魯克斯楊與青楊雜種f1代優(yōu)良單株葉片再生植株的生產(chǎn)方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種魯克斯楊與青楊雜種F1代優(yōu)良單株葉片再生根的生產(chǎn)方法。本發(fā)明所述魯克斯楊與青楊雜種F1代優(yōu)良單株葉片再生植株的生產(chǎn)方法由外植體的選擇與消毒，愈傷組織的誘導(dǎo)，不定芽的誘導(dǎo)和根的誘導(dǎo)組成。本發(fā)明培養(yǎng)周期短，變異少，培養(yǎng)條件可以人為控制，操作方法簡(jiǎn)單，為魯克斯楊與青楊雜種F1代優(yōu)良單株作為優(yōu)良的科研材料進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化和品種改良等研究奠定基礎(chǔ)，從而為楊樹人工林大面積生產(chǎn)提供耐鹽堿地的優(yōu)良品種。
【專利說明】
魯克斯楊與青楊雜種F1代優(yōu)良單株葉片再生植株的生產(chǎn)方法一
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種魯克斯楊與青楊雜種F1代優(yōu)良單株葉片再生植株的生產(chǎn)方法。二技術(shù)背景
[0002]楊樹因其生長(zhǎng)速度快、世界分布廣、人工林栽植面積大，已經(jīng)成為21世紀(jì)改善人類生存環(huán)境，滿足人類生活需求最有潛力的樹種之一。目前已經(jīng)成為世界木本植物育種、栽培等模式樹種。
[0003]近年來，楊樹人工林面積持續(xù)擴(kuò)大，出現(xiàn)了可用土地資源不足的問題，而我國存在大面積的鹽堿灘涂地，面積達(dá)到〇.27億hm2，如何加強(qiáng)對(duì)鹽堿灘涂地的利用，成為楊樹育種中關(guān)注的焦點(diǎn)。三
【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明需要解決的問題是針對(duì)楊樹優(yōu)良種質(zhì)資源耐鹽堿育種中的需求，發(fā)明了一種魯克斯楊與青楊雜種F1代優(yōu)良單株葉片再生植株的生產(chǎn)方法，為楊樹優(yōu)良種質(zhì)資源的遺傳轉(zhuǎn)化和品種改良快速提供研究材料。
[0005]本發(fā)明所述魯克斯楊與青楊雜種F1代優(yōu)良單株葉片再生植株的生產(chǎn)方法由以下步驟構(gòu)成:
[0006](1)外植體的選擇與消毒:
[0007]選擇生長(zhǎng)健壯無病害的魯克斯楊與青楊雜種F1代優(yōu)良單株的幼嫩葉片作為外植體，將材料經(jīng)流水沖洗lh，去除表面雜物，在無菌操作工作臺(tái)上，先用滅菌的無菌水沖洗3 遍，再用75%無水乙醇消毒30s，接著用無菌水沖洗3遍，然后用0.1 %氯化汞消毒處理5-7min，最后用滅菌的無菌水沖洗4遍；
[0008](2)愈傷組織的誘導(dǎo):
[0009]在超凈工作臺(tái)上，將消毒好的葉片切成6mm大小的方塊，接種于誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基上 (配方為:MS+0.5mg/L 6-BA+0.15mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂;Ph調(diào)為5.8)，葉的背面緊貼培養(yǎng)基，每瓶接種3-4塊，誘導(dǎo)光照條件12h/d，2000lux，溫度23-28 °C ;
[0010](3)不定芽的誘導(dǎo):
[0011]將經(jīng)過繼代培養(yǎng)1次后的黃綠色愈傷組織轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)不定芽分化培養(yǎng)基上(配方為:MS+0 ? 5mg/L 6-BA+0 ? 05mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂；Ph調(diào)為5 ? 8)，誘導(dǎo)光照條件 12h/d，光照強(qiáng)度約20001ux，溫度23-28°C ;
[0012](4)根的誘導(dǎo):
[0013]經(jīng)過不定芽誘導(dǎo)得到再生芽，待再生芽長(zhǎng)到4-5片葉子，長(zhǎng)度0.8-1.2cm高時(shí)可轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根(配方為:1/2MS+0 ? 6mg/LIBA+0 ? 2mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂； Ph調(diào)為5.8)，誘導(dǎo)光照條件12h/d，光照強(qiáng)度20001ux，溫度23-28°C ;。[〇〇14]本發(fā)明所述魯克斯楊與青楊雜種F1代優(yōu)良單株葉片再生植株培養(yǎng)周期為45-55天。
[0015]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，其有益效果是:本發(fā)明使用魯克斯楊與青楊雜種F1代優(yōu)良單株葉片作為材料，取材方便，數(shù)量充足，接種后在較短時(shí)間內(nèi)形成愈傷組織直至生根形成幼苗植株，所得植株生長(zhǎng)健壯，平均根長(zhǎng)均明顯增大。繁殖系數(shù)約為8.6,培養(yǎng)條件可人為控制。利用本方法，可以提高魯克斯楊與青楊雜種F1代優(yōu)良單株的幼苗繁殖系數(shù)和成活率， 培養(yǎng)周期短，變異少，培養(yǎng)條件可人為控制，操作方法簡(jiǎn)單，為魯克斯楊與青楊雜種F1代優(yōu)良單株作為優(yōu)良的科研材料進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化和品種改良等研究奠定基礎(chǔ)，從而為楊樹人工林大面積生產(chǎn)提供耐鹽堿地的優(yōu)良品種。四【附圖說明】
[0016]圖1魯克斯楊與青楊雜種F1代優(yōu)良單株再生植株的葉片外植體
[0017]圖2魯克斯楊與青楊雜種F1代優(yōu)良單株葉片再生植株的愈傷組織
[0018]圖3魯克斯楊與青楊雜種F1代優(yōu)良單株葉片再生植株的叢生芽
[0019]圖4魯克斯楊與青楊雜種F1代優(yōu)良單株葉片再生植株的生根幼苗五【具體實(shí)施方式】
[0020]1，繁殖材料的選擇
[0021]試驗(yàn)材料取自金陵科技學(xué)院楊樹基地上的魯克斯楊與雜交青楊雜種F1代優(yōu)良單株。[〇〇22]2,繁殖材料的消毒[〇〇23]將材料經(jīng)流水沖洗lh去除表面雜物，在無菌操作工作臺(tái)上，先用無菌水沖洗3遍， 再用75%無水乙醇消毒30s，接著無菌水沖洗3遍，然后用0.1 %氯化汞消毒處理5-7min，最后用滅菌的無菌水沖洗4遍;見附圖1。[〇〇24]3,愈傷組織的誘導(dǎo)
[0025]在超凈工作臺(tái)上，將消毒好的葉片切成6mm大小的方塊，接種于愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，葉的背面緊貼培養(yǎng)基，每瓶接種3-4塊，誘導(dǎo)光照條件12h/d，光照強(qiáng)度20001UX，溫度23-28 °C;見附圖2 [〇〇26] 4,不定芽的誘導(dǎo)
[0027]將經(jīng)過連續(xù)繼代培養(yǎng)2-3次后的黃綠色愈傷組織轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)不定芽分化培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)光照條件12h/d，光照強(qiáng)度20001UX，溫度23-28°C ;見附圖3 [0〇28]5,根的誘導(dǎo)
[0029]經(jīng)過不定芽誘導(dǎo)得到再生芽，待再生芽長(zhǎng)到4-5片葉子，長(zhǎng)度lcm高時(shí)可轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根，誘導(dǎo)光照條件12h/d，光照強(qiáng)度20001UX，溫度23-28°C。幼苗生根情況，見附圖4。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種魯克斯楊與青楊雜種F1代優(yōu)良單株葉片再生植株的生產(chǎn)方法，其特征是由以下 步驟構(gòu)成:(1)外植體的選擇與消毒選擇生長(zhǎng)健壯無病害的魯克斯楊與青楊雜種F1代優(yōu)良單株的幼嫩葉片作為外植體，將 材料經(jīng)流水沖洗lh，去除表面雜物，在無菌操作工作臺(tái)上，先用滅菌的無菌水沖洗3遍，再用 75%無水乙醇消毒30s，接著用無菌水沖洗3遍，然后用0.1%氯化汞消毒處理5-7min，最后 用無菌水震蕩沖洗4遍；2)愈傷組織的誘導(dǎo)在超凈工作臺(tái)上，將消毒好的葉片切成6mm大小的方塊，接種于誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基上，培 養(yǎng)基的配方為:MS+0.5mg/L的6-BA+0.15mg/L的NAA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂;Ph調(diào)為5.8，葉的 背面緊貼培養(yǎng)基，每瓶接種3-4塊，誘導(dǎo)光照條件12h/d，光照強(qiáng)度20001UX，溫度23-28°C;3)不定芽的誘導(dǎo)將經(jīng)過繼代培養(yǎng)1次后的黃綠色愈傷組織轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)不定芽分化培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基的 配方為:MS+0 ? 5mg/L的6-BA+0 ? 05mg/L的NAA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂;Ph調(diào)為5 ? 8，誘導(dǎo)光照條 件 12h/d，光照強(qiáng)度20001ux，溫度23-28°C ;4)根的誘導(dǎo)經(jīng)過不定芽誘導(dǎo)得到再生芽，待再生芽長(zhǎng)到4-5片葉子，長(zhǎng)度0.8-1.2cm高時(shí)轉(zhuǎn)入生根 培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根，培養(yǎng)基的配方為:1/2MS+0.6mg/L的IBA+0.2mg/L的NAA+30g/L蔗糖+7g/L 瓊脂;？11調(diào)為5.8，誘導(dǎo)光照條件1211/(1，光照強(qiáng)度200011?，溫度23-28°(:。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種魯克斯楊與青楊雜種F1代優(yōu)良單株葉片再生植株的生產(chǎn)方 法，其特征是繁殖系數(shù)為8.6，培養(yǎng)周期為45-55天。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK105993937SQ201610312866
【公開日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年5月12日
【發(fā)明人】馬艷, 金鳳, 朱云華, 田野, 宋紫玲, 章麗梅
【申請(qǐng)人】金陵科技學(xué)院