一種兼顧荷花增殖與生根的組培方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種兼顧荷花增殖與生根的組培方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 荷花(Nelumbo nucifera)屬睡蓮科蓮屬多年水生草本花弁，又名蓮花、水芙蓉等， 其花大色艷，觀賞價值極高，分布廣泛，為人們所喜愛，是我國十大名花之一，在環(huán)境美化、 藥用、食用、W及外貿(mào)出口等方面都有很大的應(yīng)用和開發(fā)潛力。目前，我國荷花仍采用分截 繁殖和大面積池栽或缸栽的傳統(tǒng)繁殖方法。然而，用傳統(tǒng)方法繁育，荷花的分截繁殖系數(shù)較 低（1:10)，用種量大，生產(chǎn)成本高，而且長期用種截進(jìn)行無性繁殖，會造成種性的退化和病 毒的積累，加上一些珍稀品種生長勢弱，種質(zhì)資源保存困難，運(yùn)些問題都在一定程度上阻礙 了荷花種植業(yè)的發(fā)展。采用荷花組織培養(yǎng)技術(shù)在無菌的條件下W荷花成熟胚、未成熟胚、地 下莖的莖尖為外植體建立無菌體系，再對它進(jìn)行增殖生根培養(yǎng)，進(jìn)而得到大量荷花無菌苗， 對無菌苗進(jìn)行馴化移栽能很好的解決在分截繁殖中存在的成本高、種性退化和病毒積累等 問題。為了尋找方便、快捷和低成本的快速增殖方法，前人已經(jīng)做了較多研究，但目前，荷花 組織培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基大多數(shù)是單一的增殖培養(yǎng)基或生根培養(yǎng)基，都是進(jìn)行先增殖后生 根，運(yùn)種增殖方式所花費(fèi)的時間較長，成本較高，不能很好的達(dá)到快速繁殖的目的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 針對現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于設(shè)計提供一種兼顧荷花增殖與生根 的組培方法的技術(shù)方案。
[0004] 所述的一種兼顧荷花增殖與生根的組培方法，其特征在于包括W下步驟： 1) 成熟胚蓮子芽的誘導(dǎo)培養(yǎng) 取完全成熟種子，取成熟胚為外植體，經(jīng)清洗和消毒后取出胚，并接種到已經(jīng)滅好菌的 pH值為5.7的15固體培養(yǎng)基上，在溫度為25±2°〇，光周期16/她，光強(qiáng)2400111義的培養(yǎng)室中培 養(yǎng)； 2) 增殖培養(yǎng) 初代培養(yǎng)4周后，選生長狀況良好未褐化的無菌苗轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)基WMS 培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加濃度為0.3~3mg/L的6-BA，濃度為0.3~Img/L的NAA，濃度為 30g/L的薦糖和0.3%的瓊脂，pH值5.7，在溫度25±2°〇，光周期16/她，光強(qiáng)2400111^的培養(yǎng)室 中培養(yǎng)。
[000引所述的一種兼顧荷花增殖與生根的組培方法，其特征在于所述的步驟1)中清洗和 消毒具體為：用自來水沖洗干凈后用濃硫酸酸蝕地，流水沖洗0.化后剝?nèi)ネ鈿?，浸?5~ 18.5h，將浸泡過的蓮子用1%的次氯酸鋼溶液消毒lOmin，對消毒完的蓮子用無菌水沖洗5 遍。
[0006]所述的一種兼顧荷花增殖與生根的組培方法，其特征在于所述的步驟2)中增殖培 養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基+0.3 mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA。
[0007] 采用本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明通過初代培養(yǎng)、增殖、生根，實現(xiàn)了荷花的高效 再生。本發(fā)明通過特殊增殖培養(yǎng)基的使用，在增殖培養(yǎng)過程中能做到快速獲得芽增殖的同 時誘導(dǎo)生根獲得大量荷花組培苗，縮短了擴(kuò)繁時間，降低成本。運(yùn)些組培苗可用于荷花的栽 培繁殖，成本低，具有很高的經(jīng)濟(jì)價值。現(xiàn)有技術(shù)中荷花組培苗增殖的研究中都是先增殖后 生根，而本發(fā)明一步完成增殖與生根，節(jié)省了培養(yǎng)基更換的步驟，實施步驟更簡單易行，實 施條件更寬松，節(jié)約了時間和成本，且效果非常顯著。
【具體實施方式】
[0008] 為了使本發(fā)明更加容易理解，下面結(jié)合具體實施案例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理 解，運(yùn)些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。
[0009] 實施例1: 一種兼顧荷花增殖與生根的組培方法 1) 成熟胚蓮子芽的誘導(dǎo)培養(yǎng) 取完全成熟種子，取成熟胚為外植體，用自來水沖洗干凈后用濃硫酸酸蝕地，流水沖洗 0.化后剝?nèi)ネ鈿?，浸?5~18.5h，將浸泡過的蓮子用1%的次氯酸鋼溶液消毒lOmin，對消毒 完的蓮子用無菌水沖洗5遍從中取出胚，并接種到已經(jīng)滅好菌的抑值為5.7的MS(Murashige and Skoog)固體培養(yǎng)基上，在溫度為25 ± 2°C，光周期16/她，光強(qiáng)24001UX的培養(yǎng)室中培養(yǎng)； 2) 增殖培養(yǎng) 初代培養(yǎng)4周后，選生長狀況良好未褐化的無菌苗轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)基WMS 培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加濃度為0.3~3mg/L的6-BA即6-芐基腺嚷嶺，濃度為0.3~Img/L 的NAA即糞乙酸，濃度為30g/L的薦糖和0.3%的瓊脂(gelrite)，pH值5.7，在溫度25±2°0，光 周期16/她，光強(qiáng)24001UX的培養(yǎng)室中培養(yǎng)。
[0010] 試驗例1 在MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入不同濃度的BA、NAA配成6種不同培養(yǎng)基。通過實施例1的方法進(jìn) 行培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)4周后統(tǒng)計芽增殖系數(shù)、根數(shù)、生根率和平均根長，統(tǒng)計結(jié)果如表1所示。由 表1可知，芽增殖系數(shù)最高的培養(yǎng)基為培養(yǎng)基4(MS+3mg/LBA+0.3mg/LNAA)，增殖系數(shù)為 3.15，與其他培養(yǎng)基差異顯著;從生根情況來看，培養(yǎng)基1 (MS+3mg/LBA+0.3mg/LNAA)生根率 最高為95%;根數(shù)最多的培養(yǎng)基為培養(yǎng)基2(MS+0.3mg/LBA+lmg/LNAA)為5.15條，與培養(yǎng)基1 (MS+3mg/LBA+0.3mg/LNAA)差異不顯著，與其他培養(yǎng)基差異顯著;平均根長最長的培養(yǎng)基為 培養(yǎng)基 1 (MS+0.3mg/LBA+0.3mg/LNAA)為0.395cm，與培養(yǎng)基2(MS+0.3mg/LBA+lmg/LNAA)差 異不顯著但與其他培養(yǎng)基差異顯著。
[0011] 如果只考慮芽增殖，培養(yǎng)基4 :MS+3mg/LBA+0.3mg/LNAA為最適培養(yǎng)基，如果只考慮 生根，培養(yǎng)基1、2都適合荷花組培苗的根的誘導(dǎo)。綜合考慮芽快速增殖與生根，我們可W得 出，培養(yǎng)基 1 :MS+0.3mg/LBA+0.3mg/LNAA 最為適合。
[0012] 表1不同激素水平的培養(yǎng)基對根、芽產(chǎn)生的影響
注:表中芽增殖系數(shù)表示芽數(shù)平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤；多重比較采用Duncan法，同一欄中不同 字母表示存在顯著性差異(P<〇. 05)。
【主權(quán)項】
1. 一種兼顧荷花增殖與生根的組培方法，其特征在于包括以下步驟： 1) 成熟胚蓮子芽的誘導(dǎo)培養(yǎng) 取完全成熟種子，取成熟胚為外植體，經(jīng)清洗和消毒后取出胚，并接種到已經(jīng)滅好菌的pH值為5.7的1^固體培養(yǎng)基上，在溫度為25±2°(3，光周期16/811，光強(qiáng)240011?的培養(yǎng)室中培 養(yǎng)； 2) 增殖培養(yǎng) 初代培養(yǎng)4周后，選生長狀況良好未褐化的無菌苗轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加濃度為0.3~3mg/L的6-BA，濃度為0.3~lmg/1的NAA，濃度為 30g/L的蔗糖和0.3%的瓊脂，pH值5.7，在溫度25± 2°C，光周期16/8h，光強(qiáng)24001UX的培養(yǎng)室 中培養(yǎng)。2. 如權(quán)利要求1所述的一種兼顧荷花增殖與生根的組培方法，其特征在于所述的步驟 1) 中清洗和消毒具體為：用自來水沖洗干凈后用濃硫酸酸蝕4h，流水沖洗0.5h后剝?nèi)ネ鈿ぃ?浸泡15~18.5h，將浸泡過的蓮子用1%的次氯酸鈉溶液消毒lOmin，對消毒完的蓮子用無菌 水沖洗5遍。3. 如權(quán)利要求1所述的一種兼顧荷花增殖與生根的組培方法，其特征在于所述的步驟 2) 中增殖培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基+0.3mg/L6-BA+0.3mg/LNAA。
【專利摘要】一種兼顧荷花增殖與生根的組培方法，屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。其包括以下步驟：取完全成熟種子，取成熟胚為外植體，經(jīng)清洗和消毒后取出胚，并接種到已經(jīng)滅好菌的pH值為5.7的MS固體培養(yǎng)基上，在溫度為25±2℃，光周期16/8h，光強(qiáng)2400lux的培養(yǎng)室中培養(yǎng)；初代培養(yǎng)4周后，選生長狀況良好未褐化的無菌苗轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，增殖培養(yǎng)基以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加濃度為0.3～3mg/L的6-BA，濃度為0.3～1mg/L的NAA，濃度為30g/L的蔗糖和0.3%的瓊脂，pH值5.7。本發(fā)明在增殖培養(yǎng)過程中能做到快速獲得芽增殖的同時誘導(dǎo)生根獲得大量荷花組培苗，縮短了擴(kuò)繁時間，降低成本。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105475137
【申請?zhí)枴緾N201510941910
【發(fā)明人】唐宇力, 諸葛菲, 張海珍, 錢萍, 范麗琨, 周虹, 楊麗麗, 臧巧路, 林新春
【申請人】杭州市園林文物局靈隱管理處(杭州花圃), 浙江農(nóng)林大學(xué)
【公開日】2016年4月13日
【申請日】2015年12月16日