高活性奶牛發(fā)酵精飼料的制備方法及其專用復(fù)合菌劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物飼料技術(shù)領(lǐng)域中一種高活性奶牛發(fā)酵精飼料的制備方法及其專 用復(fù)合菌劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 奶牛常用的飼料可以分為粗飼料和精飼料(也稱精料補充料)兩部分。奶牛粗飼料 品種有各類青草、干草、玉米秸桿、玉米秸青貯、東北羊草、優(yōu)質(zhì)苜蓿等。奶牛精飼料的原料 主要有能量伺料、蛋白質(zhì)伺料、礦物質(zhì)伺料、維生素及伺料添加劑等【尚占琪.牛羊精料補充 料生產(chǎn)與飼喂技術(shù)[J].甘肅畜牧獸醫(yī)，2015,45(4): 16.】。奶牛精飼料品質(zhì)優(yōu)劣直接關(guān)系到 日糧的營養(yǎng)水平，而奶牛日糧營養(yǎng)品質(zhì)對奶牛的生產(chǎn)性能、繁殖性能和鮮乳品質(zhì)等具有重 要影響[高民，王麗芳，盧德勛，胡紅蓮.奶牛精飼料和日糧營養(yǎng)品質(zhì)的整體評價技術(shù)及其應(yīng) 用[J].中國畜牧雜志，2013,49(4):41-44.]，因此，提高奶牛精飼料品質(zhì)已成為奶牛養(yǎng)殖業(yè) 的關(guān)鍵技術(shù)。
[0003] 發(fā)酵飼料是指微生物在人工控制條件下，通過自身的代謝活動，將植物性、動物性 和礦物性物質(zhì)中的抗營養(yǎng)因子分解或轉(zhuǎn)化，產(chǎn)生更能被畜禽采食、消化、吸收的，養(yǎng)分更高 且無毒害的飼料原料。發(fā)酵飼料作為一種生物飼料，具有替代抗生素的作用，保障了畜禽養(yǎng) 殖業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展。
[0004] 近些年來，微生物發(fā)酵飼料作為動物一種重要的飼料得到了迅速發(fā)展，現(xiàn)已有許 多有價值的產(chǎn)品上市。其中秸桿發(fā)酵飼料已經(jīng)在牛羊飼養(yǎng)中被廣泛的應(yīng)用，而微生物發(fā)酵 精飼料的研究卻相對滯后。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何提高奶牛精飼料的活性和/或奶牛產(chǎn)奶量和/ 或奶牛的體細胞數(shù)，該活性為如下6種特性中至少一種特性:真蛋白質(zhì)含量、可溶性糖含量、 可溶性蛋白質(zhì)含量、淀粉酶酶活性、蛋白酶酶活性和纖維素酶酶活性。
[0006] 為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種奶牛發(fā)酵精飼料及其制備方法。
[0007] 本發(fā)明所提供的奶牛發(fā)酵精飼料的制備方法，包括用復(fù)合菌劑發(fā)酵奶牛精飼料得 到發(fā)酵產(chǎn)物，該發(fā)酵產(chǎn)物即為所述奶牛發(fā)酵精飼料;所述復(fù)合菌劑的活性成分由枯草芽孢 桿菌和釀酒酵母組成。
[0008] 上述制備方法中，所述奶牛精飼料可為未經(jīng)發(fā)酵的奶牛精飼料。
[0009] 上述制備方法中，所述枯草芽孢桿菌可為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis) CGMCC1 · 0892，所述釀酒酵母可為釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)CGMCC2 · 1190〇
[0010] 上述制備方法中，所述復(fù)合菌劑中所述枯草芽孢桿菌和所述釀酒酵母的菌落形成 單位比為1:(1-4)或（1-4):1，如1:2。
[0011] 上述制備方法中，所述用復(fù)合菌劑發(fā)酵奶牛精飼料添加腐植酸鈉。
[0012] 所述腐植酸鈉的添加量可為所述奶牛精飼料的質(zhì)量的X倍，所述X大于0小于等于 8%，具體可為2%。
[0013] 由上述任一制備方法制備的奶牛發(fā)酵精飼料也屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0014] 所述奶牛發(fā)酵精飼料具有1)-6)中的至少一種特性：
[0015] 1)所述奶牛發(fā)酵精伺料的真蛋白質(zhì)含量尚于所述奶牛精伺料的真蛋白質(zhì)含量；
[0016] 2)所述奶牛發(fā)酵精飼料的可溶性糖含量高于所述奶牛精飼料的可溶性糖含量；
[0017] 3)所述奶牛發(fā)酵精飼料的可溶性蛋白質(zhì)含量高于所述奶牛精飼料的可溶性蛋白 質(zhì)含量；
[0018] 4)所述奶牛發(fā)酵精飼料的淀粉酶酶活性高于所述奶牛精飼料的淀粉酶酶活性；
[0019] 5)所述奶牛發(fā)酵精飼料的蛋白酶酶活性高于所述奶牛精飼料的蛋白酶酶活性；
[0020] 6)所述奶牛發(fā)酵精飼料的纖維素酶酶活性高于所述奶牛精飼料的纖維素酶酶活 性。
[0021 ]上述奶牛發(fā)酵精飼料的下述至少一種用途也屬于本發(fā)明的保護范圍：
[0022] A1)上述奶牛發(fā)酵精飼料在增加奶牛產(chǎn)奶量中的應(yīng)用；
[0023] A2)上述奶牛發(fā)酵精飼料在降低牛乳中體細胞數(shù)中的應(yīng)用；
[0024] A3)上述奶牛發(fā)酵精飼料在改善奶牛胃腸道功能中的應(yīng)用。
[0025] 上述應(yīng)用中，上述奶牛發(fā)酵精飼料可在奶牛泌乳期按每天每頭奶牛0.5-lkg添加。
[0026] 本發(fā)明還提供了用于制備奶牛發(fā)酵精飼料的菌劑。
[0027] 本發(fā)明所提供的用于制備奶牛發(fā)酵精飼料的菌劑，為所述復(fù)合菌劑。
[0028] 上述用于制備奶牛發(fā)酵精飼料的菌劑在制備奶牛發(fā)酵精飼料中的應(yīng)用也屬于本 發(fā)明的保護范圍。
[0029] 上述應(yīng)用中，所述改善奶牛動物胃腸道功能體現(xiàn)為下述至少一種特性:糞便成型 好、糞便氨味減輕、糞便光滑細膩和拉稀情況改善。
[0030] 實驗證明，采用本發(fā)明的用于制備奶牛發(fā)酵精飼料的菌劑發(fā)酵奶牛精飼料獲得的 奶牛發(fā)酵精飼料，顯著增加了真蛋白質(zhì)含量、可溶性糖含量、可溶性蛋白質(zhì)含量、淀粉酶酶 活性、蛋白酶酶活性和纖維素酶酶活性，在調(diào)控瘤胃微生態(tài)區(qū)系平衡和改善飼料養(yǎng)分利用 等方面有突出的作用，能夠使奶牛的產(chǎn)奶量提高3.34kg/d，降低牛乳中體細胞數(shù)，減少了糞 便中的臭味，緩解養(yǎng)殖環(huán)境污染，為奶牛養(yǎng)殖業(yè)的可持續(xù)發(fā)展提供保障。
【附圖說明】
[0031] 圖1為飼喂奶牛發(fā)酵精飼料前后奶牛的糞便形態(tài)。左圖為飼喂奶牛發(fā)酵精飼料前 奶牛的糞便，右圖為飼喂奶牛發(fā)酵精飼料后奶牛的糞便。
【具體實施方式】
[0032]下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明進行進一步的詳細描述，給出的實施例僅為了闡 明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。
[0033] 下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0034] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0035] 1 材料
[0036] 1.1下述實施例中的枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)GCMCCl .0892(下文簡稱 枯草芽抱桿菌 1.0892)和釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae) CGMCC2 · 1190 (即 As2.1190)(下文簡稱釀酒酵母2.1190)均為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中 心（簡稱CGMCC)的菌種?？莶菅挎邨U菌13S4、酵母菌SC4(牛普春等.奶牛精飼料混菌固態(tài)發(fā) 酵過程中還原糖含量變化的研究.2015.No. 20飼料研究)為內(nèi)蒙古斯隆生物技術(shù)有限責任 公司實驗室保存。
[0037] 1.2下述實施例中的奶牛為荷斯坦奶牛。
[0038] 1.3下述實施例中的奶牛精飼料為內(nèi)蒙古優(yōu)牧特農(nóng)牧科技股份有限公司的產(chǎn)品， 配方如下：玉米37%、豆柏17%、菜柏5%、棉柏10%、DDG20%、預(yù)混料5%、脂肪粉1 %、稻殼 粉5%。其中，"％"為質(zhì)量百分含量。該奶牛精飼料是未經(jīng)發(fā)酵的奶牛精飼料。
[0039] 1.4下述實施例中的2%固體發(fā)酵培養(yǎng)基是向上述奶牛精飼料中加入是奶牛精飼 料的5/6倍質(zhì)量的水和2 % (質(zhì)量百分含量)腐植酸鈉水溶液得到的固體發(fā)酵培養(yǎng)基。2 %固 體發(fā)酵培養(yǎng)基中，腐植酸鈉與奶牛精飼料的質(zhì)量比為2:100。
[0040] 2.1下述實施例中的可溶性蛋白質(zhì)含量的測定采用考馬斯亮藍法（Read S M， Northcote D H.Minimization of variation in the response to different proteins of the Coomass i e Bri lliant Blue G dye-binding assay for protein.[J] .Analytical Biochemistry，1981，116:53-64)〇
[0041] 2.2下述實施例中的可溶性多糖含量的測定采用蒽酮比色法(趙可夫.植物抗鹽生 理[M].北京：中國科學(xué)技術(shù)出版社.1993:22-24)。
[0042] 2.3下述實施例中的真蛋白含量的測定采用硫酸銅沉淀法(麻益良，秦良吉，劉樹 年.飼料真蛋白質(zhì)含量的測定[J].山東家禽，1999(5): 17-19)。
[0043] 2.4下述實施例中的淀粉酶含量的測定采用3,5_二硝基水楊酸比色法（陳號，陸 雯，虞婷，等.淀粉酶高產(chǎn)菌株的誘變選育[J].農(nóng)業(yè)科學(xué)研究，2010.31 (1): 16-18)。
[0044] 2.5下述實施例中的蛋白酶含量的測定采用福林酚法(SB/T 10317-1999,蛋白酶 活力測定法[S])。
[0045] 2.6下述實施例中的纖維素酶酶活的測定采用3，5 -二硝基水楊酸比色法（N Y / T912-2004.飼料添加劑纖維素酶活力的測定）。
[0046] 下述實施例中的發(fā)酵均在無菌條件下進行。在制備奶牛發(fā)酵精飼料時，上述奶牛 精飼料在發(fā)酵前進行滅菌。
[0047] 實施例1、復(fù)合菌劑及其制備的奶牛發(fā)酵精飼料的活性物質(zhì)含量
[0048] 1、本實施例提供了如下2種用于制備奶牛發(fā)酵精飼料的菌劑：枯草芽孢桿菌 1.0892與釀酒酵母2.1190復(fù)合菌劑和枯草芽孢桿菌13S4與酵母菌SC4復(fù)合菌劑。
[0049]枯草芽孢桿菌1.0892與釀酒酵母2.1190復(fù)合菌劑的活性成分由枯草芽孢桿菌 1.0892和釀酒酵母2.1190組成，枯草芽孢桿菌1.0892和釀酒酵母2.1190的菌落形成單位 (cfu)比為1: 2。
[0050]枯草芽孢桿菌13S4與酵母菌SC4復(fù)合菌劑的活性成分由枯草芽孢桿菌13S4和酵母 菌SC4組成，枯草芽孢桿菌13S4和酵母菌SC4的菌落形成單位(cfu)比為1:2。
[0051 ] 1.1液體菌種的制備
[0052] 1.1.1枯草芽孢桿菌1.0892液體菌種的制備
[0053]將枯草芽孢桿菌1.0892用營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基在34-35°C培養(yǎng)18-24h，得到的培 養(yǎng)物即為枯草芽孢桿菌1.0892液體菌種，該枯草芽孢桿菌1.0892液體菌種中枯草芽孢桿菌 1 · 0892 的含量為 7 X 108cfu/mL。
[0054] 1.1.