使用蘆薈液制備蘆薈注射液針劑的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種使用蘆薈液制備蘆薈注射液針劑的方法，包括下述步驟：首先取蘆薈液100重量份加蒸餾水2000重量份進(jìn)行稀釋，將稀釋液攪拌均勻后進(jìn)行分離、過(guò)濾澄清；加鹽酸調(diào)節(jié)pH值至6.3-6.5，加熱到115℃后高溫滅菌30分鐘，自然冷卻；用鹽酸將冷卻液的pH調(diào)至4.2-4.5，經(jīng)超濾膜超濾，截留獲得分子量不大于10000Da的含藥溶液；然后藥液分裝入瓶，115℃-118℃滅菌30分鐘即可。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于突破了傳統(tǒng)的將蘆薈當(dāng)做排毒養(yǎng)顏通便產(chǎn)品的使用范圍，運(yùn)用現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)手段，將蘆薈制成蘆薈注射液，使其藥用領(lǐng)域拓寬到了對(duì)腫瘤等疾病的防治方面，試驗(yàn)證明，本發(fā)明制備的蘆薈注射液治療效果突出且無(wú)毒副作用。
【專利說(shuō)明】使用蘆薈液制備蘆薈注射液針劑的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及蘆薈產(chǎn)品，尤其是涉及一種使用蘆薈液制備蘆薈注射液針劑的方法。【背景技術(shù)】
[0002]蘆薈(Aloe)是一種多年生百合科肉質(zhì)的草本植物，是一種具有食用、美容、保健、醫(yī)藥以及觀賞等功能的植物。蘆薈化學(xué)成分復(fù)雜，已發(fā)現(xiàn)的成分超過(guò)160多種，主要有多糖、蒽醌類化合物、有機(jī)酸、氨基酸、酶和多肽、維生素、留族化合物、礦物質(zhì)、微量元素等有效活性成分。不同品種蘆薈的活性成分含量有明顯差別，即使是同一品種，不同產(chǎn)地、不同生長(zhǎng)期，不同采收季節(jié)，不同的加工方法，蘆薈的活性成分含量也有明顯差異。為了便于終端產(chǎn)品加工、使用、運(yùn)輸和銷售，通常將蘆薈鮮葉進(jìn)行全葉榨汁或去皮榨汁，蘆薈液是蘆薈行業(yè)最常見(jiàn)的原料之一。
[0003]目前蘆薈行業(yè)只有蘆薈罐頭(蘆薈丁)、蘆薈粉劑、蘆薈液等基礎(chǔ)原料，可以制造成蘆薈膠、蘆薈膠囊、蘆薈片劑、蘆薈口服液等蘆薈產(chǎn)品。口服蘆薈制品具有排毒養(yǎng)顏，潤(rùn)通腸胃，增強(qiáng)免疫功能等作用，但實(shí)際效果主要集中在通便功能上，對(duì)其他人體疾病沒(méi)有明顯改善和治療作用。該發(fā)明(使用蘆薈液制備蘆薈注射液針劑的方法)可以使蘆薈的應(yīng)用擴(kuò)大到醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，對(duì)腫瘤的抑制有很好的作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種使用蘆薈液制備蘆薈注射液針劑的方法，該蘆薈注射液針劑對(duì)多種腫瘤疾病具有較好的治療作用。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明可采取下述技術(shù)方案:
本發(fā)明所述的使用蘆薈液 制備蘆薈注射液針劑的方法，包括下述步驟:
第一步，取蘆薈液100重量份加蒸餾水2000重量份進(jìn)行稀釋，得稀釋液；
第二步，將稀釋液攪拌均勻后靜置過(guò)夜進(jìn)行分離；
第三步，將第二步分離后的上清液過(guò)濾澄清；
第四步，將第三步得到的濾液加鹽酸調(diào)節(jié)PH值至6.3-6.5，加熱到115°C后高溫滅菌30分鐘，然后自然冷卻；
第五步，用鹽酸將第四步得到的冷卻液的PH調(diào)至4.2-4.5，經(jīng)超濾膜超濾，截留獲得分子量不大于IOOOODa的含藥溶液；
第六步，將第五步得到的藥液分裝入瓶，115°C _118°C滅菌30分鐘即可。
[0006]所述蘆薈液的制備方法為:
第一步，將新鮮蘆薈葉浸泡30-60分鐘，清洗干凈后粉碎成蘆薈漿汁；
第二步，將蘆薈漿汁倒入加熱反應(yīng)罐中導(dǎo)入蒸汽加熱至15_20°C，同時(shí)按蘆薈漿汁總重量的0.125%加入果膠酶或蛋白酶，50-60分鐘后，將溫度升至75-80°C，并保溫3_5小時(shí)進(jìn)行滅活處理；
第三步，將第二步滅活處理后的汁液過(guò)濾，制成蘆薈液成品。[0007]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于突破了傳統(tǒng)的將蘆薈當(dāng)做排毒養(yǎng)顏通便產(chǎn)品的使用范圍，運(yùn)用現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)手段，將蘆薈制成蘆薈注射液，使其藥用領(lǐng)域拓寬到了對(duì)腫瘤等疾病的防治方面，試驗(yàn)證明，本發(fā)明制備的蘆薈注射液治療效果突出且無(wú)毒副作用。
【具體實(shí)施方式】
[0008]本發(fā)明所述的使用蘆薈液制備蘆薈注射液針劑的方法，包括下述步驟:
第一步，將新鮮蘆薈葉浸泡30-60分鐘，清洗干凈后去皮或連皮用食用不銹鋼破碎機(jī)粉碎成蘆薈漿汁；
第二步，將蘆薈漿汁倒入加熱反應(yīng)罐中導(dǎo)入蒸汽加熱至15-20°C，時(shí)間不超過(guò)60分鐘，同時(shí)按蘆薈漿汁總重量的0.125%加入果膠酶或蛋白酶，以促進(jìn)蘆薈的降解，60分鐘后，將溫度升至75-80°C，并保溫3-5個(gè)小時(shí)，進(jìn)行滅活處理；
第三步，將第二步滅活處理后的汁液過(guò)濾，制成蘆薈液成品；
第四步，取上述蘆薈液100重量份加蒸餾水2000重量份進(jìn)行稀釋，得稀釋液；
第五步，將稀釋液攪拌均勻(或超聲均質(zhì)15分鐘)后靜置過(guò)夜進(jìn)行分離；
第六步，將分離后的上清液過(guò)濾澄清；
第七步，將濾液用37%的鹽酸調(diào)節(jié)pH值至6.3-6.5，加熱到115°C后滅菌30分鐘，然后自然冷卻；
第八步，用37%的鹽酸將冷卻液的pH調(diào)至4.2-4.5，經(jīng)超濾膜超濾，截留獲得分子量不大于IOOOODa的含藥溶液；
第九步，將得到的藥液分別裝入250毫升的玻璃瓶中，充氮加熱到115°C_118°C滅菌30分鐘，即可得到注射液針劑成品。
[0009]本發(fā)明注射液的臨床使用效果試驗(yàn)如下:
一、體外抗腫瘤作用
1.實(shí)驗(yàn)材料
1.1樣品:本發(fā)明制備的注射液，呈淡棕色，澄清透明，規(guī)格:250ml瓶裝，含蘆薈有效成分8g?？砂磳?shí)驗(yàn)濃度直接加入培養(yǎng)體系。
[0010]1.2 試劑:RPM1-1640, DMEM (Gibco)，小牛血清(維森特，20130118)，
Trypsin (Amresco), MTT (Sigma) ,DMSO(Sigma)0
[0011]1.3細(xì)胞株:MDA-MB-231 (人乳腺癌細(xì)胞)，HPEG2 (人肝癌細(xì)胞)，B16F10 (黑色素瘤細(xì)胞)，A549 (人肺癌細(xì)胞)，MCF-7 (人乳腺癌細(xì)胞)，本實(shí)驗(yàn)室保存。
[0012]1.4儀器:GS_15R臺(tái)式冷凍離心機(jī)(Beckman) ；BP310s電子天平 (sartorius) ;Microfuge微量離心機(jī)(Beckman) ;DK_8D電熱恒溫水浴槽(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；MS1 Minishaker(IKA);層流架(蘇凈集團(tuán)安泰公司)；C02培養(yǎng)箱(Formascientific) ；Pureplus純水器(U.S.A) ;SW_CJ-1FD凈化工作臺(tái)(蘇凈集團(tuán)安泰公司)；Biotek Synerge 2 酶標(biāo)儀(Biotek) ; Zeiss AVIVO 型倒置顯微鏡(Zeiss);
2.實(shí)驗(yàn)方法
2.1接種細(xì)胞:用0.25%胰蛋白酶消化處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的腫瘤細(xì)胞，用含10%
胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液配成單個(gè)細(xì)胞懸液，以每孔2 X IO4個(gè)細(xì)胞接種于96孔板中，將培養(yǎng)板移入CO2孵箱中，在37°C、5%C02及飽和濕度條件下培養(yǎng)24小時(shí)后加藥。[0013]2.2加藥:終濃度每個(gè)濃度平行6孔，用培養(yǎng)基稀釋后加入(空白對(duì)照孔:
不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液；陰性對(duì)照孔:除不加藥物外，其余操作相同)，細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)。
[0014]2.3呈色:棄上清，每孔加200μ1新鮮配制的含0.4mg ml-1 MTT的無(wú)血清培 養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)4h，然后棄上清加200μ1 DMSO溶解MTT甲簪沉淀，用微型振蕩器振蕩混勻。
[0015]2.4比色:酶標(biāo)儀測(cè)定490nm處光密度值(以空白對(duì)照孔調(diào)零)，按下式計(jì) 算腫瘤細(xì)胞抑制率，
2.5細(xì)胞抑制率(%)=(對(duì)照組OD值一試驗(yàn)組OD值)/對(duì)照組OD值X 100%,
并計(jì)算預(yù)測(cè)IC50值(半數(shù)抑制濃度)。
[0016]3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果
從結(jié)果可以看出，MDA-MB-231、HPEG2、MCF-7細(xì)胞對(duì)受試樣品較為敏感，其IC50值分別% 70.6 μ g/ml,275.3 μ g/ml 和 224.6 μ g/ml ;而 B16F10 和 A549 細(xì)胞的敏感性則較低，其 IC50 值分別為 1857.2 μ g/ml 和 965.4 μ g/ml。
[0017]總得來(lái)看，在體外培養(yǎng)體系中對(duì)部分腫瘤細(xì)胞(如HPEG2、MCF-7)顯示較強(qiáng)的抑制作用，而對(duì)B16F10和A549則表現(xiàn)的抑制作用較低。
[0018]
【權(quán)利要求】
1.一種使用蘆薈液制備蘆薈注射液針劑的方法，其特征在于:包括下述步驟: 第一步，取蘆薈液100重量份加蒸餾水2000重量份進(jìn)行稀釋，得稀釋液； 第二步，將稀釋液攪拌均勻后靜置過(guò)夜進(jìn)行分離； 第三步，將第二步分離后的上清液過(guò)濾澄清； 第四步，將第三步得到的濾液加鹽酸調(diào)節(jié)PH值至6.3-6.5，加熱到115°C后高溫滅菌30分鐘，然后自然冷卻； 第五步，用鹽酸將第四步得到的冷卻液的PH調(diào)至4.2-4.5，經(jīng)超濾膜超濾，截留獲得分子量不大于IOOOODa的含藥溶液； 第六步，將第五步得到的藥液分裝入瓶，115°C _118°C滅菌30分鐘即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的使用蘆薈液制備蘆薈注射液針劑的方法，其特征在于:所述蘆薈液的制備方法為: 第一步，將新鮮蘆薈葉浸泡30-60分鐘，清洗干凈后粉碎成蘆薈漿汁； 第二步，將蘆薈漿汁倒入加熱反應(yīng)罐中導(dǎo)入蒸汽加熱至15_20°C，同時(shí)按蘆薈漿汁總重量的0.125%加入果膠酶或蛋白酶，50-60分鐘后，將溫度升至75-80°C，并保溫3_5小時(shí)進(jìn)行滅活處理； 第三步，將第二步滅活處理后的汁液過(guò)濾，制成蘆薈液成品。
【文檔編號(hào)】A61K9/08GK103463378SQ201310405920
【公開(kāi)日】2013年12月25日 申請(qǐng)日期:2013年9月9日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月9日
【發(fā)明者】張冰, 陸大杰 申請(qǐng)人:開(kāi)封九福來(lái)生物技術(shù)有限公司