專利名稱：抗腫瘤化合物去乙酰真菌環(huán)氧乙酯的發(fā)酵基質(zhì)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種化合物的發(fā)酵基質(zhì)，尤其是涉及一種抗腫瘤化合物去乙酰真菌環(huán)氧乙酯 (Deacetyl-mycoepoxydiene)的發(fā)酵基質(zhì)。
背景技術(shù)：
化合物2-(8-甲基-9-氧雜-雙環(huán)[4.2.1 ]九-2,4- 二烯-7-基)-6-氧-3,6- 二氫-2H-吡喃酮 (Deacetyl-mycoepoxydiene，俗稱去乙酰真菌環(huán)氧乙酯)，最早見于本申請人于2007年的報道， 本申請人在公開號為CN1903858的發(fā)明專利申請?zhí)峁┮环N抗腫瘤化合物去乙酰真菌環(huán)氧乙酯 及其制備方法，是一種結(jié)構(gòu)新穎，用擬莖點霉A-l-2-3代謝產(chǎn)生的去乙酰真菌環(huán)氧乙酯與制 法及在抗腫瘤藥物或其他生物活性先導(dǎo)物中的應(yīng)用。分子式為C14H1604，制備時取菌種接種 于培養(yǎng)基培養(yǎng)至發(fā)酵，加入乙酸乙酯、甲醇和乙酸混合溶劑，收集提取液減壓濃^l至膏狀， 用水分散，萃取至無色，分別得石油醚、乙酸乙酯、正丁醇相浸膏。再分離，裝柱，濃縮， 洗脫，收集合并各個組分進行反相硅膠柱分離。取反相硅膠，裝柱，洗滌，洗脫，收集每個 柱體積的洗脫液，濃縮至干，收集第2個組分進行凝膠柱層析分離，取凝膠，裝柱，洗脫， 收集各組分。反復(fù)洗滌直至晶體表面無色素附著。該申請的發(fā)明人沈月毛等從福建省漳州市 九龍江口浮宮鎮(zhèn)草埔頭(地名)紅樹林生態(tài)區(qū)的紅樹植物秋燕葉片中分離得到的菌株A123, 經(jīng)鑒定為擬莖點霉CP/zo/mw紅sp.)。該菌株已保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，登記入冊的保 藏編號為CCTCC NO: M 206060，保藏的培養(yǎng)物名稱及注明的鑒別特征為擬莖點霉(P/zo附ow's sp.)，保藏日為2006年6月26日。
擬莖點霉CP/ OTOM&sp.)A123該屬真菌為植物寄生菌(見裘緯蕃主編，菌物學(xué)大全[M]，北 京科學(xué)出版社，1998)，該菌株在20%海水配方馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基(PDA)培養(yǎng)基上，生 長良好，菌絲純白，無明顯色素產(chǎn)生，不產(chǎn)孢子，培養(yǎng)10d以后，產(chǎn)生黑色子座。
未見有與本申請專利相同的發(fā)酵培養(yǎng)基配方的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種用擬莖點霉(尸toma^ sp.)A123菌株發(fā)酵真菌(參見公開號為 CN1903858的發(fā)明專利申請)為代謝產(chǎn)物Deacetyl-mycoepoxydiene的抗腫瘤化合物去乙酰真 菌環(huán)氧乙酯的發(fā)酵基質(zhì)及其發(fā)酵方法。
本發(fā)明所述的抗腫瘤化合物去乙酰真菌環(huán)氧乙酯的化學(xué)名2-(8-甲基-9-氧雜-雙環(huán)[4.2.1] 九-2,4-二烯-7-基)-6-氧-3,6-二氫-2H-吡喃酮，其分子式為C14H1604，結(jié)構(gòu)式為
本發(fā)明所述的抗腫瘤化合物去乙酰真菌環(huán)氧乙酯的發(fā)酵基質(zhì)的組成為按質(zhì)量/體積比， 葡萄糖為40 95g/L，馬鈴薯為100 300g/L， VB,為2 10mg/L，甘露醇為8 20g/L;按體 積百分比，陳海水為12% 25%，水補足1L， pH自然。
本發(fā)明所述的抗腫瘤化合物去乙酰真菌環(huán)氧乙酯的發(fā)酵基質(zhì)的發(fā)酵方法為
1) 將馬鈴薯去皮，切成小塊，加水煮沸，取汁液連同配方中其它成分混合均勻；
2) 滅菌后，接種菌株A123，攪拌發(fā)酵，發(fā)酵液經(jīng)過濾，除去菌體，收集發(fā)酵液用有機 溶劑攪拌萃取，收集萃取所得的有機相，減壓濃縮至干即為目標產(chǎn)物。
所述加水煮沸的時間最好為0.5h。所述攪拌發(fā)酵最好在26 28"C通氣攪拌發(fā)酵14 18d;所述攪拌萃取的時間最好為12 36h，所述減壓濃縮的溫度最好為45'C。
與現(xiàn)有的發(fā)酵培養(yǎng)基相比，由于本發(fā)明所述的抗腫瘤化合物去乙酰真菌環(huán)氧乙酯的發(fā)酵 基質(zhì)其組成合理，因此采用本發(fā)明所述的抗腫瘤化合物去乙酰真菌環(huán)氧乙酯的發(fā)酵基質(zhì)，通 過常規(guī)的發(fā)酵技術(shù)，所發(fā)酵的Deacetyl-mycoepoxydiene產(chǎn)量可達150 200mg/L。
具體實施例方式
以下實施例將對本發(fā)明作進一步的說明。 實施例1
培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基的配方為馬鈴薯170 g，葡萄糖85 g， VB^mg，甘露醇14g，陳海 水200ml，水補足1L， pH自然。
發(fā)酵時，將上述培養(yǎng)基滅菌后，接種A123菌株，28'C發(fā)酵18d。發(fā)酵液經(jīng)過濾，除去菌 體，收集發(fā)酵液用等量乙酸乙脂攪拌萃取3遍，每遍萃取12h，收集萃取所得的有機相，45°C 濃縮至干即為本品的粗提物。
實施例2
培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基的配方為馬鈴薯100 g，葡萄糖40 g， VB,2mg，甘露醇8g，陳海 水250ml，水補足1L， pH自然。
發(fā)酵時，將上述培養(yǎng)基滅菌后，接種A123菌株，26'C發(fā)酵14d。發(fā)酵液經(jīng)過濾，除去 菌體，收集發(fā)酵液用等量甲醇攪拌萃取3遍，每遍萃取15h，收集萃取所得的有機相，45'C 濃縮至干即為本品的粗提物。
實施例3
培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基的配方為馬鈴薯300 g,葡萄糖95 g， VB! 10mg，甘露醇20g，陳 海水250ml，水補足1L， pH自然。
發(fā)酵時，將上述培養(yǎng)基滅菌后，接種A123菌株，27'C發(fā)酵15d。發(fā)酵液經(jīng)過濾，除去菌 體，收集發(fā)酵液用等量氯仿攪拌萃取3遍，每遍萃取36h，收集萃取所得的有機相，45'C濃 縮至干即為本品的粗提物。
實施例4
培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基的配方為馬鈴薯200 g，葡萄糖55g， VB,4mg,甘露醇12g，陳海 水120ml，水補足1L， pH自然。
發(fā)酵時，將上述培養(yǎng)基滅菌后，接種A123菌株，27'C發(fā)酵15d。發(fā)酵液經(jīng)過濾，除去菌 體，收集發(fā)酵液用等量乙酸乙脂攪拌萃取3遍，每遍萃取20h，收集萃取所得的有機相，45°C 濃縮至干即為本品的粗提物。
實施例5
培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基的配方為馬鈴薯250 g，葡萄糖70 g， VB口mg，甘露醇16g，陳海 水180ml，水補足1L， pH自然。
發(fā)酵時，將上述培養(yǎng)基滅菌后，接種A123菌株，26。C發(fā)酵14 d。發(fā)酵液經(jīng)過濾，除去 菌體，收集發(fā)酵液用等量甲醇攪拌萃取3遍，每遍萃取12h，收集萃取所得的有機相，45°C 濃縮至干即為本品的粗提物。
實施例6
培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基的配方為馬鈴薯200 g，葡萄糖80g， VB^mg，甘露醇15g,陳海 水220ml，水補足1L， pH自然。
發(fā)酵時，將上述培養(yǎng)基滅菌后，接種A123菌株，26。C發(fā)酵16d。發(fā)酵液經(jīng)過濾，除去菌 體，收集發(fā)酵液用等量氯仿攪拌萃取3遍，每遍萃取30h，收集萃取所得的有機相，45'C濃 縮至干即為本品的粗提物。
權(quán)利要求
1.抗腫瘤化合物去乙酰真菌環(huán)氧乙酯的發(fā)酵基質(zhì)，所述的抗腫瘤化合物去乙酰真菌環(huán)氧乙酯的化學(xué)名2-(8-甲基-9-氧雜-雙環(huán)[4.2.1]九-2，4-二烯-7-基)-6-氧-3，6-二氫-2H-吡喃酮，其分子式為C14H16O4，結(jié)構(gòu)式為其特征在于所述的抗腫瘤化合物去乙酰真菌環(huán)氧乙酯的發(fā)酵基質(zhì)的組成為按質(zhì)量/體積比，葡萄糖為40～95g/L，馬鈴薯為100～300g/L，VB1為2～10mg/L，甘露醇為8～20g/L；按體積百分比，陳海水為12％～25％，水補足1L，pH自然。
2. 如權(quán)利要求l所述的抗腫瘤化合物去乙酰真菌環(huán)氧乙酯的發(fā)酵基質(zhì)的發(fā)酵方法，其特 征在于包括以下步驟1) 將馬鈴薯去皮，切成小塊，加水煮沸，取汁液連同配方中其它成分混合均勻；2) 滅菌后，接種菌株A123，攪拌發(fā)酵，發(fā)酵液經(jīng)過濾，除去菌體，收集發(fā)酵液用有機 溶劑攪拌萃取，收集萃取所得的有機相，減壓濃縮至干即為目標產(chǎn)物。
3. 如權(quán)利要求2所述的抗腫瘤化合物去乙酰真菌環(huán)氧乙酯的發(fā)酵基質(zhì)的發(fā)酵方法，其特 征在于所述加水煮沸的時間為0.5h。
4. 如權(quán)利要求2所述的抗腫瘤化合物去乙酷真菌環(huán)氧乙酯的發(fā)酵基質(zhì)的發(fā)酵方法，其特 征在于所述攪拌發(fā)酵在26 28'C通氣攪拌發(fā)酵14 18d。
5. 如權(quán)利要求2所述的抗腫瘤化合物去乙酰真菌環(huán)氧乙酯的發(fā)酵基質(zhì)的發(fā)酵方法，其特 征在于所述攪拌萃取的時間為12 36h。
6. 如權(quán)利要求l所述的抗腫瘤化合物去乙酰真菌環(huán)氧乙酯的發(fā)酵基質(zhì)的發(fā)酵方法，其特 征在于所述減壓濃縮的溫度為45°C。
全文摘要
抗腫瘤化合物去乙酰真菌環(huán)氧乙酯的發(fā)酵基質(zhì)，涉及一種化合物的發(fā)酵基質(zhì)。提供一種抗腫瘤化合物去乙酰真菌環(huán)氧乙酯的發(fā)酵基質(zhì)及其發(fā)酵方法。分子式C₁₄H₁₆O₄。發(fā)酵基質(zhì)組成為葡萄糖為40～95g/L，馬鈴薯為100～300g/L，VB₁為2～10mg/L，甘露醇為8～20g/L；陳海水為12％～25％，水補足1L。發(fā)酵方法為將馬鈴薯去皮，切成小塊，加水煮沸，取汁液連同配方中其它成分混合均勻；滅菌后，接種菌株A123，攪拌發(fā)酵，發(fā)酵液經(jīng)過濾，除去菌體，收集發(fā)酵液用有機溶劑攪拌萃取，收集萃取所得的有機相，減壓濃縮至干即為目標產(chǎn)物。
文檔編號A61P35/00GK101353678SQ200810071738
公開日2009年1月28日 申請日期2008年9月8日 優(yōu)先權(quán)日2008年9月8日
發(fā)明者宋思揚, 偉 張, 沈月毛, 蘇文金, 鄭忠輝, 黃耀堅 申請人:廈門大學(xué)