一種利用酒精工業(yè)黃水生產(chǎn)乳酸菌的方法
【專利摘要】一種利用酒精工業(yè)黃水生產(chǎn)乳酸菌的方法，包括酒精工業(yè)黃水的收集處理、乳酸菌在酒精工業(yè)黃水中的培養(yǎng)以及乳酸菌的收取和制備。本發(fā)明所提供的利用酒精工業(yè)黃水生產(chǎn)乳酸菌的方法，既能充分利用酒精工業(yè)黃水，降低黃水的處理成本，優(yōu)化黃水的綜合利用，改善生態(tài)環(huán)境，又能擴(kuò)大現(xiàn)有乳酸菌生產(chǎn)中營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)的來源，降低生產(chǎn)成本，擴(kuò)大乳酸菌的應(yīng)用范圍。
【專利說明】一種利用酒精工業(yè)黃水生產(chǎn)乳酸菌的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及酒精工業(yè)黃水的綜合利用領(lǐng)域以及微生物培養(yǎng)領(lǐng)域，尤其是利用酒精工業(yè)中的黃水進(jìn)行微生物培養(yǎng)。
【背景技術(shù)】
[0002]酒精工業(yè)是我國一項(xiàng)重要的能源產(chǎn)業(yè)，但在酒精生產(chǎn)過程中會(huì)產(chǎn)生巨大的副產(chǎn)物，其中酒糟等固體成分和部分黃水一起可繼續(xù)生產(chǎn)DDGS等飼料原料而被再次利用，而絕大部分的黃水卻沒有 得到很好的利用。黃水是在生產(chǎn)酒精過程中排出的富含多種營(yíng)養(yǎng)成分的液體物質(zhì)，黃水中含豐富的有機(jī)酸(尤其是乳酸、丁酸、己酸、乙酸等羧酸含量最多)、醇、醛、酯等呈香味物質(zhì)，同時(shí)還含有氨基酸、糖類、酒精、腐殖質(zhì)、酵母菌體自溶物、微生物菌體以及活細(xì)胞等，由于其營(yíng)養(yǎng)豐富，直接排入環(huán)境中往往會(huì)造成嚴(yán)重的水體富營(yíng)養(yǎng)化的污染，為此，國家規(guī)定酒精企業(yè)排放的廢水必須經(jīng)過前期處理，并達(dá)到4級(jí)水標(biāo)準(zhǔn)后方可排放，這樣一來，除了黃水中的營(yíng)養(yǎng)成分被浪費(fèi)外，酒精企業(yè)往往增加較多的費(fèi)用用于黃水的處理，而且，目前我國大部分酒廠對(duì)黃水的處理都是將其用于拌糟回窖發(fā)酵或養(yǎng)窖、培養(yǎng)人工窖泥等方面，不僅不能有效利用資源，而且無法從根本上解決發(fā)酵黃水的最終去路問題。因此如何綜合利用黃水資源，如何能夠變廢為寶，徹底解決黃水的去路問題顯得尤為重要，如若能將黃水變廢為寶，充分利用起來，將降低企業(yè)的成本投入，同時(shí)也符合生態(tài)環(huán)境建設(shè)的需要。
[0003]乳酸菌是一類能夠在培養(yǎng)條件下產(chǎn)生乳酸，并同時(shí)產(chǎn)生一系列酶類的有益菌的總稱，目前乳酸菌已形成工業(yè)生產(chǎn)，其成品已在醫(yī)藥保健、食品、飼料等行業(yè)中得到廣泛應(yīng)用。然而，現(xiàn)行乳酸菌生產(chǎn)方法多采用人為加入大量?jī)?yōu)質(zhì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)作為原料進(jìn)行生產(chǎn)，其生產(chǎn)成本較高，進(jìn)而影響乳酸菌的應(yīng)用，以及增加以乳酸菌為原料的相關(guān)產(chǎn)品的成本。
[0004]酒精工業(yè)黃水中富含多種可溶態(tài)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，因此，如果能夠利用酒精工業(yè)黃水進(jìn)行乳酸菌的生產(chǎn)，既能解決酒精工業(yè)黃水的綜合利用問題，變廢為寶，又能降低目前乳酸菌生產(chǎn)成本，進(jìn)一步擴(kuò)大乳酸菌的應(yīng)用范圍。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種利用酒精工業(yè)黃水進(jìn)行乳酸菌培養(yǎng)的技術(shù)方法，一方面減少酒精工業(yè)中黃水處理的環(huán)節(jié)和費(fèi)用，提高酒精工業(yè)黃水的綜合利用率，另一方面降低乳酸菌工業(yè)生產(chǎn)的成本。
[0006]本發(fā)明解決上述技術(shù)問題采用的技術(shù)方案是:一種利用酒精工業(yè)黃水生產(chǎn)乳酸菌的方法，具體步驟如下:
(1)將收集到的酒精工業(yè)黃水用一般的藥用紗布(雙層)進(jìn)行過濾，收集濾液作為乳酸菌培養(yǎng)基質(zhì)，備用；
(2)對(duì)步驟(1)所得的酒精工業(yè)黃水濾液進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定，并根據(jù)測(cè)定結(jié)果以及乳酸菌生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)需要進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充，備用，具體營(yíng)養(yǎng)成分補(bǔ)充種類和數(shù)量為:每升上述的酒精工業(yè)黃水濾液中添加尿素2.5g、葡萄糖10g、吐溫80 0.5mL ；
(3)對(duì)步驟(2)中經(jīng)營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充后的酒精工業(yè)黃水濾液進(jìn)行滅菌，并將滅菌后的酒精工業(yè)黃水濾液的PH調(diào)節(jié)至6.3飛.5，備用，其中，具體的滅菌方法優(yōu)選為:將補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)后的酒精工業(yè)黃水的pH調(diào)節(jié)至3.2^3.5，并向盛裝酒精工業(yè)黃水的容器內(nèi)注入二氧化碳?xì)怏w，密封并室溫放置24h ；
(4)將乳酸菌菌種接種于MRS液體培養(yǎng)基上，并培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中后期，檢測(cè)活菌數(shù)不低于1X108 cfu/mL時(shí)作為種子菌液備用，其中MRS液體培養(yǎng)基的制作方法是:取牛肉蛋白粉10g、牛肉浸膏10g、酵母浸膏5g、葡萄糖20g、醋酸鈉5g、檸檬酸二銨2g、吐溫80 0.lmL、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.28g、蒸溜水1000mL混合，用高壓滅菌鍋在121°C滅菌20min-30min，調(diào)節(jié) ρΗ6.3~6.5 ；
(5)按照5%(v/v)的比例將步驟(4)所得的的種子菌液接種于步驟(3)所得的酒精工業(yè)黃水濾液中，并于37~37.5°C的條件下培養(yǎng)24~30h ；
(6)按照重量體積比向步驟(5)中經(jīng)培養(yǎng)的乳酸菌中添加2%的熟米粉，并于室溫下靜置5min-10min,然后采用大容量離心機(jī),于3000r/min離心,獲得乳酸菌固體混合物,備用；
(7)取步驟(6)所得的乳酸菌固體混合物，采用真空冷凍干燥法進(jìn)行干燥，其具體干燥方法為:將混合均勻的乳酸菌固體混合物攤成0.3^0.5cm的厚度，置于真空冷凍干燥機(jī)內(nèi)，溫度_45°C '50°C，真空度l(T20Pa，干燥時(shí)間22~24h，干燥完成后，用復(fù)合薄膜進(jìn)行真空包裝，真空度為0.085~0.095Mpa,即可得到乳酸菌成品。
[0007]進(jìn)一步的，在步驟(7)進(jìn)行之前，按照重量比，向步驟(6)所得到的乳酸菌固體混合物中加入2.5%~3%海藻酸 鈉、4.5%~5%的脫脂奶粉、5%甘油和8%~10%的β -環(huán)狀糊精作為保護(hù)劑，并混合均勻。
[0008]本發(fā)明中所用的乳酸菌購自上海北諾生物科技有限公司，保藏于美國標(biāo)準(zhǔn)生物品收藏中心，其保藏編號(hào)為ATCC 11007，購買日期為2013年10月25日。
[0009]本發(fā)明具有以下有益效果:
第一，與目前乳酸菌生產(chǎn)的原料和營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)相比，本發(fā)明采用酒精工業(yè)黃水作為培養(yǎng)原料和基質(zhì)，充分利用了酒精工業(yè)廢水，提高了酒精工業(yè)黃水的綜合利用價(jià)值，改善了生態(tài)環(huán)境，擴(kuò)大了乳酸菌生產(chǎn)所需營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)的來源，降低了乳酸菌的生產(chǎn)成本；
第二，經(jīng)乳酸菌的培養(yǎng)，酒精工業(yè)黃水中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被乳酸菌充分利用，其含量有效降低，基本達(dá)到酒精廢水的排放標(biāo)準(zhǔn)，并且省去了企業(yè)處理酒精工業(yè)黃水的環(huán)節(jié)以及相關(guān)投入，降低了相關(guān)企業(yè)的生產(chǎn)成本；
第三，本發(fā)明是從板框壓濾機(jī)的板框直接采集酒精工業(yè)黃水的，這是因?yàn)榫凭I(yè)黃水的收集點(diǎn)較為重要，從板框壓濾機(jī)的板框直接收集的黃水營(yíng)養(yǎng)成分較排水口收集的黃水營(yíng)養(yǎng)成分豐富，更加適合作為培養(yǎng)基質(zhì)；
第四，本發(fā)明在測(cè)定酒精工業(yè)黃水營(yíng)養(yǎng)含量的前提下，根據(jù)測(cè)定結(jié)果有針對(duì)性的對(duì)黃水進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充，以更加適合乳酸菌的生長(zhǎng)和繁殖，進(jìn)一步提高了乳酸菌在酒精工業(yè)黃水中的產(chǎn)量；
第五，針對(duì)酒精工業(yè)黃水的特有的化學(xué)組成，進(jìn)行適當(dāng)?shù)那疤幚砗筒糠只瘜W(xué)性質(zhì)的改變，使其更適合乳酸菌的生長(zhǎng)和繁殖，提高乳酸菌的產(chǎn)量；
第六，針對(duì)酒精工業(yè)黃水的特有的化學(xué)性質(zhì)，采用PH調(diào)節(jié)以及二氧化碳密封的方法進(jìn)行滅菌，操作簡(jiǎn)單，滅菌效果較好，適宜工廠化生產(chǎn)的進(jìn)行；
第七，在乳酸菌固體混合物冷凍干燥過程中加入相應(yīng)的保護(hù)劑，可有效保存乳酸菌，使其存活率達(dá)85.3%。
[0010]因此，本發(fā)明所提供的利用酒精工業(yè)黃水生產(chǎn)乳酸菌的方法，既能充分利用酒精工業(yè)黃水，降低黃水的處理成本，優(yōu)化黃水的綜合利用，改善生態(tài)環(huán)境，又能擴(kuò)大現(xiàn)有乳酸菌生產(chǎn)中營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)的來源，降低生產(chǎn)成本，擴(kuò)大乳酸菌的應(yīng)用范圍。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0011]圖1是酒精工業(yè)黃水中各種營(yíng)養(yǎng)成分的含量。
[0012]圖2是不同培養(yǎng)溫度對(duì)乳酸菌成品中活菌數(shù)的影響。
[0013]圖3是不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)乳酸菌成品中活菌數(shù)的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0014]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
[0015]實(shí)施例1:一種利用酒精工業(yè)黃水生產(chǎn)乳酸菌的方法，本方法采用的是玉米為原料生產(chǎn)酒精的黃水，具體步驟如下:
(1)將收集到的酒精工業(yè)黃水用一般的藥用紗布(雙層)進(jìn)行過濾，收集濾液作為乳酸菌培養(yǎng)基質(zhì)，備用；
(2)對(duì)步驟(1)所得的濾液進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定，其測(cè)定結(jié)果見附圖1，并根據(jù)測(cè)定結(jié)果以及乳酸菌生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)需要進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充，具體營(yíng)養(yǎng)成分補(bǔ)充種類和數(shù)量為:每升上述的酒精工業(yè)黃水中添加尿素2.5g、葡萄糖10g、吐溫80 0.5mL ；
(3)對(duì)步驟(2)中經(jīng)營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充后的酒精工業(yè)黃水濾液進(jìn)行滅菌，并將滅菌后的酒精工業(yè)黃水濾液的PH調(diào)節(jié)至6.3飛.5，備用，其中，具體的滅菌方法為:將補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)后的酒精工業(yè)黃水濾液的PH調(diào)節(jié)至3.2^3.5，并向盛裝酒精工業(yè)黃水濾液的容器內(nèi)注入二氧化碳?xì)怏w，密封并室溫放置24h ；
(4)將乳酸菌菌種接種于MRS液體培養(yǎng)基上，并培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中后期,檢測(cè)活菌數(shù)不低于IX 108 cfu/mL時(shí)作為種子菌液備用，其中MRS液體培養(yǎng)基的制作方法是:取牛肉蛋白粉10g、牛肉浸膏10g、酵母浸膏5g、葡萄糖20g、醋酸鈉5g、檸檬酸二銨2g、吐溫80 0.lmL、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.28g、蒸溜水1000mL混合，用高壓滅菌鍋在121°C滅菌20min-30min，調(diào)節(jié) ρΗ6.3~6.5 ；
(5)按照5%(v/v)的比例將步驟(4)所得的的種子菌液接種于步驟(3)所得的酒精工業(yè)黃水濾液中，并于37°C的條件下培養(yǎng)24h ；
(6)按照重量體積比向步驟(5)中經(jīng)培養(yǎng)的乳酸菌中添加2%的熟米粉，并于室溫下靜置5min，然后采用大容量離心機(jī)，于3000r/min離心，獲得乳酸菌固體混合物，備用；
(7)根據(jù)步驟(6)所得的乳酸菌固體混合物的重量，按照重量比向乳酸菌固體混合物中加入2.5%~3%海藻 酸鈉、4.5%~5%的脫脂奶粉、5%甘油和8%~10%的β-環(huán)狀糊精作為保護(hù)劑，并混合均勻，然后攤成0.3^0.5cm的厚度，置于真空冷凍干燥機(jī)內(nèi)，在溫度-45°C ^-50°C，真空度l(T20Pa的條件下進(jìn)行冷凍干燥，干燥時(shí)間22~24h，干燥完成后，用復(fù)合薄膜進(jìn)行真空包裝，真空度為0.085、.095Mpa,即可得到乳酸菌成品。[0016]經(jīng)測(cè)定，采用本實(shí)施例中的方法所得乳酸菌成品中活菌數(shù)量為(95.7±6) XlO70
[0017]實(shí)施例2:—種利用酒精工業(yè)黃水生產(chǎn)乳酸菌的方法，本方法采用的是玉米為原料生產(chǎn)酒精的黃水，具體步驟如下:
(1)將收集到的酒精工業(yè)黃水用一般的藥用紗布(雙層)進(jìn)行過濾，收集濾液作為乳酸菌培養(yǎng)基質(zhì)，備用；
(2)對(duì)步驟(1)所得的濾液進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定，其測(cè)定結(jié)果見附圖1，并根據(jù)測(cè)定結(jié)果以及乳酸菌生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)需要進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充，具體營(yíng)養(yǎng)成分補(bǔ)充種類和數(shù)量為:每升上述的酒精工業(yè)黃水濾液中添加尿素2.5g、葡萄糖10g、吐溫80 0.5mL ；
(3)對(duì)步驟(2)中經(jīng)營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充后的酒精工業(yè)黃水濾液進(jìn)行滅菌，并將滅菌后的酒精工業(yè)黃水濾液的PH調(diào)節(jié)至6.3飛.5，備用，其中，具體的滅菌方法為:將補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)后的酒精工業(yè)黃水濾液的PH調(diào)節(jié)至3.2^3.5，并向盛裝酒精工業(yè)黃水濾液的容器內(nèi)注入二氧化碳?xì)怏w，密封并室溫放置24h ；
(4)將乳酸菌菌種接種于MRS液體培養(yǎng)基上，并培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中后期,檢測(cè)活菌數(shù)不低于1X108 cfu/mL時(shí)作為種子菌液備用，其中MRS液體培養(yǎng)基的制作方法是:取牛肉蛋白粉10g、牛肉浸膏10g、酵母浸膏5g、葡萄糖20g、醋酸鈉5g、檸檬酸二銨2g、吐溫80 0.lmL、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.28g、蒸溜水1000mL混合，用高壓滅菌鍋在121°C滅菌20min-30min，調(diào)節(jié) ρΗ6.3~6.5 ；
(5)按照5%(v/v)的比例將步驟(4)所得的的種子菌液接種于步驟(3)所得的酒精工業(yè)黃水濾液中，并于37.5°C的條件下培養(yǎng)30h ；
(6)按照重量體積比向步驟(5)中經(jīng)培養(yǎng)的乳酸菌中添加2%的熟米粉，并于室溫下靜置lOmin，然后采用大容量離心機(jī)，于3000r/min離心，獲得乳酸菌固體混合物，備用；
(7)根據(jù)步驟(6)所得的乳酸菌固體混合物的重量，按照重量比向乳酸菌固體混合物中加入2.5%~3%海藻酸鈉、4.5%~5%的脫脂奶粉、5%甘油和8%~10%的β -環(huán)狀糊精作為保護(hù)劑，并混合均勻，然后攤成0.3^0.5cm的厚度，置于真空冷凍干燥機(jī)內(nèi)，在溫度-45°C ^-50°C，真空度l(T20Pa的條件下進(jìn)行冷凍干燥，干燥時(shí)間22~24h，干燥完成后，用復(fù)合薄膜進(jìn)行真空包裝，真空度為0.085、.095Mpa,即可得到乳酸菌成品。
[0018]經(jīng)測(cè)定，采用本實(shí)施例中的方法所得乳酸菌成品中活菌數(shù)量為(98.5±9) XlO70
[0019]實(shí)施例3:—種利用酒精工業(yè)黃水生產(chǎn)乳酸菌的方法，本方法采用的是玉米為原料生產(chǎn)酒精的黃水，具體步驟如下:
(1)將收集到的酒精工業(yè)黃水用一般的藥用紗布(雙層)進(jìn)行過濾，收集濾液作為乳酸菌培養(yǎng)基質(zhì)，備用；
(2)對(duì)步驟(1)所得的濾液進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定，其測(cè)定結(jié)果見附圖1，并根據(jù)測(cè)定結(jié)果以及乳酸菌生長(zhǎng)繁殖的營(yíng)養(yǎng)需要進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充，具體營(yíng)養(yǎng)成分補(bǔ)充種類和數(shù)量為:每升上述的酒精工業(yè)黃水濾液中添加尿素2.5g、葡萄糖10g、吐溫80 0.5mL ；
(3)對(duì)步驟(2)中經(jīng)營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充后的酒精工業(yè)黃水濾液進(jìn)行滅菌，并將滅菌后的酒精工業(yè)黃水濾液的PH調(diào)節(jié)至6.3飛.5，備用，其中，具體的滅菌方法為:將補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)后的酒精工業(yè)黃水濾液的PH調(diào)節(jié)至3.2^3.5，并向盛裝酒精工業(yè)黃水濾液的容器內(nèi)注入二氧化碳?xì)怏w，密封并室溫放置24h ；
(4)將乳酸菌菌種接種于MRS液體培養(yǎng)基上，并培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中后期，檢測(cè)活菌數(shù)不低于IX 108 Cfu/mL時(shí)作為種子菌液備用，其中MRS液體培養(yǎng)基的制作方法是:取牛肉蛋白粉10g、牛肉浸膏10g、酵母浸膏5g、葡萄糖20g、醋酸鈉5g、檸檬酸二銨2g、吐溫80 0.lmL、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.28g、蒸溜水1000mL混合，用高壓滅菌鍋在121°C滅菌20min-30min，調(diào)節(jié) ρΗ6.3~6.5 ；
(5)按照5%(v/v)的比例將步驟(4)所得的的種子菌液接種于步驟(3)所得的酒精工業(yè)黃水濾液中，并于37.2°C的條件下培養(yǎng)27h ；
(6)按照重量體積比向步驟(5)中經(jīng)培養(yǎng)的乳酸菌中添加2%的熟米粉，并于室溫下靜置7min，然后采用大容量離心機(jī)，于3000r/min離心，獲得乳酸菌固體混合物，備用；
(7)根據(jù)步驟(6)所得的乳酸菌固體混合物的重量，按照重量比向乳酸菌固體混合物中加入2.5%~3%海藻酸鈉、4.5%~5%的脫脂奶粉、5%甘油和8%~10%的β -環(huán)狀糊精作為保護(hù)劑，并混合均勻，然后攤成0.3^0.5cm的厚度，置于真空冷凍干燥機(jī)內(nèi)，在溫度-45°C ^-50°C，真空度l(T20Pa的條件下進(jìn)行冷凍干燥，干燥時(shí)間22~24h，干燥完成后，用復(fù)合薄膜進(jìn)行真空包裝，真空度為0.085、.095Mpa,即可得到乳酸菌成品。
[0020]經(jīng)測(cè)定，采用本實(shí)施例中的方法所得乳酸菌成品中活菌數(shù)量為(104.3±7) XlO70
[0021]下面結(jié)合試驗(yàn)例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明。
[0022]試驗(yàn)例1:探討采用本發(fā)明所提供的方法進(jìn)行乳酸菌培養(yǎng)，不同培養(yǎng)溫度對(duì)最終乳酸菌成品中活菌的數(shù)量的 影響，并找出最適宜的培養(yǎng)溫度。
[0023]在微生物的培養(yǎng)中，溫度的影響至關(guān)重要，直接影響到微生物培養(yǎng)的成功與否，以及最終的菌落數(shù)量是否合乎要求。依照本發(fā)明提供的方法，采用單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，將培養(yǎng)溫度分別設(shè)置為 360C >36.50C >36.8。。、37。。、37.2°C >37.5°C、38°C和 40°C 的不同溫度梯度，進(jìn)行乳酸菌的培養(yǎng)，試驗(yàn)結(jié)果見附圖2。
[0024]由附圖2中可以看出，按照本發(fā)明的方法進(jìn)行乳酸菌的培養(yǎng)時(shí)，當(dāng)培養(yǎng)溫度在37°C至37.5 °C時(shí)，乳酸菌中活菌數(shù)較高，尤其是37.2°C時(shí)候，活菌數(shù)最高，因此，37.2°C是采用本發(fā)明的方法培養(yǎng)乳酸菌的最適宜的培養(yǎng)溫度。
[0025]試驗(yàn)例2:探討采用本發(fā)明所提供的方法進(jìn)行乳酸菌培養(yǎng)，不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)最終乳酸菌成品中活菌的數(shù)量的影響，并找出最適宜的培養(yǎng)時(shí)間。
[0026]乳酸菌的培養(yǎng)時(shí)間不宜過長(zhǎng)，因?yàn)闀r(shí)間過長(zhǎng)，乳酸菌會(huì)出現(xiàn)自溶現(xiàn)象，導(dǎo)致細(xì)菌數(shù)量急劇下降，因此，適宜的培養(yǎng)時(shí)間至關(guān)重要。依照本發(fā)明的方法，采用單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，將培養(yǎng)時(shí)間分別設(shè)置為12h、18h、24h、30h、36h和48h，進(jìn)行培養(yǎng)，并測(cè)定不同培養(yǎng)時(shí)間所得乳酸菌中活菌的數(shù)量，其結(jié)果見附圖3。
[0027]從附圖3中可以看出，培養(yǎng)時(shí)間為24tT30h時(shí)，乳酸菌中活菌數(shù)量較多，而且，當(dāng)培養(yǎng)時(shí)間為30h時(shí)，其活菌數(shù)達(dá)到最大，因此依照本發(fā)明的方法，最適宜的培養(yǎng)時(shí)間是30h。
【權(quán)利要求】
1.一種利用酒精工業(yè)黃水生產(chǎn)乳酸菌的方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)將收集到的酒精工業(yè)黃水進(jìn)行過濾，并取其濾液備用； (2)對(duì)步驟(1)所得的酒精工業(yè)黃水濾液進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定，并根據(jù)測(cè)定結(jié)果對(duì)酒精工業(yè)黃水濾液進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充，備用； (3)對(duì)步驟(2)中經(jīng)營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充后的酒精工業(yè)黃水濾液進(jìn)行滅菌，并將滅菌后的酒精工業(yè)黃水濾液的PH調(diào)節(jié)至6.3飛.5，備用； (4)將乳酸菌菌種接種于MRS液體培養(yǎng)基上，并培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中后期,檢測(cè)活菌數(shù)不低于lX108cfu/mL時(shí)作為種子菌液備用； (5)按照5%(v/v)的比例將步驟(4)所得的的種子菌液接種于步驟(3)所得的酒精工業(yè)黃水濾液中，并于37~37.5°C的條件下培養(yǎng)24~30h ； (6)按照重量體積比向步驟(5)中經(jīng)培養(yǎng)的乳酸菌中添加2%的熟米粉，并于室溫下靜置5min-10min,然后通過離心得到乳酸菌固體混合物,備用； (7)將步驟(6)中所得的乳酸菌固體混合物攤成0.3^0.5cm的厚度，置于真空冷凍干燥機(jī)內(nèi)進(jìn)行干燥，干燥完成后進(jìn)行真空包裝，得到乳酸菌成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用酒精工業(yè)黃水生產(chǎn)乳酸菌的方法，其特征在于:步驟(I)中的酒精工業(yè)黃水是從板框壓濾機(jī)的板框中收集得到。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種利用酒精工業(yè)黃水生產(chǎn)乳酸菌的方法，其特征在于:步驟(3)中的滅菌方法是先將補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)后的酒精工業(yè)黃水濾液的pH調(diào)節(jié)至3.2^3.5，然后向盛裝酒精工業(yè)黃水濾液的容器內(nèi)注入二氧化碳?xì)怏w，密封并室溫放置24h。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種利用酒精工業(yè)黃水生產(chǎn)乳酸菌的方法，其特征在于:步驟(4)中的MRS液體培養(yǎng)基的制備方法是:取牛肉蛋白粉10g、牛肉浸膏10g、酵母浸膏5g、葡萄糖20g、醋酸鈉5g、檸檬酸二銨2g、吐溫80 0.lmL、硫酸鎂0.58g、硫酸錳0.28g和蒸溜水1000mL混合,并用高壓滅菌鍋在121°C滅菌20min-30min,然后調(diào)節(jié)pH至6.3~6.5。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種利用酒精工業(yè)黃水生產(chǎn)乳酸菌的方法，其特征在于:在進(jìn)行步驟(7)之前，根據(jù)步驟(6)中所得的乳酸菌固體混合物的重量，按照重量比向乳酸菌固體混合物中加入2.5%~3%海藻酸鈉、4.5%~5%的脫脂奶粉、5%甘油和8%~10%的β -環(huán)狀糊精作為保護(hù)劑，并混合均勻。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種利用酒精工業(yè)黃水生產(chǎn)乳酸菌的方法，其特征在于:步驟(7)中所述的真空冷凍干燥機(jī)的溫度是-45°C~_50°C，真空度l(T20Pa，干燥時(shí)間22~24h。
【文檔編號(hào)】C12N1/20GK104004675SQ201410183608
【公開日】2014年8月27日 申請(qǐng)日期:2014年5月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月4日
【發(fā)明者】何萬領(lǐng), 張廣勤, 李旺, 丁軻, 李元曉, 李曉麗 申請(qǐng)人:河南科技大學(xué)