專利名稱：用于評(píng)估藥物反應(yīng)的方法和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及對(duì)藥品的反應(yīng)，評(píng)估藥物反應(yīng)和預(yù)測(cè)受試者對(duì)特定藥物及藥物治療方 案的反應(yīng)的方法，以及對(duì)基因多態(tài)性和改變的基因表達(dá)的分析。
背景技術(shù)：
下文包含的內(nèi)容可用于了解本發(fā)明。這并非認(rèn)定任何本文提供的內(nèi)容相對(duì)于正在 描述或要求保護(hù)的發(fā)明是現(xiàn)有技術(shù)，或與此相關(guān)，或者任何具體或隱含引用的出版物或文 獻(xiàn)是現(xiàn)有技術(shù)。最近對(duì)人類基因組學(xué)領(lǐng)域的科技焦點(diǎn)是藥物基因組學(xué)，其包含對(duì)使用發(fā)育中的人 類DNA序列變異性和藥物處方的努力。藥物基因組學(xué)研究基于給定基因型和所得表型之間 的相關(guān)性或關(guān)聯(lián)。自從超過(guò)半個(gè)世紀(jì)前的首個(gè)相關(guān)性研究將不良藥物反應(yīng)聯(lián)系到在兩種藥 物代謝酶(血漿膽堿酯酶和葡萄糖-6-磷酸脫氫酶)上的氨基酸變異上，多個(gè)研究已經(jīng)報(bào) 道了藥物代謝酶內(nèi)部的序列多態(tài)性、藥物靶向物和藥物運(yùn)輸體以及與藥物效果或安全性協(xié) 調(diào)水平的相關(guān)性。藥物基因組學(xué)信息將特別適用于相關(guān)性信息可用于預(yù)防藥物毒性的臨床環(huán)境，或 開(kāi)發(fā)治療方案。例如、經(jīng)常就硫代嘌呤甲基轉(zhuǎn)移酶基因上的遺傳差異來(lái)篩選患者，該酶可降 低6-巰基嘌呤或硫唑嘌呤的代謝。但在觀察到的藥物毒性中至今只有極少比例已經(jīng)由一 組藥物基因組學(xué)標(biāo)記物得到充分的解釋。另外，臨床試驗(yàn)中“異?！钡膫€(gè)體、或經(jīng)歷未預(yù)期到的效果的個(gè)體(當(dāng)受試藥物已 經(jīng)事先被證明兼具安全性和有效性)，在獲得FDA藥物批準(zhǔn)時(shí)可導(dǎo)致實(shí)質(zhì)性的延遲，并且甚 至可導(dǎo)致某些藥物從市場(chǎng)退出，盡管這些藥物也許對(duì)多數(shù)受試者有效。生物技術(shù)方法到目前為止曾用于識(shí)別靶基因組區(qū)域，包括、例如、差異性基因表達(dá) (其從根本上探尋受試樣品和對(duì)照組之間在基因表達(dá)上的差異)；蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用 圖譜可用于識(shí)別藥物受試者和其即時(shí)效應(yīng)；并挖掘人類序列數(shù)據(jù)庫(kù)中的類似于已知的疾病 相關(guān)的、藥物代謝動(dòng)力或藥效的調(diào)控子的序列。與此相比，關(guān)聯(lián)和確證基因組區(qū)域與具體表 型特征的聯(lián)合研究依賴于群體遺傳學(xué)和穩(wěn)健的統(tǒng)計(jì)學(xué)度量。聯(lián)合研究提供在更短時(shí)間內(nèi)獲 得更多信息的強(qiáng)大工具，從而減少了搜索和開(kāi)發(fā)努力的成本。因?yàn)樗腥祟愔?9. 9%的基因組成是一致的，其任意兩個(gè)個(gè)體的DNA序列是幾乎 相同的。個(gè)體間的差異包括、例如、DNA序列的缺失和插入，非編碼區(qū)中的重復(fù)DNA元件數(shù) 的變化和單個(gè)核苷酸位點(diǎn)的改變，或“單核苷酸多態(tài)性”(SNP)。SNP可用于進(jìn)行聯(lián)合研究，并已被鑒定為潛在適用于表型特征的遺傳標(biāo)記物。關(guān)注 于藥學(xué)領(lǐng)域的特定的表型特征包括對(duì)疾病的易患性及應(yīng)對(duì)的特定藥物或治療方案。例如，最近的研究報(bào)道對(duì)抗血小板劑氯吡格雷的反應(yīng)是可變的，20 40%的患者 由于ADP-誘導(dǎo)的血小板凝集或激活的低抑制而被規(guī)類為不良反應(yīng)者或?qū)β冗粮窭子锌剐?(Angiolillo DJ等人(2005) ；Gurbel PA等人(2003) ；Gurbel PA等人(2006) ；Gurbel PA, Bliden, KP, Hayes KM 等人(2005) ；Mobley，JE 等人(2004)；和 Muller I 等人(2003))。代謝酶(如細(xì)胞色素CYP450系統(tǒng))和腸道吸收機(jī)制(如ρ-糖蛋白外排泵)也許負(fù)責(zé)所述改 變。由放射性同位素標(biāo)記的紅霉素呼吸試驗(yàn)來(lái)測(cè)定的CYP3A4的活性，已被報(bào)道與氯吡格雷 的反應(yīng)相關(guān)(Lau WC等人)。CYP3A4據(jù)報(bào)道負(fù)責(zé)多數(shù)藥物代謝，并且其已被確信該途徑是 對(duì)氯吡格雷到其活性代謝物的生物轉(zhuǎn)化過(guò)程的主要限制因素。但氯吡格雷的代謝也可受CYP2C19、CYP2C9影響，并可能受CYP3A5影響(Brandt JT, Close SL等人(2007)和Suh JH等人(2006))。數(shù)個(gè)經(jīng)詳細(xì)描述過(guò)的遺傳多態(tài)性存在 于所述這些酶的基因內(nèi)，其致使個(gè)體成為弱代謝者或超代謝者。例如，CYP2C19 * 2等位基 因顯示該酶的一種功能喪失，且載體據(jù)報(bào)道在使用每日一次75mg的氯吡格雷(Hulot JS等 人(2006)和 Fontana P, Senouf D 等人(2007))和 300mg 的負(fù)荷劑量(Brandt JT, Close SL等人(2007))時(shí)顯示減弱的抗血小板反應(yīng)。CYP3A4多態(tài)性也已被報(bào)道與對(duì)300mg氯吡格 雷的減弱的反應(yīng)有關(guān)(Angiolillo DJ 等人(2006)；和 Fontana P，HulotJS 等人(2006))。 CYP3A5功能喪失基因型* 3已被報(bào)道與在經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療(PCI)后的個(gè)體中動(dòng)脈粥 樣硬化的案例增加有關(guān)(SuhJH等人(2006))。ISAR-CH0ICE的藥代動(dòng)力學(xué)成分的研究提示600mg的氯吡格雷的升限效應(yīng)也許是 由于所述藥物的可飽和腸道吸收作用(vonBeckerath N等人(2005))。其隨后提出ρ-糖 蛋白外排泵在該過(guò)程中可被涉及。另外ABCBl基因(C3435T)的一種多態(tài)性(編碼ρ-糖蛋 白)已被報(bào)道降低血漿母體藥物水平(Taubert D等人)。但該結(jié)果尚未被轉(zhuǎn)化到藥效學(xué)影 響。減弱的藥效反應(yīng)被報(bào)道在數(shù)個(gè)臨床研究中與不良心臟事件的更高相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)有 關(guān)，提示對(duì)氯吡格雷的減弱的藥效反應(yīng)是臨床相關(guān)性的(Ajzenberg，N，等人(2005)； Barragan, P 等人(2003) ；Cuisset, T 等人(2006) ；Gurbel, PA, Bliden, KP, Samara, W 等人 (2005) ；Gurbel，PA，Bliden，KP，Guyer，K 等人(2005)和 Matetzky，S 等人(2004))。對(duì)氯吡格雷的反應(yīng)顯示大范圍的個(gè)體間變異，并且大量個(gè)體顯示對(duì)該藥物無(wú)或極 小反應(yīng)。重要的是，對(duì)處于心血管藥物治療的患者的藥物基因組學(xué)試驗(yàn)?zāi)壳耙堰M(jìn)入臨床實(shí) 踐階段。FDA最近已批準(zhǔn)了在華法林療法之前對(duì)VKORCl和CYP2C9多態(tài)性的藥物基因組學(xué) 試驗(yàn)。用標(biāo)準(zhǔn)諾莫圖劑量鑒定弱反應(yīng)者或那些有出血風(fēng)險(xiǎn)者可預(yù)防造成醫(yī)院患者中的實(shí)質(zhì) 比例發(fā)病的藥物相關(guān)并發(fā)癥。擁有一種生物標(biāo)記物或生物標(biāo)記物組合是可希望的和有利的，其可用于確定受試 者對(duì)抗血小板劑的反應(yīng)，或?qū)κ茉囌咭砸环N或更多抗血小板劑使用各種劑量和劑量方案來(lái) 進(jìn)行治療的適合性。本發(fā)明提供了這些生物標(biāo)記物及它們?cè)诖_定受試者的與對(duì)抗血小板藥 物及藥物治療方案的反應(yīng)有關(guān)的這些表型特征的方法中的用途。發(fā)明概述本文闡述和要求保護(hù)的發(fā)明具有許多特性和實(shí)施方式，包括，但不限于，在本發(fā)明 概述中的解釋或闡述或引用的那些。其并非意圖包括全部?jī)?nèi)容，且本文闡述和要求保護(hù)的 發(fā)明不限于本發(fā)明概述中定義的特征或?qū)嵤┓绞?其包括只用于解說(shuō)性用途并且沒(méi)有限 制性)，或者不受其限制。一方面，本發(fā)明涉及確定受試者中基因型和藥物反應(yīng)和/或?qū)χ委煼桨傅倪m合性 之間的關(guān)系。因此，根據(jù)此方面，提供預(yù)測(cè)或確定受試者對(duì)抗血小板劑的反應(yīng)的方法，所述方法包括對(duì)來(lái)自所述受試者的樣品的一種或多種多態(tài)性的有或無(wú)進(jìn)行分析，所述多態(tài)性選 自1.編碼細(xì)胞色素P450，家族2，亞家族C，多肽19(CYP2C19)的基因中的IA/ G(rs28399504)，也被稱為 “CYP2C19 * 4”，“基因型 CYP2C19 * 4” 或"CYP2C19 * 4 攜帶 者”；2.編碼CYP2C19的基因中的636G > A，也被稱為“CYP2C19 * 3”，“基因型CYP2C19 * 3” 或“CYP2C19 * 3 攜帶者，，。3.編碼 CYP2C19 的基因中的-806C/T(rsl2248560)，也被稱為"CYP2C19 * 17”;禾口4.編碼核受體亞家族1，組I，成員2 (NRl12)的基因中的275A/G(rsl464602)(還 被稱為 BXR、PAR、PRR、PXR、SAR、SXR、ONRl、PARI、PAR2 或 PARq)。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，一種或多種所述多態(tài)性的有或無(wú)是受試者對(duì)抗血小 板劑反應(yīng)的標(biāo)示。在一個(gè)實(shí)施方式中，有一種或多種所述多態(tài)性通常指示受試者對(duì)抗血小 板劑的減弱的反應(yīng)。在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式中，下述一種或多種多態(tài)性可與上述所列出的多態(tài)性 1 5的一種或多種或全部聯(lián)用5.編碼細(xì)胞色素P450，家族3，亞家族A，多肽5(CYP3A5)的基因中的6986G/ A(rs776746)，還被稱為“CYP3A5 * 1 * 1 ”，“基因型 CYP3A5 * 1 * 1” 或“CYP3A5 * 1 * 1 攜帶者”；和6.編碼 CYP3A5 的基因中的 31611T/C。這些多態(tài)性結(jié)合在一起被稱為“CYP3A5 * 1”(雜合子)或“CYP3A5 * 1 * 1”(純 合子)。在該實(shí)施方式中，有一種或多種所述多態(tài)性通常指示受試者對(duì)抗血小板劑的減弱的 反應(yīng)。在另一實(shí)施方式中，有一種或多種所述多態(tài)性可指示受試者對(duì)抗血小板劑的增強(qiáng)的 反應(yīng)。在另一實(shí)施方式中，受試者有多態(tài)性CYP2C19 * 2、CYP2C19 * 3和CYP2C19 * 4將 指示所述受試者對(duì)已加大劑量的或持續(xù)加大劑量的抗血小板劑的增強(qiáng)的反應(yīng)。另一方面， 所述受試者可為無(wú)反應(yīng)者或弱反應(yīng)者。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，抗血小板劑選自噻吩并吡啶類抗血小板劑。在該實(shí) 施方式的另一方面，該抗血小板劑選自第二代噻吩并吡啶類抗血小板劑。在優(yōu)選實(shí)施方式 中，該抗血小板劑優(yōu)選氯吡格雷。在另一實(shí)施方式中，該抗血小板劑選自第三代噻吩并吡啶抗血小板劑。在優(yōu)選實(shí) 施方式中，該抗血小板劑是普拉格雷。在另一優(yōu)選實(shí)施方式中，該抗血小板劑是氯吡格雷，且個(gè)體的基因型包括如本文 闡述的CYP2C19 * 2、CYP2C19 * 3、CYP2C19 * 4禾P CYP2C9 * 3中的一種或多種或全部。在 又一優(yōu)選實(shí)施方式中，受試者的基因型包括編碼CYP2B6的基因中的516G > T(rs3745274) TT或GT，其可單獨(dú)或與一種或多種或全部上述的多態(tài)性在一起。在個(gè)體中有一種或多種這 些多態(tài)性指示對(duì)氯吡格雷的減弱的反應(yīng)。在尤其優(yōu)選的實(shí)施方式中，抗血小板劑是氯吡格雷，且個(gè)體的基因型包括CYP2C19 女2和CYP2C9 * 3。多態(tài)性的這個(gè)組合指示受試者接受氯吡格雷的治療(包括，例如，以 150mg的日劑量治療)后在血小板的抑制上出現(xiàn)更大的變化。
在另一優(yōu)選實(shí)施方式中，抗血小板劑是氯吡格雷，且個(gè)體的基因型包括CYP2C19 女17。該多態(tài)性指示在以氯吡格雷進(jìn)行治療后在血小板抑制上出現(xiàn)更大變化。一種或多種多態(tài)性可被直接檢測(cè)，或通過(guò)檢測(cè)與所述一種或多種多態(tài)性連鎖不平 衡的一種或多種多態(tài)性來(lái)檢測(cè)。該方法可另外包括分析來(lái)自所述受試者的樣品中有一種或多種選自下列的多態(tài) 性，所述多態(tài)性選自7.編碼 CYP2C19 的基因中的 19154G/A(rs4244285)，也被稱為 “CYP2C19 * 2” ；8.編碼細(xì)胞色素P450，家族2，亞家族C，多肽9(CYP2C9)的基因中的42614A/ C(rsl057910)，也被稱為 “CYP2C9 * 3”；禾口9.編碼細(xì)胞色素P450，家族2，亞家族B，多肽6的基因中的516G>T(rs3745274)， 也被稱為“CYP2B6 * 9”。在這個(gè)實(shí)施方式中，有一種或多種所述多態(tài)性單獨(dú)或與一種或多種或全部上述記 載的多態(tài)性一起通常指示受試者對(duì)抗血小板劑的減弱的反應(yīng)。另外，一種或多種另外的多 態(tài)性的檢測(cè)可直接進(jìn)行或通過(guò)檢測(cè)與一種或多種另外的多態(tài)性連鎖不平衡的多態(tài)性來(lái)檢 測(cè)。有一種或多種選自下列的多態(tài)性指示對(duì)該抗血小板劑的弱反應(yīng)或抗性，所述多 態(tài)性選自CYP3A5 * 1 * 1 ；CYP2C19 * 4 ；CYP2C19 * 3 ；編碼CYP2C19的基因中的基因 型-806C/T(rsl2248560)TT 或 CT (在本文中還被稱為基因型 CYP2C19 * 17 或 CYP2C19 * 17 攜帶者)；編碼CYP2C19的基因中的基因型19154G/A(rs4244285)AA或GA(在本文中還被稱 為基因型CYP2C19 * 2或CYP2C19 * 2攜帶者)；編碼CYP2C9的基因中的基因型42614A/ C(rsl057910)CC或CA(在本文中還被稱為基因型CYP2C9 * 3或CYP2C9 * 3攜帶者)；編 碼NR1I2的基因中的基因型275A/G(rsl464602)GG或GA ；編碼CYP2B6的基因中的基因型 516G > T (rs3745274) TT 或 GT。有一種或多種選自下列的多態(tài)性指示對(duì)該抗血小板劑的反應(yīng)性，該多態(tài)性選自 CYP3A5 * 3 * 3 ；編碼CYP3A5的基因中的基因型31611T/C TC或CC ；編碼CYP2C19的基因 中的基因型lG/A(rs28399504)AA ；編碼CYP2C19的基因中的基因型636G > A(rs4986893) GG ；編碼CYP2C19的基因中的基因型-806T > C (rsl2248560) CC ；編碼CYP2C19的基因中的 基因型 19154A > G (rs4244285) GG ；編碼 CYP2C9 的基因中的基因型 42614C > A (rsl057910) AA ；或編碼NR1I2的基因中的基因型275G > A(rsl464602)AA ；編碼CYP2B6的基因中的基 因型 516G > T(rs3745274) GG0該抗血小板劑優(yōu)選噻吩并吡啶，更優(yōu)選氯吡格雷。本發(fā)明的方法尤其適用于處于患與血小板凝集相關(guān)的疾病或癥狀的風(fēng)險(xiǎn)或正患 該疾病或病癥的受試者，所述與血小板凝集相關(guān)的疾病或癥狀包括冠狀動(dòng)脈疾病，急性冠 狀動(dòng)脈綜合征，外周血管疾病，動(dòng)脈粥樣硬化(包括癥狀性動(dòng)脈粥樣硬化)，腦血管疾病，血 栓栓塞；或正接受或已經(jīng)接受對(duì)一種或多種這些疾病或癥狀的治療的受試者，所述治療包 括手術(shù)治療包括放置血管內(nèi)支架，搭橋手術(shù)，瓣膜置換術(shù)等。本文中下述的討論引用本發(fā)明的一個(gè)方面用于預(yù)測(cè)或確定受試者對(duì)一種或多種 抗血小板劑的反應(yīng)，也值得重視的是本發(fā)明這些方面也用于確定受試者對(duì)治療方案的適合 性，優(yōu)選用于確定受試者對(duì)抗血小板劑的預(yù)防性或治療性治療的適合性，包括選自噻吩并吡啶類抗血小板劑的抗血小板劑，包括第二代噻吩并吡啶類抗血小板劑(包括氯吡格雷)， 和第三代噻吩并吡啶抗血小板劑(包括普拉格雷)。值得重視的是本發(fā)明的方法可識(shí)別多個(gè)類別的多態(tài)性或多態(tài)性組合，即與對(duì)一種 或多種抗血小板劑弱反應(yīng)或抗性相關(guān)的多態(tài)性(本文中稱為“抗性多態(tài)性”)，與對(duì)一種或 多種抗血小板劑反應(yīng)相關(guān)的多態(tài)性(本文中稱為“反應(yīng)性多態(tài)性”)，與對(duì)一種或多種抗血 小板劑治療方案的反應(yīng)相關(guān)的多態(tài)性，以及與對(duì)不同劑量(包括一種或多種抗血小板劑的 增加的劑量)的反應(yīng)相關(guān)的多態(tài)性。這些SNP可計(jì)入使個(gè)體分類為反應(yīng)者類別(即反應(yīng)者(輕度減弱的反應(yīng)，中度減 弱的反應(yīng))或無(wú)反應(yīng)者)的記分系統(tǒng)。無(wú)任何一種確定的抗性多態(tài)性都可將個(gè)體歸類于反 應(yīng)者類別。因此，本發(fā)明更提供了預(yù)測(cè)或確定受試者對(duì)抗血小板劑的反應(yīng)的方法，所述方法 包括確定與對(duì)抗血小板劑的弱反應(yīng)或抗性相關(guān)的至少一種抗性多態(tài)性的有或無(wú)；其中有至少一種抗性多態(tài)性指示對(duì)抗血小板劑的弱反應(yīng)或抗性。此外，值得重視的是上述方面可用于確定受試者對(duì)治療方案或劑量的適合性，優(yōu) 選用于確定受試者對(duì)使用抗血小板劑方案或劑量的預(yù)防性或治療性治療的適合性。在本發(fā)明的優(yōu)選形式中，有全部反應(yīng)性多態(tài)性指示對(duì)抗血小板劑的反應(yīng)。在本發(fā)明的另一優(yōu)選形式中，有兩種或更多種抗性多態(tài)性指示對(duì)抗血小板劑的弱 反應(yīng)或抗性。在另一方面，本發(fā)明提供了預(yù)測(cè)和確定受試者對(duì)抗血小板劑反應(yīng)的方法，所述方 法包括提供來(lái)自所述受試者的樣品的一種或多種基因測(cè)試結(jié)果，以及分析一種或多種多態(tài) 性的有或無(wú)的結(jié)果，該多態(tài)性選自本文闡述過(guò)的(或與任何一種或多種上述多態(tài)性連鎖不 平衡的一種或多種多態(tài)性)，或選自編碼CYP3A5的基因中的6986G/A(rs776746)；編碼 CYP3A5 的基因中的 31611T/C ；編碼 CYP2C19 的基因中的 1A/G (rs28399504)；編碼 CYP2C19 的基因中的 636G > A(rs4986893)；編碼 CYP2C19 的基因中的-806C/T (rsl2248560)；編碼 NRl 12的基因中的275A/G(rsl464602)；或與任何一種或多種這些多態(tài)性連鎖不平衡的一 種或多種多態(tài)性；其中標(biāo)志一種或多種所述多態(tài)性的有或無(wú)的結(jié)果指示受試者對(duì)抗血小板 劑的反應(yīng)。在另一方面提供了預(yù)測(cè)和確定受試者對(duì)抗血小板劑的反應(yīng)的方法，所述方法包 括分析兩種或更多種選自下列的多態(tài)性，該多態(tài)性選自編碼編碼CYP3A5的基因中的 6986G/A(rs776746)；編碼 CYP3A5 的基因中的 31611T/C ；編碼 CYP2C19 的基因中的 IA/ G(rs28399504)；編碼 CYP2C19 的基因中的 636G > A(rs4986893)；編碼 CYP2C19 的基因中 的-806C/T(rsl2248560)；編碼NR1I2的基因中的275A/G (rsl464602)；或與任何一種或多 種這些多態(tài)性連鎖不平衡的一種或多種多態(tài)性。在本發(fā)明的一個(gè)形式中如本文闡述的方法與一個(gè)或多個(gè)與對(duì)抗血小板劑的反應(yīng) 有關(guān)的危險(xiǎn)因素分析聯(lián)合進(jìn)行，包括一個(gè)或多個(gè)流行病學(xué)危險(xiǎn)因素。這種流行病學(xué)危險(xiǎn)因 素包括但不限于吸煙或被動(dòng)吸煙，年齡，性別，以及與血小板凝集有關(guān)的家族病史或癥狀， 包括冠狀動(dòng)脈疾病，急性冠狀動(dòng)脈綜合征，外周血管疾病，動(dòng)脈粥樣硬化(包括癥狀性動(dòng)脈 粥樣硬化)，腦血管疾病，血栓栓塞，或正在接受或已接受對(duì)一種或多種這些疾病或癥狀的治療的受試者，所述治療包括手術(shù)治療、包括放置血管支架，搭橋手術(shù)，瓣膜置換術(shù)等。在另一方面，本發(fā)明提供了至少一種多態(tài)性在評(píng)估受試者對(duì)抗血小板劑反應(yīng)中的 用途，其中所述至少一種多態(tài)性選自編碼CYP3A5的基因中的6986G/A(rs776746)；編碼 CYP3A5 的基因中的 31611T/C ；編碼 CYP2C19 的基因中的 1A/G (rs28399504)；編碼 CYP2C19 的基因中的 636G > A(rs4986893)；編碼 CYP2C19 的基因中的-806C/T (rsl2248560)；編碼 NRl 12 的基因中的 275A/G(rsl464602)；編碼 CYP2B6 的基因中的 516G > T (rs3745274)；或 與所述多態(tài)性中的任何一種連鎖不平衡的一種或多種多態(tài)性。隨機(jī)地，上述用途可與至少一種另外的多態(tài)性的用途相組合，所述另外的多態(tài)性 選自編碼CYP2C19的基因中的19154G/A(rs4244285)；編碼CYP2C9的基因中的42614A/ C(rsl057910)；編碼CYP2B6的基因中的516G > T(rs3745274)；或與任意一種或多種這些 多態(tài)性連鎖不平衡的一種或多種多態(tài)性。在本發(fā)明的另一方面提供了用于本文闡述的本發(fā)明的優(yōu)選方法的一套核苷酸探 針和/或引物。優(yōu)選地，所述核苷酸探針和/或引物是跨距，或能用作跨距的，基因的所述 多態(tài)性區(qū)域的那些。還提供了含本文闡述的任意一種探針和/或引物的序列的一種或多種 核苷酸探針和/或引物。在又一方面，本發(fā)明提供了用于本發(fā)明方法的核酸微陣列，微陣列包含存在核酸 序列的基體、所述核酸序列能夠與編碼本文闡述的一種或多種抗性或反應(yīng)性多態(tài)性的核酸 序列或與之互補(bǔ)的序列雜交。在其他方面，本發(fā)明提供用于本發(fā)明方法的抗體微陣列，該微陣列包含基體、該基 體上存在能與基因表達(dá)產(chǎn)物結(jié)合的抗體，當(dāng)與本文闡述的抗性或反應(yīng)性多態(tài)性相關(guān)時(shí)，該 基因的表達(dá)被上調(diào)或下調(diào)。在其它方面中，本發(fā)明提供了評(píng)估受試者對(duì)介入的適合性的方法，該介入用于診 斷或治療血小板凝集相關(guān)疾病，所述方法包括a)提供來(lái)自受試者的樣品的一種或多種 基因測(cè)試的結(jié)果，以及b)分析所述結(jié)果中一種或多種反應(yīng)性多態(tài)性的有或無(wú)、或者一種 或多種抗性多態(tài)性的有或無(wú)，其中所述反應(yīng)性或抗性多態(tài)性選自編碼CYP3A5的基因中 的6986G/A (rs776746)；編碼CYP3A5的基因中的31611T/C ；編碼CYP2C19的基因中的IA/ G(rs28399504)；編碼 CYP2C19 的基因中的 636G > A(rs4986893)；編碼 CYP2C19 的基因中 的-806C/T(rsl2248560)；編碼NR1I2的基因中的275A/G(rsl464602)；或與任何一種或多 種這些多態(tài)性連鎖不平衡的一種或多種多態(tài)性；其中有一種或多種抗性多態(tài)性指示受試者 對(duì)該介入的適合性或不適合性。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，該介入是對(duì)與血小板凝集相關(guān)疾病或癥狀的診斷試 驗(yàn)，所述疾病或癥狀包括冠狀動(dòng)脈疾病，急性冠狀動(dòng)脈綜合征，外周血管疾病，動(dòng)脈粥樣硬 化(包括癥狀性動(dòng)脈粥樣硬化)，腦血管疾病，血栓栓塞，或或正在接受或已經(jīng)接受針對(duì)一 種或多種上述這些疾病或癥狀的治療的受試者，所述治療包括手術(shù)治療包括放置血管支 架、搭橋手術(shù)，瓣膜置換術(shù)等。在本發(fā)明的另一實(shí)施方式中，所述介入是對(duì)血小板凝集相關(guān)疾病或癥狀的治療， 包括冠狀動(dòng)脈疾病，急性冠狀動(dòng)脈綜合征，外周血管疾病，動(dòng)脈粥樣硬化(包括癥狀性動(dòng)脈 粥樣硬化)，腦血管疾病，血栓栓塞，或或正在接受或已經(jīng)接受針對(duì)一種或多種上述這些疾 病或癥狀的治療的受試者，所述治療包括手術(shù)治療，包括放置血管支架包括是否植入藥物洗脫或稀有金屬冠狀動(dòng)脈支架的確定，搭橋手術(shù)，瓣膜置換等，更優(yōu)選對(duì)所述疾病或癥狀的 預(yù)防性治療。優(yōu)選地，所述方法包括對(duì)一種或多種另外的反應(yīng)性或抗性多態(tài)性的有或無(wú)的分 析，該多態(tài)性選自編碼CYP2C19的基因中的19154G/A(rs4244285)；編碼CYP2C9的基因中 的 42614A/C(rsl057910)；編碼 CYP2B6 的基因中的 516G > T(rs3745274)；或與任意一種或 多種這些多態(tài)性連鎖不平衡的一種或多種多態(tài)性。在又一方面，本發(fā)明提供了在確定受試者對(duì)介入的適合性的情況中預(yù)測(cè)受試者對(duì) 抗血小板劑的反應(yīng)性的數(shù)據(jù)，所述介入是對(duì)血小板凝集相關(guān)疾病或癥狀的診斷或治療，所 述數(shù)據(jù)包含，組成自或包括對(duì)至少一種抗血小板劑的反應(yīng)_相關(guān)的基因分析的結(jié)果、該基 因分析選自本文闡述的一種或多種基因分析，且所述數(shù)據(jù)指示受試者對(duì)所述介入的適合性 或不適合性。例如，所述確定為是否植入藥物洗脫冠狀動(dòng)脈支架還是稀有金屬冠狀動(dòng)脈支架。 在一個(gè)實(shí)施方式中，所述數(shù)據(jù)代表有一種或多種反應(yīng)性多態(tài)性，或代表無(wú)一種或多種反應(yīng) 性多態(tài)性，或代表有一種或多種抗性多態(tài)性。在另一方面，本發(fā)明提供了確定受試者對(duì)抗血小板劑反應(yīng)的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括 用于接收、處理和通信數(shù)據(jù)的計(jì)算機(jī)處理器設(shè)備；用于存儲(chǔ)數(shù)據(jù)的存儲(chǔ)設(shè)備，該數(shù)據(jù)包括關(guān) 于對(duì)抗血小板劑的反應(yīng)或關(guān)于與血小板凝集相關(guān)疾病或癥狀的至少一種基因分析結(jié)果的 參照基因數(shù)據(jù)庫(kù)和任選的與血小板凝集相關(guān)的疾病或癥狀的非基因危險(xiǎn)因素的參照非基 因數(shù)據(jù)庫(kù)；以及被嵌入在計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理器內(nèi)的計(jì)算機(jī)程序，一旦接收由基因分析的結(jié)果 構(gòu)成或包括基因分析的結(jié)果的數(shù)據(jù)，由于該數(shù)據(jù)被包括在所述參照基因數(shù)據(jù)庫(kù)中，該計(jì)算 機(jī)程序處理在所述參照數(shù)據(jù)庫(kù)背景中的所述數(shù)據(jù)，以作為結(jié)果確定所述受試者對(duì)抗血小板 劑的反應(yīng)，一旦知道所述結(jié)果，可優(yōu)選將所述結(jié)果通信給已輸入所述數(shù)據(jù)的使用者。優(yōu)選地，至少一種基因分析是對(duì)選自下列的一種或多種多態(tài)性的分析，所述多態(tài) 性選自編碼CYP3A5的基因中的6986G/A(rs776746)；編碼CYP3A5的基因中的31611T/ C ；編碼CYP2C19的基因中的1A/G(rs28399504)；編碼CYP2C19的基因中的636G > A(rs4986893)；編碼 CYP2C19 的基因中的-806C/T(rsl2248560)；編碼 NR1I2 的基因中的 275A/G(rsl464602)；或與所述一種或多種多態(tài)性連鎖不平衡的一種或多種多態(tài)性。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，該數(shù)據(jù)由醫(yī)療保健提供者的代表輸入。在另一實(shí)施 方式中，該數(shù)據(jù)由受試者、他們的醫(yī)學(xué)顧問(wèn)或其它代表輸入。優(yōu)選地，所述系統(tǒng)容易經(jīng)由網(wǎng) 絡(luò)或個(gè)人電腦獲得。優(yōu)選地，所述參照基因數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)成于、包含或包括與對(duì)抗血小板劑反應(yīng)相關(guān)的基 因分析的結(jié)果、該基因分析選自一種或多種本文闡述的基因分析，優(yōu)選為對(duì)一種或多種選 自下列的多態(tài)性的分析結(jié)果，該多態(tài)性選自編碼CYP3A5的基因中的6986G/A(rs776746)； 編碼CYP3A5的基因中的31611T/C ；編碼CYP2C19的基因中的1A/G (rs28399504)； 編碼CYP2C19的基因中的636G > A(rs4986893)；編碼CYP2C19的基因中的-806C/ T(rsl2248560)；編碼 NR1I2 的基因中的 275A/G(rsl464602)；編碼 CYP2C19 的基因中的 19154G/A (rs4244285)；編碼 CYP2C9 的基因中的 42614A/C (rsl057910)；或與所述一種或多 種多態(tài)性連鎖不平衡的一種或多種多態(tài)性。更優(yōu)選地，所述參照基因數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)成于、包含或包括任意兩種、任意三種、任意四種、或全部多態(tài)性的分析結(jié)果，該多態(tài)性選自編碼CYP3A5的基因中的6986G/ A(rs776746)；編碼CYP3A5的基因中的31611T/C ；編碼CYP2C19的基因中的IA/ G(rs28399504)；編碼 CYP2C19 的基因中的 636G > A(rs4986893)；編碼 CYP2C19 的基 因中的 _806C/T(rsl2248560)；編碼 NR1I2 的基因中的 275A/G(rsl464602)。所述參照 基因數(shù)據(jù)庫(kù)可額外包含或包括選自下列的一種或多種多態(tài)性的結(jié)果分析，該多態(tài)性選 自編碼CYP2C19的基因中的19154G/A(rs4244285)；編碼CYP2B6的基因中的516G > T(rs3745274)；編碼CYP2C9的基因中的42614A/C(rsl057910)。更優(yōu)選地，所述參照基因 數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)成于、包含或包括全部本文闡述的基因分析的結(jié)果。在又一方面，本發(fā)明提供了適宜于使用在系統(tǒng)上的計(jì)算機(jī)程序，該系統(tǒng)如上定義， 包括持有程序代碼的計(jì)算機(jī)可使用的媒介，體現(xiàn)在促使計(jì)算機(jī)程序處理接收的數(shù)據(jù)的媒 介，該數(shù)據(jù)組成自或包括在兩種背景下所述至少一種抗血小板劑反應(yīng)-相關(guān)的基因分析 的結(jié)果的參照基因數(shù)據(jù)庫(kù)；和任選的與血小板凝集相關(guān)疾病或癥狀的非基因危險(xiǎn)因素的參 照非基因數(shù)據(jù)庫(kù)，這兩種背景下的至少一種抗血小板劑反應(yīng)_相關(guān)基因分析的結(jié)果。優(yōu)選地，至少一種抗血小板劑反應(yīng)_相關(guān)的基因分析選自一種或多種本文闡述的 基因分析，優(yōu)選至少一種抗血小板劑反應(yīng)-相關(guān)的基因分析是對(duì)選自下列的一種或多種多 態(tài)性的分析，該多態(tài)性選自編碼CYP3A5的基因中的6986G/A(rs776746)；編碼CYP3A5的 基因中的31611T/C ；編碼CYP2C19的基因中的1A/G (rs28399504)；編碼CYP2C19的基因中 的 636G > A(rs4986893)；編碼 CYP2C19 的基因中的-806C/T(rsl2248560)；編碼 NRl 12 的 基因中的275A/G(rsl464602)；或與所述一種或多種多態(tài)性連鎖不平衡的一種或多種多態(tài) 性。優(yōu)選地，至少一種抗血小板劑反應(yīng)_相關(guān)基因分析是對(duì)來(lái)自上述組的任意兩種、任意三 種、任意四種、或全部多態(tài)性的分析。至少一種抗血小板劑反應(yīng)-相關(guān)基因分析可額外包含對(duì)選自下列的一種或多 種多態(tài)性的分析，該多態(tài)性選自編碼CYP2C19的基因中的19154G/A(rs4244285)；編碼 CYP2B6 的基因中的 516G>T(rs3745274)；編碼 CYP2C9 的基因中的 42614A/C(rsl057910)。優(yōu)選地，至少一種抗血小板劑反應(yīng)_相關(guān)的基因分析是本文闡述過(guò)的基因分析。還提供了用于確定受試者對(duì)介入的適合性的如上所述的計(jì)算機(jī)系統(tǒng)和程序，所述 介入是對(duì)血小板凝集相關(guān)疾病或癥狀的診斷或治療。再一方面，本發(fā)明提供了預(yù)測(cè)受試者對(duì)血小板凝集相關(guān)疾病或癥狀的易患性的數(shù) 據(jù)在對(duì)受試者對(duì)抗血小板劑反應(yīng)的預(yù)測(cè)和確定中的用途，所述數(shù)據(jù)包含、構(gòu)成自或包括至 少一種抗血小板劑反應(yīng)_相關(guān)基因分析的結(jié)果，該基因分析選自一種或多種本文闡述過(guò)的 基因分析，且所述數(shù)據(jù)可代表受試者對(duì)抗血小板劑反應(yīng)。優(yōu)選地，該數(shù)據(jù)包含、構(gòu)成自或包括選自下列的一種或多種多態(tài)性的分析結(jié)果， 該多態(tài)性選自編碼CYP3A5的基因中的6986G/A (rs776746)；編碼CYP3A5的基因中的 31611T/C ；編碼 CYP2C19 的基因中的 1A/G (rs28399504)；編碼 CYP2C19 的基因中的-806C/ T(rsl2248560)；編碼 NR1I2 的基因中的 275A/G(rsl464602)；編碼 CYP2C19 的基因中的 636G > A(rs4986893)；或與所述一種或多種多態(tài)性連鎖不平衡的一種或多種多態(tài)性。更優(yōu)選地，該數(shù)據(jù)包含、構(gòu)成自或包括兩種或更多種、三種或更多、四種或更多、或 全部的上述的多態(tài)性的分析結(jié)果。更優(yōu)選地，該數(shù)據(jù)包含、構(gòu)成自或包括全部本文闡述過(guò)的 基因分析。
在另一方面，本發(fā)明提供了評(píng)估受試者對(duì)抗血小板劑反應(yīng)的試劑盒，所述試劑盒 包括對(duì)來(lái)自所述受試者樣品的本文闡述的一種或多種多態(tài)性的有或無(wú)的分析設(shè)備。在又一方面，本發(fā)明提供了評(píng)價(jià)受試者對(duì)血小板凝集相關(guān)疾病的治療性介入的 適合性的方法，該方法包括a)提供對(duì)來(lái)自受試者樣品的一種或多種血小板抑制試驗(yàn)的結(jié) 果；以及b)分析該結(jié)果；其中指示少于約10%的血小板抑制的結(jié)果指示受試者對(duì)所述介入 的適合性和不適合性。優(yōu)選地，該治療性介入是用，例如，氯吡格雷來(lái)治療。另外可選擇的，所述治療性介 入可用普拉格雷治療。優(yōu)選地，所述血小板抑制試驗(yàn)是給予氯吡格雷后的血小板抑制試驗(yàn)，優(yōu)選在氯吡 格雷給藥后約2小時(shí)進(jìn)行血小板抑制試驗(yàn)。優(yōu)選使用快速血小板功能分析儀，更優(yōu)選VerifyNow快速血小板功能分析儀，更 優(yōu)選將VerifyNow快速血小板功能分析儀及P2Y12試劑盒測(cè)定血小板抑制試驗(yàn)。在一個(gè)實(shí)施方式中，少于約5%的血小板抑制的、少于約4%血小板抑制的，少于 約3%血小板抑制的，或優(yōu)選少于約2%的血小板抑制的結(jié)果，指示受試者對(duì)所述治療性介 入的不適合性，更優(yōu)選指示受試者對(duì)使用氯吡格雷治療的不適合性。在另一實(shí)施方式中，少于約5%的血小板抑制的、少于約4%血小板抑制的，少于 約3%血小板抑制的，或優(yōu)選少于約2%的血小板抑制的結(jié)果，指示受試者對(duì)所述治療性介 入的適合性，更優(yōu)選指示受試者對(duì)使用普拉格雷治療的適合性。在又一實(shí)施方式中，少于約10%的血小板抑制的、少于約5%的血小板抑制的、少 于約4%的血小板抑制的、少于約3%的血小板抑制的、或優(yōu)選少于約2%的血小板抑制的 結(jié)果，指示受試者適對(duì)所述治療性介入的適合性，更優(yōu)選指示受試者對(duì)氯吡格雷的高劑量 治療方案的適合性，更優(yōu)選指示受試者對(duì)氯吡格雷的高劑量治療方案的適合性、包括以約 1200mg的負(fù)荷劑量和約150mg日維持劑量的氯吡格雷給藥。在更多方面本發(fā)明提供了預(yù)測(cè)或確定對(duì)受試者的與血小板凝集相關(guān)疾病的治療 方案的效果的方法，其中的治療方案包括抗血小板劑的給藥，該方法包括a)提供對(duì)來(lái)自 受試者樣品的一種或多種血小板抑制試驗(yàn)的結(jié)果；以及b)分析所述結(jié)果；其中指示少于約 10%的血小板抑制的結(jié)果指示治療方案的效果減弱。優(yōu)選地，所述效果指長(zhǎng)期療效，更優(yōu)選一周治療后的、一個(gè)月治療后的、或介于一 個(gè)月和一年治療后的所述治療方案的效果。優(yōu)選地，所述抗血小板劑為例如、氯吡格雷。治療方案優(yōu)選包括以約600mg的負(fù)荷劑量和約75mg的日維持劑量的氯吡格雷給藥。優(yōu)選地，血小板抑制試驗(yàn)是以氯吡格雷給藥后的血小板抑制試驗(yàn)，優(yōu)選以氯吡格 雷給藥后約2小時(shí)時(shí)的血小板抑制試驗(yàn)。優(yōu)選使用快速血小板功能分析儀，更優(yōu)選VerifyNow快速血小板功能分析儀，更 優(yōu)選VerifyNow快速血小板功能分析儀及P2Y12試劑盒來(lái)測(cè)量血小板抑制試驗(yàn)。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，少于約5%的血小板抑制的、少于約4%的血小板抑制 的、少于約3%的血小板抑制的、或優(yōu)選少于約2%的血小板抑制的結(jié)果指示治療方案的效 果減弱，更優(yōu)選指示使用氯吡格雷治療的效果減弱，更優(yōu)選指示減弱以約600mg負(fù)荷劑量和約75mg日維持劑量的氯吡格雷治療的減弱的效果。在另一方面，本發(fā)明提供了對(duì)受試者的與血小板凝集相關(guān)疾病的治療方法，該 方法包括a)對(duì)受試者在第一天的治療中以氯吡格雷的負(fù)荷劑量給藥，該負(fù)荷劑量介于 600mg以上至約ISOOmg的范圍；b)在隨后每個(gè)治療日對(duì)受試者以氯吡格雷的維持劑量給 藥，該維持劑量介于50mg以上至約200mg的范圍。在優(yōu)選實(shí)施方式中，所述負(fù)荷劑量在600mg以上到約1500mg的范圍，更優(yōu)選在 900mg以上到約1500mg的范圍，更優(yōu)選負(fù)荷劑量為約1200mg。在優(yōu)選實(shí)施方式中，維持劑量介于約50mg和約200mg之間，更優(yōu)選介于約75mg到 和150mg之間，更優(yōu)選所述日維持劑量為約150mg。優(yōu)選地，受試者已經(jīng)被認(rèn)定為氯吡格雷無(wú)反應(yīng)者或弱反應(yīng)者，更優(yōu)選受試者已經(jīng) 被認(rèn)定為使用本發(fā)明方法的氯吡格雷的無(wú)反應(yīng)者或弱反應(yīng)者。在其它方面，本發(fā)明提供了在受試者中治療血小板凝集相關(guān)疾病的方法，所述方 法包括a)在治療的第一天給予受試者以首次負(fù)荷劑量的氯吡格雷，所述首次負(fù)荷劑量為 300mg以上到約900mg ；b)在治療的第一天給予受試者以第二次負(fù)荷劑量的氯吡格雷，所述 第二次負(fù)荷劑量為300mg以上到約900mg ；c)在隨后每個(gè)治療日給予受試者以維持劑量的 氯吡格雷，所述維持劑量在50mg以上到約200mg ；其中的第二次負(fù)荷劑量在首次負(fù)荷劑量 之后約30分鐘給藥。在優(yōu)選實(shí)施方式中，首次負(fù)荷劑量為600mg。在另一優(yōu)選實(shí)施方式中，第二次負(fù)荷 劑量為600mg。優(yōu)選地，第二次負(fù)荷劑量是在首次負(fù)荷劑量后的約30分鐘到4小時(shí)之間給藥，優(yōu) 選在首次負(fù)荷劑量后的約45分鐘到3小時(shí)之間給藥，更優(yōu)選在首次負(fù)荷劑量后的約1小時(shí) 到2. 5小時(shí)之間，更優(yōu)選在首次負(fù)荷劑量后約2小時(shí)時(shí)給藥。在優(yōu)選實(shí)施方式中，所述維持劑量介于約50mg到約200mg之間，更優(yōu)選介于約 75mg到約150mg之間，更優(yōu)選所述日維持劑量為約150mg。本發(fā)明還提供了產(chǎn)品，其包含含有氯吡格雷的多個(gè)劑型、以及對(duì)患有血小板凝集 相關(guān)疾病的患者給予氯吡格雷的產(chǎn)品說(shuō)明，其中的產(chǎn)品說(shuō)明提供根據(jù)如上所述的本發(fā)明的 治療方法施用氯吡格雷。優(yōu)選地，該產(chǎn)品說(shuō)明提供氯吡格雷在治療的第一天以約1200mg的負(fù)荷劑量給藥， 在其后每天的治療中接下來(lái)給予約150mg的維持劑量。優(yōu)選地，多個(gè)劑型包括至少一個(gè)負(fù)荷劑量劑型以及至少一個(gè)維持劑量劑型，所述 至少一個(gè)負(fù)荷劑量劑型提供了約1200mg的總劑量，并且所述維持劑量劑型含有約150mg。優(yōu)選地，所述產(chǎn)品說(shuō)明提供在治療的第一天以約600mg氯吡格雷的首次負(fù)荷劑量 給藥，且在首次負(fù)荷劑量后至少約30分鐘時(shí)給予約600mg氯吡格雷的第二次負(fù)荷劑量，并 且約150mg氯吡格雷的維持劑量是在隨后的治療中每天給藥。優(yōu)選地，多個(gè)劑型包括至少兩個(gè)負(fù)荷劑量的劑型和至少一個(gè)維持劑量的劑型，所 述至少兩個(gè)負(fù)荷劑量的劑型提供了約1200mg氯吡格雷的總劑量，且所述維持劑量劑型包 括約150mg的氯吡格雷。優(yōu)選地，至少兩個(gè)負(fù)荷劑量的劑型各含有約600mg氯吡格雷。優(yōu)選地，所述劑型是口服劑型。另外還提供氯吡格雷用于制備適用于上述方法的藥劑或劑型的用途。


圖1顯示對(duì)血小板活化的激動(dòng)劑和抗血小板劑。圖2顯示皮爾遜相關(guān)矩陣，該矩陣顯示在兩個(gè)時(shí)間間隔血小板功能反應(yīng)之間的關(guān) 系，以及給予氯吡格雷后基于較早時(shí)間間隔對(duì)血小板活性的后發(fā)抑制的可預(yù)測(cè)性。當(dāng)發(fā)生 在2小時(shí)的血小板抑制少于2%，可預(yù)測(cè)在7小時(shí)無(wú)反應(yīng)(抑制發(fā)生< 10% )，伴隨100% 的靈敏性，和88%的特異性。圖3顯示在給以600mg氯吡格雷后2小時(shí)時(shí)的血小板抑制。CYP2C19 * 2和 CYP2C19女4攜帶者顯示CYP2C19酶功能喪失，但CYP2C19女17顯示獲得功能。P值使用 Kruskal-Wallis 檢驗(yàn)計(jì)算。圖4顯示第二次氯吡格雷負(fù)荷劑量后2小時(shí)時(shí)在CYP2C19 * 1 * 1正常攜帶者中 的血小板抑制。女1攜帶者顯示正常CYP2C19酶的功能。P值使用Marm Whitney檢驗(yàn)計(jì)
笪弁。圖5顯示第二次氯吡格雷負(fù)荷劑量后2小時(shí)時(shí)在CYP2C19 * 2或* 4功能喪失的 攜帶者中的血小板抑制。圖6顯示在CYP2C19正常攜帶者中7天的血小板抑制。圖7顯示在CYP2C19 * 2或* 4的功能喪失攜帶者中7天的血小板抑制。圖8顯示無(wú)關(guān)劑量的全部個(gè)體中的弱反應(yīng)者基因型(CYP2C19和CYP2C9)的累加 效應(yīng)。P值使用Wilcoxon檢驗(yàn)計(jì)算。圖9顯示對(duì)氯吡格雷反應(yīng)者狀況的基因型危險(xiǎn)分值，其中針對(duì)2小時(shí)的抗血小板 抑制標(biāo)繪抗性基因型的數(shù)量。P值使用Wilcoxon檢驗(yàn)計(jì)算。實(shí)施方式術(shù)語(yǔ)遺傳藥理學(xué)和藥物基因組學(xué)術(shù)語(yǔ)及其語(yǔ)法上等同的術(shù)語(yǔ)在本文中可互換使 用。這些術(shù)語(yǔ)指對(duì)個(gè)體的基因如何決定其(他或她)對(duì)藥物的反應(yīng)(如患者的“藥物反應(yīng) 表型”、或“藥物反應(yīng)基因型”)的研究。藥物基因組學(xué)使臨床醫(yī)生或內(nèi)科醫(yī)生對(duì)、例如將最 為受益于所述治療的患者進(jìn)行靶預(yù)防性或治療性治療，或者避免對(duì)可能遭受藥物相關(guān)的毒 性副作用或者效果減弱或無(wú)效果的患者的治療。使用病例對(duì)照研究，已經(jīng)比較了接受冠狀動(dòng)脈介入的受試者中候選基因的多個(gè)基 因變異(多態(tài)性)的頻率。這些候選基因的大多數(shù)對(duì)基因表達(dá)或蛋白功能有確定的(或可 能的)功能性作用。特別比較了具有弱藥物反應(yīng)的受試者與具有良藥物反應(yīng)的受試者之間 的多態(tài)性的頻率。在本文闡述過(guò)的一個(gè)實(shí)施方式中，鑒定了抗性基因多態(tài)性和反應(yīng)性基因多態(tài)性。 這些多態(tài)性列表如下
權(quán)利要求
預(yù)測(cè)或確定受試者對(duì)抗血小板劑的反應(yīng)的方法，所述方法包括分析自所述受試者的樣品中選自下列的一種或多種多態(tài)性的有或無(wú)●編碼細(xì)胞色素P450，家族3，亞家族A，多肽5(CYP3A5)的基因中的6986G/A(rs776746)；●編碼CYP3A5的基因中的31611T/C；●編碼細(xì)胞色素P450，家族2，亞家族C，多肽19(CYP2C19)的基因中的1A/G(rs28399504)；●編碼CYP2C19的基因中的636G＞A(rs4986893)；●編碼CYP2C19的基因中的 806C/T(rs12248560)；●編碼核受體亞家族1，組I，成員2(NR1I2)的基因中的275A/G(rs1464602)；或●與所述另外的多態(tài)性中的一種或多種連鎖不平衡的一種或多種多態(tài)性，其中所述多態(tài)性中的一種或多種的有或無(wú)指示所述受試者對(duì)抗血小板劑的反應(yīng)。
2.權(quán)利要求1的方法，還包括分析自所述受試者的樣品中有選自下列的一種或多種另 外的多態(tài)性 編碼 CYP2C19 的基因中的 19154G/A(rs4244285)； 編碼細(xì)胞色素P450，家族2，亞家族C，多肽9 (CYP2C9)的基因中的42614A/ C(rsl057910)； 編碼細(xì)胞色素P450，家族2，亞家族B，多肽6 (CYP2B6)的基因中的516G > T(rs3745274)；或 與所述另外的多態(tài)性中的一種或多種連鎖不平衡的一種或多種多態(tài)性。
3.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的方法，其中所述抗血小板劑是氯吡格雷。
4.預(yù)測(cè)或確定受試者對(duì)氯吡格雷的反應(yīng)的方法，所述方法包括 提供自所述受試者的樣品的一種或多種基因測(cè)試的結(jié)果，及 分析所述結(jié)果中選自下列的一種或多種多態(tài)性的有或無(wú) ■編碼 CYP3A5 的基因中的 6986G/A(rs776746)；■編碼CYP3A5的基因中的31611T/C ； ■編碼 CYP2C19 的基因中的 1A/G(rs28399504)； ■編碼 CYP2C19 的基因中的 636G > A(rs4986893)； ■編碼 CYP2C19 的基因中的 _806C/T(rsl2248560)； ■編碼NR1I2的基因中的275A/G(rsl464602)；或 ■與這些多態(tài)性中的任一種或多種連鎖不平衡的一種或多種多態(tài)性； 其中指示所述多態(tài)性中的一種或多種的有或無(wú)的結(jié)果指示所述受試者對(duì)氯吡格雷的 反應(yīng)性。
5.評(píng)估受試者對(duì)與血小板凝集相關(guān)的疾病的診斷性或治療性介入的適合性的方法，所 述方法包括(a)提供自所述受試者的樣品的一種或多種基因測(cè)試的結(jié)果，及(b)分析所述結(jié)果中一種或多種反應(yīng)性多態(tài)性的有或無(wú)、或者一種或多種抗性多態(tài)性 的有或無(wú)，其中所述反應(yīng)性或抗性多態(tài)性選自 編碼 CYP3A5 的基因中的 6986G/A(rs776746)； 編碼CYP3A5的基因中的31611T/C ； 編碼 CYP2C19 的基因中的 1A/G(rs28399504)； 編碼 CYP2C19 的基因中的 636G > A(rs4986893)； 編碼 CYP2C19 的基因中的 _806C/T(rsl2248560)； 編碼NR1I2的基因中的275A/G(rsl464602)；或 與所述多態(tài)性中的任一種或多種連鎖不平衡的一種或多種多態(tài)性；其中有一種或多種抗性多態(tài)性指示所述受試者對(duì)所述介入的適合性或不適合性。
6.權(quán)利要求5的方法，其中有一種或多種多態(tài)性指示所述受試者對(duì)用氯吡格雷治療的 不適合性和對(duì)用普拉格雷治療的適合性。
7.權(quán)利要求5的方法，其中所述介入是對(duì)與血小板凝集相關(guān)的疾病或病癥的治療。
8.權(quán)利要求5的方法，其中所述與血小板凝集相關(guān)的疾病或病癥，冠狀動(dòng)脈疾病、急性 冠狀動(dòng)脈綜合征、外周血管疾病、包括癥狀性動(dòng)脈粥樣硬化在內(nèi)的動(dòng)脈粥樣硬化、腦血管疾 病、或血栓栓塞。
9.權(quán)利要求5的方法，包括對(duì)選自下列的一種或多種額外的反應(yīng)性或抗性多態(tài)性的有 或無(wú)的分析 編碼 CYP2C19 的基因中的 19154G/A(rs4244285)； 編碼 CYP2C9 的基因中的 42614A/C(rsl057910)； 編碼 CYP2B6 的基因中的 516G > T(rs3745274)；或 與這些多態(tài)性中的任一種或多種連鎖不平衡的一種或多種多態(tài)性。
10.評(píng)估受試者對(duì)與血小板凝集相關(guān)的疾病的治療性介入的適合性方法，所述方法包括(a)提供自所述受試者的樣品中血小板抑制的一種或多種測(cè)試的結(jié)果；及(b)分析所述結(jié)果；其中指示小于約10%血小板抑制的結(jié)果指示所述受試者對(duì)所述介入的適合性或不適合性。
11.權(quán)利要求10的方法，其中所述治療性介入是用氯吡格雷治療。
12.權(quán)利要求11的方法，其中藥物給予后至少2小時(shí)時(shí)小于約5%血小板抑制的結(jié)果 指示所述受試者對(duì)高劑量氯吡格雷治療方案的適合性，所述高劑量氯吡格雷治療方案包括 以下列劑量給予氯吡格雷 2個(gè)600mg劑量的重復(fù)負(fù)荷劑量，及 約150mg的日維持劑量。
13.治療受試者的與血小板凝集相關(guān)的疾病的方法，所述方法包括(a)在首個(gè)治療日給予所述受試者負(fù)荷劑量的氯吡格雷，所述負(fù)荷劑量在從600mg以 上至約ISOOmg的范圍內(nèi)，假設(shè)以600mg的重復(fù)負(fù)荷劑量給予；(b)在隨后每個(gè)治療日給予所述受試者維持劑量的氯吡格雷，所述維持劑量在從50mg 以上至約200mg的范圍內(nèi)。
14.治療受試者的與血小板凝集相關(guān)的疾病的方法，所述方法包括(a)在首個(gè)治療日給予所述受試者第一負(fù)荷劑量的氯吡格雷，所述第一負(fù)荷劑量在從300mg以上至約900mg的范圍內(nèi)；(b)在首個(gè)治療日給予所述受試者第二負(fù)荷劑量的氯吡格雷，所述第二負(fù)荷劑量在從 300mg以上至約900mg的范圍內(nèi)；(c)在隨后每個(gè)治療日給予所述受試者維持劑量的氯吡格雷，所述維持劑量在從50mg 以上至約200mg的范圍內(nèi)；其中所述第二負(fù)荷劑量在所述第一負(fù)荷劑量后至少約30分鐘時(shí)給予。
15.權(quán)利要求14的方法，其中所述第二負(fù)荷劑量在所述第一負(fù)荷劑量后約2小時(shí)時(shí)給予。
16.產(chǎn)品，其含眷含氯吡格雷的多個(gè)劑型、和 將氯吡格雷給予患與血小板凝集相關(guān)的疾病的患者的產(chǎn)品說(shuō)明， 其中所述產(chǎn)品說(shuō)明提供以下列劑量給予氯吡格雷 在首個(gè)治療日以約1200mg的負(fù)荷劑量，之后 在隨后每個(gè)治療日以約150mg的維持劑量。
17.權(quán)利要求16的產(chǎn)品，其中所述產(chǎn)品說(shuō)明提供 在首個(gè)治療日以約600mg的第一負(fù)荷劑量給予氯吡格雷，及 在所述第一負(fù)荷劑量后至少約30分鐘時(shí)以約600mg的第二負(fù)荷劑量給予氯吡格雷，及 在隨后每個(gè)治療日以約150mg的維持劑量給予氯吡格雷。
18.確定受試者對(duì)抗血小板劑的反應(yīng)的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)含 計(jì)算機(jī)處理器設(shè)備，其用于接收、處理和通信數(shù)據(jù)； 眷存儲(chǔ)設(shè)備，其用于存儲(chǔ)數(shù)據(jù)，所述數(shù)據(jù)包括■至少一種基因分析的結(jié)果的參照基因數(shù)據(jù)庫(kù)，所述基因分析 關(guān)于對(duì)抗血小板劑的反應(yīng)，或 關(guān)于與血小板凝集相關(guān)的疾病或病癥，和■任選的與血小板凝集相關(guān)的疾病或病癥的非基因危險(xiǎn)因素的參照非基因數(shù)據(jù)庫(kù)；和 計(jì)算機(jī)程序，其被嵌入所述計(jì)算機(jī)處理器，一旦接收由基因分析的結(jié)果組成或包括 基因分析的結(jié)果的數(shù)據(jù)，由于所述數(shù)據(jù)被包括在所述參照基因數(shù)據(jù)庫(kù)中，所述計(jì)算機(jī)程序 處理所述參照數(shù)據(jù)庫(kù)情景中的所述數(shù)據(jù)，以作為結(jié)果確定所述受試者對(duì)抗血小板劑的反 應(yīng)，一旦知道所述結(jié)果，可優(yōu)選將所述結(jié)果通信給已輸入所述數(shù)據(jù)的使用者。
19.權(quán)利要求18的系統(tǒng)，所述至少一種基因分析是分析選自下列的一種或多種多態(tài)性 編碼 CYP3A5 的基因中的 6986G/A(rs776746)； 編碼CYP3A5的基因中的31611T/C ； 編碼 CYP2C19 的基因中的 1A/G(rs28399504)； 編碼 CYP2C19 的基因中的 636G > A(rs4986893)； 編碼 CYP2C19 的基因中的 _806C/T(rsl2248560)； 編碼NR1I2的基因中的275A/G(rsl464602)；或 與所述一種或多種多態(tài)性連鎖不平衡的一種或多種多態(tài)性。
20.評(píng)估受試者對(duì)抗血小板劑的反應(yīng)的試劑盒，所述試劑盒含眷設(shè)備，其分析自所述受試者的樣品中選自下列的一種或多種多態(tài)性的有或無(wú):■編碼 CYP3A5 的基因中的 6986G/A(rs776746)；■編碼CYP3A5的基因中的31611T/C ；■編碼 CYP2C19 的基因中的 1A/G(rs28399504)；■編碼 CYP2C19 的基因中的 636G > A(rs4986893)；■編碼 CYP2C19 的基因中的-806C/T (rsl2248560)；■編碼NRl 12的基因中的275A/G(rsl464602)；或■與所述一種或多種多態(tài)性連鎖不平衡的一種或多種多態(tài)性，及 產(chǎn)品使用說(shuō)明。
全文摘要
本發(fā)明提供了預(yù)測(cè)和確定受試者對(duì)抗血小板劑的反應(yīng)的方法，且所述方法包括使用基因多態(tài)性分析確定受試者對(duì)血小板凝集相關(guān)疾病的治療方案或介入的適合性。本發(fā)明還涉及基因多態(tài)性在評(píng)估受試者對(duì)抗血小板劑的反應(yīng)上的用途。還提供了適用于這種評(píng)估的核苷酸探針和引物、試劑盒，以及微陣列。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK101978073SQ200980109219
公開(kāi)日2011年2月16日 申請(qǐng)日期2009年1月23日 優(yōu)先權(quán)日2008年1月25日
發(fā)明者帕特里克·格拉丁, 瑪麗亞-莉薩·達(dá)爾, 阿爾祖·古內(nèi)斯, 馬克·韋伯斯特 申請(qǐng)人:診療實(shí)驗(yàn)室