睡布袋無菌苗及其培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及睡布袋組織培養(yǎng)，具體地，設(shè)及一種睡布袋無菌苗及其培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 睡布袋（Gerradanthus macrorrhizus)為葫蘆科（Cucurbitaceae)睡布袋屬 (Gerradanthus)的著名多肉球莖觀賞植物，原產(chǎn)于非洲東部。進(jìn)入本世紀(jì)，W睡布袋等為代 表的多肉植物，受到多肉愛好者的追捧。多年生的睡布袋植株W其碩大的球莖，優(yōu)美的姿 態(tài)，在多肉植物中備受關(guān)注。江蘇省中國科學(xué)院植物研究所于2005年開始從非洲引進(jìn)睡布 袋種苗進(jìn)行地栽引種馴化，成功收獲種子，近年來通過不斷試驗，先后獲得睡布袋切塊繁殖 方法和種子苗工廠化生產(chǎn)等方法。
[0003] 睡布袋常見的繁殖方法有切塊繁殖及播種等方法，目前根據(jù)已有報道，睡布袋的 播種繁殖存在種子獲得較難，獲取數(shù)量有限，發(fā)芽時間較長(通常1個月W上），生長環(huán)節(jié)受 環(huán)境因子影響較大等問題，而其他繁殖方法存在繁殖系數(shù)不高，效率有限等不足。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種睡布袋無菌苗及其培養(yǎng)方法，該方法具有優(yōu)異的繁殖系 數(shù)與繁殖效率且培養(yǎng)周期短，另外通過該方法培養(yǎng)而得的睡布袋無菌苗生長速度快。
[0005] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種睡布袋無菌苗的培養(yǎng)方法，包括：
[0006] 1)將睡布袋種子置于無菌蒸饋水中浸泡；
[0007] 2)將浸泡后的睡布袋種子剝離種皮，接著依次浸泡于酒精溶液和過氧化氨溶液， 然后通過無菌蒸饋水洗涂W得到無菌外植體；
[000引3)將無菌外植體接種于培養(yǎng)基；
[0009] 4)將培養(yǎng)基依次經(jīng)過暗培養(yǎng)和于光暗交替的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。
[0010] 本發(fā)明還提供了一種睡布袋無菌苗，該睡布袋無菌苗通過上述方法培養(yǎng)而得。
[0011] 通過上述技術(shù)方案，本發(fā)明通過組織培養(yǎng)的方式培育睡布袋無菌苗，具體過程為： 首先將睡布袋種子置于無菌蒸饋水浸泡，接著剝離種皮且依次通過酒精溶液和過氧化氨溶 液浸泡、無菌蒸饋水洗涂，然后接種，最后進(jìn)行培養(yǎng)便可制得生長健壯的睡布袋無菌苗。該 方法的培養(yǎng)周期短，且繁殖系數(shù)與繁殖效率均十分優(yōu)異;并且制得的睡布袋無菌苗的品質(zhì) 局。
[0012] 本發(fā)明的其他特征和優(yōu)點將在隨后的【具體實施方式】部分予W詳細(xì)說明。
【附圖說明】
[0013] 附圖是用來提供對本發(fā)明的進(jìn)一步理解，并且構(gòu)成說明書的一部分，與下面的具 體實施方式一起用于解釋本發(fā)明，但并不構(gòu)成對本發(fā)明的限制。在附圖中：
[0014] 圖1是實施例1的步驟3)中睡布袋種子剛剛接種到培養(yǎng)基中的生長圖；
[0015] 圖2是經(jīng)過3天暗培養(yǎng)后移至光暗交替條件下培養(yǎng)3天后睡布袋種子開始萌發(fā)的生 長圖；
[0016]圖3是光暗交替條件下培養(yǎng)3天后14天后的睡布袋種子無菌苗；
[0017]圖4是長出真葉的睡布袋種子無菌苗。
【具體實施方式】
[0018] W下對本發(fā)明的【具體實施方式】進(jìn)行詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的具體 實施方式僅用于說明和解釋本發(fā)明，并不用于限制本發(fā)明。
[0019] 本發(fā)明提供了一種睡布袋無菌苗的培養(yǎng)方法，包括：
[0020] 1)將睡布袋種子置于無菌蒸饋水中浸泡；
[0021] 2)將浸泡后的睡布袋種子剝離種皮，接著依次浸泡于酒精溶液和過氧化氨溶液， 然后通過無菌蒸饋水洗涂W得到無菌外植體；
[0022] 3)將無菌外植體接種于培養(yǎng)基；
[0023] 4)將培養(yǎng)基依次經(jīng)過暗培養(yǎng)和于光暗交替的條件下進(jìn)行培養(yǎng)。
[0024] 在本發(fā)明的步驟1)中，浸泡的條件可W在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了浸泡效果更 加，優(yōu)選地，在步驟1)中，浸泡至少滿足W下條件:浸泡溫度為22-24°C，浸泡時間為10-1化。
[0025] 在本發(fā)明的步2)中，酒精溶液的濃度W及浸泡的條件可W在寬的范圍內(nèi)選擇，但 是為了能夠充分地消毒，優(yōu)選地，在步驟2)中，酒精溶液的濃度為70-80重量％，并且睡布袋 種子于酒精溶液中浸泡至少滿足W下條件:浸泡溫度為22-24°C，浸泡時間為30-50S。
[0026] 在本發(fā)明的步2)中，氧化氨溶液的濃度W及浸泡的條件可W在寬的范圍內(nèi)選擇， 但是為了能夠充分地消毒，優(yōu)選地，在步驟2)中，過氧化氨溶液的濃度為10-20重量％，并且 睡布袋種子于過氧化氨溶液中浸泡至少滿足W下條件:浸泡溫度為22-24°C，浸泡時間為9-15min。
[0027] 在本發(fā)明的步2)中，無菌蒸饋水的洗涂次數(shù)可W在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使 得睡布袋種子表面的殘留的酒精溶液和/或氧化氨溶液能夠充分地洗涂干凈，優(yōu)選地，在步 驟2)中，無菌蒸饋水的洗涂次數(shù)為4-5次。
[0028] 在本發(fā)明的步2)中，培養(yǎng)基可W在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得睡布袋種子能 夠吸收足夠的營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行發(fā)芽和生長，優(yōu)選地，在步驟3)中，培養(yǎng)基的抑為6-7,并且培養(yǎng) 基含有30-35g/L的薦糖和6.5-7.0邑凡的瓊脂粉。更優(yōu)選地，優(yōu)選地，培養(yǎng)基選自1/415、1/ 2MS和MS培養(yǎng)基中的一種或多種。其中，1 /4MS、1 /2MS和MS培養(yǎng)基含有的成分可W參見表1 和表2，表2中的各組分的濃度在1/4MS、1/2MS和MS培養(yǎng)基中均相同。
[0029] 表 1
[0030]
[0033] 在本發(fā)明的步驟3)中，無菌外植體可W直接插入培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，也可W先設(shè)置 培養(yǎng)槽然后再將種子植入其中，為了睡布袋種子能夠吸收更足夠的營養(yǎng)物質(zhì)進(jìn)行發(fā)芽和生 長，優(yōu)選地，無菌外植體接種于培養(yǎng)基表面的凹槽內(nèi)，凹槽的長度為1.2-1.8cm，寬度為0.2-0.4cm。
[0034] 在本發(fā)明的步驟4)中，暗培養(yǎng)的具體條件可W在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得 睡布袋種子發(fā)芽率和生長率更加的優(yōu)異，優(yōu)選地，暗培養(yǎng)至少滿足W下條件:培養(yǎng)溫度為 21-23°C，相對濕度為50-60 %，培養(yǎng)時間為3-5天。
[0035] 在本發(fā)明的步驟4)中，光暗交替的條件可W在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了使得睡 布袋種子發(fā)芽率和生長率更加的優(yōu)異，優(yōu)選地，于光暗交替的條件下進(jìn)行培養(yǎng)至少滿足W 下條件:光照強(qiáng)度為1800-20001UX，光照時間為12-14V天，黑暗時間為10-1化/天，相對濕 度為50-60 %，培養(yǎng)溫度為22-24°C，培養(yǎng)時間為12-18天。
[0036] 在本發(fā)明的步驟1)中，浸泡可W治愈本領(lǐng)域的任何一種器皿中進(jìn)行，但是為了滿 足種子呼吸，便于流水沖洗種子，避免外界的雜質(zhì)污染睡布袋種子，優(yōu)選地，在步驟1)中，浸 泡于單層紗布封口的玻璃容器中進(jìn)行。
[0037] 在本發(fā)明的步驟2)中，浸泡后的睡布袋種子的種皮的剝離方式可W在本領(lǐng)域中任 何一種常規(guī)的剝離方式，為了能夠?qū)⒎N皮快速高效地剝離并且防止在種皮剝離過程中對種 胚造成損傷，優(yōu)選地，在步驟2)中，浸泡后的睡布袋種子的種皮的剝離自種子帶翅的一側(cè)開 始。
[0038] 本發(fā)明還提供了一種睡布袋無菌苗，該睡布袋無菌苗通過上述方法培養(yǎng)而得。
[0039] 在本發(fā)明中，睡布袋無菌苗的高度可W在寬的范圍內(nèi)選擇，但是為了便于睡布袋 無菌苗的移植，優(yōu)選地，睡布袋無菌苗的高度為3-7cm。