一種馬齒莧子總黃酮樹(shù)脂純化方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種維吾爾中草藥：馬齒莧子的總黃酮樹(shù)脂純化方法，是以大孔樹(shù)脂吸附法將馬齒莧子提取液經(jīng)上柱、洗脫、收集洗脫液、濃縮、干燥，獲得純化的馬齒莧子總黃酮。本發(fā)明提供的馬齒莧子總黃酮樹(shù)脂純化方法，采用干法上樣，是一種簡(jiǎn)單、便捷的方法。所選的大孔樹(shù)脂具有吸附量大、解吸率大。本發(fā)明方法以乙醇為溶劑，既廉價(jià)又無(wú)毒。用本發(fā)明方法純化馬齒莧子提取物，其總黃酮轉(zhuǎn)移率可達(dá)90%以上，純化物總黃酮含量可達(dá)60%以上，且重現(xiàn)性好，樹(shù)脂可重復(fù)使用。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種馬齒莧子總黃酮樹(shù)脂純化方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及維吾爾藥成分純化方法，主要涉及維吾爾藥提取物的純化方法，尤其涉及馬齒莧子總黃酮的純化方法，屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]在新疆，維吾爾傳統(tǒng)醫(yī)藥至今廣泛流傳。新疆具有獨(dú)特的地理環(huán)境和氣候條件，因而蘊(yùn)育了豐富的維吾爾藥材資源。馬齒莧子為馬齒莧科植物馬齒莧的干燥種子，夏秋果實(shí)成熟時(shí)采收全株曬干，抖動(dòng)后收集落下的種子。本品扁圓形或因腎形，長(zhǎng)約0.94_，寬
0.83mm，厚約0.42mm。表黑色，少數(shù)紅棕色，于解剖鏡下可見(jiàn)密布細(xì)小庇狀突起。一端有一凹陷，凹陷旁有一白色種臍。質(zhì)堅(jiān)硬，難破碎。味微酸。以粒飽滿(mǎn)，色黑者為佳。清涼生津，利尿止渴，降低機(jī)體膽液質(zhì)的偏旺。用于治療熱性疾患，胃病，頭痛，子宮炎癥，腦膜炎，尿道炎及熱性臺(tái)甫。研究認(rèn)為馬齒莧子的這些作用與黃酮類(lèi)成分有密切關(guān)系。馬齒莧子總提取物由于成分復(fù)雜而使制成的制劑不可避免地存在粗、大、黑的缺點(diǎn)，且總提取物中還因含有較多的糖類(lèi)而具有較大的吸濕性，限制了其劑型的選擇。因此對(duì)馬齒莧子總黃酮進(jìn)行純化，使純化后的產(chǎn)品符合中藥新劑型的需要具有重要的意義。
[0003]中藥中黃酮類(lèi)化合物的純化，傳統(tǒng)采用溶劑萃取法、聚酰胺和硅膠柱層析法，但是溶劑萃取法操作麻煩，萃取過(guò)程又易乳化，所有有機(jī)溶劑，如氯仿、乙酸乙醋、正丁醇有不同程度的毒性，且用氯仿萃取，只能得到黃酮總量的40%;用乙酸乙醋萃取，也只能得到總量的50% ;用正丁醇萃取也僅得到總量的40%左右，因此需要用上述幾種溶劑依次萃取才能使總黃酮基本萃取完全。聚田先肢純化；去對(duì)馬齒莧子總黃酮的不可逆吸附達(dá)40%，因此其率低，且洗脫麻煩。硅膠純化法對(duì)黃酮的不可逆吸附達(dá)60%，得率更低。因此上述三種法在馬齒莧子總黃酮純化中，均不理想。而同時(shí)基于大孔樹(shù)脂在中藥純化中應(yīng)用日漸廣泛，己用于純化黃酮、皂苷、生物堿等中藥成分，大孔樹(shù)脂種類(lèi)日益增多，在傳統(tǒng)DIOl、D102樹(shù)脂的基礎(chǔ)上，己開(kāi)發(fā)了各種不同性能的大孔樹(shù)脂，如，天津農(nóng)藥股份公司樹(shù)脂分公司生產(chǎn)的D-1Ol、DA201、DM301，河北滄州寶恩化工有限公司的HPD系列，以及南開(kāi)大學(xué)化工廠生產(chǎn)的AB-8、D3520等。可以考慮采用大孔樹(shù)脂對(duì)其進(jìn)行提純。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對(duì)現(xiàn)有馬齒莧子中總、黃酮的提取與純化方法上存在的不足之處，本發(fā)明提供一種全新的馬齒莧子中總黃酮的提取與純化方法，主要用樹(shù)脂對(duì)馬齒莧子進(jìn)行柱提純，采用這種方法，降低了有機(jī)溶劑在整個(gè)提純過(guò)程中的應(yīng)用，防止了有機(jī)溶劑對(duì)最終產(chǎn)物的影響，本發(fā)明方法純化馬齒莧子，其總黃國(guó)同轉(zhuǎn)移率可達(dá)90%以上，純化物總黃酮含量可達(dá)55%以上，且重現(xiàn)性好，樹(shù)脂可重復(fù)使用。
[0005]本發(fā)明所述的技術(shù)方案如下:一種馬齒莧子總黃酮樹(shù)脂純化方法，由以下具體步驟組成:
1)取粉碎的馬齒莧子，以體積分?jǐn)?shù)為40%乙醇為溶劑，浸泡12小時(shí)，以藥材質(zhì)量10倍體積量的體積分?jǐn)?shù)為40%乙醇為提取劑，加熱至回流提取，收集提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液；
2)將步驟I得到的提取液濃縮到每毫升含提取物20mg，選用HPD-400或HPD-600或AB-8或DlOl大孔樹(shù)脂，上樣，上樣吸附0.1- 2.0小時(shí)，先水洗，水洗體積為IBV -3BV，水洗流速為lBV/h -3BV/h，然后用乙醇洗脫，洗脫用乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%-80%，洗脫量為 IBV -4BV，洗脫速度為 2BV/h -4BV/h ；
3)收集步驟2的乙醇洗脫液，濃縮，50°C真空干燥，得干燥的純化產(chǎn)品。
[0006]本發(fā)明提供的馬齒莧子總黃酮樹(shù)脂純化方法步驟2中優(yōu)選HPD-400大孔樹(shù)脂對(duì)濃縮液進(jìn)行純化，優(yōu)選工藝條件為:上樣吸附時(shí)間為1.0小時(shí)，水洗體積為113V，水洗流速為2BV/h，洗脫劑為乙醇，洗脫用乙醇濃度為60%，乙醇洗脫量為2BV，乙醇洗脫速度為2BV/h。本發(fā)明提供的馬齒莧子總黃酮樹(shù)脂純化方法步驟2中提取液濃縮物為透明狀棕黃色液體或含有懸浮態(tài)棕黃色絮狀顆粒的透明狀棕黃色液體。
[0007]本發(fā)明提供的馬齒莧子總黃酮樹(shù)脂純化方法步驟2中濃縮液上樣的方式是干法上樣，上樣體積與大孔樹(shù)脂質(zhì)量比值為:5: 1-10:1。優(yōu)選濃縮液上樣體積比大孔樹(shù)脂質(zhì)量為:8:1。干法上樣可以使未溶解的樣品與樹(shù)脂充分混合均勻，吸附的更加充分。上樣體積與大孔樹(shù)脂質(zhì)量比值太大樹(shù)脂吸收飽和且有剩余，浪費(fèi)濃縮液。上樣體積與大孔樹(shù)脂質(zhì)量比值太小，大孔樹(shù)脂利用不完全有浪費(fèi)。
[0008]本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn): 1.本發(fā)明提供的馬齒莧子總黃酮樹(shù)脂純化方法操作簡(jiǎn)單、快捷；
2.所選的大孔樹(shù)脂具有吸附量大、解吸率大的功能；
3.濃縮液上樣的方式是干法上樣，使未溶解的樣品與樹(shù)脂充分混合均勻，吸附的更加充分；
4.以乙醇為溶劑和洗脫劑，價(jià)廉、無(wú)毒；
5.本發(fā)明方法純化馬齒莧子，其總黃酮轉(zhuǎn)移率可達(dá)90%以上，純化物總黃酮含量可達(dá)55%以上，且重現(xiàn)性好，樹(shù)脂可重復(fù)使用。
[0009]【具體實(shí)施方式】:
為了更好理解本發(fā)明的技術(shù)方案，以下通過(guò)具體的實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0010]實(shí)施例1
一種馬齒莧子總黃酮樹(shù)脂純化方法，具體步驟如下:
1)取粉碎的馬齒莧子50g，以體積分?jǐn)?shù)為40%乙醇為溶劑，浸泡12小時(shí)，以藥材質(zhì)量10倍體積量的體積分?jǐn)?shù)為40%乙醇為提取劑，加熱至回流提取，收集提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液；
2)將提取液濃縮到每毫升含提取物20mg，選用DlOl大孔樹(shù)脂，上樣體積與大孔樹(shù)脂質(zhì)量比值為8:1干法上樣，上樣吸附1.0小時(shí)，先用2BV蒸館水水洗，水洗流速為2BV/ h，然后用3BV體積分?jǐn)?shù)為50%乙醇洗脫，洗脫速度為2BV/h ；
3)將收集的乙醇洗脫液，濃縮，50°C真空干燥，得干燥的純化產(chǎn)品3.58g。
[0011]實(shí)施例2
四種樹(shù)脂對(duì)馬齒莧子總黃酮的靜態(tài)吸附與解吸試驗(yàn)
稱(chēng)取Ig干樹(shù)脂，分別裝入100ml錐形瓶中，各加入濃度為10mg/ml 的樣品溶液20ml。每隔IOmin振蕩10s，持續(xù)2h，靜止24h，使其達(dá)到飽和吸附，抽濾，取濾液1.0ml，按標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)項(xiàng)下操作，求得樣品的黃酮含量。按下式計(jì)算樹(shù)脂吸附量:
吸附量=[初始質(zhì)量濃度剩余質(zhì)量濃度]X溶液體積/樹(shù)脂量將濾出的樹(shù)脂另置100ml錐形瓶中，加入70%乙醇20ml，每隔IOmin振蕩10s，持續(xù)2h，抽濾，取濾液1.0ml，按標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)項(xiàng)下操作，求得樣品的黃酮含量。按下式計(jì)算解吸率(% ):
解吸率=[解吸液濃度X解吸液體積]/吸附量X 100%
表1四種樹(shù)脂靜態(tài)飽和吸附量及靜態(tài)洗脫率測(cè)定結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.一種馬齒莧子總黃酮純化方法，其特征是:其純化步驟為: 1)取粉碎的馬齒莧子，以體積分?jǐn)?shù)為40%乙醇為溶劑，浸泡12小時(shí)，以藥材質(zhì)量10倍體積量的體積分?jǐn)?shù)為40%乙醇為提取劑，加熱至回流提取，收集提取液，減壓回收乙醇，得濃縮液； 2)將步驟I得到的提取液濃縮到每毫升含提取物20噸，選用HPD-400或HPD-600或AB-8或DlOl大孔樹(shù)脂，上樣，上樣吸附0.1-2.0小時(shí)，先水洗，水洗體積為1BV-3BV，水洗流速為lBV/h -3BV /h，然后用乙醇洗脫，洗脫用乙醇體積分?jǐn)?shù)為50%- 80%，洗脫量為1BV-4BV，洗脫速度為 2BV/h-4BV/h ； 3)收集步驟2的乙醇洗脫液，濃縮，50°C真空干燥，得干燥的純化產(chǎn)品。
2.如權(quán)利要求1所述的馬齒莧子總黃酮純化方法，其特征是:提取液濃縮物為透明狀棕黃色液體或含有懸浮態(tài)棕黃色絮狀顆粒的透明狀棕黃色液體。
3.如權(quán)利要求1所述的馬齒莧子總黃酮純化方法，其特征是:濃縮液上樣的方式是干法上樣，上樣體積與大孔樹(shù)脂質(zhì)`量比值為:5:1 - 10:1。
【文檔編號(hào)】A61K36/185GK103550269SQ201310588394
【公開(kāi)日】2014年2月5日 申請(qǐng)日期:2013年11月21日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月21日
【發(fā)明者】不公告發(fā)明人 申請(qǐng)人:青島農(nóng)業(yè)大學(xué)