母豬飼用微生態(tài)發(fā)酵劑及其制備方法和活性固態(tài)發(fā)酵飼料的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種母豬飼用微生態(tài)發(fā)酵劑及其制備方法和活性固態(tài)發(fā)酵飼料，屬于 飼料微生物技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著畜牧養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，人畜共糧的矛盾日趨突出，研究與開(kāi)發(fā)利用飼料資 源的新途徑已成為發(fā)展畜牧業(yè)的重大課題，其中微生物發(fā)酵飼料日益受到重視。微生物發(fā) 酵飼料是指在人為可控制的條件下，以植物性農(nóng)副產(chǎn)品為主要原料，通過(guò)微生物的代謝作 用，將植物性、動(dòng)物性和礦物性物質(zhì)中的抗?fàn)I養(yǎng)因子分解、合成，產(chǎn)生更能被畜、禽采食、消 化、吸收養(yǎng)分和無(wú)毒害作用的生物飼料或飼料原料。微生態(tài)飼料添加劑又稱微生態(tài)制劑、益 生素、活菌制劑等，添加到飼料中進(jìn)行適當(dāng)?shù)陌l(fā)酵即為微生態(tài)發(fā)酵飼料。它是由許多有益微 生物及其代謝物構(gòu)成，可與相關(guān)動(dòng)物體內(nèi)的自然微生態(tài)體系相吻合和營(yíng)養(yǎng)互補(bǔ)；可直接飼 喂動(dòng)物，并能有效促進(jìn)動(dòng)物體調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)平衡的一類添加劑。
[0003] 微生態(tài)制劑安全、有效、不污染環(huán)境、無(wú)耐藥性，作為抗生素的替代品將在飼料工 業(yè)中發(fā)揮重要作用。隨著社會(huì)的發(fā)展，人們對(duì)食品安全越來(lái)越重視，抗生素飼料添加劑的廣 泛應(yīng)用所引起的臨床畜禽耐藥問(wèn)題越來(lái)越嚴(yán)重，造成的藥物殘留問(wèn)題不但影響了動(dòng)物產(chǎn)品 質(zhì)量，也危害人們的身體健康，其他如導(dǎo)致動(dòng)物體內(nèi)菌群失調(diào)、產(chǎn)生抗藥性、畜產(chǎn)品適口性 差等問(wèn)題，尤其是食物鏈的藥物殘留也引起普遍關(guān)注。因此，開(kāi)發(fā)和研制新型無(wú)污染、無(wú)殘 留綠色微生態(tài)飼料添加劑，是生產(chǎn)綠色畜禽產(chǎn)品的需要，已受到人們的重視和認(rèn)可。
[0004] 目前，微生態(tài)飼料分為發(fā)酵型和非發(fā)酵型；發(fā)酵型微生態(tài)飼料在發(fā)酵類別上歸屬 于強(qiáng)化微生物混合固態(tài)發(fā)酵(發(fā)酵基質(zhì)含水量在12 %~80 %之間）。發(fā)酵型又可細(xì)化為普通 型和活性型。普通型采用"接種-發(fā)酵(好氧、厭氧)_干燥-包裝-產(chǎn)品"工藝路線;我國(guó)早期大 多采用這種工藝方式，影響最大的是CN1024468C中公開(kāi)的"粗淀粉料混菌固體發(fā)酵菌體蛋 白飼料的方法"，率先在生料發(fā)酵飼料方面取得突破，在國(guó)內(nèi)外產(chǎn)生較大影響，因工藝復(fù)雜 (需干燥環(huán)節(jié)）、無(wú)活性微生物及熱敏性活性成分已逐漸被淘汰。活性型則采用"接種-包裝-發(fā)酵(厭氧)_產(chǎn)品"的技術(shù)路線，由于工藝簡(jiǎn)單并含有活性微生物及其活性成分而具有獨(dú)特 優(yōu)勢(shì)，自本世紀(jì)初以來(lái)，已成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)領(lǐng)域。
[0005] 活性發(fā)酵型微生態(tài)飼料因具有改善飼料適口性、提高飼料營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、生產(chǎn)成本較 低和充分利用多種飼料資源等顯著特點(diǎn)，研究開(kāi)發(fā)潛力極大，是現(xiàn)在和未來(lái)安全飼料發(fā)展 的重要方向。微生態(tài)飼料在發(fā)酵菌種上主要表現(xiàn)在由傳統(tǒng)的單一菌種(株）向具有一定功能 組合效應(yīng)的多菌種(株)發(fā)展。目前我國(guó)用于飼料強(qiáng)化混合發(fā)酵的微生物菌種(菌劑)主要是 與具體的發(fā)酵工藝相配套使用的微生物菌種，如CN1024468C使用由黑曲霉和白地霉兩種 (株)微生物組成的發(fā)酵菌種，CN1857099A中公開(kāi)的"動(dòng)物發(fā)酵濃縮飼料和配合飼料及其制 作方法和設(shè)備"使用的主要由乳酸菌和酵母菌組成的發(fā)酵菌種。兩種菌株進(jìn)行混合發(fā)酵，提 高了飼料的發(fā)酵效果和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，但所產(chǎn)生的酶系仍不夠全面，具有一定的局限性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種母豬飼用微生態(tài)發(fā)酵劑及其制作方法和活性固態(tài)發(fā)酵 飼料，通過(guò)對(duì)具有顯著協(xié)同作用的多個(gè)菌株的篩選和組合，解決現(xiàn)有的微生物發(fā)酵制劑存 在的單一性、發(fā)酵不全面和發(fā)酵效果差的問(wèn)題，以達(dá)到提高產(chǎn)品質(zhì)量和降低生產(chǎn)成本的目 的。應(yīng)用本發(fā)明生產(chǎn)的飼料飼養(yǎng)畜禽，具有促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)和增強(qiáng)抗病能力效果顯著、飼料利 用效率高以及減輕養(yǎng)殖環(huán)境污染等特點(diǎn)；飼養(yǎng)而得的畜禽產(chǎn)品，無(wú)抗生素、激素等藥物殘 留，營(yíng)養(yǎng)豐富且口味純正天然。
[0007] 本發(fā)明的技術(shù)方案：
[0008] 本發(fā)明提供了一種母豬飼用微生態(tài)發(fā)酵劑，其特征在于，按照重量份數(shù)計(jì)如以下 原料配制而成： 米曲霉（As/>ergi//i?〇7z<3e) 2份~4份； 小被抱霉而2份-4份； 釀酒酵母（<Sbcc/?orow_yce? cerevisii/e) 1 份~2份；
[0009] Π 地符1份~2份:. 啊舒多囊霉通1份~2份； 異常威克漢遜酵母(附c/tez如服朋_yces 1份~2份； 泡盛曲霉 61ψβ/;^ι7/??〇Μ·'α??〇Γζ'） 1 份~2份。
[0010] 上述母豬飼用微生態(tài)發(fā)酵劑的制備方法，其步驟如下：
[0011] 1、一級(jí)培養(yǎng)
[0012] (1)配制PDA固體培養(yǎng)基
[0013] A1、取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000ml;80°C浸泡lh，用紗布過(guò)濾，然后補(bǔ) 足失水至1000ml; IOOPa滅菌20min，即得20%馬鈴薯浸汁，貯存?zhèn)溆茫?br>[0014] A2、按每100mL馬鈴薯浸汁加入2g葡萄糖，加熱煮沸后按每100mL馬鈴薯浸汁加入 2g瓊脂，繼續(xù)加熱融化并補(bǔ)足失水；
[0015] A3、分裝、加塞、包扎；
[0016] A4、高壓蒸汽滅菌，IOOPa滅菌20min;
[0017] A5、臥斜，待冷卻后30°C恒溫培養(yǎng)24h，排除冷凝水，觀察試管培養(yǎng)基表面光滑無(wú)菌 則可以進(jìn)行接菌；
[0018] (2)斜面接種
[0019] 將各菌種分別斜面接種，30°C恒溫培養(yǎng)24~72h;
[0020] 2、二級(jí)培養(yǎng)
[00211 (1)三角瓶的制作工藝
[0022] B1、裝料:按照重量比，麩皮:水=1:1的比例將兩者進(jìn)行拌料，每千克混合料加入 2ml濃硫酸；
[0023] B2、裝入三角瓶?jī)?nèi)高度為20~25cm，裝料為50g/瓶；
[0024] B3、棉塞堵塞封口，再用16層無(wú)菌紗布封口；
[0025] Ek、高壓蒸汽滅菌，IOOPa滅菌20min。自然冷卻；
[0026] B5、接菌:接菌量每Ig斜面接種25g物料；
[0027] B6、28~32°C恒溫培養(yǎng)，培養(yǎng)過(guò)程中每?jī)蓚€(gè)小時(shí)搖三角瓶一次，攤平；至24小時(shí)后 扣瓶，培養(yǎng)6小時(shí)后扣瓶，全程36小時(shí)，得到種曲，粉碎后過(guò)60目篩，并測(cè)定樣品酶活力； [0028]其中，酶活力定義如下：
[0029]木聚糖酶活力:在37°C和pH5.5條件下，每分鐘從濃度為5mg/ml的木聚糖溶液中降 解釋放Imio 1還原糖所需要的酶量為1個(gè)酶活單位u;
[0030]果膠酶活力:在37°C和PH5.5條件下，每分鐘從濃度為4mg/ml的聚半乳糖醛酸溶液 中降解釋放Iymol還原糖所需要的酶量為1個(gè)酶活單位u;
[0031 ]纖維素酶活力:在37°C和PH5.5條件下，每分鐘從濃度為4mg/ml的羧甲基纖維素鈉 溶液中降解釋放Iymol還原糖所需要的酶量為1個(gè)酶活單位u;
[0032]淀粉酶活力：在37°C、pH6.8的條件下，每分鐘水解淀粉生成Img還原糖所需的酶 量；
[0033]所得二級(jí)發(fā)酵產(chǎn)物要求細(xì)菌總數(shù)2 108cfu/g，總酶活2 500u/g，低于此標(biāo)準(zhǔn)不在 用于進(jìn)行三級(jí)接種培養(yǎng)；
[0034] 3、三級(jí)培養(yǎng)
[0035] (1)筐式培養(yǎng)基的制作
[0036] B1、裝料：按照重量比將麩皮：水=5 : 3的比例進(jìn)行拌料，每公斤混合料加入2ml濃 硫酸和硫酸銨IOg;
[0037] 132、高壓滅菌100?&，2〇111；[11。自然冷卻；
[0038] B3、裝入筐中高度2~3cm的培養(yǎng)基；
[0039 ] B5、按筐式培養(yǎng)基物料重量的10 %進(jìn)行接菌；
[0040] (2)培養(yǎng)
[00411 B1、室溫培養(yǎng)，控制室內(nèi)相對(duì)濕度50~85%，培養(yǎng)過(guò)程中，堆積培養(yǎng)，每6小時(shí)翻拌 一次，至18小時(shí)，待其連餅后將其劃碎，36小時(shí)候扣筐繼續(xù)培養(yǎng)至72小時(shí)，得固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)物， 將其粉碎后過(guò)60目篩，并測(cè)定樣品酶活力;所得三級(jí)發(fā)酵產(chǎn)物要求細(xì)菌總數(shù)2 108cfu/g，總 酶活2 500u/g，低于此標(biāo)準(zhǔn)不再用于進(jìn)行四級(jí)接種培養(yǎng)；
[0042] 4、四級(jí)培養(yǎng)
[0043]將三級(jí)培養(yǎng)的各菌株用石膏粉作為載體按照重量比，三級(jí)培養(yǎng)產(chǎn)物:石膏粉=1: 10進(jìn)行混合，進(jìn)行四級(jí)培養(yǎng)，四級(jí)培養(yǎng)培養(yǎng)基按重量組成為麩皮:玉米面=1:1，加入水和濃 硫酸，水占麩皮玉米面混合物料總重量的50 %~70 %，硫酸占麩皮玉米面混合物料總重量 的1%。
[0044]利用上述母豬飼用微生態(tài)發(fā)酵劑制得的活性固態(tài)發(fā)酵飼料，按照重量百分比由如 下原料制備而成： 玉米 60~70% 麥款 5~.15 % 稻米糠 5； - 10% 豆粕 5-~15%
[0045] 磷酸氫鈣 ?