含有西洛他唑及銀杏葉提取物作為有效成分的聽(tīng)覺(jué)障礙預(yù)防或治療用藥物組合物的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及含有西洛他唑及銀杏葉提取物作為有效成分的用于預(yù)防或治療聽(tīng)覺(jué)障礙的藥物組合物，所述藥物組合物抑制由于活性氧(ROS)生成引起的聽(tīng)覺(jué)細(xì)胞的凋亡，從而能夠有效預(yù)防或治療噪聲性聽(tīng)覺(jué)障礙或耳毒性聽(tīng)覺(jué)障礙。
【專(zhuān)利說(shuō)明】含有西洛他唑及銀杏葉提取物作為有效成分的聽(tīng)覺(jué)障礙預(yù) 防或治療用藥物組合物

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及含有西洛他唑及銀杏葉提取物作為有效成分的用于預(yù)防或治療聽(tīng)覺(jué) 障礙的藥物組合物。

【背景技術(shù)】
[0002]聽(tīng)覺(jué)障礙是由于多種原因引起的聽(tīng)覺(jué)上的異常，是指聽(tīng)力下降或喪失的狀態(tài)，耳 朵由外耳（耳廓至鼓膜）、中耳（鼓膜至耳蝸入口）及內(nèi)耳（耳蝸內(nèi)部）組成，其中只要有 一處發(fā)生問(wèn)題就會(huì)導(dǎo)致聽(tīng)覺(jué)障礙。聽(tīng)覺(jué)障礙分為外耳和中耳的損傷引起的聽(tīng)覺(jué)障礙（傳導(dǎo) 性聽(tīng)覺(jué)障礙）及內(nèi)耳和聽(tīng)覺(jué)神經(jīng)系統(tǒng)損傷引起的聽(tīng)覺(jué)神經(jīng)障礙（感覺(jué)神經(jīng)性聽(tīng)覺(jué)障礙），外 耳及中耳損傷引起的聽(tīng)覺(jué)障礙只要治療上述損傷就可以使聽(tīng)覺(jué)障礙恢復(fù)，但是內(nèi)耳和聽(tīng)覺(jué) 神經(jīng)系統(tǒng)損傷引起的聽(tīng)覺(jué)障礙即使治療了上述損傷時(shí)也多數(shù)情況下無(wú)法恢復(fù)，因此給患者 帶來(lái)很大的不便。
[0003]所述內(nèi)耳及神經(jīng)系統(tǒng)損傷引起的聽(tīng)覺(jué)障礙可分為老年性聽(tīng)覺(jué)障礙、小兒聽(tīng)覺(jué)障 礙、梅尼埃病、突發(fā)性聽(tīng)覺(jué)障礙、噪聲性聽(tīng)覺(jué)障礙、耳毒性聽(tīng)覺(jué)障礙等，其中噪音引起的噪聲 性聽(tīng)覺(jué)障礙及藥物引起的耳毒性聽(tīng)覺(jué)障礙最為普遍。
[0004]噪聲性聽(tīng)覺(jué)障礙（noise-induced hearing loss ;acoustic trauma)在聽(tīng)力損 失和耳蝸病變的形態(tài)發(fā)面與耳毒性聽(tīng)覺(jué)障礙非常相似。噪聲性聽(tīng)覺(jué)障礙是因?yàn)楸┞队趶?qiáng) 噪音，聽(tīng)覺(jué)細(xì)胞受到氧化應(yīng)激，結(jié)果生成活性氧（Mh壽包紐S巹(reactive oxygen species，ROS)，所生成的ROS誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡（apopt〇si s)而發(fā)生。暴露于強(qiáng)噪音后，細(xì)胞 損傷程度由細(xì)胞的抗氧化狀態(tài)而決定，可以通過(guò)增進(jìn)抗氧化狀態(tài)并使之維持，從而減少損 傷的程度。但是，事實(shí)上到目目U為止還沒(méi)有開(kāi)發(fā)出能夠預(yù)防或治療噪聲性聽(tīng)覺(jué)障礙的藥物。 [000 5]耳毒性（ototoxicity)聽(tīng)覺(jué)障礙是由于使用耳毒性藥物而發(fā)生的副作用，已知氨 基糖苷（aminoglycoside)抗生素及一些抗癌劑等誘發(fā)耳毒性。
[0006]熱基糖音類(lèi)抗生素有鏈霉素（streptomycin)、卡那霉素 （kanamy cin)、慶大霉 素（gentamicin)、新霉素（neomycin)、阿米卡星（ami kac in)、妥布霉素（tobramycin)、 奈替米星（netilmicin)、地貝卡星（dibekacin)、紫蘇霉素（sisomycin)、利波多麥星 (Iivodomycin)等。氨基糖苷抗生素主要用于與普通抗生素不太反應(yīng)的革蘭氏陰性菌感染、 結(jié)核、深部感染等。氨基糖苷抗生素在長(zhǎng)期給藥或部分情況下短期給藥時(shí)顯示耳毒性副作 用。氨基糖苷抗生素通過(guò)結(jié)合于細(xì)菌 3OS核糖體亞單位而抑制蛋白合成，從而顯示出抗菌 作用，這種氨>基糖苷抗生素持續(xù)暴露在耳蝸細(xì)胞（cochlear cell)時(shí)，科爾蒂（corti)器官 的外毛細(xì)胞（outer hair cell)和感覺(jué)毛細(xì)胞（sensory hair cell)會(huì)凋亡。凋亡機(jī)制已 知為氨基糖苷抗生素和Ca2+復(fù)合體形成的活性氧而引起。
[0007]此外，誘發(fā)耳毒性的抗癌劑可以例舉順鉑（Cisplatin)和卡鈾（C arboplatin)。 [0008]順鉑（順一二胺二氯鉑（II )，CDDP)是用于治療包括乳癌、膀胱癌、胃癌、宮頸癌、 頭頸部癌等多種腫瘤的抗腫瘤藥物。
[0009]順鉑是含有鉑的重金屬化合物，以鉑原子為中心以順勢(shì)（Cis)形式結(jié)合有2個(gè)氯 原子和2個(gè)氨分子，與DNA鏈上的2個(gè)相鄰鳥(niǎo)嘌呤結(jié)合，形成鏈內(nèi)交聯(lián)，從而抑制DNA合 成。即，已知為順?shù)N附著在存在于癌細(xì)胞的核內(nèi)的DNA雙重螺旋結(jié)構(gòu)，阻礙 DNA的復(fù)制，由 此抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)及增殖，從而顯示出抗癌效果。但是順鉬由于耳毒性（Qtotoxicity)聽(tīng) 覺(jué)障礙等嚴(yán)重副作用而在臨床上的使用受到限制。實(shí)際上已知，使用順拍治療頭頸部癌的 多數(shù)患者經(jīng)受耳毒性聽(tīng)覺(jué)障礙。這種耳毒性在初期顯現(xiàn)為高頻聽(tīng)力損失，但是漸進(jìn)地不僅 引起全頻聽(tīng)力損失，還誘發(fā)平衡異常等前庭功能降低。順鉬顯示耳毒性聽(tīng)覺(jué)障礙的機(jī)制已 知為活性氧（ROS)的增加和由此導(dǎo)致的脂質(zhì)過(guò)氧化及 DNA的損傷等。目前為了預(yù)防耳毒性 聽(tīng)覺(jué)障礙，正在研究硫代硫酸鈉等巰基類(lèi)藥物；N-乙酰半胱氨酸、D-及L-蛋氨酸、氟桂嗪 (flunar izin)等鈣通道阻斷劑；半胱天冬酶（caspase)抑制劑等，但實(shí)情是還沒(méi)有實(shí)用化 的藥物。因此需要能夠預(yù)防耳毒性藥物引起的副作用耳毒性聽(tīng)覺(jué)障礙的有效的方法及藥 物。
[0010]如上所述，噪聲性聽(tīng)覺(jué)障礙及耳毒性聽(tīng)覺(jué)障礙被認(rèn)為是由于噪音及耳毒性藥物生 成ROS誘發(fā)細(xì)胞凋亡而發(fā)生。因此能夠有效抑制活性氧生成的物質(zhì)可以成為顯示出耳毒性 的預(yù)防或治療效果的候選物質(zhì)。
[0011] 此外，西洛他唑（cilostazol)是強(qiáng)力的選擇性磷酸二酯酶in型（PDE III)抑制 劑，表不為6-[4-(1-環(huán)己基-IH-四唑-5-基）丁氧基]-3,4-二氫-2-(lH)-喹啉。西洛 他唑可以用作血小板凝集抑制劑及血管擴(kuò)張劑，主要用于治療末梢動(dòng)脈疾病及間歇性跛行 患者。
[0012] 此外，銀杏葉提取物（Ginkgo biloba Extract，GbE)是由24%的類(lèi)黃酮和6%的 萜類(lèi)構(gòu)成，已知對(duì)支氣管哮喘和支氣管炎、末梢血液障礙及腦功能不全等有效。
[0013]目前已經(jīng)公知包含上述兩種物質(zhì)的復(fù)合制劑的抗血栓用途（參照韓國(guó)專(zhuān)利第 10-0963268及韓國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)第10_2〇1〇-0040281號(hào)），所述復(fù)合制劑作為抗凝劑、抗血小板 劑及血栓溶解劑而在市售。
[0014] 本發(fā)明發(fā)明人對(duì)含有西洛他唑和銀杏葉提取物的復(fù)合制劑進(jìn)行研究的過(guò)程中，確 認(rèn)了所述制劑能夠有效預(yù)防或治療聽(tīng)覺(jué)障礙，由此完成了本發(fā)明。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0015] 發(fā)明概述
[0016] 從而，本發(fā)明的目的在于提供能夠預(yù)防或治療聽(tīng)覺(jué)障礙的藥物組合物。
[0017] 本發(fā)明的另一目的在于，提供能夠預(yù)防或治療聽(tīng)覺(jué)障礙的藥物制劑。
[0018]本發(fā)明的又一目的在于，提供耳毒性聽(tīng)覺(jué)障礙改善的含有氨基糖苷抗生素的抗生 組合物。
[0019] 本發(fā)明的再一目的在于，提供耳毒性聽(tīng)覺(jué)障礙改善的含有耳毒性抗癌劑的抗癌用 組合物。
[0020] 根據(jù)上述目的，本發(fā)明提供含有西洛他唑和銀杏葉提取物作為有效成分的用于預(yù) 防或治療聽(tīng)覺(jué)障礙的藥物組合物。
[0021] 根據(jù)上述另一目的，本發(fā)明提供含有西洛他唑和銀杏葉提取物作為有效成分的用 于預(yù)防或治療聽(tīng)覺(jué)障礙的藥物制劑。
[0022]根據(jù)上述又一目的，本發(fā)明提供含有西洛他唑和銀杏葉提取物及氨基糖苷抗生素 作為有效成分的耳毒性聽(tīng)覺(jué)障礙改善的抗生組合物。
[0023]根據(jù)上述再一目的，本發(fā)明提供含有西洛他唑和銀杏葉提取物及耳毒性抗癌劑作 為有效成分的耳毒性聽(tīng)覺(jué)障礙改善的抗癌用組合物。
[0024]含有西洛他唑及銀杏葉提取物作為有效成分的本發(fā)明的藥物組合物能夠抑制活 性氧（ROS)的生成引起的聽(tīng)覺(jué)細(xì)胞的凋亡，從而能夠治療噪聲性聽(tīng)覺(jué)障礙或耳毒性聽(tīng)覺(jué)障 礙。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0025]本發(fā)明的上述及其他目的和特征，通過(guò)隨附的附圖及對(duì)本發(fā)明的說(shuō)明將更加明 確：
[0026]圖1是向大鼠單獨(dú)施用順鉬，或組合雷那新（renexin)、銀杏葉提取物或西洛他唑 施用后，在16KHz(上部圖表）和32KHz(下部圖表）測(cè)定的聽(tīng)力閾值（hearing threshold) 的結(jié)果的圖表。各個(gè)圖中，Pre是表示施用藥物之前，P-5表示開(kāi)始施用順鉑5天之后， a至 e表示實(shí)施例<1-2>的第一組至第五組。
[0027]圖2是向大鼠單獨(dú)施用順鉑，或組合雷那新、銀杏葉提取物或西洛他唑施用后，通 過(guò)懸尾試驗(yàn)測(cè)定頭部旋轉(zhuǎn)次數(shù)的結(jié)果的圖表。圖2中Pre、P-5、a至e分別與圖1中說(shuō)明的 相同。
[0028]圖3是向大鼠單獨(dú)施用順鉑，或組合雷那新、銀杏葉提取物或西洛他唑施用后，通 過(guò)游泳試驗(yàn)測(cè)定的游泳時(shí)間（秒）的圖表。圖3中Pre、P-5、a至e分別與圖1中說(shuō)明的相 同。
[0029]圖4是向大鼠單獨(dú)施用順鉑，或組合雷那新、銀杏葉提取物或西洛他唑施用后，用 掃描電子顯微鏡（SEM)對(duì)柯蒂氏器官的中部（m iddle turn，上部圖）和底部（basal turn， 下部圖）進(jìn)行拍攝的截面圖。圖4中a至e分別與圖1中說(shuō)明的相同。
[0030]圖5是向大鼠單獨(dú)施用順鉑，或組合雷那新、銀杏葉提取物或西洛他唑施用后，測(cè) 定柯蒂氏器官的中部（middle turn，上部圖）和底部（basal turn，下部圖）的外毛細(xì)胞 (outer hair cell, 0HC)的數(shù)量的結(jié)果的圖表。圖5中a至e分別與圖1中說(shuō)明的相同。 [0031]圖6是向大鼠單獨(dú)施用順鈾，或組合雷那新、銀杏葉提取物或西洛他唑施用后，用 掃描電子顯微鏡（SEM)對(duì)球囊（saccule,上部圖）和小囊（utricle，下部圖）進(jìn)行拍攝的 截面圖。圖6中3至6分別與圖1中說(shuō)明的相同。
[0032]圖7是向大鼠單獨(dú)施用順鉑，或組合雷那新、銀杏葉提取物或西洛他唑施用后，測(cè) 定球囊和小囊的毛細(xì)胞（hair cell, HC)的數(shù)量的結(jié)果的圖表。上部圖是球囊的毛細(xì)胞數(shù) 量，下部圖是小囊的毛細(xì)胞數(shù)量。圖7中a至e分別與圖1中說(shuō)明的相同。
[0033]圖8是向聽(tīng)覺(jué)細(xì)胞系HEI-OCl處理20 ii M的順鉑后，通過(guò)MTS分析法測(cè)定細(xì)胞存 活率（％)的圖表。
[0034]圖9是表示向HEI-OCl細(xì)胞處理不同濃度的雷那新（a:3. 5、b:7.0、c: 14. 1、 d:28_ l、e:56. 3、f: 122. 5、g:225_ 0、h:450_ 0 及 i:900_ Ou g/ml)后，通過(guò) MTS 分析法測(cè)定的 吸光度的圖表。
[0035] 圖10是表示處理不同濃度的雷那新（a:3. 5、b:7. 0、c: 14. 1、d:28. 1、e:56. 3、 f: 122_ 5、g:225. 0、h:450. O 及 i :900. O u g/ml)和 20 u M 的順鈾后，通過(guò) MTS 分析法測(cè)定的 吸光度的圖表。
[0036]圖11表示向JEI-OCl細(xì)胞處理雷那新、CDDP和雷那新+CDDP后，用膜聯(lián)蛋白 V-FITC/碘化丙陡（PI)染色，并用流式細(xì)胞分析儀（fl〇w Cyt〇meter)分析的結(jié)果。圖Ii 的上部圖表示流式細(xì)胞分析結(jié)果，下部圖表示細(xì)胞凋亡率（％ )。
[0037]圖12是向HEI-OCl細(xì)胞處理雷那新、CDDP和雷那新+CDDP后，利用免疫印跡試驗(yàn) 測(cè)定細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞蛋白聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶（PARP)、BCL-XL、BAX、細(xì)胞色素C、剪 切的半胱天冬酶3 (cleaved caspaSe3)、ERK及JNK的表達(dá)量的結(jié)果。上部圖表表示各信^ 傳遞蛋白的表達(dá)量，下部圖是免疫印跡試驗(yàn)的照片。
[0038] 圖13是向HEI-OCl細(xì)胞處理CDDP和雷那新+CDDP后，利用熒光顯微鏡觀察活性 氧（ROS)的照片。
[0039] 發(fā)明詳述
[0040]本發(fā)明提供含有西洛他唑及銀杏葉提取物作為有效成分的用于預(yù)防或治療聽(tīng)覺(jué) 障礙的藥物組合物。
[0041]本發(fā)明的藥物組合物中使用的西洛他唑是具有6-[4-(1_環(huán)己基-IH-四 唑_5_基）丁氧基]_3, 4-二氫_2_ (IH)-喹啉的化合物名稱(chēng)的物質(zhì)，可以使用現(xiàn)在市售的 藥物。此外，本發(fā)明中使用的銀杏葉提取物是通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的工序提取的，可以 通過(guò)使用水和低級(jí)醇或低級(jí)酮的混合溶劑的傳統(tǒng)溶劑提取法、先用堿性水溶液提取后再用 低級(jí)醇和低級(jí)乙酸酯或低級(jí)酮的混合溶劑提取的方法，或超臨界提取等已知的任何方法提 取也無(wú)妨，這樣提取的銀杏葉提取物優(yōu)選含有主成分黃酮苷為15重量％以上的，尤其是優(yōu) 選含有黃酮苷及萜內(nèi)酯的。
[0042] 在一具體例中，本發(fā)明的藥物組合物可以以1:0. 1-1:4. 8的重量比包含西洛他唑 及銀杏葉提取物。優(yōu)選具體例中，本發(fā)明的藥物組合物可以以1:0.8的重量比包含西洛他 唑及銀杏葉提取物
[0043]本發(fā)明的藥物組合物的特征為預(yù)防或治療聽(tīng)覺(jué)障礙。在一實(shí)施例中，本發(fā)明的藥 物組合物能夠預(yù)防或治療噪音引起的聽(tīng)覺(jué)障礙（稱(chēng)為噪聲性聽(tīng)覺(jué)障礙）。在另一實(shí)施例中， 本發(fā)明的藥物組合物能夠預(yù)防或治療施用耳毒性藥物引起的聽(tīng)覺(jué)障礙（稱(chēng)為耳毒性聽(tīng)覺(jué) 障礙）。
[0044]所述耳毒性藥物包括氨基糖苷抗生素及抗癌劑，優(yōu)選地，可以選自鏈霉素、卡那 霉素、慶大霉素、新霉素、阿米卡星、妥布霉素、奈替米星、地貝卡星、紫蘇霉素、利波多麥星 (Iivodomycin)及順怕和卡鉑中的任意一種以上。
[0045]本發(fā)明實(shí)施例中公開(kāi)了本發(fā)明藥物組合物對(duì)代表性耳毒性藥物順怕引起的耳毒 性聽(tīng)覺(jué)障礙的效果。但是，上述的藥物通過(guò)與順鉑類(lèi)似的機(jī)制，即生成活性氧誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡 從而引起耳毒性聽(tīng)覺(jué)障礙，因此本領(lǐng)域技術(shù)人員可以知道本發(fā)明的藥物組合物對(duì)除了順鈾 之外的耳毒性藥物引起的耳毒性聽(tīng)覺(jué)障礙會(huì)顯示同樣的效果。此外，噪聲性聽(tīng)覺(jué)障礙也具 有與耳毒性聽(tīng)覺(jué)障礙相同的機(jī)制，因此可以知道本發(fā)明的藥物組合物對(duì)噪聲性聽(tīng)覺(jué)障礙也 具有同樣的效果。
[0046] 具體而言，以大鼠作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象的體內(nèi)（in vivo)研究中，施用順鉬時(shí)會(huì)發(fā)生聽(tīng)力 功能及前庭功能降低的耳毒性副作用。但是，施用本發(fā)明的藥物組合物時(shí)，聽(tīng)力功能及前庭 功能降低幅度顯著減少。此外，從形態(tài)學(xué)分析結(jié)果可以知道，與使用順鉑時(shí)毛細(xì)胞損傷且其 數(shù)量減少的情況相比，施用本發(fā)明的藥物組合物時(shí)，能夠阻止毛細(xì)胞損傷及其數(shù)量的減少 (參照實(shí)施例1及2)。
[0047] 尤其，本發(fā)明的藥物組合物在預(yù)防或治療耳毒性聽(tīng)覺(jué)障礙方面，相比單獨(dú)使用西 洛他唑及銀杏葉提取物具有更顯著的上升效果。
[0048] 本發(fā)明的藥物組合物可以劑型化為適合于經(jīng)腸給藥，即口服給藥的藥物制劑。所 述制劑可以是片劑、泡騰片劑、顆粒劑或膠囊劑的形態(tài)。所述藥物制劑優(yōu)選為單位給藥劑 型，此時(shí)各給藥劑型含有規(guī)定量的西洛他唑和銀杏葉提取物，此外可以根據(jù)通常的藥劑學(xué) 方法選擇與適當(dāng)?shù)南♂寗?、載體或其他賦形劑一起混合而劑型化。例如，片劑除了活性填充 劑之外，還可以含有通常的顆?；瘎⑾♂寗?、結(jié)合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、穩(wěn)定化劑、著色劑、 遮光劑、甜味劑及調(diào)味劑。此外，如果藥物之間的相互作用而使得穩(wěn)定性變差時(shí),可以使用 制備分層片劑等其它的制劑化工藝。
[0049] 本發(fā)明的藥物制劑以單位制劑為準(zhǔn)，可以含有50-100mg的西洛他唑以及40_80mg 的銀杏葉提取物，優(yōu)選含有IOOmg的西洛他唑和80mg的銀杏葉提取物。根據(jù)本發(fā)明的藥物 制劑1日給藥量可以根據(jù)給藥方法或治療條件而有所不同，但是經(jīng)口給藥時(shí)優(yōu)選為每日給 藥2-4次。
[0050] 此外，本發(fā)明提供含有西洛他唑、銀杏葉提取物及氨基糖苷抗生素作為有效成分 的耳毒性聽(tīng)覺(jué)障礙改善的抗生組合物。
[0051] 此外，本發(fā)明提供含有西洛他唑、銀杏葉提取物及耳毒性抗癌劑作為有效成分的 耳毒性聽(tīng)覺(jué)障礙改善的抗癌用組合物。
[0052] 所述各組合物中的氨基糖苷抗生素及耳毒性抗癌劑的具體實(shí)例如前所述。
[0053] 所述本發(fā)明的各組合物在包含氨基糖苷抗生素及耳毒性抗癌劑的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步 含有西洛他唑和銀杏葉提取物，因此能夠減少所述抗生素或抗癌劑引起的耳毒性副作用即 聽(tīng)覺(jué)障礙。所述進(jìn)一步添加的西洛他唑和銀杏葉提取物的復(fù)合物以順鈾的重量為基準(zhǔn)，優(yōu) 選使用5-20倍的含量，但不特別地限定于此。

【具體實(shí)施方式】
[0054] 以下通過(guò)實(shí)施例更詳細(xì)地說(shuō)明本發(fā)明，但這些實(shí)施例僅用于例示本發(fā)明，本發(fā)明 的范圍并不由這些實(shí)施例限定。
[0055] 實(shí)施例1 :根據(jù)本發(fā)明的復(fù)合制劑對(duì)聽(tīng)力功能及前庭功能的效果分析
[0056] 〈1_1>復(fù)合制劑的制備
[0057] 將西洛他唑（CS，SK化學(xué)）及銀杏葉提取物（GbE，SK化學(xué)）以5:4的重量比混合 后，溶解于〇? 5% (w/v)羧甲基纖維素鈉（CMCNa，西格瑪公司）水溶液中，以18mg/mL的濃 度制得復(fù)合制劑（以下稱(chēng)為雷那新（renexin))。
[0058] <1-2>試料的施用
[0059] 將 8-10 周齡的 SD(Sprague-Dawley)大鼠（200-250g)52 只，分為以下 6 組，并按 照下述施用各藥物。
[0060] _第一組：正常對(duì)照組（n = 3);
[0061] _第二組：順怕（CDDP)單獨(dú)給藥組（n = 13);
[0062]-第三組：雷那新+CDDP給藥組（n = 12);
[0063] _第四組：銀杏葉提取物+CDDP給藥組（n = 12);和
[0064]-第五組：西洛他唑+CDDP給藥組（n = 12)。
[0065]順鉑（西格瑪公司）用生理鹽水溶解為〇? 15mg/mL的濃度，以16mg/kg/天的用 量從0-3日每天通過(guò)腹腔注射給藥；雷那新作為預(yù)處理（pre-treatment)在順鈾給藥7天 前（-7天）開(kāi)始，作為后處理（p ost-treatment)在順鉑給藥開(kāi)始后的第5天為止，每天以 180mg/kg/天的用量經(jīng)口給藥；西洛他唑和銀杏葉提取物分別以i〇〇 mg/kg/天和8〇mg/kg/ 天的用量與雷那新相同的時(shí)間期間每日經(jīng)口給藥。
[0066] 〈1_3>聽(tīng)力功能評(píng)價(jià)：聽(tīng)腦干反應(yīng)試驗(yàn)
[0067] 以實(shí)施例<1_2>的大鼠作為對(duì)象，利用Biosig32系統(tǒng)（Tucker-Da vis技術(shù)，蓋 恩斯維爾（Gainesville)，F(xiàn)L，美國(guó)）進(jìn)行了聽(tīng)腦干反應(yīng)（auditory brainstem response ； ABR)試驗(yàn)，從而評(píng)價(jià)了聽(tīng)力功能。ABR試驗(yàn)在施用藥物之前（Pre)和施用順鉑開(kāi)始5天 (P-5)后進(jìn)行了測(cè)定。
[0068] 在ABR試驗(yàn)之前，實(shí)施例<1-2>的大鼠至少在飼養(yǎng)室適應(yīng)3天。試驗(yàn)前一天，麻醉 大鼠并在耳內(nèi)設(shè)置耳麥，用耳鏡（otoscope)檢查鼓膜的外觀是否正常。試驗(yàn)當(dāng)日，將大鼠 放入防音箱內(nèi)，在皮下內(nèi)利用經(jīng)皮滅菌電極針記錄ABR。將活性電極位于頭頂點(diǎn)（vertex)， 標(biāo)準(zhǔn)電極位于相同側(cè)的乳突（mastoid process)，然后接地電極位于相反側(cè)的乳突。向大 鼠腹腔內(nèi)注射含有唑拉西泮（zolazepam;Zoletil50,維克（Virbac),法國(guó)）50mg/kg和隆 朋（Rompun) 5mg/kg的溶液麻醉大鼠。然后，通過(guò)位于耳道（ear canal)內(nèi)的耳麥，以5dB S PL為階段從75開(kāi)始到IOdB提供16KHz和32KHz的猝發(fā)音（tone burst)。1024次的刺激 (swe?。┲兴玫降姆磻?yīng)結(jié)果進(jìn)行平均，將出現(xiàn)wave V的波形的最小猝發(fā)音大?。╠B)作為 聽(tīng)力閾值。
[0069] 將在16KHz和32KHZ的聽(tīng)力閾值測(cè)定結(jié)果分別在圖1的上部和下部圖表中示出。 各圖中Pre表不施用藥物之前，P-5表不開(kāi)始施用順鈾5天后，a至e表示實(shí)施例<1-2>的 第一組至第五組。如圖1所示，可以確認(rèn)在16KHz和32KHz,⑶DP單獨(dú)給藥組（b)的情況相 比正常對(duì)照組（a)聽(tīng)力閾值均顯著升高（P二〇? 〇〇〇)，CDDP的施用時(shí)由于耳毒性而引起聽(tīng) 力功能損傷。但是renexin+CDDP給藥組（c)的情況相比CDDP單獨(dú)給藥組（b)聽(tīng)力閾值顯 著降低。尤其是，雷那新+CDDP給藥組（c)的情況相比銀杏葉提取物+CDDP給藥組（d)及 西洛他唑+⑶DP給藥組（e)聽(tīng)力閾值低，顯示為聽(tīng)力功能改善。
[0070] 上述結(jié)果表示雷那新能夠預(yù)防或治療⑶DP施用引起的聽(tīng)力損失，且雷那新相比 單獨(dú)施用銀杏葉提取物及西洛他唑時(shí)，具有活性成分的混合引起的協(xié)同效果。
[0071] 〈卜4>前庭功能評(píng)價(jià)：懸尾試驗(yàn)
[0072] 以實(shí)驗(yàn)例〈1-2>的大鼠為對(duì)象通過(guò)懸尾試驗(yàn)（tail hanging test)評(píng)價(jià)前庭功 能。前庭功能評(píng)價(jià)在施用藥物之前和開(kāi)始施用順怕5天之后進(jìn)行測(cè)定。懸尾試驗(yàn)通過(guò)將各 組的大鼠尾部提起懸掛在30cm的高度后，用攝像機(jī)進(jìn)行記錄，計(jì)數(shù)每10秒鐘的頭部旋轉(zhuǎn)的 次數(shù)，從而完成。
[0073] 試驗(yàn)結(jié)果在圖2中示出。如圖2所示，⑶DP-單獨(dú)給藥組（b)的情況下頭部旋轉(zhuǎn) 次數(shù)為21. 8±9次，相比正常對(duì)照組（a)顯著增加（P = 〇. 〇〇〇);相反，雷那新+CDDP給藥 組（c)的情況下為S. 3±5. 3次,相比CDDP-單獨(dú)給藥組（b)頭部旋轉(zhuǎn)次數(shù)顯著減少（P = 0. 002)。尤其是，雷那新+CDDP給藥組（C)頭部旋轉(zhuǎn)次數(shù)相比銀杏葉提取物+CDDP給藥組 (d)和西洛他唑+CDDP給藥組（e)減少更多。
[0074] 上述結(jié)果表示施用雷那新能夠預(yù)防或治療順鉬引起的前庭功能的損傷，且雷那新 相比單獨(dú)施用銀杏葉提取物和西洛他唑的情況，具有活性成分的混合引起的協(xié)同效果。
[0075] <1-5>前庭功能的評(píng)價(jià)：游泳試驗(yàn)
[0076] 以實(shí)驗(yàn)例<1_2>的大鼠為對(duì)象通過(guò)游泳試驗(yàn)評(píng)價(jià)前庭功能。前庭功能評(píng)價(jià)在施用 藥物之前和開(kāi)始施用順鉑5天之后進(jìn)行測(cè)定。
[0077] 具體地，在不銹鋼水槽（長(zhǎng)28cm，寬45cm，深25cm)中以19cm的深度添加與體溫 相似溫度的水。將大鼠的尾部提起，從20cm的高度將其丟入水槽中間。由單獨(dú)的觀察者來(lái) 記錄大鼠接觸水的時(shí)刻開(kāi)始逃出到平臺(tái)上的時(shí)刻的時(shí)間。
[0078] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果示出圖3中。如圖3所示，CDDP-單獨(dú)給藥組（b)的情況下平均游泳時(shí) 間為29.6±17.4秒，相比正常對(duì)照組（ a)顯著增加（P = 〇. 006);相反，雷那新+CDDP給藥 組（c)的情況下為14.9±5.7秒，相比⑶DP-單獨(dú)給藥組（b)平均游泳時(shí)間顯著減少（P = 0? 048)。尤其是，雷那新+CDDP給藥組（c)平均游泳時(shí)間相比銀杏葉提取物+CDDP給藥組 (d)和西洛他唑+CDDP給藥組（e)減少更多。
[0079] 上述結(jié)果表示施用雷那新能夠預(yù)防或治療順鉬引起的前庭功能的損傷，且雷那新 相比單獨(dú)施用銀杏葉提取物和西洛他唑的情況，具有活性成分的混合引起的協(xié)同效果。
[0080] 實(shí)施例2 :根據(jù)本發(fā)明的復(fù)合制劑施用的聽(tīng)覺(jué)及前庭毛細(xì)胞的形態(tài)評(píng)價(jià)
[0081] 〈2-1>中部及底部的形態(tài)評(píng)價(jià)
[0082] 將實(shí)施例<1-2>各組的大鼠進(jìn)行麻醉后，摘取了顳骨（temporal bone)。在解剖顯 微鏡下，在耳蝸:（巧卒.1的圓窗（round window)和卵圓窗（oval window)上鉆孔，用巴斯 德吸管在外淋巴隙（perilymphatic space)灌流4%的戊二醛（EMgrade，產(chǎn)地，Inc. CA，美 國(guó)），然后將各試料在4%戊二醛溶液中固定24小時(shí)。耳蝸表面及外淋巴隙用磷酸緩沖液 (PBS)洗滌3次后，灌流1%的四氧化鋨（〇 smium tetroxide)，在組織旋轉(zhuǎn)器上放置15分 鐘。然后，用PBS洗滌試料3次，在解剖顯微鏡下去除耳蝸的骨囊（bony capsule)，切開(kāi)側(cè) 壁（lateral wall)將科爾蒂器官露出。通過(guò)卵圓窗將球囊（saccule)完全打開(kāi)直至銀色耳 石（otolith)露出，將耳石從囊斑（saccule mac ula)上去除。上述過(guò)程中小囊（utricle) 的毛細(xì)胞露出。將摘取的組織使用5〇%、70%、 9〇%、95%和1〇〇%丙酮逐漸增加濃度進(jìn)行 脫水。脫水的試料暴露于六甲基二娃氣焼（hexamethyIdisiIazane)中，進(jìn)行空氣干燥后， 放置在l 3mm的涂覆鉑的短柱（stub)上，用JSM-5410LV掃描電子顯微鏡（SEM)(日本電子 光學(xué)實(shí)驗(yàn)室，東京，日本）觀察，用寶麗來(lái)551andfilm進(jìn)行照相。
[0083]拍攝的照片示于圖4。圖4的上部照片為提供16KHZ猝發(fā)音時(shí)中部（middle turn) 的截面圖，下部照片為提供32KHz的猝發(fā)音時(shí)底部（basal turn)的截面圖，a至e表示實(shí) 施例<1-2>的第一組至第五組。
[0084] 從上述中部截面圖及底部截面圖中可以確認(rèn)，CDDP單獨(dú)給藥組（b)的外毛細(xì)胞不 均勻，其數(shù)量顯著減少；相反雷那新+CDDP給藥組（c)的外毛細(xì)胞均勻,其數(shù)量顯著增加。 [0085] 〈2-2>外毛細(xì)胞數(shù)量的測(cè)定
[0086]為了觀察根據(jù)使用本發(fā)明的復(fù)合制劑的毛細(xì)胞分布及數(shù)量變化，參照文獻(xiàn) (Viberg and Canlon，Hear Res_，I97 (I-2) : 1-10, 2〇〇4)測(cè)定實(shí)施例 <2-1> 的中部及底部 的外毛細(xì)胞（outer hair cell，OHC)的數(shù)量。
[0087]測(cè)定結(jié)果示于圖5。如圖5所示，CDDP單獨(dú)給藥組（b)的外毛細(xì)胞數(shù)量相比正常 對(duì)照組（a)顯著減少，聽(tīng)力功能受損；但是雷那新+CDDP給藥組（c)相比CDDP單獨(dú)給藥組， 外毛細(xì)胞的數(shù)量顯著增加。尤其是，雷那新+CDDP給藥組（c)的外毛細(xì)胞數(shù)量相比銀杏葉 提取物+CDDP給藥組（d)和西洛他唑+CDDP給藥組（e)顯著增加。
[0088] <2-3>球囊及小囊的形態(tài)評(píng)價(jià)
[0089]從前庭細(xì)胞得到球囊和小囊，與實(shí)施例<2-1>相同地使用掃描電子顯微鏡（SEM) 觀察。
[0090] 掃描電子顯微鏡照片不于圖6。如圖6所示，可以確認(rèn)CDDP單獨(dú)給藥組（b)的球 囊及小囊的毛細(xì)胞均不均勻，數(shù)量顯著減少，相反雷那新+CDDP給藥組（c)的情況時(shí)毛細(xì)胞 均勻，數(shù)量增加。尤其是，雷那新+⑶DP給藥組（c)的情況相比銀杏葉提取物+CDDP給藥組 (d)及西洛他唑+CDDP給藥組（e)，毛細(xì)胞的均勻性及數(shù)量顯著良好。
[0091] <2-4>毛細(xì)胞的數(shù)量測(cè)定
[0092]為了確認(rèn)根據(jù)本發(fā)明的復(fù)合制劑施用的毛細(xì)胞的分布及數(shù)量變化，參照文獻(xiàn) (Viberg and Canlon，Hear Res.，197 (1-2) : 1-10,2〇〇4)測(cè)定實(shí)施例 <2-3> 得到的球囊及 小囊的毛細(xì)胞（HC)數(shù)量。
[0093]測(cè)定結(jié)果示于圖7。如圖7所示，CDDP單獨(dú)給藥組（b)的情況相比正常對(duì)照組（a) 毛細(xì)胞的數(shù)量顯著減少（P = 0. 000)，但是雷那新+CDDP給藥組（c)的情況相比CDDP單獨(dú) 給藥組（b)，毛細(xì)胞的數(shù)量顯著增加（P = 〇.〇〇2)。尤其是，雷那新+CDDP給藥組（c)相比 銀杏葉提取物+CDDP給藥組（d)和西洛他唑+CDDP給藥組（ e)，毛細(xì)胞的數(shù)量增加。
[0094] 實(shí)施例3 :對(duì)CDDP-誘導(dǎo)細(xì)胞毒性的本發(fā)明復(fù)合制劑的體外效果分析
[0095] 〈3-DCDDP-誘導(dǎo)細(xì)胞毒性的確認(rèn)
[0096]為了確認(rèn)〇〇〇?-誘導(dǎo)細(xì)胞毒性，聽(tīng)覺(jué)細(xì)胞系（冊(cè)1-〇(：101'(：(：，美國(guó)）在33。(：、1〇% C02條件的培養(yǎng)器中，用添加了 1〇% FBS的達(dá)爾伯克必需基本培養(yǎng)基（DMEM，Dulbecco' s minimum essential me dium)中進(jìn)行培養(yǎng)。所培養(yǎng)的細(xì)胞以3000細(xì)胞/孔的濃度分株于 96孔板中，然后添加2〇 p M的順鉑進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)第〇、12、24和48小時(shí)時(shí)，在各孔中分別 加入2〇 U I MTS溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，然后利用全自動(dòng)定量繪圖酶標(biāo)儀在490nm處測(cè)定甲 瓚的吸光度，從而測(cè)定存活細(xì)胞比例。
[0097]測(cè)定結(jié)果示于圖8。如圖8所示，根據(jù)順鉑的處理，時(shí)間依賴(lài)性地出現(xiàn)細(xì)胞存活率 減少，由此可以確認(rèn)CDDP-誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性。
[0098] <3_2>本發(fā)明的復(fù)合制劑的效果分析（1)
[00"]為了調(diào)查雷那新對(duì)HEI-OCl細(xì)胞的用量效果，在96孔板中以3000細(xì)胞/孔的濃 度進(jìn)行接種，并添加不同濃度的雷那新（a:3.5、b:7.〇、c:14. l、d:28. l、e:56.3、f:122.5、 g:225_0、h:45〇.0及i: 9〇〇.〇y g/ml)培養(yǎng)24小時(shí)。為了 MTS分析，向各孔中添加2〇 y I MT S溶液，在33°C、10% C02條件的培養(yǎng)器中培養(yǎng)4小時(shí)，然后利用全自動(dòng)定量繪圖酶標(biāo)儀 在49〇nm處測(cè)定甲瓚的吸光度。
[0100]測(cè)定結(jié)果示于圖9。如圖9所示，可以知道與CON(單獨(dú)培養(yǎng)基）相比，在3. 5 Ug/ ml(a;P = 0_019)、7.0ug/ml(b;P = 0.028)和 14_ lug/ml(c;p = 〇.〇〇3)濃度下，雷那新 能夠顯著地促進(jìn)HEI-OCl細(xì)胞的成長(zhǎng)。
[0101] 〈3_3>本發(fā)明復(fù)合制劑的效果分析（2)
[0102] 為了觀察與順鉑聯(lián)用時(shí)本發(fā)明的復(fù)合制劑的預(yù)防效果，按照上述實(shí)施例〈3-1>向 HEI-OCl細(xì)胞添加不同濃度的雷那新預(yù)處理1小時(shí)后，添加20 PM的順鉑后培養(yǎng)24小時(shí)。 此后，通過(guò)如上所述的MTS分析測(cè)定甲瓚的吸光度。
[0103]測(cè)定結(jié)果示于圖10。如圖10所示，與CDDP單獨(dú)處理組相比，在14. In g/ml(c, P = 0. 000)和28_ I u g/ml (d，P = 0. 019)濃度下，雷那新能夠顯著地保護(hù)聽(tīng)覺(jué)細(xì)胞免受 CDDP-誘導(dǎo)細(xì)胞毒性。
[0104] 實(shí)施例4 :對(duì)CDDP-誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的本發(fā)明復(fù)合制劑的體外效果分析 [0105]為了分析對(duì)CDDP-誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的本發(fā)明復(fù)合制劑的體外效果，用雷那新處理的 HEI-OCl細(xì)胞使用膜聯(lián)蛋白（Armexin)V-FITC/碘化丙啶（PI)染色后用流式細(xì)胞儀（ flow cytometer)進(jìn)行分析。
[0106] 具體地，HEI-OCl細(xì)胞在6孔板隔夜培養(yǎng)，對(duì)照組沒(méi)有添加任何物質(zhì)，雷那新處理 組用14. I u g/ml的雷那新預(yù)處理1小時(shí)，CDDP處理組用20 u M的CDDP處理，雷那新+CDDP 處理組用14. I Ii g/ml的renexin預(yù)處理1小時(shí)后，用20 u M的CDDP處理。此后，用PBS洗 滌細(xì)胞，用胰蛋白酶分離后，在2, OOOrpm下離心分離3分鐘。收得的細(xì)胞在200W1 PBS中 小心地進(jìn)行重懸，離心分離收得細(xì)胞后，在100 U I IX結(jié)合緩沖液中重懸。然后,分別添加 5 Ul的膜聯(lián)蛋白V-FIT C及PI，在常溫下培養(yǎng)15分鐘。添加400 ul IX結(jié)合緩沖液后，通 過(guò)利用FACScantoTMII (BD，圣地亞哥，加拿大）的流式細(xì)胞分析進(jìn)行分析。
[0107] 上述結(jié)果示于圖11。圖11的上部表示流式細(xì)胞分析結(jié)果，下部圖表表示凋亡的比 例（％)。如圖11所示，可以知道通過(guò)CDDP處理誘導(dǎo)的聽(tīng)覺(jué)細(xì)胞的細(xì)胞凋亡由于雷那新處 理而減少。這表示根據(jù)本發(fā)明的復(fù)合制劑具有預(yù)防CDDP-誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的效果。
[0108] 實(shí)施例5 :本發(fā)明復(fù)合制劑對(duì)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞的效果分析
[0109] 為了確認(rèn)本發(fā)明的復(fù)合制劑對(duì)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞產(chǎn)生的影響，進(jìn)行了免疫印 跡試驗(yàn)。細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞蛋白質(zhì)使用聚腺苷二憐酸-核糖聚合酶（poly ADP ribose polymerase，PARP)、BCL-XL、BAX、細(xì)胞色素 C、剪切的半胱天冬酶 3 (cleaved caspase3)、 ERK及JNK，對(duì)照組蛋白使用P -肌動(dòng)蛋白（P-Actin)的1抗，均購(gòu)自細(xì)胞信號(hào)技術(shù)公 司（Cell Signaling Technology，丹佛斯，馬薩諸塞州）。實(shí)施例4的4個(gè)組的HEI-0C1 細(xì)胞用PBS洗滌2次后，在冷RIPA緩沖液[2 y g/mL蛋白抑制劑，ImM苯甲基磺酰氟 (phenymethylsulfonyl fluoride，PMSF)、lmM NaF、lraM Na3V04]中溶解，在冰上反應(yīng) 30 分 鐘。將勻楽在4°C以13, OOOrpm離心分離30分鐘，然后上層液用于進(jìn)一步分析。
[0110] 蛋白質(zhì)濃度通過(guò)DC蛋白質(zhì)分析（Bio-Rad，赫科斯（Hercules)，加拿大）確定。含 有蛋白質(zhì)（20 Ug)的試料立即在100°C下加熱10分鐘后，通過(guò)SDS-PAGE分離。在凝膠中電 泳之后，將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。用PBS中的5%脫脂牛奶處理，封閉膜后，在4°C下與最 終稀釋至1:1〇〇〇濃度比例的1次多克隆抗體一同培養(yǎng)。在含有〇? 〇5%吐溫的PBS(PBS-T) 中洗滌后，蛋白質(zhì)條帶根據(jù)制造商的指示在X線薄膜上利用增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光分析進(jìn)行視覺(jué) 化[West-Q 化學(xué)發(fā)光底物試劑盒（Chemiluminescent substrate kit)，GenDEPOT，首爾韓 國(guó)]。
[0111] 免疫印跡試驗(yàn)結(jié)果示于圖12。圖12的上部圖表表示各信號(hào)傳遞蛋白的表達(dá)量，下 部表示免疫印跡試驗(yàn)的照片。如圖12所示，處理雷那新的情況相比CDDP單獨(dú)處理組，通過(guò) BCL-XL抗-細(xì)胞凋亡基因而編碼的蛋白質(zhì)表達(dá)顯著增加，BAX、細(xì)胞色素C、剪切的半胱天冬 酶3及剪切的PARP的表達(dá)顯著減少。上述結(jié)果表示雷那新抑制線粒體路徑。此外，雷那新 減少P-ERK的表達(dá)，這表示雷那新通過(guò)MAPK/ERK路徑阻斷CDDP-誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
[0112] 實(shí)施例6 :本發(fā)明復(fù)合制劑對(duì)細(xì)胞內(nèi)活性氧生成的效果分析
[0113] 以對(duì)照組、CDDP單獨(dú)處理組及雷那新+CDDP處理組為對(duì)象，利用總ROS檢測(cè)試劑盒 (Enzo生命科學(xué)，ENZ-5010)測(cè)定主要在病理狀態(tài)下產(chǎn)生的細(xì)胞內(nèi)活性氧的變化。所述試劑 盒的主成分包括氧化應(yīng)激檢測(cè)試劑。所述非熒光性及細(xì)胞滲透性的總ROS檢測(cè)染料與過(guò)氧 化氫、過(guò)氧化亞硝酸鹽及羥基自由基等廣泛的活性氧粒子直接反應(yīng)，生成表示不同R0S/RNS 型的細(xì)胞生成的綠色熒光物質(zhì)。HEI-OCl細(xì)胞在12孔板中培養(yǎng)，用⑶DP (20 PM)和雷那新 (14. I ii g/mL)處理后，向細(xì)胞上樣（呈目）ROS檢測(cè)溶液，培養(yǎng)1小時(shí)。細(xì)胞用IX洗滌緩 沖液洗滌后，在熒光顯微鏡下觀察。
[0114]熒光顯微鏡照片示于圖13。如圖13所示，處理雷那新時(shí)相比CDDP單獨(dú)處理組，細(xì) 胞內(nèi)ROS的生成顯著降低。
[0115]本發(fā)明以上述具體實(shí)施例為具體例進(jìn)行了說(shuō)明，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在隨附 的權(quán)利要求書(shū)定義的本發(fā)明的范圍內(nèi)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行多種變形或變更。
【權(quán)利要求】
1. 一種用于預(yù)防或治療聽(tīng)覺(jué)障礙的藥物組合物，其特征在于，含有西洛他唑和銀杏葉 提取物作為有效成分。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述西洛他唑及銀杏葉提取物以 1:0. 1至1:4. 8的重量比包含。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于，所述西洛他唑及銀杏葉提取物以 1 :〇. 8的重量比包含。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述聽(tīng)覺(jué)障礙是噪音引起的聽(tīng)覺(jué) 障礙或施用耳毒性藥物引起的聽(tīng)覺(jué)障礙。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的藥物組合物，其特征在于，所述耳毒性藥物是氨基糖苷抗生 素或抗癌劑。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于，所述耳毒性藥物選自鏈霉素、卡那 霉素、慶大霉素、新霉素、阿米卡星、妥布霉素、奈替米星、地貝卡星、紫蘇霉素、利波多麥星 及順鉬和卡鉬中的1種以上。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，所述耳毒性藥物為順鉬。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物抑制聽(tīng)覺(jué)細(xì)胞中 的活性氧的生成及由此引起的聽(tīng)覺(jué)細(xì)胞的細(xì)胞凋亡。
9. 一種用于預(yù)防或治療聽(tīng)覺(jué)障礙的藥物制劑，其特征在于，該藥物組合物含有西洛他 唑和銀杏葉提取物作為有效成分。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物制劑，其特征在于，所述藥物制劑含有50-100mg的西洛 他唑以及40-80mg的銀杏葉提取物。
11. 根據(jù)權(quán)利要求10所述的藥物制劑，其特征在于，所述藥物制劑含有1〇〇的mg西洛 他唑和80mg的銀杏提取物。
12. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物制劑，其特征在于，所述聽(tīng)覺(jué)障礙是噪音引起的聽(tīng)覺(jué)障 礙或施用耳毒性藥物引起的聽(tīng)覺(jué)障礙。
13. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的藥物制劑，其特征在于，所述耳毒性藥物是氨基糖苷抗生 素或抗癌劑。
14. 根據(jù)權(quán)利要求13所述的藥物制劑，其特征在于，所述耳毒性藥物選自鏈霉素、卡那 霉素、慶大霉素、新霉素、阿米卡星、妥布霉素、奈替米星、地貝卡星、紫蘇霉素、利波多麥星 及順鉬和卡鉬中的1種以上。
15. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物制劑，其特征在于，所述藥物制劑是片劑、泡騰片劑、顆 粒劑或膠囊劑。
16. -種耳毒性聽(tīng)覺(jué)障礙改善的抗生組合物，其特征在于，該組合物含有西洛他唑、銀 杏葉提取物及氨基糖苷抗生素作為有效成分。
17. -種耳毒性聽(tīng)覺(jué)障礙改善的抗癌用組合物，其特征在于，該組合物含有西洛他唑、 銀杏葉提取物及耳毒性抗癌劑作為有效成分。
【文檔編號(hào)】A61K36/16GK104244950SQ201380016531
【公開(kāi)日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2013年3月29日 優(yōu)先權(quán)日:2012年3月30日
【發(fā)明者】柳根鎬, 韓蕙英, 李素英 申請(qǐng)人:Sk化學(xué)公司