子宮和乳腺異常增生及血管通透性提高大鼠模型造模方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種子宮和乳腺異常增生及血管通透性提高大鼠模型的造模方法，屬于醫(yī)療評價、檢測技術(shù)領(lǐng)域。該方法將健康Wistar雌性大鼠進行卵巢切除手術(shù)后，通過外源皮下注射雌激素21天進行造模，且通過大鼠體內(nèi)血清17β?雌二醇水平、子宮重量和形態(tài)、乳腺形態(tài)和血管通透性指標的檢測，判定該方法造模與子宮、乳腺異常增生和血管通透性提高病癥診斷標準相符合的目的，使臨床與基礎(chǔ)研究達到一致性。此模型無其他明顯器質(zhì)性病變的出現(xiàn)，在子宮和乳腺增生的病理生理及防治藥物研發(fā)和在血管通透性提高導致血管滲出、水腫及癌轉(zhuǎn)移抑制研究方面是一個十分重要和理想的動物模型。
【專利說明】
子宮和乳腺異常増生及血管通透性提高大鼠模型造模方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)療評價、檢測技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種動物模型的造模方法，具體涉及一 種子宮和乳腺異常增生及血管通透性提高大鼠模型的造模方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 雌性激素分泌異常會導致乳腺增生、子宮內(nèi)膜增生、子宮肌瘤和乳腺癌及子宮內(nèi) 膜癌發(fā)生，該方面的病理生理學研究和防治藥物研發(fā)一直是人們十分關(guān)注的話題。該方面 理想動物模型的建立有著十分重要的意義。
[0003]雌性激素分泌異常導致血管通透性的提高是多種雌激素相關(guān)性疾病發(fā)生的主要 原因，如血清雌激素水平過高易產(chǎn)生血管滲出、水腫及卵巢過激綜合征，還可誘發(fā)子宮內(nèi)膜 癌、乳腺癌、前列腺癌、肝癌及肺癌等的發(fā)生和轉(zhuǎn)移，研究雌激素紊亂的治療藥物的臨床前 研究需要使動物處于子宮和乳腺異常增生及血管通透性提高的狀態(tài)，因此我們發(fā)明一種子 宮和乳腺異常增生及血管通透性提高大鼠模型的造模方法，為臨床雌激素相關(guān)性疾病發(fā)病 機制分析及預防治療提供理論指導。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種子宮和乳腺異常增生及血管通透性提高大鼠模型的造 模方法，依照該造模方法得到的大鼠模型有助于臨床雌激素相關(guān)性疾病發(fā)病機制分析及預 防和治療。
[0005] 為了實現(xiàn)上述目的，采用以下的技術(shù)方案予以實現(xiàn)：
[0006] -種子宮和乳腺異常增生及血管通透性提高大鼠模型的造模方法，包括以下步 驟：
[0007] -種子宮和乳腺異常增生及血管通透性提高大鼠模型的造模方法，其特征在于， 具體包括以下步驟：
[0008] ⑴將50-55日齡的清潔級雌性Wistar大鼠，隨機分成5組，每組15只，同組放入一籠 中，5組大鼠均在室內(nèi)溫度25 °C、相對濕度54 %的飼養(yǎng)室飼養(yǎng)7天；
[0009] ⑵在無菌條件下，選4組大鼠進行卵巢切除術(shù)，剩余組進行假手術(shù);卵巢切除術(shù)具 體是先用鹽酸氯胺酮80mg/kg腹腔注射麻醉，再沿著背部脊柱兩側(cè)切口，單側(cè)切口距脊柱 lcm、距最后肋骨1.5cm，切口長1.5-2cm，切開皮膚和肌肉層后放入定高切口保護器擴張肌 肉層，所述定高切□保護器通道直徑1.5cm，找到卵巢，近端輸卵管上做兩個結(jié)扎，將卵巢切 除(〇vx)，滴數(shù)滴青霉素注射液以防止感染，逐層縫合創(chuàng)口，術(shù)后用無菌〇.9%NaCl注射液配 置青霉素注射液0.8萬U/ml，每只大鼠lml腹腔注射，每天1次，連續(xù)注射3天，以防止腹腔感 染，術(shù)后原籠飼養(yǎng)；
[0010] ⑶恢復一周后，分別標記5組為:假手術(shù)(Sham)、卵巢切除(Ovx)、卵巢切除+170-雌 二醇0 ? 01mg/kg體重（Ovx+EstO ? 01)、卵巢切除+170-雌二醇0 ? lmg/kg體重（Ovx+EstO ? 1)、卵 巢切除+170-雌二醇lmg/kg體重(0vx+Estl);第一組和第二組大鼠每天皮下注射0.2ml芝麻 油，作為對照;第三組至第五組大鼠每天皮下注射不同劑量的170-雌二醇芝麻油溶液；
[0011] ⑷21天后，測定大鼠血清雌二醇水平、子宮重量及形態(tài)結(jié)構(gòu)、乳腺形態(tài)的變化以確 定其增生情況，測定子宮內(nèi)膜中嗜酸性粒細胞滲出量和大鼠視網(wǎng)膜EB滲出量的變化以確定 其血管通透性的變化情況，基于增生情況和血管通透性變化情況的結(jié)果綜合判定模型成功 度。
[0012] 本發(fā)明的有益技術(shù)效果:采取以背部兩側(cè)開口切除大鼠卵巢的措施去除內(nèi)源性雌 激素的作用，使實驗大鼠生理周期同步化，減少誤差，再通過皮下注射外源170-雌二醇21 天進行造模，然后結(jié)合子宮重量、子宮形態(tài)、乳腺形態(tài)及血管通透性分析檢測結(jié)果判定模型 的成功度;該方法快速高效、成功率高，得到的子宮和乳腺異常增生及血管通透性提高大鼠 模型狀態(tài)平穩(wěn)，無其他明顯器質(zhì)性病變的出現(xiàn)，是雌激素紊亂的治療藥物臨床前研究的良 好實驗材料，有助于臨床雌激素相關(guān)性疾病發(fā)病機制分析及預防治療的直接研究，尤其是 在子宮和乳腺增生的病理生理及防治藥物研發(fā)和在血管通透性提高導致血管滲出、水腫及 癌轉(zhuǎn)移抑制研究方面是一個十分重要和理想的動物模型。
【附圖說明】
[0013] 圖1A-E為雌二醇誘發(fā)的去卵巢大鼠子宮形態(tài)變化；注：與Sham組相比表示p〈 0 ? 05;與Ovx組相比：A表示p〈0 ? 05;m表示p〈0 ? 01。
[0014]圖2為卵巢切除大鼠（Ovx)、假手術(shù)大鼠（Sham)和雌二醇Est處理后卵巢切除大鼠 子宮內(nèi)膜形態(tài)變化切片圖；g，子宮腺體;C，被覆上皮細胞;UC，宮腔;gee，腺上皮細胞。HE染 色。
[0015]圖3為雌二醇Est處理后卵巢切除大鼠子宮乳腺形態(tài)變化切片圖。
[0016] 圖4-1為雌二醇對去卵巢大鼠子宮嗜酸性粒細胞滲出的影響；與假手術(shù)Sham組比 較:*#P〈0.001;與卵巢切除組Ovx比較: +++P〈0.001。
[0017] 圖4-2為雌二醇Est處理后卵巢切除大鼠子宮炎性細胞滲出形態(tài)切片圖。
【具體實施方式】
[0018] 為了證明該種子宮和乳腺異常增生及血管通透性提高大鼠模型造模方法的成功 有效性，進行了以下實驗：
[0019] 1材料 [0020] 1.1實驗動物
[0021]健康雌性Wistar大鼠，50-55日齡，由蘭州大學動物實驗中心提供，許可證號： SCKX(甘）2014-0001。
[0022] 1.2藥品、試劑及溶液配制
[0023] 170-雌二醇（170-estradiol，Est)，Sigma公司產(chǎn)品，用芝麻油溶解配制。
[0024] 1.3儀器
[0025] 光學顯微鏡（Olympus Vanox)
[0026] 圖像分析系統(tǒng)
[0027] BL-420+智能型生物信號顯示與處理系統(tǒng)(成都泰盟電子有限公司）
[0028] IBM兼容機
[0029] 萬分之一電子天平 [0030] 組織包埋機 [0031] 病理切片機 [0032] 2 方法 [0033] 2.1動物造模方法
[0034] 將50-55日齡的健康雌性Wistar大鼠，隨機分成5組，每組15只，同組放入一籠中，5 組大鼠均在室內(nèi)溫度25°C、相對濕度54%的飼養(yǎng)室飼養(yǎng)7天。在無菌條件下，選4組大鼠進行 卵巢切除術(shù)，剩余組進行假手術(shù)；卵巢切除術(shù)具體是先用鹽酸氯胺酮80mg/kg腹腔注射麻 醉，再沿著背部脊柱兩側(cè)切口，單側(cè)切口距脊柱lcm、距最后肋骨1.5cm，切口長1.5-2cm，切 開皮膚和肌肉層后放入定高切口保護器擴張肌肉層，所述定高切口保護器通道直徑1.5cm， 找到卵巢，近端輸卵管上做兩個結(jié)扎，將卵巢切除(〇vx)，滴數(shù)滴青霉素注射液以防止感染， 逐層縫合創(chuàng)口，術(shù)后用無菌0.9%NaCl注射液配置青霉素注射液0.8萬U/ml，每只大鼠lml腹 腔注射，每天1次，連續(xù)注射3天，以防止腹腔感染，術(shù)后原籠飼養(yǎng)?；謴鸵恢芎?，分別標記5組 為：
[0035]第一組:假手術(shù)(Sham)，每天皮下注射0.2ml芝麻油，N= 15，作為正常對照；
[0036]第二組:卵巢切除(Ovx)，每天皮下注射0.2ml芝麻油，N= 15，作為空白對照；
[0037] 第三組:卵巢切除+170-雌二醇(Ovx+Est0.0 1)，每天皮下注射0.2ml Est芝麻油溶 液，劑量為〇.〇lmg/kg體重，N=15;
[0038] 第四組：卵巢切除+170-雌二醇(Ovx+EstO ? 1)，每天皮下注射0 ? 2ml Est芝麻油溶 液，劑量為〇. lmg/kg體重，N=15;
[0039] 第五組:卵巢切除+170-雌二醇(Ovx+Estl)，每天皮下注射0.2ml Est芝麻油溶液， 劑量為lmg/kg體重，N= 15。
[0040] 第一組和第二組動物每天皮下注射0.2ml芝麻油，作為對照;第三組至第五組動物 每天皮下注射不同劑量的雌二醇溶液。21天后，動物經(jīng)股動脈放血處死，將子宮從陰道連接 處和雙角分叉處剪斷，迅速取出稱重并用10%的多聚甲醛固定；同時取2-3個乳腺同樣用 10%的多聚甲醛進行固定；同時從左心室抽取約0.6ml血液，離心后取血清，用放射免疫技 術(shù)測定血清性激素水平。將固定好的標本按常規(guī)方法進行石蠟包埋，子宮取橫切面，乳腺取 縱切面，制備石蠟切片，進行HE染色，利用光學顯微鏡和圖象分析系統(tǒng)對不同處理組動物子 宮和乳腺組織切片進行下列觀察和測量：
[0041] 1)子宮觀察和測量指標:選擇雙角子宮角腔完整的切片進行觀察和分析，一個子 宮橫切面上有兩個角腔；
[0042]①以完整的角腔為單位，在10倍光鏡下對其內(nèi)膜上的腺體和血管總數(shù)進行計數(shù)； 同時在40倍光鏡下在內(nèi)膜區(qū)隨機選5個視野，對每個視野中腺體的數(shù)量進行計數(shù)；
[0043]②在40倍光鏡下對腺體及其上皮細胞的發(fā)育情況進行觀察，同時隨機選5個腺 體，利用圖象分析系統(tǒng)測量腺體上皮細胞的高度，取平均值；
[0044]③利用光學顯微鏡上的標尺，隨機選擇5個視野，在10倍鏡下對子宮內(nèi)膜的厚度進 行測量，同時利用圖象分析系統(tǒng)同樣測量5個采集區(qū)子宮內(nèi)膜的厚度，取平均值?？蓪煞N 方法測得的結(jié)果進行比較；
[0045]④在40倍光鏡下對子宮內(nèi)膜上皮細胞的發(fā)育情況進行觀察，并利用圖象分析系統(tǒng) 測量5個隨機采集區(qū)子宮內(nèi)膜上皮細胞的高度，取平均值。
[0046] 2)乳腺觀察:分別在低倍和高倍鏡下，同時結(jié)合圖象分析系統(tǒng)，對不同處理組動物 的乳腺腺泡及乳腺導管的發(fā)育情況進行觀察。
[0047] 3)血管通透性檢測
[0048] ①對卵巢切除大鼠子宮炎性細胞滲出的影響
[0049] 取子宮用4%的多聚甲醛溶液進行固定，常規(guī)脫水后石蠟包埋，切片，進行HE染色， 高倍鏡下(400倍)觀察每張切片任意5個視野，數(shù)出嗜酸性粒細胞個數(shù)并求出平均值和標準 差，做出柱形圖比較各組間差異。
[0050] ②對卵巢切除大鼠視網(wǎng)膜中EB滲出的影響
[0051]實驗動物造模完成后，按實驗大鼠用規(guī)格為2ml: 0. lg鹽酸氯胺酮溶液按0.3ml ? kg<體重-0.5ml ? kg<體重進行腹腔注射麻醉后剪開胸腔，把1%的伊文思藍溶液按2mg ? kg^1體重經(jīng)左心室注入，循環(huán)5min后用1 %的多聚甲醛溶液按60ml ? mirT1體重固定2min，再 用37°C預熱的生理鹽水120ml進行沖洗約5min，同時剪開右心耳，迅速摘取大鼠眼球，分離 視網(wǎng)膜，稱重記錄;將視網(wǎng)膜置于300yl甲酰胺溶液中，在70°C下孵育18h，然后在4°C下以 7500r/min高速離心8min，取上清液50yl，用蒸餾水定容至3ml后，用分光光度計在620nm處 測定吸光度值并記錄;根據(jù)視網(wǎng)膜孵化液在620nm處的吸光值、標準曲線方程和視網(wǎng)膜濕重 算出視網(wǎng)膜中伊文思藍的含量(ng ? g-1組織）。
[0052] 2.2數(shù)據(jù)處理
[0053] 結(jié)果均以f ±沒表示。統(tǒng)計學處理兩組間用t檢驗，多組間用方差分析(AN0VA)，P〈 〇.〇5具有顯著性差異。
[0054] 3 結(jié)果
[0055] 3.1外源給雌二醇對卵巢切除大鼠血清性激素水平的影響
[0056] 卵巢切除后21天實驗大鼠血清雌二醇水平明顯下降，皮下注射不同劑量外源性雌 激素，血清雌激素水平明顯升高，其中注射雌激素(〇.lmg/Kg)可使血清雌二醇接近正常水 平(見表3.1-1)。
[0057]表3.1-1雌激素對卵巢切除大鼠血清Est(pg/ml)的影響
[0059 ]與 Sham 組相比 **P〈0 ? 01;與Ovx組相比+P〈0 ? 05，++P〈0 ? 01，+++P〈0 ? 001 (Mean 土 SD，n = 5~6) 〇
[0060] 3.2子宮增生情況
[0061] 3.2.1雌二醇對卵巢切除大鼠子宮重量和子宮系數(shù)的影響
[0062] 大鼠卵巢切除后21天，Ovx組子宮重量及子宮系數(shù)降低，外源給雌二醇后，大鼠的 子宮重量和子宮系數(shù)增加，且呈雌激素劑量依賴效應，且雌二醇〇. lmg/kg給藥時，卵巢切除 大鼠的子宮重量和子宮系數(shù)就可以恢復到正常水平，與動情期假手術(shù)大鼠相似(見表3.2- 1).
[0063]表3.2-1雌激素對卵巢切除大鼠子宮重量和子宮系數(shù)的影響
[0065] 與Sham組相比：***P<0 ? 001;與Ovx組相比：++P<0 ? 01，+++P<0 ? 001
[0066] 3.2.2雌二醇誘發(fā)去卵巢大鼠子宮形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化
[0067] 大鼠卵巢摘除后子宮萎縮明顯，子宮內(nèi)膜、肌層均變薄。給予外源性雌二醇 (O.Olmkg-1體重、O.lmg kg-1體重、l.Omg ? kg-1體重)后，子宮內(nèi)膜厚度增高，肌層增厚、腺上 皮細胞高度增高、肌細胞直徑增大，被覆上皮細胞高度增加，且與外源雌二醇給藥劑量呈劑 量依賴關(guān)系，其中雌激素〇.lmg/kg給藥后，卵巢切除的大鼠的子宮各項指標可達到或稍超 過假手術(shù)大鼠水平，而雌激素 lmg/kg體重給藥后，卵巢切除大鼠的子宮各項指標都明顯高 于正常，呈現(xiàn)異常增生狀態(tài)(見圖1A-E)。
[0068]大鼠切除卵巢后21天，取其子宮作石蠟切片，HE染色，經(jīng)光學顯微鏡和圖象分析系 統(tǒng)觀察分析，發(fā)現(xiàn)卵巢切除后，大鼠子宮壁明顯變薄，無論是通過顯微鏡目測或利用圖象分 析系統(tǒng)測定結(jié)果顯示其內(nèi)膜厚度明顯變小，內(nèi)膜被覆上皮細胞明顯變矮;腺體萎縮，腺體數(shù) 量減少，腺上皮細胞明顯變矮。皮下注射Est(lmg/kg)后，卵巢切除大鼠子宮內(nèi)膜明顯增厚， 腺上皮細胞和內(nèi)膜被覆上皮細胞明顯增大，基本可恢復甚至超過假手術(shù)大鼠的水平，內(nèi)膜 被覆上皮細胞不但增高且多出現(xiàn)假復層上皮，但子宮腺體的數(shù)量無明顯增多（見圖2)。
[0069] 3.3乳腺增生情況
[0070] 大鼠乳腺由結(jié)締組織、腺泡和導管組成，腺泡和導管的上皮細胞由單層立方或低 柱狀上皮細胞組成，有些大導管從單層柱狀上皮逐漸變?yōu)閺蛯又鶢钌掀?。大鼠卵巢切?1 天后，乳腺明顯萎縮，腺泡減少，導管減少變小。卵巢切除大鼠皮下注射Est(0.01、0.1和 lmg/kg體重)后，乳腺腺泡和導管及其上皮細胞有不同程度的增生，乳腺組織密度增加明顯 (見圖3)。
[0071] 3.4血管滲出的影響
[0072] 3.4.1對卵巢切除大鼠子宮炎性細胞滲出的影響
[0073] 大鼠摘除卵巢后21天，大鼠子宮萎縮明顯，子宮內(nèi)膜中嗜酸性粒細胞滲出減少。給 予外源雌激素后嗜酸性粒細胞滲出增加。與Sham組比較，Ovx組未出現(xiàn)嗜酸性粒細胞滲出； 當給予外源性的不同劑量的雌二醇(〇.〇lmg.kg-l體重、0. lmg.kg-1體重和lmg.kg-1體重） 處理后可誘導嗜酸性粒細胞的滲出（圖4-1、圖4-2)
[0074] 3.4.2雌激素對卵巢切除大鼠視網(wǎng)膜中EB滲出的影響
[0075]大鼠卵巢切除后21天，大鼠視網(wǎng)膜EB滲出明顯減少；給外源雌激素0. lmg/kg和 lmg/kg后，視網(wǎng)膜中EB滲出明顯增加。
[0076] 表3.4-1不同劑量170-雌二醇卵巢切除大鼠視網(wǎng)膜中EB滲出的影響
[0079]注：與Sham組相比：▲表示P〈0 ? 05;與Ovx組相比：*P〈0 ? 05，#P〈0 ? 001。
[0080] 4、實驗結(jié)論
[0081 ]⑴卵巢切除大鼠的體內(nèi)血清雌二醇水平明顯下降，外源皮下注射雌二醇后，卵巢 切除大鼠體內(nèi)雌二醇水平升高，與外源雌二醇給藥劑量呈劑量依賴效應，且外源給予雌二 醇O.lmg/kg體重時，卵巢切除大鼠體內(nèi)雌二醇水平可達到動情期大鼠的血清水平。
[0082] ⑵大鼠卵巢摘除后子宮萎縮明顯，子宮內(nèi)膜、肌層均變薄。給予外源性雌二醇后， 子宮內(nèi)膜厚度增高，肌層增厚、腺上皮細胞高度增高、肌細胞直徑變長，被覆上皮細胞高度 增加，且與外源雌激素給藥劑量呈劑量依賴關(guān)系，其中雌激素〇. lmg/kg給藥后，卵巢切除的 大鼠的子宮各項指標都恢復到正常水平，而雌激素lmg/kg給藥后，卵巢切除大鼠的子宮各 項指標都高于正常值，現(xiàn)異常增生狀態(tài)(P〈〇. 〇〇1)。
[0083] ⑶大鼠卵巢切除21天后，乳腺明顯萎縮，腺泡減少，導管減少變小。卵巢切除大鼠 皮下注射Est(lmg/kg)后，乳腺腺泡和導管及其上皮細胞有不同程度的增生，乳腺組織密度 增加明顯。
[0084] ⑷大鼠摘除卵巢后21天，大鼠子宮萎縮明顯，子宮內(nèi)膜中嗜酸性粒細胞滲出減少， 給予外源雌二醇后嗜酸性粒細胞滲出增加 (p〈〇.001);大鼠卵巢切除后21天，大鼠視網(wǎng)膜EB 滲出明顯減少;給外源雌二醇后，視網(wǎng)膜中EB滲出明顯增加 (p〈0.05)。
[0085] 綜上所述，與卵巢切除大鼠相比，以本發(fā)明的子宮和乳腺異常增生及血管通透性 提高大鼠模型的造模方法制作的大鼠模型在子宮體重、子宮形態(tài)、乳腺形態(tài)、血管通透性 水平與對照方面均具有顯著性差異；與正常大鼠相比，外源雌二醇(〇.lmg/kg體重）可恢復 去卵巢大鼠血清的雌二醇水平，而外源雌二醇（lmg/kg體重)則可造成大鼠的子宮和乳腺異 常增生及血管通透性提高。由此可見本發(fā)明的一種子宮和乳腺異常增生及血管通透性提高 大鼠模型的造模方法是成功的，可以用于科學研究。
【主權(quán)項】
1. 一種子宮和乳腺異常增生及血管通透性提高大鼠模型造模方法，其特征在于，具體 包括以下步驟： ⑴將50-55日齡的清潔級雌性Wistar大鼠，隨機分成5組，每組15只，同組放入一籠中，5 組大鼠均在室內(nèi)溫度25 °C、相對濕度54 %的飼養(yǎng)室飼養(yǎng)7天； ⑵在無菌條件下，選4組大鼠進行卵巢切除術(shù)，剩余組進行假手術(shù);卵巢切除術(shù)具體是 先用鹽酸氯胺酮80mg/kg腹腔注射麻醉，再沿著背部脊柱兩側(cè)切口，單側(cè)切口距脊柱lcm、距 最后肋骨1.5cm，切口長1.5-2cm，切開皮膚和肌肉層后放入定高切口保護器擴張肌肉層，所 述定高切口保護器通道直徑1.5cm，找到卵巢，近端輸卵管上做兩個結(jié)扎，將卵巢切除 (Ovx)，滴數(shù)滴青霉素注射液以防止感染，逐層縫合創(chuàng)口，術(shù)后用無菌〇.9%NaCl注射液配置 青霉素注射液0.8萬U/ml，每只大鼠lml腹腔注射，每天1次，連續(xù)注射3天，以防止腹腔感染， 術(shù)后原籠飼養(yǎng)； (3)恢復一周后，分別標記5組為:假手術(shù)(Sham)、卵巢切除(Ovx)、卵巢切除+17β-雌二醇 0 · 01mg/kg體重(Ovx+EstO · 01)、卵巢切除+17β-雌二醇0 · lmg/kg體重(Ovx+EstO · 1)、卵巢切 除+17β-雌二醇lmg/kg體重(Ovx+Estl);第一組和第二組大鼠每天皮下注射0.2ml芝麻油， 作為對照;第三組至第五組大鼠每天皮下注射不同劑量的17β_雌二醇芝麻油溶液； ⑷21天后，測定大鼠血清雌二醇水平、子宮重量及形態(tài)結(jié)構(gòu)、乳腺形態(tài)的變化以確定其 增生情況，測定子宮內(nèi)膜中嗜酸性粒細胞滲出量和大鼠視網(wǎng)膜ΕΒ滲出量的變化以確定其血 管通透性的變化情況，基于增生情況和血管通透性變化情況的結(jié)果綜合判定模型成功度。
【文檔編號】A01K67/027GK105850890SQ201610176756
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年3月25日
【發(fā)明人】李紅芳, 邱小青, 豆興成, 金珊, 汪龍德
【申請人】李紅芳