本發(fā)明涉及納米生物醫(yī)學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種復(fù)合物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

影像引導(dǎo)放射治療是一種四維的放射治療技術(shù)，它在三維放射治療的基礎(chǔ)上加入了時(shí)序的概念，可從定位、計(jì)劃到治療實(shí)施和驗(yàn)證等方面創(chuàng)造各種解決方案。患者進(jìn)行治療前、治療中利用各種先進(jìn)的影像設(shè)備對(duì)腫瘤及正常器官進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)控，并根據(jù)器官位置的變化調(diào)整治療條件，做到精確治療。通過(guò)實(shí)時(shí)成像去監(jiān)控藥物的輸運(yùn)情況，從時(shí)間及空間上去控制治療是當(dāng)前實(shí)施精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)，個(gè)性化治療發(fā)展的迫切需求。

然而現(xiàn)有的成像引導(dǎo)治療存在許多不足，如在成像過(guò)程中，藥物受成像發(fā)射光的影響，隨之釋放，以及啟動(dòng)光動(dòng)力治療。這樣就會(huì)導(dǎo)致不能在真正的病灶處進(jìn)行藥物釋放及實(shí)施光動(dòng)力治療，并對(duì)身體產(chǎn)生嚴(yán)重的影響?，F(xiàn)有技術(shù)在成像過(guò)程中雖然選擇了較低的激發(fā)功率，盡管功率很低，仍可以啟動(dòng)治療，從而造成不必要的損傷。現(xiàn)有技術(shù)難以達(dá)到在成像監(jiān)控的過(guò)程中，完全不啟動(dòng)治療，當(dāng)監(jiān)控藥物大量富集到達(dá)病灶部位時(shí)，再啟動(dòng)光控治療的效果。因此，建立真正可實(shí)時(shí)成像監(jiān)測(cè)，在時(shí)間、空間上同時(shí)可控釋放的載藥平臺(tái)尤為關(guān)鍵。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種復(fù)合物及其制備方法，本發(fā)明提供的復(fù)合物能夠?qū)崿F(xiàn)在時(shí)間和空間上同時(shí)可控釋放藥物。

本發(fā)明提供了一種復(fù)合物，由上轉(zhuǎn)換納米顆粒和光響應(yīng)藥物復(fù)合而成；

所述上轉(zhuǎn)換納米顆粒的基質(zhì)具有式I所示的原子比：

MReF_n 式I；

式I中，M為Na、Ba或K，Re為Y或Gd，n為4或5；

所述上轉(zhuǎn)換納米顆粒的摻雜稀土離子為：Yb³⁺、Er³⁺、Ho³⁺和Tm³⁺中的一種或幾種；

所述光響應(yīng)藥物由光控分子和臨床藥物制備得到；

所述光控分子選自香豆素類(lèi)化合物、硝基苯類(lèi)化合物、偶氮類(lèi)化合物或苯甲酰甲基酯類(lèi)化合物。

優(yōu)選的，所述上轉(zhuǎn)換納米顆粒的基質(zhì)為NaYF₄、BaYF₅、KYF₄或NaGdF₄。

優(yōu)選的，所述上轉(zhuǎn)換納米顆粒的摻雜稀土離子為Er³⁺、Yb³⁺和Tm³⁺中的一種或幾種。

優(yōu)選的，所述上轉(zhuǎn)換納米顆粒為核殼結(jié)構(gòu)的上轉(zhuǎn)換納米顆粒。

優(yōu)選的，所述上轉(zhuǎn)換納米顆粒為NaYF₄:Er@NaYF₄@Yb,Tm@NaYF₄。

優(yōu)選的，所述香豆素類(lèi)化合物為氨基、羥基、羧基或酯基修飾的4-甲基香豆素衍生物。

優(yōu)選的，所述硝基苯類(lèi)化合物具有式II結(jié)構(gòu)：

式II中，R為羥基、羧基或酯基。

優(yōu)選的，所述對(duì)羥基苯甲酮類(lèi)化合物具有式III結(jié)構(gòu)：

式III中，LG為光解離去基團(tuán)。

優(yōu)選的，所述偶氮類(lèi)化合物為偶氮苯及其衍生物。

本發(fā)明提供了一種上述技術(shù)方案所述的復(fù)合物在制備藥物中的應(yīng)用。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明中的復(fù)合物采用特殊成分的上轉(zhuǎn)化納米顆粒，這種上轉(zhuǎn)化納米顆粒為受激光調(diào)控、發(fā)射光可轉(zhuǎn)變的納米粒子；同時(shí)，本發(fā)明采用與上轉(zhuǎn)化納米顆粒發(fā)射峰有交疊的可剪切的光敏分子作為光控分子，通過(guò)上轉(zhuǎn)換納米顆粒與光控分子的相互配合，能夠使這種復(fù)合物實(shí)現(xiàn)采用不同的發(fā)光源分別控制實(shí)時(shí)成像和藥物釋放的效果，本發(fā)明提供的這種復(fù)合物能夠?qū)⒊上癫ǘ闻c光控治療波段分開(kāi)，實(shí)現(xiàn)藥物在時(shí)間和空間上的同時(shí)可控，可作為治療腫瘤的藥物從而達(dá)到實(shí)時(shí)成像引導(dǎo)治療手段的目的。

附圖說(shuō)明

為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的附圖僅僅是本發(fā)明的實(shí)施例，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前提下，還可以根據(jù)提供的附圖獲得其他的附圖。

圖1為本發(fā)明實(shí)施例1制備得到的上轉(zhuǎn)換納米顆粒的掃描電子顯微鏡照片；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例2制備得到的上轉(zhuǎn)換納米顆粒的掃描電子顯微鏡照片；

圖3為本發(fā)明實(shí)施例2制備的上轉(zhuǎn)換納米顆粒不同波長(zhǎng)激發(fā)下的熒光發(fā)射光譜；

圖4為紫杉醇光響應(yīng)藥物的制備的流程圖；

圖5為阿霉素光響應(yīng)藥物的制備的流程圖；

圖6為本發(fā)明實(shí)施例測(cè)試得到的藥物釋放曲線；

圖7為本發(fā)明實(shí)施例測(cè)試得到的熒光成像圖片結(jié)果；

圖8為本發(fā)明實(shí)施例測(cè)試得到的腫瘤治療效果圖。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例中的附圖，對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

本發(fā)明提供了一種復(fù)合物，由上轉(zhuǎn)換納米顆粒和光響應(yīng)藥物復(fù)合而成；

所述上轉(zhuǎn)換納米顆粒的基質(zhì)具有式I所示的原子比：

MReF_n 式I；

式I中，M為Na、Ba或K，Re為Y或Gd，n為4或5；

所述上轉(zhuǎn)換納米顆粒的摻雜稀土離子為：Yb³⁺、Er³⁺、Ho³⁺和Tm³⁺中的一種或幾種；

所述光響應(yīng)藥物由光控分子和臨床藥物制備得到；

所述光控分子選自香豆素類(lèi)化合物、硝基苯類(lèi)化合物、偶氮類(lèi)化合物或苯甲酰甲基酯類(lèi)化合物。

在本發(fā)明中，所述上轉(zhuǎn)化納米顆粒為一種基于多波長(zhǎng)近紅外光激發(fā)，發(fā)射光可變的上轉(zhuǎn)換納米粒子，這種上轉(zhuǎn)化納米顆粒受激發(fā)光調(diào)控，發(fā)射光可轉(zhuǎn)變。在本發(fā)明中，所述上轉(zhuǎn)換納米顆粒包括基質(zhì)和摻雜稀土離子，所述基質(zhì)為MReF_n，其中M為Na、Ba或K；Re為Y或Gd；n為4或5。在本發(fā)明中，所述基質(zhì)優(yōu)選為NaYF₄、BaYF₅、KYF₄或NaGdF₄。在本發(fā)明中，所述摻雜稀土離子為Yb³⁺、Er³⁺、Ho³⁺和Tm³⁺中的一種或幾種，優(yōu)選為Er³⁺；Yb³⁺和Er³⁺；或Tm³⁺。在本發(fā)明中，對(duì)于Er的發(fā)光中心所述基質(zhì)在上轉(zhuǎn)換納米顆粒中的摩爾含量?jī)?yōu)選為20～100％，更優(yōu)選為40～80％，更優(yōu)選為50～60％，最優(yōu)選25％。在本發(fā)明中，所述上轉(zhuǎn)化納米顆粒的粒徑優(yōu)選為10～80nm，更優(yōu)選為20～40nm，最優(yōu)選為25～35nm。

在本發(fā)明中，所述上轉(zhuǎn)換納米顆?？梢詾楹藲そY(jié)構(gòu)的上轉(zhuǎn)換納米顆粒，可以為核殼型分區(qū)摻雜的上轉(zhuǎn)換納米顆粒，如雙層殼結(jié)構(gòu)或多層殼結(jié)構(gòu)。在本發(fā)明中，所述上轉(zhuǎn)換納米顆粒優(yōu)選為NaYF₄:Er、NaErF₄:Er、NaYF₄:Yb,Er或NaYF4:Er@NaYF₄@Yb,Tm@NaYF₄。在本發(fā)明中，所述NaYF₄:Er和NaErF₄:Er為裸核結(jié)構(gòu)上轉(zhuǎn)換納米顆粒，基質(zhì)為NaYF₄和NaErF₄，摻雜稀土離子為Er³⁺，其中基質(zhì)與摻雜稀土離子的摩爾比優(yōu)選為3:1。在本發(fā)明中，所述NaYF₄:Yb,Er@NaYF₄@Yb,Tm@NaYF₄為核殼結(jié)構(gòu)的上轉(zhuǎn)換納米顆粒，核成分為NaYF₄:Yb,Er，第一層殼成分為NaYF₄，第二層殼成分為Yb,Tm，第三層殼成分為NaYF₄。本發(fā)明對(duì)所述核、第一層殼、第二層殼和第三層殼的摩爾比沒(méi)有特殊的限制可以為任何比例，優(yōu)選為1：3：4：8。在本發(fā)明中，所述核成分中基質(zhì)和摻雜稀土離子的摩爾比優(yōu)選小于3：1。在本發(fā)明中，所述第二層殼中Yb和Tm的摩爾比優(yōu)選為(20-99.8)：(0.3-1％)，更優(yōu)選為99.5:0.5。

本發(fā)明對(duì)所述上轉(zhuǎn)換納米顆粒的來(lái)源沒(méi)有特殊的限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的上述基質(zhì)和摻雜稀土離子的上轉(zhuǎn)化納米顆粒即可，可按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的上轉(zhuǎn)化納米顆粒的制備方法制備得到。

在本發(fā)明中，所述光響應(yīng)藥物由光控分子和臨床藥物制備得到。在本發(fā)明中，所述光控分子為與上轉(zhuǎn)化納米顆粒發(fā)射峰有交疊的可剪切的光敏分子，優(yōu)選為與上轉(zhuǎn)化納米顆粒藍(lán)紫光發(fā)射峰有交疊的可剪切的光敏分子。在本發(fā)明中，所述光控分子為香豆素類(lèi)化合物，硝基苯類(lèi)化合物、偶氮類(lèi)化合物或苯甲酰甲基酯類(lèi)化合物。在本發(fā)明中，所述香豆素類(lèi)化合物優(yōu)選為氨基、羥基、羧基或酯基修飾的4-甲基香豆素衍生物，更優(yōu)選為7-氨基-4-甲基香豆素。在本發(fā)明中，所述硝基苯類(lèi)化合物優(yōu)選具有式II結(jié)構(gòu)：

式II中，R為羥基、羧基或酯基，所述硝基苯類(lèi)化合物更優(yōu)選為鄰硝基苯甲醇。在本發(fā)明中，所述對(duì)羥基苯甲酰類(lèi)化合物優(yōu)選具有式III結(jié)構(gòu)：

式III中，LG為光解離去基團(tuán)。

在本發(fā)明中，所述對(duì)羥基苯甲酰類(lèi)化合物更優(yōu)選為對(duì)羥基苯甲酰磷酸酯。在本發(fā)明中，所述偶氮類(lèi)化合物優(yōu)選為偶氮苯及其衍生物，更優(yōu)選為偶氮苯。

本發(fā)明對(duì)所述臨床藥物沒(méi)有特殊的限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的臨床常用藥物即可，可以為消炎類(lèi)藥物、抗腫瘤類(lèi)藥物等，優(yōu)選為抗腫瘤類(lèi)藥物，更優(yōu)選為紫杉醇類(lèi)抗腫瘤藥物、鉑類(lèi)抗腫瘤藥物、5氟尿嘧啶類(lèi)抗腫瘤藥物、阿霉素或苯丁酸氮芥類(lèi)表面可修飾功能基團(tuán)的抗腫瘤藥物，最優(yōu)選為表面可修飾功能化的抗癌藥紫杉醇、阿霉素或苯丁酸氮芥。在本發(fā)明中，所述抗腫瘤物質(zhì)還可以為抗腫瘤化合物的衍生物，所述衍生物優(yōu)選為抗腫瘤化合物的羧基衍生物或碳酸酯衍生物。

在本發(fā)明中，所述光控分子和臨床藥物的摩爾比優(yōu)選為(0.5～1.5):1，更優(yōu)選為(0.8～1.2)：1，最優(yōu)選為1：1。

本發(fā)明對(duì)所述光響應(yīng)藥物的制備方法沒(méi)有特殊的限制，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的光控分子和藥物復(fù)合的方法制備得到即可，如將光控分子和臨床藥物進(jìn)行縮合反應(yīng)即可制備得到光響應(yīng)藥物。

在本發(fā)明中，所述復(fù)合物由上轉(zhuǎn)換納米顆粒和光響應(yīng)藥物復(fù)合而成，可以通過(guò)上轉(zhuǎn)換納米顆粒和光響應(yīng)藥物偶聯(lián)得到，利用上轉(zhuǎn)換納米顆粒表面共價(jià)、配位或吸附光響應(yīng)藥物。在本發(fā)明中，所述上轉(zhuǎn)換納米顆粒和光響應(yīng)藥物的摩爾比優(yōu)選為(5～15)：1，更優(yōu)選為(8～12)：1，最優(yōu)選為10：1。

在本發(fā)明中，所述復(fù)合物的制備方法可以為：

將上轉(zhuǎn)換納米顆粒進(jìn)行表面修飾后與光響應(yīng)藥物進(jìn)行載藥即可得到復(fù)合物。

在本發(fā)明中，可以將光響應(yīng)藥物通過(guò)化學(xué)偶聯(lián)、配位或吸附的方法接枝到經(jīng)過(guò)修飾的上轉(zhuǎn)化納米顆表面。在本發(fā)明中，將上轉(zhuǎn)換納米顆粒進(jìn)行表面修飾的方法優(yōu)選為：

將上轉(zhuǎn)換納米顆粒溶解于酸中。

在本發(fā)明中，所述酸優(yōu)選為鹽酸。在本發(fā)明中，優(yōu)選將上轉(zhuǎn)換納米顆粒溶解于酸中調(diào)節(jié)pH值為3～5，更優(yōu)選調(diào)節(jié)pH值為4。在本發(fā)明中，所述溶解的時(shí)間優(yōu)選為10～20小時(shí)，更優(yōu)選為12～18小時(shí)。在本發(fā)明中，將上轉(zhuǎn)換納米顆粒溶解于酸中可去除其表面的油酸配體。本發(fā)明優(yōu)選將溶解于酸中的上轉(zhuǎn)換納米顆粒取出后進(jìn)行離心處理，得到經(jīng)過(guò)表面修飾的上轉(zhuǎn)換納米顆粒。在本發(fā)明中，經(jīng)過(guò)表面修飾的上轉(zhuǎn)換納米顆?？芍苯优c光響應(yīng)藥物配位相連或經(jīng)過(guò)生物相容性良好的其他配體間接偶聯(lián)進(jìn)行復(fù)合。

本發(fā)明優(yōu)選將光響應(yīng)藥物通過(guò)化學(xué)反應(yīng)連接到經(jīng)過(guò)修飾的上轉(zhuǎn)換納米顆粒表面，具體方法為：

將表面經(jīng)過(guò)修飾的上轉(zhuǎn)換納米顆粒和光響應(yīng)藥物在溶劑中進(jìn)行反應(yīng)，得到復(fù)合物。

在本發(fā)明中，所述溶劑優(yōu)選為四氫呋喃。在本發(fā)明中，所述反應(yīng)的溫度優(yōu)選為室溫，更優(yōu)選為20～30℃，最優(yōu)選為25℃。在本發(fā)明中，所述反應(yīng)的時(shí)間優(yōu)選為10～15小時(shí)，更優(yōu)選為12～13小時(shí)。

在本發(fā)明中，所述反應(yīng)完成后，本發(fā)明優(yōu)選將反應(yīng)體系進(jìn)行分離提取，以去除未反應(yīng)的光響應(yīng)藥物。在本發(fā)明中，所述分離提取的方法優(yōu)選為離心。

在本發(fā)明中，上述技術(shù)方案所述的復(fù)合物可作為藥物應(yīng)用，尤其適用于作為抗腫瘤藥物。本發(fā)明提供的復(fù)合物作為藥物能夠?qū)崿F(xiàn)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)成像引導(dǎo)及可選擇光控制藥物釋放。本發(fā)明提供的復(fù)合物采用發(fā)射光可轉(zhuǎn)變的上轉(zhuǎn)換納米顆粒與光響應(yīng)藥物偶聯(lián)，得到可選擇光控釋放型載藥納米粒子，通過(guò)高效能量傳遞，控制藥物釋放，達(dá)到高效的光控治療效果。本發(fā)明可調(diào)控上轉(zhuǎn)換納米顆粒的激發(fā)波長(zhǎng)產(chǎn)生不同波段的發(fā)射光，從而調(diào)諧與光控載藥分子的作用，可精確的控制藥物的釋放，實(shí)現(xiàn)一種激發(fā)光源進(jìn)行實(shí)時(shí)成像，其他激發(fā)光源進(jìn)行可光控釋放藥物的目的，應(yīng)用于實(shí)時(shí)成像引導(dǎo)的精準(zhǔn)光控藥物治療方法。

本發(fā)明提供的復(fù)合物作為抗腫瘤藥物進(jìn)行應(yīng)用優(yōu)選將其分散后通過(guò)靜脈注射或瘤內(nèi)直接注射方式作用于腫瘤部位，選擇波長(zhǎng)分別進(jìn)行成像與控制釋放藥物，用近紅外光照射釋放時(shí)間1～15分鐘，以進(jìn)行時(shí)時(shí)成像監(jiān)測(cè)引導(dǎo)治療。在本發(fā)明中，優(yōu)選采用生理鹽水或PBS溶劑進(jìn)行分散。

本發(fā)明優(yōu)選對(duì)上述復(fù)合物制備的藥物在波長(zhǎng)范圍為700～2000nm的激光下照射；更優(yōu)選在波長(zhǎng)為792nm、802nm和1500nm的激光下進(jìn)行成像，980nm的激光照射下進(jìn)行光控釋藥；最優(yōu)選在802nm的激光照射下進(jìn)行成像，980nm激光照射下進(jìn)行光控治療。本發(fā)明提供的復(fù)合物作為藥物其中的上轉(zhuǎn)換納米顆粒在980nm短時(shí)間的照射條件下，可以高效釋放藥物，而800nm左右的激發(fā)光對(duì)藥物釋放完全沒(méi)有影響，相對(duì)傳統(tǒng)單一發(fā)射模式，顯現(xiàn)出明顯的可控治療優(yōu)勢(shì)，因此在臨床治療方面有著廣闊的治療前景。本發(fā)明提供的復(fù)合物作為藥物結(jié)合成像手段能夠?qū)δ[瘤(或其他病變部位)進(jìn)行精準(zhǔn)有效的定位，實(shí)施準(zhǔn)確殺傷作用。同時(shí)這種復(fù)合物還可以修飾靶分子應(yīng)用于靶向熒光成像與靶向治療；結(jié)合Gd基質(zhì)作為MRI成像；Yb,Lu或Gd等元素的摻入，可以作為CT成像試劑。

本發(fā)明采用具有發(fā)射光可控制的多色上轉(zhuǎn)換納米粒子，通過(guò)響應(yīng)外部“生物窗口”波長(zhǎng)范圍內(nèi)的近紅外光的刺激分別發(fā)射具有成像功能及治療功能的上轉(zhuǎn)換熒光。本發(fā)明利用在上轉(zhuǎn)換納米粒子表面共價(jià)、配位或吸附光控載藥分子，提高能量傳遞效率，從而提高藥物釋放產(chǎn)率，提高療效；將上轉(zhuǎn)換成像波段與光控治療波段分開(kāi)，實(shí)現(xiàn)時(shí)間空間同時(shí)可控，從而實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)成像及成像引導(dǎo)的治療，達(dá)到對(duì)疾病的有效治療，最低限度的傷害，最終提高病人的預(yù)后。

本發(fā)明以下實(shí)施例所用原料均為市售商品。

實(shí)施例1NaYF₄:Er的制備

分別稱(chēng)取氯化釔YCl₃·6H₂O 227.3毫克、氯化鉺ErCl₃·6H₂O 95.3毫克，放入50毫升三口瓶中，加入4毫升油酸和17毫升1-十八(碳)烯。除氧半小時(shí)，隨后加熱升溫溶解上述物質(zhì)，待各物質(zhì)完全溶解后，停止加熱并冷卻至室溫，并向其中加入溶有0.1g氫氧化鈉和0.1482克氟化銨的甲醇溶液，之后升溫到65℃，待甲醇除凈后，升溫到300℃并保持1.5小時(shí)進(jìn)行反應(yīng)。待反應(yīng)結(jié)束后，將得到的反應(yīng)產(chǎn)物降至室溫，用丙酮和乙醇分別離心，得到NaYF₄:Yb,Er上轉(zhuǎn)換納米顆粒，溶于4毫升環(huán)己烷中待用。

對(duì)本發(fā)明實(shí)施例1制備得到的上轉(zhuǎn)換納米顆粒進(jìn)行掃描電子顯微鏡檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如圖1所示，圖1為本發(fā)明實(shí)施例1制備得到的上轉(zhuǎn)換納米顆粒的掃描電子顯微鏡照片；由圖1可以看出，本發(fā)明實(shí)施例1制備得到的上轉(zhuǎn)換納米顆粒的粒徑為20nm。

實(shí)施例2NaYF₄:Er@NaYF₄@Yb,Tm@NaYF₄的制備

取氯化釔YCl₃·6H₂O 60.7毫克，放入50毫升三口瓶中，加入3毫升油酸和7.5毫升1-十八(碳)烯。攪拌除氧半小時(shí)之后，加熱升溫，待氯化釔溶解后，停止加熱，冷卻至室溫，加入溶有25毫克氫氧化鈉和37毫克氟化銨的甲醇溶液，之后升溫到60℃并保持半小時(shí)。之后加入實(shí)施例1制備得到的上轉(zhuǎn)換納米粒子80℃保持45分鐘。隨后升溫到300℃并保持1.5小時(shí)。重復(fù)以上合成步驟進(jìn)行第二殼層包覆，取氯化鐿YbCl₃·6H₂O 385.0毫克、氯化銩TmCl₃·6H₂O 1.9毫克。再次重復(fù)NaYF₄殼層包覆步驟及用量，最終得到核殼的多色發(fā)光的NaYF₄:Yb,Er@NaYF₄@Yb,Tm@NaYF₄上轉(zhuǎn)換納米顆粒。

對(duì)本發(fā)明實(shí)施例2制備得到的上轉(zhuǎn)換納米顆粒進(jìn)行掃描電子顯微鏡檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果如圖2所示，圖2為本發(fā)明實(shí)施例2制備得到的上轉(zhuǎn)換納米顆粒的掃描電子顯微鏡照片；由圖2可以看出，本發(fā)明實(shí)施例2制備得到的上轉(zhuǎn)換納米顆粒尺寸均一為納米粒子，而非混合不同材料的樣品，其粒徑為40nm。

檢測(cè)本發(fā)明實(shí)施例2制備得到的上轉(zhuǎn)換納米顆粒不同波長(zhǎng)激發(fā)下的熒光發(fā)射圖譜，檢測(cè)方法為：

將實(shí)施例2中所得的上轉(zhuǎn)換納米粒子，溶于8mL環(huán)己烷中，取100μL溶液，稀釋10倍進(jìn)行光譜測(cè)量。分別以980nm和800nm激光器進(jìn)行光照，并采集光譜。

檢測(cè)結(jié)果如圖3所示，圖3為本發(fā)明實(shí)施例2制備的上轉(zhuǎn)換納米顆粒不同波長(zhǎng)激發(fā)下的熒光發(fā)射光譜，由圖3可知，本發(fā)明提供的這種納米粒子可以在800nm與980nm激發(fā)光下，發(fā)射不同波長(zhǎng)的上轉(zhuǎn)換光譜，實(shí)現(xiàn)選擇激發(fā)，光譜可調(diào)的光子上轉(zhuǎn)換發(fā)光。

實(shí)施例3紫杉醇光響應(yīng)藥物的制備

按照文獻(xiàn)J.Am.Chem.Soc.2012,134,5052-5055公開(kāi)的方法采用7-氨基-4-甲基香豆素作為光控分子、紫杉醇為藥物按照?qǐng)D4所述的流程制備得到紫杉醇光響應(yīng)藥物，圖4為紫杉醇光響應(yīng)藥物的制備的流程圖。

實(shí)施例4阿霉素光響應(yīng)藥物的制備

按照文獻(xiàn)small 2015,11,No.45,6078–6090公開(kāi)的方法，通過(guò)圖5中3號(hào)化合物與對(duì)硝基苯基氯甲酸酯制備得到光控分子，以阿霉素(DOX)為藥物，按照?qǐng)D5所示的流程制備得到阿霉素光響應(yīng)藥物，圖5為阿霉素光響應(yīng)藥物的制備的流程圖。

實(shí)施例5復(fù)合物的制備

將實(shí)施例2制備得到的上轉(zhuǎn)換納米顆粒10毫克溶于pH＝4鹽酸中，反應(yīng)6小時(shí)，去除表面油酸配體，經(jīng)三次離心，將所得沉淀復(fù)溶于四氫呋喃中備用，得到表面修飾后的上轉(zhuǎn)換納米顆粒。

將上述制備得到的表面修飾后的上轉(zhuǎn)換納米顆粒加入到實(shí)施例3制備得到的紫杉醇的光響應(yīng)藥物中，在室溫反應(yīng)12小時(shí)，離心提純得到紫杉醇的光控藥物復(fù)合物。

實(shí)施例6復(fù)合物的制備

將實(shí)施例2制備得到的上轉(zhuǎn)換納米顆粒10毫克溶于pH＝4鹽酸中，反應(yīng)6小時(shí)，去除表面油酸配體，經(jīng)三次離心，將所得沉淀復(fù)溶于四氫呋喃中備用，得到表面修飾后的上轉(zhuǎn)換納米顆粒。

按照下方法對(duì)實(shí)施例4制備的阿霉素光響應(yīng)藥物進(jìn)行脫保護(hù)基團(tuán)處理，具體過(guò)程為：

將實(shí)施例4制備得到的阿霉素光響應(yīng)藥物加入到二氯甲烷中，加入過(guò)量的三氟乙酸，反應(yīng)5小時(shí)，進(jìn)行脫保護(hù)。隨后，旋蒸除去溶劑及三氟乙酸，藥品烘干備用。

將上述制備得到的表面修飾后的上轉(zhuǎn)換納米顆粒加入到脫掉保護(hù)基團(tuán)(Boc)后的阿霉素光響應(yīng)藥物中，在室溫反應(yīng)12小時(shí)，離心提純得到阿霉素的光控藥物分子光控藥物復(fù)合物。

實(shí)施例7

將本發(fā)明實(shí)施例5制備得到的復(fù)合物溶于PBS溶液中10mg/mL，進(jìn)行選擇波段光控藥物釋放及成像原理性檢測(cè)，具體方法為：

選擇波段光控藥物釋放：將上述實(shí)施例4制備得到的復(fù)合物分成二組于1厘米的熒光池中，分別以980nm與800nm的激光器對(duì)樣品進(jìn)行光照。照射15分鐘后抽取相同體積(100μL)進(jìn)行離心，取上清進(jìn)行高效液相分析。

檢測(cè)結(jié)果為，本發(fā)明實(shí)施例5制備得到的復(fù)合物經(jīng)808nm激光器照射沒(méi)有藥物釋放，其可進(jìn)行細(xì)胞熒光成像，熒光成像圖片如圖7所示，圖7為本發(fā)明實(shí)施例測(cè)試得到的熒光成像圖片結(jié)果；經(jīng)980nm激光照射可進(jìn)行光控釋放藥物，得到如圖6所示的藥物釋放曲線，圖6為本發(fā)明實(shí)施例測(cè)試得到的藥物釋放曲線。因此，本發(fā)明提供的復(fù)合物能夠進(jìn)行成像與治療的可調(diào)控選擇。

實(shí)施例8

將本發(fā)明實(shí)施例5制備得到復(fù)合物采用水溶性介質(zhì)生理鹽水分散劑進(jìn)行分散后，質(zhì)量濃度為200μg/mL，注射到荷瘤鼠的腫瘤部位，采用下述方法進(jìn)行選擇波段進(jìn)行成像與釋藥檢測(cè)：

將腫瘤尺寸均勻荷瘤小鼠進(jìn)行分組，分成4組，分別為注射實(shí)施例5制得的復(fù)合物+800nm光照組a，注射實(shí)施例5制得的復(fù)合物+980nm光照組b，及實(shí)施例5制得的復(fù)合物不光照組c以及注射生理鹽水對(duì)照組，光照組每只鼠光照30分鐘，每5分鐘間隔2分鐘，治療7天，隨后取腫瘤進(jìn)行觀察。

檢測(cè)結(jié)果如圖8所示，圖8為本發(fā)明實(shí)施例測(cè)試得到的腫瘤治療效果圖，由圖8可知，與對(duì)照組相比，用980nm功率為0.25～2.5W/cm²近紅外光照射30分鐘，可實(shí)現(xiàn)小鼠的光控釋放藥物抑制腫瘤，用808nm功率為0.25～2.5W/cm²近紅外光照射，沒(méi)有抑制腫瘤作用，使其可以進(jìn)行實(shí)時(shí)成像監(jiān)控成像的目的。

由以上實(shí)施例可知，本發(fā)明提供了一種復(fù)合物，由上轉(zhuǎn)換納米顆粒和光響應(yīng)藥物復(fù)合而成；所述上轉(zhuǎn)換納米顆粒的基質(zhì)具有式I所示的原子比：MReF_n式I；式I中，M為Na、Ba或K，Re為Y或Gd，n為4或5；所述上轉(zhuǎn)換納米顆粒的摻雜稀土離子為：Yb³⁺、Er³⁺、Ho³⁺和Tm³⁺中的一種或幾種；所述光響應(yīng)藥物由光控分子和抗腫瘤物質(zhì)制備得到；所述光控分子選自香豆素類(lèi)化合物、硝基苯類(lèi)化合物、偶氮類(lèi)化合物或苯甲酰甲基酯類(lèi)化合物。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的這種復(fù)合物能夠?qū)⒊上癫ǘ闻c光控治療波段分開(kāi)，實(shí)現(xiàn)藥物在時(shí)間和空間上的同時(shí)可控，可作為治療腫瘤的藥物從而達(dá)到實(shí)時(shí)成像引導(dǎo)治療手段的目的。

以上實(shí)施例的說(shuō)明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想。應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行若干改進(jìn)和修飾，這些改進(jìn)和修飾也落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。