本技術(shù)所公開的主題提供了用于增強針對腫瘤抗原的免疫應(yīng)答的細胞、組合物和方法。其涉及包含靶向cd70的抗原識別受體（例如，tcr樣融合分子）的細胞。本技術(shù)所公開的細胞改善了針對實體腫瘤（例如，腎細胞癌）的活性。

背景技術(shù)：

1、基于細胞的免疫療法是用于治療癌癥的具有治愈潛力的療法?？赏ㄟ^引入針對抗原識別受體（例如，tcr樣融合分子）編碼的遺傳物質(zhì)來將t細胞和其他免疫細胞修飾為靶向腫瘤抗原?；颊吖こ袒腸ar?t細胞已顯示出針對一系列液體和實體惡性腫瘤的顯著功效。然而，在很大一部分患者中發(fā)生治療失敗和復發(fā)。因此，仍然需要改善免疫療法。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本技術(shù)所公開的主題提供了在患有腎細胞癌、胰腺癌或卵巢癌的受試者中減小腫瘤負荷和/或預防和/或治療腫瘤的方法。另外或可替代地，本技術(shù)所公開的主題提供了在受試者中減小腫瘤負荷和/或預防和/或治療腫瘤的方法，其中腫瘤為腎細胞癌、胰腺癌或卵巢癌。

2、在某些實施例中，所述方法包括：向受試者施用有效量的包含靶向cd70的tcr樣融合分子的細胞。在某些實施例中，所述方法在受試者中減少腫瘤細胞的數(shù)量、減小腫瘤尺寸和/或根除腫瘤。

3、本技術(shù)所公開的主題進一步提供了在有此需要的受試者中預防和/或治療腫瘤的方法，所述方法包括：從受試者獲得具有不可檢測的cd70多肽水平的腫瘤樣品，通過fish來檢測cd70多核苷酸，以及如果檢測到cd70多核苷酸，則向受試者施用有效量的包含靶向cd70的tcr樣融合分子的細胞。此外，本技術(shù)所公開的主題進一步提供了在有此需要的受試者中預防和/或治療腫瘤的方法，所述方法包括：從受試者獲得具有不可檢測的cd70多肽水平的腫瘤樣品，b)使樣品與ezh2抑制劑接觸，以及如果在樣品中檢測到cd70多肽，則向受試者施用有效量的包含靶向cd70的tcr樣融合分子的細胞。

4、在某些實施例中，tcr樣融合分子包含：i)第一抗原結(jié)合鏈，所述第一抗原結(jié)合鏈包含抗體的重鏈可變區(qū)(vh)的抗原結(jié)合片段；和ii)第二抗原結(jié)合鏈，所述第二抗原結(jié)合鏈包含抗體的輕鏈可變區(qū)(vl)的抗原結(jié)合片段；其中第一抗原結(jié)合鏈和第二抗原結(jié)合鏈a)各自包含trac多肽或trbc多肽，并且b)與第二抗原結(jié)合，其中tcr樣融合分子以獨立于hla的方式與第二抗原結(jié)合。

5、在某些實施例中，其中trac多肽和trbc多肽中的至少一者為內(nèi)源性的。在某些實施例中，第一抗原結(jié)合鏈和第二抗原結(jié)合鏈以約1?×?10-8?m或更小的解離常數(shù)(kd)與第二抗原結(jié)合。在某些實施例中，第一抗原結(jié)合鏈和第二抗原結(jié)合鏈以約5?×?10-9?m或更小的解離常數(shù)(kd)與第二抗原結(jié)合。

6、在某些實施例中，第一抗原結(jié)合鏈包含抗體的vh的抗原結(jié)合片段以及trbc多肽，并且第二抗原結(jié)合鏈包含抗體的vl的抗原結(jié)合片段以及trac多肽。在某些實施例中，第一抗原結(jié)合鏈包含抗體的vh的抗原結(jié)合片段以及trac多肽，并且第二抗原結(jié)合鏈包含抗體的vl的抗原結(jié)合片段以及trbc多肽。

7、在某些實施例中，i)第一抗原結(jié)合鏈包含：包含seq?id?no:?34中所示的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:?35中所示的氨基酸序列的cdr2以及包含seq?id?no:?36中所示的氨基序列的cdr3，并且第二抗原結(jié)合鏈包含：包含seq?id?no:?37中所示的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:?38中所示的氨基酸序列的cdr2以及包含seq?id?no:?39中所示的氨基酸序列的cdr3。在某些實施例中，第一抗原結(jié)合鏈包含：包含seq?id?no:?37中所示的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:?38中所示的氨基酸序列的cdr2以及包含seq?id?no:?39中所示的氨基序列的cdr3，并且第二抗原結(jié)合鏈包含：包含seq?id?no:?34中所示的氨基酸序列的cdr1、包含seq?id?no:?35中所示的氨基酸序列的cdr2以及包含seq?id?no:?36中所示的氨基酸序列的cdr3。

8、在某些實施例中，第一抗原結(jié)合鏈包含seq?id?no:?40中所示的重鏈可變區(qū)的cdr1、cdr2和cdr3，并且第二抗原結(jié)合鏈包含seq?id?no:?42中所示的輕鏈可變區(qū)的cdr1、cdr2和cdr3。在某些實施例中，第一抗原結(jié)合鏈包含seq?id?no:?42中所示的輕鏈可變區(qū)的cdr1、cdr2和cdr3，并且第二抗原結(jié)合鏈包含seq?id?no:?40中所示的重鏈可變區(qū)的cdr1、cdr2和cdr3。在某些實施例中，第一抗原結(jié)合鏈包含seq?id?no:?40中所示的重鏈可變區(qū)，并且第二抗原結(jié)合鏈包含seq?id?no:?42中所示的輕鏈可變區(qū)的cdr1、cdr2和cdr3。在某些實施例中，第一抗原結(jié)合鏈seq?id?no:?42中所示的輕鏈可變區(qū)；并且第二抗原結(jié)合鏈包含seq?id?no:?40中所示的重鏈可變區(qū)。

9、在某些實施例中，第一抗原結(jié)合鏈和第二抗原結(jié)合鏈能夠與cd3ζ多肽締合。在某些實施例中，第一抗原結(jié)合鏈和第二抗原結(jié)合鏈在與第二抗原結(jié)合時能夠激活cd3ζ多肽。在某些實施例中，cd3ζ多肽的激活能夠激活細胞。

10、在某些實施例中，細胞進一步包括對trac基因座的基因破壞。在某些實施例中，細胞進一步包括對cd70基因座的基因破壞。在某些實施例中，細胞進一步包括對trac基因座和cd70的基因破壞。

11、在某些實施例中，腫瘤包含具有cd70低抗原密度的腫瘤細胞。在某些實施例中，腫瘤具有低腫瘤細胞頻率的cd70+腫瘤細胞。在某些實施例中，腫瘤包含不能通過以下項來檢測的cd70多肽：免疫擴散、免疫電泳、放射免疫測定(ria)、酶聯(lián)免疫吸附測定(elisa)、免疫熒光測定、蛋白質(zhì)印跡、結(jié)合物-配體測定、免疫組織化學技術(shù)、凝集、補體測定、高效液相色譜(hplc)、薄層色譜(tlc)、超擴散色譜或它們的組合。在某些實施例中，腫瘤和/或贅生物包含不能通過免疫組織化學(ihc)來檢測的cd70多肽。在某些實施例中，腫瘤包含不能通過免疫組織化學(ihc)來檢測的cd70多肽。

12、在某些實施例中，細胞是淋系的細胞或髓系的細胞。在某些實施例中，淋系的細胞選自由以下項組成的組：t細胞、b細胞、自然殺傷(nk)細胞和樹突狀細胞。在某些實施例中，細胞是t細胞。在某些實施例中，t細胞衍生自誘導多能干細胞。在某些實施例中，t細胞是cd8+?t細胞。在某些實施例中，cd8+?t細胞是獨立于cd4的。在某些實施例中，t細胞選自由以下項組成的組：細胞毒性t淋巴細胞(ctl)、γδ?t細胞、腫瘤浸潤性淋巴細胞(til)、調(diào)節(jié)性t細胞和自然殺傷t?(nkt)細胞。

13、在某些實施例中，細胞進一步包含靶向第二抗原的嵌合抗原受體(car)。在某些實施例中，car包含與第一抗原結(jié)合的胞外抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，以及能夠向細胞遞送激活信號的胞內(nèi)信號傳導結(jié)構(gòu)域。在某些實施例中，car的胞內(nèi)信號傳導結(jié)構(gòu)域包含cd3ζ多肽。在某些實施例中，cd3ζ多肽為天然cd3ζ多肽或經(jīng)修飾的cd3ζ多肽。在某些實施例中，經(jīng)修飾的cd3ζ多肽包含天然itam1、由兩個功能缺失突變組成的itam2變體以及由兩個功能缺失突變組成的itam3變體。在某些實施例中，car的胞內(nèi)信號傳導結(jié)構(gòu)域進一步包含至少一個共刺激信號傳導區(qū)。在某些實施例中，所述至少一個共刺激信號傳導區(qū)包含至少共刺激分子的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域或其一部分。在某些實施例中，共刺激分子選自由以下項組成的組：cd28、4-1bb、ox40、cd27、cd40、cd154、cd97、cd11a/cd18、icos、dap-10、cd2、cd150、cd226和nkg2d。在某些實施例中，car包含跨膜結(jié)構(gòu)域。

14、在某些實施例中，細胞進一步包含嵌合共刺激受體(ccr)。在某些實施例中，ccr包含與第三抗原結(jié)合的胞外抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，以及能夠向細胞遞送共刺激信號但不單獨向細胞遞送激活信號的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。在某些實施例中，ccr的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域包含至少共刺激分子的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域或其一部分。在某些實施例中，共刺激分子選自由以下項組成的組：cd28、4-1bb、ox40、cd27、cd40、cd154、cd97、cd11a/cd18、icos、dap-10、cd2、cd150、cd226和nkg2d。

15、在某些實施例中，第二抗原為腫瘤抗原或病原體抗原。在某些實施例中，腫瘤抗原選自由以下項組成的組：cd19、il1rap、abcg2、achr、ackr6、adamts13、adgre2、adgre2(emr2)、adora3、adra1d、ager、als2、巨細胞病毒(cmv)感染細胞的抗原（例如，細胞表面抗原）、ano9、aqp2、asic3、asprv1、atp6v0a4、b3gnt4、b7-h3、bcma、best4、c3orf35、cadm3、caix、capn3、ccdc155、ccr1、cd10、cd117、cd123、cd133、cd135?(flt3)、cd138、cd20、cd22、cd244?(2b4)、cd25、cd26、cd30、cd300lf、cd312、cd32、cd321、cd33、cd34、cd36、cd38、cd41、cd44、cd44v6、cd47、cd49f、cd56、cd7、cd71、cd74、cd8、cd82、cd96、cd98、cd99、cdh13、cdhr1、cea、ceacam6、chst3、clec12a、clec1a、cll1、cnih2、col15a1、colec12、cpm、cr1、cx3cr1、cxcr4、cyp4f11、daglb、darc、dfnb31、dgki、egf1r、egfr-viii、egp-2、egp-40、elovl6、emb、emc10、emr2、eng、epcam、epha2、epha4、erbb、erbb2、erb-b3、erb-b4、e-選擇素、exoc3l4、extl3、fam186b、fbp、fcgr1a、fkbp1b、flrt1、葉酸受體-α、folr2、frmd5、gabrb2、gas2、gd2、gd3、gdpd3、gna14、gnaz、gpr153、gpr56、gypa、hephl1、her-2、hert、hilpda、hla-dr、hook1、htert、htr2a、icam1、igfbp3、il10rb、il20rb、il23r、ildr1、白細胞介素-13受體亞基α-2?(il-13rα2)、itfg3、itga4、itga5、itga8、itgax、itgb5、itgb8、jam3、kcnd1、kcnj5、kcnk13、kcnn4、kcnv2、kdr、kif19、kif26b、κ-輕鏈、l1cam、lax1、lepr、lewisy?(cd174)、lewis?y?(ley)、lilra2、lilra6、lilrb2、lilrb3、lilrb4、loxl4、lpar2、lrrc37a3、lrrc8e、lrrn2、lrrtm2、ltb4r、mage-a1、magea3、mansc1、mart1、gp100、mboat1、mboat7、黑色素瘤抗原家族a、間皮素(msln)、mfap3l、mmp25、mrp1、mt-nd1、粘液素1(muc1)、粘液素16?(muc16)、myadm、myadml2、ngfr、nkcs1、nkg2d配體、nlgn3、npas2、ny-eso-1、癌胚胎抗原(h5t4)、otoa、p2ry13、p53、pde3a、pear1、piezo1、plxna4、plxnc1、pnpla3、ppfia4、ppp2r5b、prame、prame、前列腺干細胞抗原(psca)、前列腺特異性膜抗原(psma)、蛋白酶3?(pr1)、psd2、ptprj、rdh16、受體酪氨酸蛋白激酶erb-b2、rhbdl3、rnf173、rnf183、ror1、ryr2、scin、scn11a、scn2a、scnn1d、sec31b、sema4a、sh3pxd2a、siglec11、sirpb1、slc16a6、slc19a1、slc22a5、slc25a36、slc25a41、slc30a1、slc34a3、slc43a3、slc44a1、slc44a3、slc45a3、slc6a16、slc6a6、slc8a3、slc9a1、slco2b1、spag17、stc1、ston2、sun3、生存素、susd2、sync、tacstd2、tas1r3、tex29、tfr2、tim-3?(havcr2)、tlr2、tmeff2、tmem145、tmem27、tmem40、tmem59l、tmem89、tmprss5、tnfrsf14、tnfrsf1b、trim55、tspear、ttyh3、腫瘤相關(guān)糖蛋白72?(tag-72)、酪氨酸酶、血管內(nèi)皮生長因子r2?(vegf-r2)、vla-4、wilms腫瘤蛋白(wt-1)、wnt4、wt1和zdhhc11。

16、在某些實施例中，細胞進一步包含至少一種外源性共刺激配體。在某些實施例中，所述至少一種外源性共刺激配體選自由以下項組成的組：腫瘤壞死因子(tnf)家族成員、免疫球蛋白(ig)超家族成員以及它們的組合。在某些實施例中，tnf家族成員選自由以下項組成的組：4-1bbl、ox40l、cd70、fasl、gitrl、tnf相關(guān)凋亡誘導配體(trail)、cd30l、light(tnfsf14)、cd40l。

17、在某些實施例中，ig超家族成員選自由以下項組成的組：cd80、cd86、icoslg以及它們的組合。在某些實施例中，所述至少一種外源性共刺激配體包括cd80。在某些實施例中，所述至少一種外源性共刺激配體包括4-1bbl。在某些實施例中，細胞包含兩種外源性共刺激配體。在某些實施例中，所述至少兩種外源性共刺激配體包括cd80和4-1bbl。

18、在某些實施例中，細胞進一步包含融合多肽，所述融合多肽包含：a)共刺激配體的胞外結(jié)構(gòu)域和跨膜結(jié)構(gòu)域，和b)第一共刺激分子的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。在某些實施例中，共刺激配體選自由以下項組成的組：腫瘤壞死因子(tnf)家族成員、免疫球蛋白(ig)超家族成員以及它們的組合。在某些實施例中，tnf家族成員選自由以下項組成的組：4-1bbl、ox40l、cd70、gitrl、cd40l以及它們的組合。在某些實施例中，ig超家族成員選自由以下項組成的組：cd80、cd86、icoslg以及它們的組合。在某些實施例中，共刺激配體為cd80。在某些實施例中，第一共刺激分子選自由以下項組成的組：cd28、4-1bb、ox40、icos、dap-10、cd27、cd40、nkg2d、cd2以及它們的組合。在某些實施例中，第一共刺激分子為4-1bb。在某些實施例中，共刺激配體為cd80并且第一共刺激分子為4-1bb。在某些實施例中，融合多肽進一步包含第二共刺激分子的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。在某些實施例中，第二共刺激分子選自由以下項組成的組：cd28、4-1bb、ox40、icos、dap-10、cd27、cd40、nkg2d、cd2以及它們的組合。在某些實施例中，第二共刺激分子為cd28。在某些實施例中，共刺激配體為cd80，第一共刺激分子為4-1bb，并且第二共刺激分子為cd28。

19、在某些實施例中，細胞是自體的。在某些實施例中，細胞是異體的。