植物材料的表面消毒方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種安全、有效的植物材料(植物外植體)表面的消毒方法。該方法將待消毒的植物外植體放置在帶有濾網(wǎng)或?yàn)V膜的濾芯中，然后通過(guò)高速離心使植物材料表面的微生物在離心力作用下轉(zhuǎn)移到離心管底部，從而達(dá)到除菌的目的。方法簡(jiǎn)單有效，不污染環(huán)境，有望在實(shí)驗(yàn)中廣泛采用。
【專利說(shuō)明】
植物材料的表面消毒方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及生物技術(shù)，尤其涉及一種植物材料的表面消毒方法。
【背景技術(shù)】
[0002]植物組織培養(yǎng)技術(shù)，是植物細(xì)胞工程學(xué)、遺傳學(xué)、植物生理學(xué)、生物化學(xué)與分子生物學(xué)研究的重要基本技術(shù)。植物組織培養(yǎng)技術(shù)不僅僅用于快速繁殖，在單倍體育種、種質(zhì)保存、生理學(xué)研究和基因轉(zhuǎn)化等方面也有著廣泛的用途。在植物組織培養(yǎng)中始終貫穿著一個(gè)無(wú)菌的概念，一個(gè)植物外植體在接種之前，必須先通過(guò)表面消毒然后才能獲得無(wú)菌材料。
[0003]傳統(tǒng)的用于植物外植體接種前消毒的方法是:把外植體在消毒溶液或者有毒氣體下處理。這種方法的缺點(diǎn)是:1.操作繁瑣;2.有毒成分滲透到植物組織內(nèi)部后，對(duì)后續(xù)培養(yǎng)造成不利影響;3.使用過(guò)的有毒廢液污染環(huán)境。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的，就是為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問(wèn)題，提供一種植物材料的表面消毒方法。
[0005]為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案:一種植物材料的表面消毒方法，包括以下步驟:
[0006]步驟一、將待消毒的植物材料在流動(dòng)的自來(lái)水下清洗干凈；
[0007]步驟二、將清洗干凈的植物材料轉(zhuǎn)移到濾芯并置于第一個(gè)離心管中，離心管和濾芯都加滿水，然后在12000rpm-20000rpm下高速離心10_15分鐘；
[0008]步驟三、將裝有植物材料的濾芯轉(zhuǎn)移到第二個(gè)離心管中，離心管和濾芯都加滿無(wú)菌水，在12000rpm下高速離心5分鐘，重復(fù)3次；
[0009]步驟四、將步驟三中裝有植物材料的濾芯轉(zhuǎn)移到第三個(gè)離心管中，然后用無(wú)菌水把濾芯裝滿，并在12000rpm下高速離心2分鐘，重復(fù)3次，最終得到無(wú)菌的植物材料。
[0010]步驟二到步驟四在無(wú)菌設(shè)備上操作。
[0011]各離心管均經(jīng)高壓滅菌后使用。
[0012]步驟二到步驟三中使用的濾芯底部設(shè)有濾網(wǎng)，濾網(wǎng)的孔徑為0.5-1毫米。
[0013]步驟四中使用的濾芯底部設(shè)有濾膜，濾膜的孔徑為50-100微米。
[0014]本發(fā)明提供了一種安全、有效的植物材料(植物外植體)的表面消毒方法。本方法將待消毒的植物外植體放置在帶有濾網(wǎng)或?yàn)V膜的濾芯中，然后通過(guò)高速離心使植物材料表面的微生物在離心力作用下轉(zhuǎn)移到離心管底部，從而達(dá)到除菌的目的。方法簡(jiǎn)單有效，不污染環(huán)境，有望在實(shí)驗(yàn)中廣泛采用。
【具體實(shí)施方式】
[0015]本發(fā)明植物材料的表面消毒方法是，首先將待消毒的植物外植體在流動(dòng)的自來(lái)水下清洗，洗掉肉眼可見的泥沙和其它污物;然后植物材料轉(zhuǎn)移到帶有濾芯(濾芯底部設(shè)有濾網(wǎng)，濾網(wǎng)的孔徑為0.5-1毫米)的離心管中，離心管和濾芯都加滿水，然后在12000rpm-20000rpm下高速離心10-15分鐘;接著將裝有植物材料的濾芯轉(zhuǎn)移到另一個(gè)干凈的離心管中，離心管和濾芯都加滿無(wú)菌水，然后在12000rpm下高速離心5分鐘;重復(fù)三次。然后將帶有植物材料的濾芯(濾芯底部設(shè)有濾膜，濾膜的孔徑為50-100微米)轉(zhuǎn)移到另一個(gè)空的干凈離心管中，用無(wú)菌水把濾芯裝滿，并在12000rpm下高速離心2分鐘，重復(fù)三次，最終得到無(wú)菌的外植體。
[0016]上述步驟二到步驟四必須在超凈工作臺(tái)等無(wú)菌設(shè)備上操作；
[0017]上述步驟二到步驟四使用的離心管，須高壓滅菌后使用，其體積視植物外植體的大小而定。
[0018]
【申請(qǐng)人】按照上述方法對(duì)溫莪術(shù)塊莖，小蔓長(zhǎng)春花葉片和大豆種子進(jìn)行了接種前表面消毒，離心管體積為20毫升，濾芯體積為10毫升。濾芯中濾膜的孔徑為ΙΟΟμπι，上述材料消毒后，全部接種MS固體培養(yǎng)基，結(jié)果溫莪術(shù)塊莖污染率50%，小蔓長(zhǎng)春花污染率20 %，大豆種子無(wú)一例污染。
[0019]本實(shí)施例中使用的方法，適用于大部分植物的外植體接種前表面消毒，具有很大的應(yīng)用價(jià)值。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種植物材料的表面消毒方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟一、將待消毒的植物材料在流動(dòng)的自來(lái)水下清洗干凈； 步驟二、將清洗干凈的植物材料轉(zhuǎn)移到濾芯并置于第一個(gè)離心管中，離心管和濾芯都加滿水，然后在12000印111-20000印1]1下高速離心10-15分鐘； 步驟三、將裝有植物材料的濾芯轉(zhuǎn)移到第二個(gè)離心管中，離心管和濾芯都加滿無(wú)菌水，在12000rpm下高速離心5分鐘，重復(fù)3次； 步驟四、將步驟三中裝有植物材料的濾芯轉(zhuǎn)移到第三個(gè)離心管中，然后用無(wú)菌水把濾芯裝滿，并在12000rpm下高速離心2分鐘，重復(fù)3次，最終得到無(wú)菌的植物材料。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物材料的表面消毒方法，其特征在于:步驟二到步驟四在無(wú)菌設(shè)備上操作。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物材料的表面消毒方法，其特征在于:各離心管均經(jīng)高壓滅菌后使用。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物材料的表面消毒方法，其特征在于:步驟二到步驟三中使用的濾芯底部設(shè)有濾網(wǎng)，濾網(wǎng)的孔徑為0.5-1毫米。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物材料的表面消毒方法，其特征在于:步驟四中使用的濾芯底部設(shè)有濾膜，濾膜的孔徑為50-100微米。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK105850730SQ201610211341
【公開日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年4月6日
【發(fā)明人】唐寧, 張邊江, 陳全戰(zhàn), 王立科, 楊平
【申請(qǐng)人】南京曉莊學(xué)院