一種微球免疫分離方法及簡(jiǎn)易裝置制造方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種微球免疫分離方法及簡(jiǎn)易裝置。該方法應(yīng)用球狀聚合材料(一般選用聚苯乙I#材料，直徑約0.5mm)作為載體，將捕獲目標(biāo)病原菌的抗體包被在微球載體上，經(jīng)過(guò)緩沖液洗滌，格包被好抗體的微球放入樣品抽提緩沖液中進(jìn)行_獲反應(yīng)，捕獲反應(yīng)完成后，應(yīng)用篩網(wǎng)裝置洗滌微E求，之后將微球放置于培養(yǎng)基上，根據(jù)待捕獲目標(biāo)病原菌的生長(zhǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)，48小時(shí)后觀察到微E求邊緣有菌落生長(zhǎng)，根據(jù)目標(biāo)病原菌菌落特征進(jìn)廳分離純化。本方法靈敏、高效、操作簡(jiǎn)便、成本較低，在食品樣本、環(huán)境樣本和植物材料中細(xì)菌的分離方面有很大的應(yīng)用空間，該方法作為核心技術(shù)$能夠開(kāi)發(fā)相關(guān)的細(xì)菌分離純化試劑盒，因此具f推廣應(yīng)用價(jià)值。
【專利說(shuō)明】一種微球免疫分離方法及簡(jiǎn)易裝置

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及食品微生物、環(huán)境微生物的分離方法，尤其涉及及植物病原細(xì)菌的分 離純化。

【背景技術(shù)】
[0002] 以目前植物病原細(xì)菌檢疫工作為例。植物病原細(xì)菌的檢疫工作有三個(gè)步驟：1、樣 品的癥狀觀察；2、植物病原細(xì)菌的分離；3、病原菌鑒定。其中，第二個(gè)步驟即病菌的分離是 工作的重點(diǎn)和難點(diǎn)，是植物病原細(xì)菌檢疫工作的關(guān)鍵。只有拿到分離純化的病原菌，才能進(jìn) 行之后的鑒定工作。目前對(duì)植物病原細(xì)菌樣品進(jìn)行初篩通常采取一些分子檢測(cè)方法(如常 規(guī)PCR、熒光PCR、ELISA、基因芯片、液相芯片等)，這些方法只用于樣品的初篩，即初步判定 樣品是否攜帶某些病原細(xì)菌，不能作為結(jié)果判定的最終依據(jù)。所以，分離獲得的目標(biāo)病原菌 是檢驗(yàn)結(jié)果的證據(jù)，也是植物病原細(xì)菌檢疫工作的關(guān)鍵。
[0003] 目前病原菌分離的方法較多，根據(jù)植物檢疫工作需要具有快速、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，若干 不同方法的分離效果對(duì)照見(jiàn)表1。目前來(lái)看，基于免疫吸附技術(shù)的分離方法是植物病原細(xì)菌 檢疫中的最有效手段。免疫磁珠法具有自動(dòng)化程度高，分離效果較好的優(yōu)點(diǎn)，但是方法中采 用的設(shè)備和耗材價(jià)格昂貴。本專利借鑒免疫磁珠分離方法的原理，設(shè)計(jì)了簡(jiǎn)易裝置并結(jié)合 平板分離方法，探尋一種新的細(xì)菌免疫分離方法，以適應(yīng)當(dāng)前植物檢疫工作需要快速、準(zhǔn)確 的要求。
[0004] 表 1

【權(quán)利要求】
1. 一種微球免疫分離方法及簡(jiǎn)易裝置，其特征在于，該方法應(yīng)用球狀聚合材料(一般選 用聚苯乙烯材料，直徑約0. 5mm)作為載體，將捕獲目標(biāo)病原菌的抗體包被在微球上，經(jīng)過(guò)緩 沖液洗滌，將包被好抗體的微球放入樣品抽提緩沖液中進(jìn)行捕獲反應(yīng)；捕獲反應(yīng)完成后，應(yīng) 用本專利設(shè)計(jì)的簡(jiǎn)易裝置，用洗滌緩沖液或無(wú)菌水洗滌微球，之后用無(wú)菌水將微球懸浮，應(yīng) 用涂平板方法將微球放置于培養(yǎng)基上，根據(jù)待捕獲目標(biāo)病原菌的適宜生長(zhǎng)條件進(jìn)行培養(yǎng)， 48小時(shí)-72小時(shí)后觀察到微球邊緣有菌落生長(zhǎng)，根據(jù)目標(biāo)病原菌菌落特征進(jìn)行分離純化。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種微球免疫分離方法及簡(jiǎn)易裝置，其特征在于，該方法應(yīng) 用微球作為免疫捕獲載體，采用篩網(wǎng)作為洗滌過(guò)濾的主要裝置構(gòu)件，應(yīng)用涂平板培養(yǎng)基分 離方法。
【文檔編號(hào)】C12N1/20GK104212752SQ201410490409
【公開(kāi)日】2014年12月17日 申請(qǐng)日期:2014年9月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月24日
【發(fā)明者】劉鵬, 蔡國(guó)瑞, 張瑩, 胡佳續(xù), 牛春敬, 馮潔 申請(qǐng)人:天津出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物與食品檢測(cè)中心