專利名稱：一種葉酸修飾殼聚糖包裹質粒納米粒子及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物材料的醫(yī)學基礎應用領域，更具體地說，涉及一種葉酸修飾殼聚糖包裹質粒納米粒子的制備方法。
背景技術：
肝癌是臨床上常見的惡性腫瘤之一，根據最新統(tǒng)計，全世界每年新發(fā)肝癌患者約六十萬，居惡性腫瘤的第三位。原發(fā)性肝癌在我國屬于高發(fā)病，一般男性多于女性。目前我國發(fā)病人數約占全球的半數以上，占全球肝癌病人的55%，已經成為嚴重威脅我國人民健康和生命的一大殺手。早期肝癌以手術治療為主，但由于起病隱匿，早期癥狀不典型且診斷困難，確診時大多數患者已達到晚期失去手術機會。肝癌對放化療均不敏感，目前主要依賴介入(TACE)或藥物輔助治療，預后極差。目前已知肝癌的發(fā)生發(fā)展與轉移和多種基因突變、信號轉導通路和新生血管增生異常密切相關，這些發(fā)病機理為分子靶向治療提供許多有利的靶點，逐漸成為新的研究靶點。在肝癌的過繼免疫治療方面，腫瘤特異性細胞毒性T淋巴細胞(cytotoxic Tlymphocyte, CTL)被作為治療研究領域之一，治療的方向放在誘導T細胞及NK細胞分泌IFN-Y及促進CTL成熟，并且誘導更強的抗血管效應。但這種療法也有其缺陷性，原因是靶向到腫瘤局部的特異性CTL細胞數量有限，影響到免疫治療的效果。故人們開始研究一種基于趨化因子干擾素誘導蛋白10 (IP10)，作為促進T細胞的定向趨化和活化增殖的促進劑。
IPlO具有強大的趨化淋巴細胞和活化功能，可以定向募集T淋巴細胞并促進淋巴細胞活化和增殖，引起腫瘤內淋巴細胞浸潤，并且具有抑制腫瘤新生血管生成的作用，從而發(fā)揮較強的抗腫瘤作用。在借助IPlO的趨化作用下，CTL即可從注射部位靶向富集到腫瘤周圍特別是侵潤的腫瘤細胞周圍，故目前主要通過轉基因技術或者直接腫瘤局部多點注射等方法使腫瘤局部富集IP10。但這些方法存在靶向性、濃度以及體內降解等問題，不能很好的富集到腫瘤細胞局部。

發(fā)明內容
本發(fā)明要解決的技術問題在于，針對現有肝癌的過繼免疫治療中藥物靶向性較差的缺陷，提供一種葉酸修飾殼聚糖包裹質粒納米粒子及其制備方法。本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案是構造一種葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子的制備方法，包括以下步驟SI、將脫乙酰度大于95%的殼聚糖粉末溶解在含1%的醋酸溶液中，制備成5mg/mL的殼聚糖溶液，并調節(jié)PH值至4. 9-5. 2 ;在持續(xù)勻速攪拌作用下，將2mg/mL的三聚磷酸鈉溶液按照I. O: (I. 2-2. O)的體積比逐滴滴入所述殼聚糖溶液中，形成物理交聯后的殼聚糖溶液；
S2、在持續(xù)勻速攪拌作用下，將5wt%的戊二醛溶液按照1:12-15的體積比逐滴加入到所述物理交聯后的殼聚糖溶液中，37° C水浴震蕩過夜，得到化學交聯后的殼聚糖溶液，并加入過量的NaBH4粉末；S3、對步驟S2制得的殼聚糖溶液進行透析純化，得到殼聚糖納米粒子懸浮液；S4、用磷酸緩沖液將葉酸配成5mg/ml的葉酸溶液；將所述葉酸溶液、殼聚糖納米粒子懸浮液以及I-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽按質量比為10:1:5混合，在勻速攪拌作用下，室溫反應30min ;透析去除未反應的葉酸,得到葉酸修飾的殼聚糖納米粒子懸浮液；S5、將IPlO質粒用25mmol/L的Na2SO4溶液稀釋至lmg/ml后與所述殼聚糖納米粒子懸浮液分別置于55° C水浴5-20min，按質量比為10:1迅速混合后，在渦輪振蕩器上以2000rpm的震蕩速率震蕩30-50秒，室溫下靜置30min ;并在4° C下>10，OOOg離心20min， 然后用磷酸緩沖液重懸，形成乳白色懸液，制得葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子。在根據本發(fā)明所述的葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子的制備方法中，所述步驟SI中用lmol/L的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值至4. 9-5. 2，所述持續(xù)勻速攪拌為500rpm，所述逐滴滴入為I滴/秒的速率。在根據本發(fā)明所述的葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子的制備方法中，所述步驟S2中所述水浴震蕩的震蕩速率為120rpm。在根據本發(fā)明所述的葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子的制備方法中，所述步驟S3中透析純化使用的透析袋的截留分子量為8000-14000，透析時間為2小時。在根據本發(fā)明所述的葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子的制備方法中，所述步驟S4中所述勻速攪拌的速度為200rpm ;所述透析去除未反應的葉酸使用截留分子量為8000-14000的透析袋。本發(fā)明還提供了一種葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子，采用前述的制備方法制得。實施本發(fā)明的葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子及其制備方法，具有以下有益效果本發(fā)明采用葉酸修飾殼聚糖納米粒子，并對IPlO質粒進行包裹，制得葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子，本發(fā)明通過適當的制備條件獲得的納米粒子粒徑適中，形態(tài)好，產量高，通過靜脈注射給藥后，經血液循環(huán)途徑直接靶向腫瘤局部，由于材料的體積優(yōu)勢，在體內可以降低粒子被網狀上皮系統(tǒng)清除速率，延長粒子在血液循環(huán)系統(tǒng)中的停留時間。


下面將結合附圖及實施例對本發(fā)明作進一步說明，附圖中圖I所示為根據本發(fā)明的葉酸修飾殼聚糖納米粒子的制備過程化學反應原理圖；圖2所示為根據本發(fā)明的葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子的制備方法流程圖；圖3所示為根據本發(fā)明的葉酸修飾殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子的粒徑分布圖；圖4A所示為未采用葉酸修飾的殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子的掃描電鏡圖，圖4B為葉酸修飾殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子的掃描電鏡圖5所示為葉酸、殼聚糖和本發(fā)明所述葉酸修飾殼聚糖納米粒子的傅里葉變換紅外光譜表征；圖6所示為葉酸、殼聚糖和本發(fā)明所述葉酸修飾殼聚糖納米粒子的X射線衍射表征；圖7所示為本發(fā)明的凝膠阻滯實驗結果；圖8A-圖8F所示為H22細胞吞噬本發(fā)明的葉酸修飾殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子的實驗結果；圖9所示為本發(fā)明葉酸修飾殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子給藥效果檢測中小鼠腫瘤生長曲線；圖10所示為本發(fā)明葉酸修飾殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子給藥效果檢測中小鼠 生存率；圖IlA-圖IlD所示為本發(fā)明葉酸修飾殼聚糖包裹IPlO納米粒子對小鼠腫瘤的治療效果照片。
具體實施例方式為了使本發(fā)明的目的、技術方案及優(yōu)點更加清楚明白，以下結合附圖及實施例，對本發(fā)明進行進一步詳細說明。請參閱圖1，為根據本發(fā)明的葉酸修飾殼聚糖納米粒子的制備過程化學反應原理圖。本發(fā)明利用葉酸對殼聚糖進行修飾，制備葉酸修飾的殼聚糖納米粒子。如圖I中所示，葉酸的羧基在I-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)的作用下被激活后與殼聚糖的氨基發(fā)生脫水縮合形成穩(wěn)定的酰胺鍵。請參閱圖2，為根據本發(fā)明的葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子的制備方法流程圖。如圖2所示，本發(fā)明的葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子的制備方法包括以下步驟首先，在步驟SI中，采用三聚磷酸鈉制備物理交聯的殼聚糖納米粒子。步驟SI具體包括S1-1、將脫乙酰度> 95%的殼聚糖粉末溶解在含1%的醋酸溶液中，制備成5mg/mL的溶液，并用lmol/L的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值至4. 9-5. 2，制備成殼聚糖溶液A ；S1-2、將三聚磷酸鈉用蒸餾水配置成2mg/mL的三聚磷酸鈉溶液B ；S1-3、在500rpm持續(xù)勻速攪拌作用下，按照溶液A:溶液B= (I. 2-2. O) : I. O的體積比將三聚磷酸鈉溶液B按照I滴/秒的速率逐滴加入到殼聚糖溶液A中，形成物理交聯后的殼聚糖溶液C。隨后，在步驟S2中，加入戊二醛進行化學交聯反應。步驟S2具體包括S2-1、將戊二醛配置成5wt%的戊二醛溶液D ；S2-2、在持續(xù)勻速攪拌作用下，按照溶液D:溶液C=I: 12-15的體積比將所述戊二醛溶液D加入到物理交聯后的殼聚糖溶液C中，以120rpm的震蕩速率37° C水浴震蕩過夜，形成化學交聯后的殼聚糖溶液E ;S2-3、在化學交聯后的殼聚糖溶液E中進一步加入過量的NaBH4粉末，以還原殼聚糖的氨基與戊二醛形成的希夫氏堿。
隨后，在步驟S3中，對所述化學交聯后的殼聚糖溶液E進行透析純化，得到殼聚糖納米粒子懸浮液F。步驟S3具體為使用截留分子量為8000-14000的透析袋，透析時間為2小時。隨后，在步驟S4中，用葉酸對殼聚糖納米粒子進行修飾，其中，葉酸的羧基在I-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)的作用下被激活后與殼聚糖的氨基發(fā)生脫水縮合形成穩(wěn)定的酰胺鍵。步驟S4具體包括S4-1、細胞培養(yǎng)基級別的葉酸用磷酸緩沖液配成5mg/ml的葉酸溶液G ；S4-2、將葉酸溶液G、殼聚糖納米粒子懸浮液F、I-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽按質量比為10:1:5混合、在200rpm勻速攪拌作用下，室溫反應30min ；S4-3、使用截留分子量為8000-14000的透析袋透析去除未反應的葉酸，得到葉酸修飾的殼聚糖納米粒子懸浮液H?！るS后，在步驟S5中，采用Na2SO4誘導的復凝聚沉淀法制備含IPlO質粒的葉酸修飾的殼聚糖納米粒子。步驟S5具體包括S5-1、將IPlO質粒用25mmol/L的Na2SO4溶液稀釋至lmg/ml后與葉酸修飾的殼聚糖納米粒子懸浮液H分別置于55° C水浴5-20min，按質量比為10:1迅速混合后，在渦輪振蕩器上以2000rpm的震蕩速率震蕩30-50秒，室溫下靜置30min ；S5_2、4° C下>10，OOOg離心20min，然后用磷酸緩沖液重懸，形成乳白色懸液，制得葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子。本發(fā)明還提供了采用上述制備方法制得的葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子。葉酸(folic acid, FA)是人體必需的但又無法合成的一種維生素，自1986年B. A. Kamen發(fā)現葉酸是由受體介導的內吞途徑進入細胞并能與腫瘤細胞表面葉酸表達受體結合以來，人們開始了以葉酸作為靶向配體的研究。葉酸受體在許多腫瘤細胞都發(fā)現有表達，有時可比正常組織高出100-300倍。此受體主要在腫瘤細胞高表達，在正常組織中沒有或很少表達，故具有很好的腫瘤組織特異性。在人類許多腫瘤中均有葉酸受體的高表達，靶向應用的范圍很廣。葉酸受體系統(tǒng)有以下獨特優(yōu)點(1)結構比較簡單，容易合成，購買價格低廉；(2)體積較小，易修飾到納米級生物材料上，并在體內易吸收；(3)具有很好的腫瘤組織特異性，在人類大多腫瘤上表達，靶向應用的范圍很廣。甲殼素是一種天然有機高分子多糖，廣泛存在于甲殼素類動物的外殼中，殼聚糖是甲殼素的衍生物，殼聚糖分子上存在大量的氨基，在水溶液中能解離成大量的正電荷，很容易進行功能基團的修飾。目前基因治療主要面臨的一大難題即是進入體內的穩(wěn)定性以及在體內所停留的時間，殼聚糖作為一種非病毒載體具有良好的生物相容性、可降解、對細胞及組織無毒性，能有效保護負載的質?；蚧蚱卧谶M入體內不被體液中核酸酶所降解。本發(fā)明采用離子模板法制備殼聚糖納米粒子，操作簡單，殼聚糖與葉酸原料易得低廉。主要通過三聚磷酸鈉為模板，在酸性條件下通過三聚磷酸鈉上的負電荷與殼聚糖上的正電荷相結合而形成納米粒子，再通過戊二醛的作用形成更緊密結合的納米粒子。通過控制三聚磷酸鈉與殼聚糖上氨基的比例、轉速、戊二醛的用量來控制粒徑的大小。離子模板法相較于傳統(tǒng)的制備方法具有操作簡便、能在溫和條件下迅速生成粒徑幾十至數百納米的殼聚糖納米粒，不需使用有機溶劑，反應過程簡便迅速，所以具有很高的使用價值。雖然納米粒子的藥物控釋已經得到一定程度的發(fā)展，但是針對不同的高分子載體材料以及被裝載的物質，所需的制備工藝及參數也不同。本發(fā)明針對IPlO采用前述制備方法制得的葉酸修飾殼聚糖包裹質粒納米粒子的粒徑適中，便于注射給藥，通過血液循環(huán)靶向性到達腫瘤部位。目前IP-10質粒大多單獨治療、制備成融合蛋白或者聯合抗癌藥物使用，但是單獨使用的IPio具有一定的局限性，即使在腫瘤局部注射也是短暫停留，并不能長久發(fā)揮其作用。實現腫瘤基因治療的關鍵是要使用高效安全的基因導入系統(tǒng)，本發(fā)明采用葉酸修飾的殼聚糖包裹IPlO質粒能特異性的靶向至腫瘤局部并被腫瘤細胞所吞噬，殼聚糖納米粒子本身具有很好的生物相容性，從而將外源基因安全送至腫瘤細胞中。本發(fā)明用這種納米粒子生物材料對BALB/c荷瘤小鼠進行尾靜脈注射,通過血液循環(huán)途徑直接靶向腫瘤局部，由于納米粒子材料的體積優(yōu)勢，在體內可以降低粒子被網狀上皮系統(tǒng)清除速率，延長粒子在血液循環(huán)系統(tǒng)中的停留時間。請參閱圖3，為根據本發(fā)明的葉酸修飾殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子的粒徑分布圖。其中CS-IPlO為未采用葉酸修飾的殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子；FA-CS-IP10為葉 酸修飾殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子?？梢钥吹剑~酸修飾后殼聚糖水化粒徑的主峰從396nm 減小至 342nm。請參閱圖4A為未采用葉酸修飾的殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子的掃描電鏡圖，圖4B為葉酸修飾殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子的掃描電鏡圖。可以看到，未采用葉酸修飾的殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子為空載殼聚糖，其透射電鏡形態(tài)大小均一，表面形貌有些粗糙；葉酸修飾殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子不再呈現出圓球形的結構，有些類似于方形，且粒徑變小。請參閱圖5，為葉酸、殼聚糖和本發(fā)明所述葉酸修飾殼聚糖納米粒子的傅里葉變換紅外光譜(FTIR)表征。從FTIR吸收峰可以看到，葉酸的羧基與殼聚糖的氨基反應形成的羧基。請參閱圖6,為葉酸、殼聚糖和本發(fā)明所述葉酸修飾殼聚糖納米粒子的X射線衍射(XRD)表征。從該XRD衍射圖譜可以看到，葉酸修飾殼聚糖(FA-CS)呈現出無定形相，葉酸(FA)和殼聚糖(CS)的特征峰均消失，這是由于葉酸分子結構較氨基復雜得多，當葉酸接枝在殼聚糖的氨基上時，阻礙了殼聚糖分子鏈的運動。請參閱圖7，為本發(fā)明的凝膠阻滯實驗結果，具體為IPlO質粒、殼聚糖納米粒子、殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子和葉酸修飾殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子的1%瓊脂糖凝膠電泳圖。其中第O泳道分子量標準品(marker)，第I泳道IP10質粒，第2泳道殼聚糖納米粒子,第3泳道殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子,第4泳道葉酸修飾的殼聚糖包裹IPio質粒納米粒子。由于殼聚糖帶正電荷在瓊脂糖膠上不出現條帶，從3、4泳道可以看出殼聚糖包裹IPlO質粒成功。請參閱圖8A-C為H22細胞吞噬殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子的實驗結果，圖8D-F為H22細胞吞噬葉酸修飾殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子的實驗結果，圖8A-F均為37° C下孵育4h后熒光顯微鏡下觀察結果。其中圖8A和圖8D為DAPI染核顯藍色熒光，圖8B和圖8E為FITC修飾殼聚糖顯綠色熒光，圖8C為圖8A和圖8B的融合圖，圖8F為圖8D和圖SE的融合圖?？梢钥闯?，H22細胞吞噬殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子，可看見個別細胞吞噬現象但熒光不強；而H22細胞吞噬葉酸修飾殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子，幾乎所有細胞均有吞噬現象，胞質內熒光較強，說明葉酸修飾殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子可被H22細胞特異吞噬。請參閱圖9，為本發(fā)明葉酸修飾殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子給藥效果檢測中小鼠腫瘤生長曲線，實驗組別包括PBS處理組、IPlO處理組、殼聚糖包裹IPlO納米粒子(CS-IPlO)處理組，葉酸修飾殼聚糖包裹IPlO納米粒子(FA-CS-IPio)處理組，各組小鼠分別在第5、12、19天給與藥物治療?？梢钥吹剑現A-CS-IPlO處理組與對照組相比腫瘤生長速度較慢，表明FA-CS-IPlO可顯著減慢腫瘤生長速度。請參閱圖10，為本發(fā)明葉酸修飾殼聚糖包裹IPlO質粒納米粒子給藥效果檢測中小鼠生存率，實驗組別包括PBS處理組、IPlO質粒處理組、殼聚糖包裹IPlO納米粒子(CS-IPlO)處理組、葉酸修飾殼聚糖包裹IPlO納米粒子(FA-CS-IPio)處理組?？梢钥吹?，FA-CS-IPlO處理組與對照組生存曲線有統(tǒng)計學差異，小鼠生存率得到顯著提高。 請參閱圖IlA-C分別為本發(fā)明葉酸修飾殼聚糖包裹IPlO納米粒子(FA-CS-IP10)、殼聚糖包裹IPlO納米粒子(CS-IPlO)和IPlO質粒給藥效果檢測中治療20天后小鼠腫瘤生長情況照片，圖IlD為PBS處理組。收集處于對數生長期H22細胞，對4_6周BALB/c小鼠進行左下腹皮下種瘤，每只細胞數2X IO6/個。成瘤后分組予以不同處理，觀察腫瘤生長大小。在20天可觀察到葉酸修飾的殼聚糖IP-10納米粒子治療組較對照組有明顯抑制腫瘤生長的作用。本圖從直觀上說明葉酸修飾的殼聚糖ip- ο納米粒子通過血液循環(huán)作用直接靶向腫瘤抑制腫瘤生長。本發(fā)明是根據特定實施例進行描述的，但本領域的技術人員應明白在不脫離本發(fā)明范圍時，可進行各種變化和等同替換。此外，為適應本發(fā)明技術的特定場合或材料，可對本發(fā)明進行諸多修改而不脫離其保護范圍。因此，本發(fā)明并不限于在此公開的特定實施例，而包括所有落入到權利要求保護范圍的實施例。
權利要求
1.一種葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 51、將脫乙酰度大于95%的殼聚糖粉末溶解在含1%的醋酸溶液中，制備成5mg/mL的殼聚糖溶液，并調節(jié)PH值至4. 9-5. 2 ;在持續(xù)勻速攪拌作用下，將2mg/mL的三聚磷酸鈉溶液按照I. O: (I. 2-2. O)的體積比逐滴滴入所述殼聚糖溶液中，形成物理交聯后的殼聚糖溶液； 52、在持續(xù)勻速攪拌作用下，將5wt%的戊二醛溶液按照1:12-15的體積比逐滴加入到所述物理交聯后的殼聚糖溶液中，37° C水浴震蕩過夜，得到化學交聯后的殼聚糖溶液，并加入過量的NaBH4粉末； 53、對步驟S2制得的殼聚糖溶液進行透析純化，得到殼聚糖納米粒子懸浮液； 54、用磷酸緩沖液將葉酸配成5mg/ml的葉酸溶液；將所述葉酸溶液、殼聚糖納米粒子懸浮液以及I-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽按質量比為10:1:5混合，在勻速攪拌作用下，室溫反應30min ;透析去除未反應的葉酸,得到葉酸修飾的殼聚糖納米粒子懸浮液； 55、將IPlO質粒用25mmol/L的Na2SO4溶液稀釋至lmg/ml后與所述殼聚糖納米粒子懸浮液分別置于55° C水浴5-20min，按質量比為10:1迅速混合后，在渦輪振蕩器上以2000rpm的震蕩速率震蕩30-50秒，室溫下靜置30min ;并在4° C下>10，OOOg離心20min，然后用磷酸緩沖液重懸，形成乳白色懸液，制得葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子。
2.根據權利要求I所述的葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子的制備方法，其特征在于，所述步驟SI中用lmol/L的氫氧化鈉溶液調節(jié)pH值至4. 9-5. 2，所述持續(xù)勻速攪拌為500rpm，所述逐滴滴入為I滴/秒的速率。
3.根據權利要求I所述的葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子的制備方法，其特征在于，所述步驟S2中所述水浴震蕩的震蕩速率為120rpm。
4.根據權利要求I所述的葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子的制備方法，其特征在于，所述步驟S3中透析純化使用的透析袋的截留分子量為8000-14000，透析時間為2小時。
5.根據權利要求I所述的葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子的制備方法，其特征在于，所述步驟S4中所述勻速攪拌的速度為200rpm ;所述透析去除未反應的葉酸使用截留分子量為8000-14000的透析袋。
6.—種葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子,其特征在于,采用權利要求1-5中任意一項所述的制備方法制得。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子及其制備方法，該方法包括以下步驟S1、采用三聚磷酸鈉制備物理交聯的殼聚糖納米粒子；S2、加入戊二醛溶液進行化學交聯；S3、殼聚糖納米粒子的透析純化；S4、殼聚糖納米粒子的葉酸修飾S5、Na2SO4誘導的復凝聚沉淀法制備含IP10質粒的葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子。本發(fā)明的葉酸修飾的殼聚糖包裹質粒納米粒子通過靜脈注射給藥后，經血液循環(huán)途徑直接靶向腫瘤局部，由于材料的體積優(yōu)勢，在體內可以降低粒子被網狀上皮系統(tǒng)清除速率，延長粒子在血液循環(huán)系統(tǒng)中的停留時間。
文檔編號A61K38/19GK102824306SQ20121033320
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月11日 優(yōu)先權日2012年9月11日
發(fā)明者盧小玲, 趙永祥 申請人:廣西醫(yī)科大學