西南遠志的組織培養(yǎng)方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)領域，主要涉及的是西南遠志的組織培養(yǎng)方法。
【背景技術】
[0002] 西南遠志(Polygala crotalarioides Buch.Ham.)，又名西藏遠志，別名：娘母良、 丫磨娘，系遠志科遠志屬植物。是云南佤族民間的一種珍奇中草藥，生長在"稀樹高草群落" 和灌叢草坡，為多年生宿根鋪散草本，有增進食欲、強筋健骨和性功能亢進之功。長期服用 能使眉須秀長，有顏容光澤和痣斑消褪之效。"斗牛競賽"，丫磨娘可用作"發(fā)力藥"喂飼斗 牛，使膂力倍增，斗志昂揚。本品性溫，味辛甘苦；歸入心、肺、腎、肝諸經(jīng)。具有補腎助陽、養(yǎng) 心安神、祛痰解痙的功效。主治瘰疬癆傷、風濕麻木、順氣化痰、補心安神、活血止痛諸癥。臨 床應用于腎虛陽萎、早泄等性功能減退癥以及心悸怔忡，腎虛咳喘，宮寒帶下等證。藥理實 驗的結果表明，西南遠志還具有明顯的抗疲勞、抗缺氧作用，能提高機體的抗應激能力，增 強體力并使機體適應各種不良刺激的影響。目前從本屬植物中分離得到的主要成分為三萜 皂苷類化合物、咕噸酮苷類化合物、寡糖脂類化合物、生物堿及其他有機成分和無機物。作 為遠志屬植物的主要化學成分之一的三萜皂苷類化合物，根據(jù)張平夫李明炬孫學惠的《佤 族草藥"丫磨娘"強壯作用的藥理研究》證明其具有明顯促進幼齡雄性小鼠的睪丸發(fā)育和去 勢雄性大鼠已萎縮之副性腺器官的生長，能夠顯著增強小鼠游泳耐力、常壓耐缺氧以及抗 低溫能力。"丫磨娘'能夠提高機體的抗應激能力，并具有雄性激素樣作用。
[0003] 由于藥效卓著，人們爭相采挖，已經(jīng)造成原產(chǎn)地資源的嚴重枯竭，己瀕臨絕跡。因 此，為保護這一珍稀中藥品種，對西南遠志進行快速繁殖技術的研究是亟待解決的重要課 題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術的不足，提供一種操作簡單、成本低廉、成活率 高、生根率高的西南遠志的組織培養(yǎng)方法。
[0005] 本發(fā)明所述的西南遠志的組織培養(yǎng)方法由以下步驟組成：
[0006] -、外植體的選擇:選擇健壯的野生西南遠志，用其種子作為外植體；
[0007] 二、外植體的消毒:先用自來水沖洗外植體8~12min，然后采用無萊消毒法用60~ 75%的乙醇溶液消毒30~60秒，用無菌水沖洗3~5遍，按重量比例1:2~2.5將高錳酸鉀和 甲醛溶液放入玻璃干燥器的底層，隨即把外植體放入玻璃干燥器隔層瓷板上，蓋好蓋子熏 消毒1~2小時，再用濃度為3~6%的次氯酸鈉消毒10~15min，消毒完成后，再用無菌水沖 洗4~6遍；
[0008] 三、初始誘導培養(yǎng):把外植體接種于下列經(jīng)改良的無菌誘導培養(yǎng)基中，所述的改良 的無菌誘導培養(yǎng)基為:在每升KC培養(yǎng)基中加入KT1.0~1.5mg、NAA0.4~0.8mg、VB25~20mg、 活性炭1~1.5g、重量百分比濃度為10~15%的馬鈴薯汁100~150g，在溫度25~28°C、光照 強度1000~15001x、光照時間為10~12個小時的條件下，培養(yǎng)55~65天，形成圓球莖；
[0009] 四、原球莖增殖培養(yǎng):將上述的生長良好的圓球莖轉(zhuǎn)接入下列增殖培養(yǎng)基中，所述 的培養(yǎng)基為：在每升KC培養(yǎng)基中加入NAA1.5~2.0mg、KT0.5~0.8mg、VC10~30mg、VB 25~ 2〇mg、重量百分比濃度為10~15%的馬鈴薯汁100~150g、蔗糖30g、活性炭3~5g、瓊脂6~ 8g，在pH值為5~7.0條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)周期：55~65天，培養(yǎng)溫度:25~28°C，光照時間：10~ 24小時/天，光照強度1000~15001x;
[0010] 五、原球莖分化培養(yǎng):將步驟四所述的圓球莖轉(zhuǎn)入下列分化培養(yǎng)基中，所述的分化 培養(yǎng)基為：在每升KC培養(yǎng)基中加入ΝΑΑ0.8~1.0mg、KT0.1~0.5mg、VC10~30mg、VB 25~ 20mg、活性炭3~5g、重量百分比濃度為10~15%的香蕉汁100~150g、瓊脂6~8g，在溫度25 ~28°C、光照強度1000~15001x、光照時間10~12小時條件下培養(yǎng)55~65天，得到分化苗；
[0011] 六、壯苗和生根培養(yǎng):將分化苗轉(zhuǎn)入下列生根壯苗培養(yǎng)基中，所述的生根壯苗培養(yǎng) 基為：在每升1/2KC培養(yǎng)基中加入NAA0.8~1.0mg、VC10~30mg、VB 25~20mg、活性炭3~5g、 重量百分比濃度為10~15%的香蕉汁100~150g、瓊脂6~8g，在溫度25-28°C、光照時間10 ~12小時、光照強度1000~15001x條件下培養(yǎng)55~65天，得到生根苗。
[0012] 本發(fā)明針對現(xiàn)有的技術問題，提出一種西南遠志的組織培養(yǎng)方法，用少量的種子 作為外植體，快速大量的培育出西南遠志種苗。采用無汞消毒法對西南遠志外植體進行滅 菌處理，即保證了外植體無菌污染，提高其培養(yǎng)成活率，又可以避免汞污染;在培養(yǎng)基中加 入維生素 C(VC)、核黃素(VB2)為抗氧化劑，減輕了外植體的褐化和玻璃化，提高了外植體的 成活率。本發(fā)明操作簡單，成本低廉，成活率高、生根率高。
[0013] 本發(fā)明的組織培養(yǎng)方法能夠保持原品種的優(yōu)良性狀，為良種繁育和產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)奠 定基礎。
【具體實施方式】
[0014] 下面結合實施例對本發(fā)明作進一步的描述，實施例只用于對本發(fā)明更詳細的說 明，而不用于限制本發(fā)明。
[0015] 實施例1:
[0016] 外植體的選擇:選擇健壯的野生西南遠志，用其種子作為外植體。外植體的消毒： 先用自來水沖洗外植體l〇min，然后采用無汞消毒法用75%的乙醇溶液消毒30秒，用無菌水 沖洗3遍，按重量比例1: 2將高錳酸鉀和甲醛溶液直接放入玻璃干燥器的底層，隨即放入外 植體于玻璃干燥器的隔層瓷板上，蓋好蓋子熏消毒2小時。這一切均可在常溫下進行，對溫 度無特殊要求。這樣做可以比較有效除去外植體中的內(nèi)外生菌。再用濃度為5%的次氯酸鈉 消毒15min，對外植體進行再次消毒。消毒完成后，再用無菌水沖洗5遍。所述的采用無汞消 毒法就是不采用常規(guī)的氯化汞消毒方法。所述的乙醇溶液和次氯酸鈉的濃度均為現(xiàn)有技 術，即體積百分濃度。
[0017] 初始誘導培養(yǎng):把外植體接種于下列經(jīng)改良的無菌誘導培養(yǎng)基中，所述的改良的 無菌誘導培養(yǎng)基為:在每升KC培養(yǎng)基中加入KT1.2mg、NAAO. 6mg、VB220mg、活性炭1.5g、重量 百分比濃度為12%的馬鈴薯汁120g，在溫度25~28°C、光照強度1000~15001x、光照時間為 10~12個小時的條件下，培養(yǎng)55~65天，形成圓球莖。
[0018] 原球莖增殖培養(yǎng):將上述的生長良好的圓球莖轉(zhuǎn)接入下列增殖培養(yǎng)基中，所述的 培養(yǎng)基為:在每升KC培養(yǎng)基中加入NAA1 · Omg、KT0 · 6mg、VC20mg、VB21 Omg、重量百分比濃度為 12%的馬鈴薯汁120g、蔗糖30g、活性炭3g、瓊脂8g，在pH值為6.0條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)周期：55 ~65天，培養(yǎng)溫度:25~28°C，光照時間：12小時/天，光照強度1000~15001x。
[0019] 原球莖分化培養(yǎng):將步驟四所述的圓球莖轉(zhuǎn)入下列分化培養(yǎng)基中，所述的分化培 養(yǎng)基為：在每升KC培養(yǎng)基中加入NAAO · 8mg、KTO · 5mg、VC20mg、VB21 Omg、活性炭3g、重量百分 比濃度為12%的香蕉汁120g、瓊脂8g，在溫度25~28°C、光照強度1000~15001x、光照時間 10~12小時條件下培養(yǎng)55~65天，得到分化苗。
[0020] 壯苗和生根培養(yǎng):將分化苗轉(zhuǎn)入下列生根壯苗培養(yǎng)基中，所述的生根壯苗培養(yǎng)基 為：在每升1/2KC培養(yǎng)基中加入熟42.〇11^、￥02〇11^、￥8 21〇11^、活性炭38、重量百分比濃度為 15%的香蕉汁150g、瓊脂8g，在溫度25-28°C、光照時間10~12小時、光照強度1000~15001x 條件下培養(yǎng)55~65天，得到生根苗。
[0021 ]即可出瓶煉苗、移栽，成活率為93 %。
[0022] 上面所述的KC是通用培養(yǎng)基，其配方為：
[0023] KC(Kundson C)培養(yǎng)基配方
[0024]
[0025] 所述的1/2KC培養(yǎng)基是指在上述配方中，大量元素的成分均為1/2。
[0026]上面所述的KT是氯吡苯脲(CPPU))，所述的NAA是萘乙酸，所述的VB2是核黃素，所 述的VC是維生素 C。
【主權項】
1. 一種西南遠志的組織培養(yǎng)方法，其特征在于由以下步驟組成： 一、 外植體的選擇:選擇健壯的野生西南遠志，用其種子作為外植體； 二、 外植體的消毒:先用自來水沖洗外植體8~12min，然后采用無萊消毒法用60~75 % 的乙醇溶液消毒30~60秒，用無菌水沖洗3~5遍，按重量比例1:2~2.5將高錳酸鉀和甲醛 溶液放入玻璃干燥器的底層，隨即把外植體放入玻璃干燥器隔層瓷板上，蓋好蓋子熏消毒1 ~2小時，再用濃度為3~6 %的次氯酸鈉消毒10~15min，消毒完成后，再用無菌水沖洗4~6 遍； 三、 初始誘導培養(yǎng):把外植體接種于下列經(jīng)改良的無菌誘導培養(yǎng)基中，所述的改良的無 菌誘導培養(yǎng)基為：在每升KC培養(yǎng)基中加入KT 1.0~1.5mg、NAA 0.4~0.8mg、VB2 5~20mg、 活性炭1~1.5g、重量百分比濃度為10~15%的馬鈴薯汁100~150g，在溫度25~28°C、光照 強度1000~15001x、光照時間為10~12個小時的條件下，培養(yǎng)55~65天，形成圓球莖； 四、 原球莖增殖培養(yǎng):將上述的生長良好的圓球莖轉(zhuǎn)接入下列增殖培養(yǎng)基中，所述的培 養(yǎng)基為：在每升KC培養(yǎng)基中加入NAA 1.5~2.0mg、KT 0.5~0.8mg、VC 10~30mg、VB2 5~ 2〇mg、重量百分比濃度為10~15%的馬鈴薯汁100~150g、蔗糖30g、活性炭3~5g、瓊脂6~ 8g，在pH值為5~7.0條件下培養(yǎng)，培養(yǎng)周期：55~65天，培養(yǎng)溫度:25~28°C，光照時間：10~ 24小時/天，光照強度1000~15001x; 五、 原球莖分化培養(yǎng):將步驟四所述的圓球莖轉(zhuǎn)入下列分化培養(yǎng)基中，所述的分化培養(yǎng) 基為：在每升KC培養(yǎng)基中加入NAA 0.8~1.0mg、KT 0.1~0.5mg、VC 10~30mg、VB2 5~ 20mg、活性炭3~5g、重量百分比濃度為10~15%的香蕉汁100~150g、瓊脂6~8g，在溫度25 ~28°C、光照強度1000~15001x、光照時間10~12小時條件下培養(yǎng)55~65天，得到分化苗； 六、 壯苗和生根培養(yǎng):將分化苗轉(zhuǎn)入下列生根壯苗培養(yǎng)基中，所述的生根壯苗培養(yǎng)基 為：在每升1/2KC培養(yǎng)基中加入NAA 0.8~1.0mg、VC 10~30mg、VB2 5~20mg、活性炭3~5g、 重量百分比濃度為10~15%的香蕉汁100~150g、瓊脂6~8g，在溫度25-28°C、光照時間10 ~12小時、光照強度1000~15001x條件下培養(yǎng)55~65天，得到生根苗。
【專利摘要】本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)領域，主要涉及的是西南遠志的組織培養(yǎng)方法。本發(fā)明所述的西南遠志的組織培養(yǎng)方法由以下步驟組成：一、外植體的選擇；二、外植體的消毒；三、初始誘導培養(yǎng)；四、原球莖增殖培養(yǎng)；五、原球莖分化培養(yǎng)；六、壯苗和生根培養(yǎng)。本發(fā)明用少量的種子作為外植體，快速大量的培育出西南遠志種苗。采用無汞消毒法進行滅菌處理，即保證了外植體無菌污染，提高其培養(yǎng)成活率，又可以避免汞污染；在培養(yǎng)基中加入維生素C、核黃素為抗氧化劑，減輕了外植體的褐化和玻璃化，提高了外植體的成活率。本發(fā)明操作簡單，成本低廉，成活率高、生根率高。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105532458
【申請?zhí)枴緾N201511015513
【發(fā)明人】李永華, 李聰穎
【申請人】李永華
【公開日】2016年5月4日
【申請日】2015年12月29日