用刀切成1 X 1 X 1cm的小塊，放入氣流粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，按固液比為1: 1000將魔芋碎片和蒸餾水進(jìn)行混合，放入高剪切混合乳化機(jī)中，以7000r/min的轉(zhuǎn)速剪切乳化3次，每次剪切5min;再將剪切后的魔芋放入超高壓均質(zhì)機(jī)，先在150MPa下均質(zhì)5min，再于450MPa下均質(zhì)處理2次，每次均質(zhì)lOmin，用紗布過濾得到濾渣，放入恒溫干燥器中以60°C的溫度干燥lh，得魔芋粗粉;稱取50g上述制得的魔芋粗粉倒入陶瓷發(fā)酵罐中，加入700mL蒸餾水，用質(zhì)量濃度為9%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH至3，加入5g復(fù)合酶，用玻璃棒攪拌均勻后，用保鮮膜密封罐口，放置在恒溫箱中，在40°C下酶解反應(yīng)6h;將酶解產(chǎn)物移入沸水浴中，在95°C下滅活5min，再放入臥式離心機(jī)，以3000r/min的轉(zhuǎn)速離心30min，分離得到上清液，將其放入濃縮罐，減壓至1200Pa濃縮處理lOmin，得到的濃縮液即復(fù)合寡糖溶液;稱取50g大豆，浸入200mL質(zhì)量濃度為80%的乙醇溶液中滅菌5min，將滅菌后大豆放入1L燒杯中，加入500mL無菌水浸泡大豆4h，使大豆充