梅花鹿鹿脾提取物在抗氧化藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及梅花鹿鹿脾提取物在抗氧化藥物中的應(yīng)用，通過動物實驗表明，本發(fā)明工藝制備的梅花鹿鹿脾提取物可降低乙醇損傷模型小鼠血清中過氧化物、蛋白質(zhì)羰基，升高還原性谷胱甘肽含量，增強(qiáng)血清中SOD活力，具有抗氧化的作用，可用于制備抗氧化作用的藥物和保健食品。
【專利說明】梅花鹿鹿脾提取物在抗氧化藥物中的應(yīng)用
[0001]

【技術(shù)領(lǐng)域】： 本發(fā)明涉及梅花鹿鹿脾提取物在抗氧化藥物中的應(yīng)用，利用梅花鹿鹿脾提取物制備藥 物或保健品，屬于生物制藥【技術(shù)領(lǐng)域】。
[0002] 技術(shù)背景： 氧化是肌膚衰老的最大威脅，飲食不健康，日曬、壓力、環(huán)境污染等都能讓肌膚自由基 泛濫，從而產(chǎn)生面色黯淡、缺水等氧化現(xiàn)象。研究證明，人體的抗氧化系統(tǒng)是一個可與免疫 系統(tǒng)相比擬的、具有完善和復(fù)雜功能的系統(tǒng)，機(jī)體抗氧化的能力越強(qiáng)，就越健康，生命也越 長。
[0003]梅花鹿全身各部分都具有藥膳食療的作用，追溯到遠(yuǎn)古時期，《神農(nóng)本草經(jīng)》、《本 草綱目》、《本經(jīng)逢源》等古籍就收錄了鹿鸞、鹿角、鹿皮、鹿胎等鹿產(chǎn)品，并對其制法、功能、 主治做了詳細(xì)的記載說明。鹿產(chǎn)品不僅是中醫(yī)藥的重要組成，也是人們高度認(rèn)可的營養(yǎng)食 品。伴隨著鹿產(chǎn)品的需求量不斷增大，吉林省家養(yǎng)梅花鹿資源迅速發(fā)展，同時產(chǎn)生了大量的 副產(chǎn)品，如鹿心、鹿肝、鹿脾等，這些副產(chǎn)品研究人數(shù)不多。
[0004] 梅花鹿鹿脾含有豐富的脂類、維生素、蛋白質(zhì)及人體所必需氨基酸。鹿脾提取物其 中含有有很多人體可吸收的營養(yǎng)物質(zhì)，如多肽、核苷酸、維生素、礦物質(zhì)等生物活性物質(zhì)。由 于對鹿脾的開發(fā)與研究甚少，目前沒有鹿脾提取物具有抗氧化的相關(guān)報道。
[0005]
【發(fā)明內(nèi)容】
： 本發(fā)明公開了梅花鹿鹿脾提取物在抗氧化藥物中的應(yīng)用，用于制備抗氧化藥物或保健 食品。
[0006]本發(fā)明所述的鹿脾提取物是通過以下方法制備的： 1) 稱取梅花鹿脾表面結(jié)締組織，切成〇. 5cm厚的薄片； 2) 加入3~7重量的生理鹽水，膠體磨研磨2~5min ; 3) 將鹿脾混懸液升溫至4(T50°C，調(diào)PH值至5. (T6. 0,加入0. 2?2%重量的木瓜蛋白酶 在水浴鍋中保溫廣2h; 4) 繼續(xù)加入0. 5%~1%重量的5' -磷酸二酯酶保溫2~3h ; 5) 將混懸液用4000g離心IOmin取上清，用IOKD超濾膜進(jìn)行超濾得超濾液，噴霧干燥 即得具有抗氧化作用的鹿脾提取物干粉。
[0007]如上所述的方法，梅花鹿鹿脾提取過程中選用4(T50°C的水浴溫度。
[0008]如上所述的方法，其中，PH值以2mol/L的鹽酸、Imol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)。
[0009]如上所述的方法，包括兩個酶解階段。第一階段是加入0. 2~2%重量的木瓜蛋白酶 進(jìn)行酶解，主要作用是將大分子蛋白質(zhì)酶解為小分子多肽，第二階段是加入0.59T1%重量 的5'-磷酸二酯酶進(jìn)行酶解，主要作用是將核酸分解為小分子核酸、核苷酸等。
[0010] 如上述的方法，鹿脾提取物干粉中多肽含量為3(T50%，核苷酸含量為I. 2?2. 1%， 維生素含量為0. 05%?0. 3%。
[0011] 鹿脾提取物可用于制備抗氧化作用的藥物和保健食品，在劑型方面可采用各種劑 型，如口服液、片劑、顆粒劑、散劑、或丸劑、膠囊等或緩釋劑型。
[0012] 本發(fā)明的積極效果在于： 通過動物實驗表明，本發(fā)明工藝制備的梅花鹿鹿脾提取物可降低乙醇損傷模型小鼠血 清中過氧化物、蛋白質(zhì)羰基，升高還原性谷胱甘肽含量，增強(qiáng)血清中SOD活力，具有抗氧化 的作用，可用于制備抗氧化作用的藥物和保健食品。

【具體實施方式】
[0013] 通過以下實施例進(jìn)一步舉例描述本發(fā)明，并不以任何方式限制本發(fā)明，在不背離 本發(fā)明的技術(shù)解決方案的前提下，對本發(fā)明所作的本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易實現(xiàn)的任何改 動或改變都將落入本發(fā)明的權(quán)利要求范圍之內(nèi)。
[0014] 實施例1: ￡ .稱取梅花鹿脾250g，去除表面結(jié)締組織，切成0. 5cm厚的薄片； t ?加入800ml生理鹽水，膠體磨研磨5min ; C .將鹿脾混懸液升溫至40°C，調(diào)PH值至5.0,加入2. Og木瓜蛋白酶在水浴鍋中保溫 I. 5h ； C ?繼續(xù)加入I. 5g 5' -磷酸二酯酶保溫疒3h ; E .將混懸液用4000g離心IOmin取上清，用IOKD超濾膜進(jìn)行超濾得超濾液，噴霧干燥 即得具有抗氧化作用的鹿脾提取物干粉。鹿脾提取物干粉中多肽含量為30%，核苷酸含量為 1.2%，維生素含量為0.05%。
[0015] 實施例2: S .稱取梅花鹿脾250g，去除表面結(jié)締組織，切成0. 5cm厚的薄片； t ?加入860ml生理鹽水，膠體磨研磨5min ; C .將鹿脾混懸液升溫至45°C，調(diào)PH值至5. 5,加入2. 2g木瓜蛋白酶在水浴鍋中保溫 Ih ; c ?繼續(xù)加入I. 5g 5' -磷酸二酯酶保溫3h ; E .將混懸液用4000g離心IOmin取上清，用IOKD超濾膜進(jìn)行超濾得超濾液，噴霧干燥 即得具有抗氧化作用的鹿脾提取物干粉。鹿脾提取物干粉中多肽含量為35%，核苷酸含量為 1. 5%，維生素含量為0. 1%。
[0016] 實施例3: S .稱取梅花鹿脾250g，去除表面結(jié)締組織，切成0. 5cm厚的薄片； t ?加入1300ml生理鹽水，膠體磨研磨2. 5min ; C .將鹿脾混懸液升溫至50°C，調(diào)PH值至5. 5,加入4. 5g木瓜蛋白酶在水浴鍋中保溫 I. 5h ； C ?繼續(xù)加入2. 5g 5' -磷酸二酯酶保溫2h ; E .將混懸液用4000g離心IOmin取上清，用IOKD超濾膜進(jìn)行超濾得超濾液，噴霧干燥 即得具有抗氧化作用的鹿脾提取物干粉。鹿脾提取物干粉中多肽含量為40%，核苷酸含量為 2.0%，維生素含量為0. 15%。
[0017] 實施例4 : ￡ .稱取梅花鹿脾250g，去除表面結(jié)締組織，切成0. 5cm厚的薄片； t ?加入900ml生理鹽水，膠體磨研磨2. 5min ; c .將鹿脾混懸液升溫至50°C，調(diào)PH值至6. 0,加入3. Og木瓜蛋白酶在水浴鍋中保溫 1. 5h ； C?繼續(xù)加入2. Og 5' -磷酸二酯酶保溫2h; E .將混懸液用4000g離心IOmin取上清，用IOKD超濾膜進(jìn)行超濾得超濾液，噴霧干燥 即得具有抗氧化作用的鹿脾提取物干粉。鹿脾提取物干粉中多肽含量為50%，核苷酸含量為 2. 1%，維生素含量為0. 3%。
[0018] 實施例5: s .稱取梅花鹿脾250g，去除表面結(jié)締組織，切成0. 5cm厚的薄片； t ?加入IOOOml生理鹽水，膠體磨研磨2. 5min; C.將鹿脾混懸液升溫至45°C，調(diào)PH值至5.6,加入2. Sg木瓜蛋白酶在水浴鍋中保溫 Ih; C?繼續(xù)加入2. 5g 5' -磷酸二酯酶保溫3h ; e .將混懸液用4000g離心IOmin取上清，用IOKD超濾膜進(jìn)行超濾得超濾液，噴霧干燥 即得具有抗氧化作用的鹿脾提取物干粉。鹿脾提取物干粉中多肽含量為50%，核苷酸含量為 2. 0%，維生素含量為0. 25%。
[0019] 實施例6 取鹿脾提取物干粉lkg，加入等重量的Ikg糊精作為賦形劑，混合均勻，得混合粉末；力口 入95%乙醇制得軟材，16?20目篩制粒，濕顆粒70?80°C干燥30分鐘，16?20目篩整 粒，壓片即得鹿脾提取物片劑。
[0020] 實施例7 取鹿脾提取物干粉lkg，加入I. 5kg的淀粉作為賦形劑，混合均勻，加潤70%乙醇制軟 材，制粒，7(T80°C干燥30分鐘，整粒，灌裝膠囊。
[0021] 實施例8 取鹿脾提取物干粉lkg，加入Ikg糖粉和0. 5kg淀粉，混合均勻，加入65%乙醇制軟材， 16目篩制粒，濕顆粒7(T8(TC干燥30分鐘，16?30目篩選粒，混合均勻，灌裝膠囊。
[0022] 以下試驗表明本發(fā)明的鹿脾提取物具有抗氧化的作用： I. 1實驗方法 I. I. 1乙醇氧化損傷模型 選25 - 30g健康成年小鼠，隨機(jī)分為4個組，1個模型對照組和實施例1、實施例2、實 施例3鹿脾提取物劑量組，均按人體代謝的10倍（0. 22 g/kg BW)給藥，模型對照組給予同 體積生理鹽水，每天1次，連續(xù)灌胃30天，末次灌胃后，模型組對照組和3個實施例組禁食 16小時(過夜)，然后1次性灌胃給予50%乙醇12ml/kg，6小時后取材；另取一組空白對照 組不作處理，不禁食取材。測血清中氧化產(chǎn)物含量、蛋白質(zhì)羰基含量、還原性谷胱甘肽含量、 抗氧化酶活力。
[0023] 脂質(zhì)過氧化檢測 將lOnmol/mL四乙氧基丙燒,用雙蒸水稀釋成0、0. 5、1. 0、2、5、lOnmol/mL分別取0. ImL 加入酸水解液2mL，TBA工作液0. 5mL，混勻，避光、沸水浴60min，流水冷卻至室溫，3mL正丁 醇振蕩抽提lmin，3000r/min離心5min，取上清液(正丁醇層)測突光強(qiáng)度(入射狹縫I. 5nm， 出射狹縫5nm，激發(fā)波長536nm，發(fā)射波長550nm)。取血清0. Iml用相同方法進(jìn)行測定，以 四乙氧基丙烷濃度為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度為縱坐標(biāo)作圖，計算血清中過氧化脂質(zhì)含量。
[0024] 蛋白質(zhì)撰基測定 取血清0.11111，加入0.4111110 1111]1〇1/1^2,4-二硝基苯肼，對照組加入0.411112 1]1〇1/1^ HCL，渦旋混勻lmin，37°C準(zhǔn)確避光反應(yīng)30min;再加入0. 5ml 200 g/L三氯乙酸，渦旋混勻 1分鐘，在4°C下，12000r/min離心IOmin,棄上清，留沉淀；加入I. Oml無水乙醇乙酸乙酯 混合應(yīng)用液，潤旋混勻1分鐘，在4°C以下，以12000r/min離心IOmin,棄上清，留沉淀，該步 驟重復(fù)4次；最后加入I. 25ml 6mol/L鹽酸胍，混勻后，37°C準(zhǔn)確水浴15min，渦旋混勻，將 全部沉淀溶解，以12000r/min離心15min，取上清液在370nm處比色，6 mol/L鹽酸胍試劑 調(diào)零，測定OD值，計算血清中蛋白質(zhì)羰基的含量。
[0025] 還原性谷胱甘肽含量測定 取lmmol/L GSH標(biāo)準(zhǔn)溶液0、10、20、50、100、200虬，分別加入生理鹽水至0.511^，即得到 0、20、40、100、200、400Mmol/L的GSH標(biāo)準(zhǔn)液系列，各管加入DTNB4. 5mL，混勻，室溫放置10 分鐘后，空白管調(diào)零，420nm處測定吸光度。以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，做標(biāo)準(zhǔn)曲線。 測定〇. Iml反應(yīng)后吸光度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算血清中還原性谷胱甘肽的含量。
[0026] 抗氧化酶活力測定 紅細(xì)胞抽提液制備：10 y 1全血沖入〇. 5mL生理鹽水，2000r/min離心3min，棄上清，力口 冰冷的雙蒸水0. 2mL混勻，加入95%乙醇0. lmL，振蕩30s，加入三氯甲烷0. lmL，置快速混 合器抽提lmin,4000r/min離心3min,分層,上層為SOD抽提液，中層為血紅蛋白沉淀物,下 層為三氯甲烷，記錄上清液體積待測。用SOD試劑盒測定上清液中超氧化物歧化酶SOD的 活力。
[0027] 實驗結(jié)果 由表1可看出，乙醇損傷模型小鼠血清中過氧化物變高，乙醇損傷模型小鼠通過實施 例1、2、3鹿脾提取物給藥后，過氧化物含量明顯降低，恢復(fù)并且接近正常生理鹽水空白組。 表明本發(fā)明鹿脾鹿脾提取物可降低乙醇損傷模型小鼠血清中的過氧化物。
[0028] 表1乙醇損傷模型小鼠血清中過氧化物含量

【權(quán)利要求】
1. 一種梅花鹿鹿脾提取物，是通過以下方法制備的： 1) 稱取梅花鹿脾去除表面結(jié)締組織，切成0.5cm厚的薄片； 2) 加入3~7重量的生理鹽水，膠體磨研磨2~5min ; 3) 將鹿脾混懸液升溫至4(T50°C，調(diào)PH值至5. (T6. 0,加入0. 2?2%重量的木瓜蛋白酶 在水浴鍋中保溫廣2h ; 4) 繼續(xù)加入0. 5%~1%重量的5' -磷酸二酯酶保溫2~3h ; 5) 將混懸液用4000g離心IOmin取上清，用IOKD超濾膜進(jìn)行超濾得超濾液，噴霧干燥 即得具有抗氧化作用的鹿脾提取物干粉； 所述的梅花鹿鹿脾提取過程中選用4(T50°C的水浴溫度。
2. 權(quán)利要求1所述的梅花鹿鹿脾提取物在抗氧化藥物中的應(yīng)用。
3. 權(quán)利要求1所述的鹿脾提取物可用于制備抗氧化作用的藥物和保健食品，在劑型方 面可采用各種劑型，如口服液、片劑、顆粒劑、散劑、或丸劑、膠囊等或緩釋劑型。
【文檔編號】A61P39/06GK104306400SQ201410614880
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年11月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月5日
【發(fā)明者】滕利榮, 彭小君, 盧文倩, 王艷菲, 孟威, 劉艷, 蔡廣勝, 滕樂生, 逯家輝, 王貞佐, 程瑛琨, 王迪 申請人:吉林大學(xué)