一種獼猴桃增殖培養(yǎng)基及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明設(shè)及一種雜猴桃增殖培養(yǎng)基及其制備方法和應(yīng)用，屬于植物無性繁殖材料
技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 雜猴桃屬雜猴桃科(Actinidiaceae)雜猴桃屬(Actinidia)多年生藤本植物，是20 世紀(jì)最早經(jīng)人工馴化栽培的四大野生果樹之一，其果實具有豐富的營養(yǎng)價值和良好的藥用 價值，尤含大量Vc，享有"Vc之王"美稱。紅陽雜猴桃屬于中華系列雜猴桃，是雜猴桃家族中 罕見的紅屯、雜猴桃，是在四川稱猴桃原產(chǎn)地蒼溪發(fā)現(xiàn)的自然變異品種，營養(yǎng)價值極高，且果 肉細(xì)嫩，口感香甜，早果性、豐產(chǎn)性和抗逆性強，深受市場歡迎，具有極高的推廣前景。
[0003] 紅陽雜猴桃是雌雄異株，采用種子繁殖，周期長，且不易獲得大批雌株群體。目前 紅陽雜猴桃的常規(guī)育苗方法包括嫁接法和桿插法。但嫁接苗童期生長緩慢，育苗周期達(dá)兩 年W上;桿插苗成活率和繁殖效率低。僅通過傳統(tǒng)方式獲得種苗已經(jīng)不能滿足日益擴大的 市場需求。因而采用組織培養(yǎng)技術(shù)繁殖雜猴桃成為重要的良種繁育途徑。W往對紅陽雜猴 桃的研究中，普遍WMS為基本培養(yǎng)基，得出叢生芽誘導(dǎo)率最高只有27.27%，褐化率高，而且 雜猴桃組培苗節(jié)間距離較短，極大地影響了雜猴桃快繁速度，制約了紅陽雜猴桃的規(guī)?；?生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明目的：為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明提供一種降血糖燕麥膳食纖 維及其制備方法。
[0005] 技術(shù)方案:為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種雜猴桃增殖培養(yǎng)基，其主要由改良 WPM培養(yǎng)基、6-節(jié)氨基腺嚷嶺(6-BA)、糞乙酸(NAA)、赤霉素(GA)、薦糖、薦糖和瓊脂所制成； 所述改良WPM培養(yǎng)基主要由大量元素、微量元素、鐵鹽和有機物所制成。
[0006] 作為優(yōu)選，所述6-節(jié)氨基腺嚷嶺的濃度為l-2mg/L所述糞乙酸的濃度為0.1-0.所述赤霉素的濃度為0.2-0.5mg/l;所述薦糖的濃度為30g/l;所述瓊脂的濃度為 8g/L〇
[0007] 作為另一種優(yōu)選，所述培養(yǎng)基的抑為5.6，所述雜猴桃為紅陽雜猴桃。
[000引作為另一種優(yōu)選，所述大量元素由硝酸錠、硝酸鐘、二水氯化巧、四水硝酸巧、硫酸 儀、硫酸鐘和憐酸二氨鐘所提供;所述微量元素由硫酸儘、硫酸鋒、硫酸銅、鋼酸鋼和棚酸所 提供;所述鐵鹽由乙二胺四乙酸二鋼和硫酸亞鐵所提供;所述有機物為煙酸、鹽酸硫胺素、 鹽酸郵唉醇、肌醇和甘氨酸。
[0009] 作為另一種優(yōu)選，所述每一升改良WPM培養(yǎng)基中包括如下：
[0010] 412.5mg硝酸錠、400mg硝酸鐘、96mg二水氯化巧、278mg四水硝酸巧、370mg硫酸儀、 900mg硫酸鐘和340mg憐酸二氨鐘，提供大量元素；
[0011] 22.3mg硫酸儘、8.6mg硫酸鋒、0.025mg硫酸銅、0.25mg鋼酸鋼和6.2mg棚酸，提供微 量元素；
[001 ^ 37. an拓二胺四乙酸二鋼和27.8mg硫酸亞鐵，提供鐵鹽：；
[0013] 0.5mg煙酸、0.5mg鹽酸硫胺素、0.5mg鹽酸郵唉醇、lOOmg肌醇和2mg甘氨酸，提供有 機物；
[0014] 本發(fā)明還提供了所述雜猴桃增殖培養(yǎng)基的制備方法，包括W下步驟：
[0015] (1)配制改良WPM培養(yǎng)基：
[0016] ①50倍大量元素母液的配制：取硝酸錠、硝酸鐘、硫酸儀和硫酸鐘，用蒸饋水溶解 定容配成母液I;取二水氯化巧和四水合硝酸巧，用蒸饋水溶解定容配成母液Π ;取憐酸二 氨鐘，用蒸饋水溶解定容配成母液m;
[0017] 使用時按用量分別取母液I，母液Π ，母液虹；
[0018] ②200倍的微量元素母液的配制：取硫酸儘，硫酸鋒，硫酸銅，鋼酸鋼和棚酸，用蒸 饋水溶解定容配成母液IV，使用時按用量取母液IV;
[0019] ③100倍的邸TA-鐵鹽母液的配制：取乙二胺四乙酸二鋼，加蒸饋水溶解，然后加入 硫酸亞鐵，加熱溶解，定容，配成母液V，使用時按用量取母液V ;
[0020] ④100倍的有機成分母液的配制：取煙酸，鹽酸硫胺素，鹽酸化唉醇，肌醇和甘氨 酸，用蒸饋水溶解定容，配成母液VI，使用時按用量取母液VI;
[0021 ]按照用量取各種母液混合，得未定容的改良WPM培養(yǎng)基；
[0022] (2)激素母液的配制:稱取糞乙酸，先用體積濃度95%的酒精溶解，然后加水定容， 配成的糞乙酸母液，使用時按用量取糞乙酸母液;稱取赤霉素，先用體積濃度95%的酒精溶 解，然后加水定容，配成赤霉素母液，使用時按用量取赤霉素母液;稱取6-節(jié)氨基腺嚷嶺，先 用化0田容解，然后加水定容，配成6-節(jié)氨基腺嚷嶺母液，使用時按用量取6-節(jié)氨基腺嚷嶺母 液；
[0023] (3)取步驟（1)所得未定容的改良WPM培養(yǎng)基，再加入瓊脂，薦糖，6-節(jié)氨基腺嚷嶺 母液，糞乙酸母液，加熱溶解后定容至，調(diào)抑值至5.6，滅菌;待培養(yǎng)基溫度降至60-70°C時， 采用過濾滅菌法按照用量添加步驟(2)中配制的赤霉素母液，分裝，即得。
[0024] 作為優(yōu)選，所述雜猴桃增殖培養(yǎng)基的制備方法包括W下步驟
[0025] (1)配制改良WPM培養(yǎng)基：
[00%]①50倍大量元素母液的配制:分別稱取20.625g硝酸錠、20g硝酸鐘、18.5g硫酸儀、 45g硫酸鐘，然后用蒸饋水溶解后定容至1000ml，配成母液I;
[0027]稱取4.8g二水氯化巧、13.9g四水合硝酸巧，用蒸饋水溶解后定容至1000ml，配成 母液Π ;
[00%]稱取17g憐酸二氨鐘，用蒸饋水溶解后定容至1000ml，配成母液虹；
[0029] 使用時配制每升增殖培養(yǎng)基取母液I，母液Π ，母液虹各20ml;
[0030] ②200倍的微量元素母液的配制:稱取4.46g硫酸儘，1.72g硫酸鋒，0.005g硫酸銅， 0.05g鋼酸鋼，1.24g棚酸，用蒸饋水溶解后定容至1000ml，配成母液IV，使用時配制每升增 殖培養(yǎng)基取5ml母液IV;
[0031] ③100倍的抓TA-鐵鹽母液的配制：稱取3.7：3g乙二胺四乙酸二鋼，加200ml蒸饋水 進行溶解，再稱取2.7?硫酸亞鐵加入溶解，溶解時需要用電熱爐加熱，當(dāng)溶液呈淺棟色透 明液體時，停止加熱，加蒸饋水定容至lOOOmL，配成母液V，使用時配制每升增殖培養(yǎng)基取 10ml母液V;
[0032] ④100倍的有機成分母液的配制:稱取0.05g煙酸，0.05g鹽酸硫胺素，0.05g鹽酸化 唉醇，lOg肌醇，0.地甘氨酸，用蒸饋水溶解后混合定容至1000ml，配成母液VI，使用時配制 每升增殖培養(yǎng)基取10ml母液VI;
[0033] 按上述每升用量取各種母液混合，得未定容的改良WPM培養(yǎng)基；
[0034] (2)激素母液的配制:稱取50mg NAA，先用5ml體積濃度95%的酒精溶解，然后加水 定容至100ml，配成0.5mg ·血-1的NAA母液，使用時配制每升增殖培養(yǎng)基取0.2-0.4mLNAA母 液；
[0(X3日]稱取50mg赤霉素 GA3,先用5ml體積濃度95%的酒精溶解，然后加水定容至100ml， 配成0.5mg · mL-i的GA3母液，使用時配制每升增殖培養(yǎng)基取0.4-lmL赤霉素 GA3母液；
[0036] 稱取50mg 6-BA，先用5ml O.lmol · L-1化0H溶解，然后加水定容至lOOmL，配成 0.5mg · mL-i的6-BA母液，使用時配制每升增殖培養(yǎng)基取2-4mL6-BA母液；
[0037] (3)取步驟（1)所得未定容的改良WPM培養(yǎng)基，再加入瓊脂8g，薦糖30g，6-BA母液2-4mL，NAA母液0.2-0.4mL，加熱溶解后定容至1L，用0 . Imol · L-1鹽酸或氨氧化鋼調(diào)pH值至 5.6,滅菌;待培養(yǎng)基溫度降至60-70°C時，在接種臺上采用過濾滅菌法添加步驟(2)中配制 的GA3母液，每升增殖培養(yǎng)基加0.4-lmL，然后在接種臺上分裝培養(yǎng)基。
[0038] 本發(fā)明最后提供了所述雜猴桃增殖培養(yǎng)基的應(yīng)用，即利用所述培養(yǎng)基培養(yǎng)雜猴桃 的方法，包括W下步驟:將雜猴桃無菌苗接種至配制好的滅菌的增殖培養(yǎng)基上，在光照強度 3000LUX的條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為:溫度25-27°C，每日光照時間為16小時。
[0039] 有益效果:相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明所得雜猴桃增殖培養(yǎng)基，能夠克服雜猴桃節(jié)間 距離較短，繁殖系數(shù)較低的問題，顯著提高雜猴桃增殖系數(shù)及萌芽質(zhì)量，同時能夠有效降低 褐化率和污染率，從而滿足繼代增殖的需要，促進快繁體系的建立。
【具體實施方式】
[0040] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作更進一步的說明。
[00