專利名稱：一種食源性乳酸菌及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于微生物領(lǐng)域，具體地說(shuō)，是關(guān)于一種食源性乳酸菌及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
乳酸菌(Lactic acid bacteria, LAB)是指一類能夠通過(guò)同型發(fā)酵或異型發(fā)酵而產(chǎn)生乳酸的細(xì)菌，一般呈革蘭氏陽(yáng)性，厭氧，無(wú)芽孢，耐酸。并不是嚴(yán)格意義上系統(tǒng)分類中的一科或一屬，目前已發(fā)現(xiàn)的這一類菌在細(xì)菌分類學(xué)上至少包括8個(gè)屬，如乳酸桿菌屬、 雙歧桿菌屬、鏈球菌屬、明串珠球菌屬、腸球菌屬、乳球菌屬、肉食桿菌屬、奇異菌屬、片球菌屬、氣球菌屬、漫游球菌屬、李斯特氏菌屬、芽孢乳桿菌屬、芽孢桿菌屬中的少數(shù)種、環(huán)絲茵屬、丹毒絲菌屬、孿生菌屬和糖球菌屬等。絕大多數(shù)為厭氧或兼性厭氧的化能異養(yǎng)菌，生長(zhǎng)繁殖于厭氧或微耗氧、礦物質(zhì)和有機(jī)營(yíng)養(yǎng)物豐富的酸性環(huán)境中。在動(dòng)物的消化道中含量較高，大約占正常菌群10%，是人和動(dòng)物正常微生物群的組成部分，通常作為安全的益生菌劑添加到食物及動(dòng)物飼料中，且乳酸菌的生態(tài)與正常微生物群的生態(tài)密切相關(guān)。近年來(lái)乳酸菌的特殊生理活性和營(yíng)養(yǎng)功能，正日益引起人們的重視。乳酸菌能賦予食品柔和的酸味和香氣，改善食品的品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)，具有抗菌、降低膽固醇、維持微生態(tài)環(huán)境、抗腫瘤、抗變異原和增強(qiáng)免疫力等重要生物學(xué)功能，在食品中被廣泛應(yīng)用。乳酸菌發(fā)酵的食品被公認(rèn)為是功能性食品。乳酸菌被認(rèn)為是最適合的食品天然防腐劑，其表現(xiàn)出來(lái)的抗菌活性也可防止微生物污染，其可產(chǎn)生一些天然的抗菌劑，包括有機(jī)酸(乳酸、乙酸、甲酸、苯乳酸、己酸)、二氧化碳、過(guò)氧化氫、雙乙酰、乙醇和細(xì)菌素等。

發(fā)明內(nèi)容
本申請(qǐng)的發(fā)明人在對(duì)臭豆腐鹵液中的微生物多樣性的研究過(guò)程中，分離得到了一種食源性乳酸菌，經(jīng)鑒定為一種新的乳酸菌。因此，本發(fā)明的首要目的在于提供一種新的食源性乳酸菌。本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供所述食源性乳酸菌的應(yīng)用。本發(fā)明的食源性乳酸菌的16S rRNA序列如SEQ NO 1所示。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例，所述乳酸菌的保藏號(hào)為CCTCC NO :M2011381o根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例，所述乳酸菌可用于食品防腐。本發(fā)明不僅提供了一種新的食源性乳酸菌，而且該乳酸菌具有抑菌作用，因此可添加到食品中用作食品防腐劑。


圖1為本發(fā)明獲得的食源性乳酸菌的透射電鏡圖。圖2為本發(fā)明獲得的食源性乳酸菌與其他乳酸菌基于16S rRNA的進(jìn)化樹(shù)。
具體實(shí)施方式
以下通過(guò)具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。應(yīng)理解，以下實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而非用于限定本發(fā)明的范圍。本發(fā)明所用的菌種為乳酸菌Lactobacillus radiumii S1L19，在2011年9月29 日保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為中國(guó)武漢武漢大學(xué)，保藏號(hào)為CCTCC NO =M 2011381。以下實(shí)施例中所使用的MRS培養(yǎng)基的配方為胰酪胨1%，牛肉膏粉0.5%，酵母粉
0.4%,葡萄糖2%，乙酸鈉0. 5 %，檸檬酸三胺0.2%，吐溫800. 1 %，磷酸氫二鉀0.2%，硫酸鎂 0.02%，硫酸錳 0.005，pH 6.0。實(shí)施例1、食源性乳酸菌的分離和鑒定1.1、生長(zhǎng)條件本申請(qǐng)的發(fā)明人在研究臭豆腐鹵液微生物多樣性時(shí)，分離得到一株食源性菌株， 對(duì)其生長(zhǎng)條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果顯示其在de Man-Rogosa-Sharpe (MRS)培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，生長(zhǎng)溫度范圍為15 45°C，最適生長(zhǎng)溫度為30°C，生長(zhǎng)pH范圍為4. 0 8. 5。1.2、菌株形態(tài)觀察1. 1中獲得的菌株的形態(tài)，在30°C的條件下，于MRS培養(yǎng)基上培養(yǎng)4 后對(duì)該菌株進(jìn)行透射電鏡觀察(放大倍數(shù)為10000)，結(jié)果如圖1所示，細(xì)胞大小為(1.2
1.3) X (0. 6 0. 8) μ m,生長(zhǎng)方式為單個(gè)、成對(duì)或者成串生長(zhǎng)。1.3、碳源利用使用API 50CHL系統(tǒng)(BioM6rieuX，法國(guó))對(duì)1. 1中獲得的菌株的碳源利用情況進(jìn)行測(cè)定，具體操作方法按照使用說(shuō)明書。結(jié)果顯示該菌株能夠利用如下碳源L_阿拉伯糖，D-核糖，D-半乳糖，D-葡萄糖， D-果糖，D-麥芽糖，D-密二糖，D-蔗糖，D-松三糖，D-棉子糖，D-松二糖，甲基-α -D-吡喃葡萄糖苷，D-甘露糖(微弱利用)，D-乳糖(微弱利用)，葡萄糖酸(微弱利用)。該菌株不能利用如下碳源甘油，赤藻糖醇，D-阿拉伯糖，L-木糖，D-側(cè)金盞花醇，甲基-β-D-吡喃木糖苷，L-山梨糖，L-鼠李糖，衛(wèi)茅醇，肌醇，D-甘露醇，D-山梨醇，甲基-β -D-吡喃甘露糖醇，N-乙酰葡糖胺，熊果苷，水楊苷，D-纖維二糖，D-海藻糖，菊粉，糖原，木糖醇，苦杏仁苷，β -龍膽二糖，D-來(lái)蘇糖，D-塔格糖，D-巖藻糖，L-巖藻糖，D-阿拉伯糖醇，L-阿拉伯糖醇，5-酮基葡萄糖酸鉀和2-酮基葡萄糖酸鉀。1. 4、16S rRNA 測(cè)序?qū)?. 1中獲得的菌株進(jìn)行16S rRNA測(cè)序，將其序列與相關(guān)種屬的16SrRNA進(jìn)行比對(duì)，采用鄰位相連法(neighbor-joining)繪制進(jìn)化樹(shù)，結(jié)果如圖2所示。其中，本發(fā)明的菌株與其他乳酸菌的16S rRNA的同源性分別為L(zhǎng). senioris JCM 17472(96. 5%
L. diolivorans JCM 12183(96. 5 % ), L. parafarraginis JCM 14109(96. 4 % )、 L. hilgardii ATCC 8290(96. 3% ) ,L. rapi DSM 19907(96. 3% ) 因此，本發(fā)明獲得的菌株與其他乳酸菌有很高的親緣性，但與已知乳酸菌都不相同。1. 5、產(chǎn)物鑒定以葡萄糖為底物，使用D-/L-乳酸測(cè)定試劑盒(R-BiopharmAG，德國(guó))測(cè)定1. 1中獲得的菌株的降解產(chǎn)物，具體操作方法按照使用說(shuō)明書。結(jié)果顯示，其產(chǎn)物中包含D型和L 型乳酸。
綜上所述，可鑒定本發(fā)明獲得的菌株為一株新的乳酸菌，將其命名為 Lactobacillus radiumii S1L19，保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為CCTCC NO =M 2011381。實(shí)施例2、食源性乳酸菌的生物活性2. 1、發(fā)酵挑取食源性乳酸菌Lactobacillus radiumii CCTCC NO :M 2011381 單菌落，接種至3ml de Man-Rogosa-Sharpe (MRS)培養(yǎng)基，在30°C，200rpm的條件下，搖床培養(yǎng)22小時(shí)。將發(fā)酵液于4°C，12000rpm離心10分鐘，取上清液，用無(wú)菌0. 22 μ m濾器過(guò)濾除菌，放置于-20°C冰箱中待用。2. 2、生物活性測(cè)定本發(fā)明的食源性乳酸菌Lactobacillusradiumii CCTCC NO :M 2011381 的生物活性測(cè)定采用雙層瓊脂擴(kuò)散法，具體測(cè)定方法如下取甘油管保藏的指示菌金黃色葡萄球菌(革蘭氏陽(yáng)性菌)和埃希氏大腸桿菌(革蘭氏陰性菌)各50 μ 1，接種至:3ml Luria-Bertani (LB)培養(yǎng)基，在37°C，200rpm的條件下， 搖床培養(yǎng)16小時(shí)。將無(wú)菌藍(lán)色槍頭倒置，然后均勻地放置在凝固的1.5%的瓊脂上。取 20ml融化并冷卻至約55°C的LB培養(yǎng)基，加入50 μ 1過(guò)夜培養(yǎng)的金黃色葡萄球菌或埃希氏大腸桿菌的菌液，混勻后加到放置有槍頭的1. 5%的瓊脂上，待其冷卻，拔出槍頭。在每個(gè)孔中加入200μ1 3. 1 中獲得的食源性乳酸菌Lactobacillus radiumii CCTCC NO :M 2011381 發(fā)酵液，于37°C培養(yǎng)10小時(shí)后觀察結(jié)果。結(jié)果顯示，本發(fā)明的食源性乳酸菌Lactobacillusradiumii CCTCC NO :M2011381 的發(fā)酵液能夠抑制金黃色葡萄球菌和埃希氏大腸桿菌的生長(zhǎng)，對(duì)兩種指示菌都能產(chǎn)生 2.0 2. 5厘米的抑菌圈。本發(fā)明的食源性乳酸菌Lactobacillusradiumii CCTCC NO :M 2011381 對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌都有良好的抑菌效果，而且該乳酸菌分離自食品，因此可添加到食品中用作食品防腐劑，這對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的。
權(quán)利要求
1.一種食源性乳酸菌，其特征在于，所述乳酸菌的16S rRNA序列如SEQ N0:1所示。
2.如權(quán)利要求1所述的乳酸菌，其特征在于，所述乳酸菌的保藏號(hào)為CCTCCNO =M 2011381。
3.如權(quán)利要求1或2所述的乳酸菌的應(yīng)用，其特征在于，用于食品防腐。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種新的食源性乳酸菌菌株Lactobacillus radiumii CCTCC NOM2011381，該乳酸菌對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌都有良好的抑菌作用，可添加到食品中用作食品防腐劑。
文檔編號(hào)C12R1/225GK102559561SQ201210044449
公開(kāi)日2012年7月11日 申請(qǐng)日期2012年2月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月24日
發(fā)明者孫貴朋, 謝靜莉, 雷曉, 魏東芝 申請(qǐng)人:華東理工大學(xué)