本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥，具體涉及脂質(zhì)體、脂質(zhì)體納米藥物遞送系統(tǒng)、其制備方法和在治療宮頸癌中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、子宮頸癌是最常見的惡性腫瘤之一，也是全球女性癌癥死亡的第二大原因?；熓菍m頸癌的主要治療方法。然而，由于顯著的副作用和化療耐藥的發(fā)展，患者經(jīng)常經(jīng)歷復發(fā)，最終導致死亡。

2、氯尼達明（lnd）因低生物利用度和肝腎毒性導致臨床應(yīng)用受到限制。脂質(zhì)體是一種具有類似細胞膜的脂質(zhì)囊泡，因其生物相容性和生物可降解性已被作為藥物載體應(yīng)用。由于氯尼達明是疏水性藥物，它可被包裹于脂質(zhì)體的磷脂雙分子層中，從而提高其生物利用度和抗腫瘤作用。然而，現(xiàn)有脂質(zhì)體藥物遞送系統(tǒng)存在以下幾個缺點：

3、1.靶向性差：由于沒有特定的靶向機制，導致藥物在體內(nèi)分布效率不高，降低治療效果。

4、2.半衰期短：在血液循環(huán)過程中易被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)清除，需要頻繁給藥維持藥效。

5、3.生物利用度低：藥物在體循環(huán)代謝過程中被單核巨噬系統(tǒng)吞噬，大多數(shù)被截留在肝和脾，不能有效的到達血管外的腫瘤組織，無法充分發(fā)揮療效。

6、因此構(gòu)建主動靶向脂質(zhì)體藥物遞送系統(tǒng)可對宮頸癌的治療具有重要意義。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供了一種脂質(zhì)體，其是谷氨酰胺功能化的脂質(zhì)體，該脂質(zhì)體能夠有效地將糖酵解抑制劑遞送至宮頸癌部位。基于此，本發(fā)明進一步提供了尺寸均一、穩(wěn)定性高、長效緩釋、具有良好生物安全性、靶向效率高、顯著提高宮頸癌治療效果的脂質(zhì)體納米藥物遞送系統(tǒng)。本發(fā)明還提供相應(yīng)的制備方法以及其在制備治療宮頸癌藥物中的應(yīng)用。

2、靶向代謝脆弱性已成為抑制癌癥進展的一種有前景的策略。一些研究者提出，糖酵解在宮頸癌中增加。為了驗證宮頸癌的這種代謝脆弱性，本發(fā)明申請人提出了一種整合空間代謝組和空間轉(zhuǎn)錄組多組學的方法，在宮頸癌樣本中驗證糖酵解成癮。此外，還發(fā)現(xiàn)谷氨酰胺轉(zhuǎn)運體（asct2）在宮頸癌中過表達。因此，本發(fā)明申請人構(gòu)建了一種谷氨酰胺（gln）功能化的脂質(zhì)體（gl）來有效地將糖酵解抑制劑遞送至宮頸癌部位。靶向腫瘤部位后，釋放的糖酵解抑制劑顯著下調(diào)糖酵解，觸發(fā)線粒體跨膜電位的耗散，并產(chǎn)生活性氧（ros），從而切斷能量供應(yīng)，造成細胞損傷，促進宮頸癌的消退?？傊?，構(gòu)建的谷氨酰胺功能化的脂質(zhì)體及相應(yīng)的藥物遞送系統(tǒng)為宮頸癌治療提供了新的視角。

3、本發(fā)明提供一種脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體由磷脂、膽固醇和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-谷氨酰胺組成；作為優(yōu)選，所述磷脂、膽固醇與二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-谷氨酰胺的質(zhì)量比為（15-20）:（1-3）:（1-5）。

4、作為優(yōu)選，所述磷脂、膽固醇與二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-谷氨酰胺的質(zhì)量比為20：1：2。

5、作為優(yōu)選，所述磷脂包括：大豆磷脂酰膽堿、二月桂酰卵磷脂、二肉豆蔻酰卵磷脂、二棕櫚酰卵磷脂、二硬脂酰卵磷脂、二硬脂酰卵磷脂、蛋黃卵磷脂、氫化豆磷脂、二油?；蚜字?、二月桂酰磷脂酰甘油、二棕櫚脂酰甘油、二硬脂酰磷脂酰甘油、二油酰磷脂酰甘油和二肉豆蔻酰磷脂酸中的一種或幾種。

6、本發(fā)明還提供上述的脂質(zhì)體的制備方法，采用薄膜分散法、超聲分散法、反相蒸發(fā)法、冷凍干燥法、凍融法、復乳法或注入法制備脂質(zhì)體；

7、作為優(yōu)選，所述薄膜分散法包括以下步驟：

8、（1）將磷脂、膽固醇和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-谷氨酰胺按照比例溶于氯仿中，得到溶液，將溶液減壓蒸發(fā)成膜，加入去離子水，超聲水化，得到脂質(zhì)體原液；

9、（2）采用脂質(zhì)體擠出器，將步驟（1）得到的脂質(zhì)體原液通過薄膜進行擠出，得到脂質(zhì)體。

10、作為優(yōu)選，步驟（1）中，所述減壓蒸發(fā)的參數(shù)為：旋蒸速度：70rpm、溫度：45℃；和/或

11、所述超聲水化的參數(shù)為：超聲的功率為150w，采用超聲脈沖模式：在冰浴上2-10秒開，2-10秒關(guān)；優(yōu)選為在冰浴上3秒開，6秒關(guān)。

12、作為優(yōu)選，步驟（2）中，所述薄膜包括聚碳酸酯膜；優(yōu)選將陽離子脂質(zhì)體原液依次通過孔徑為450nm-100nm的聚碳酸酯膜的多張聚碳酸脂膜，每張膜進行10-11個循環(huán)。

13、作為優(yōu)選，還包括在步驟（2）制備的脂質(zhì)體中加入凍干劑進行凍干的步驟；

14、作為優(yōu)選，所述凍干劑包括海藻糖；所述凍干劑為脂質(zhì)體重量的5%；和/或

15、所述凍干的參數(shù)為：溫度為：-80℃，真空度：0.01mbar。

16、本發(fā)明還提供脂質(zhì)體納米藥物遞送系統(tǒng)，其特征在于：所述脂質(zhì)體納米藥物遞送系統(tǒng)包括上述的脂質(zhì)體和糖酵解抑制劑；

17、作為優(yōu)選，所述磷脂、膽固醇、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-谷氨酰胺與糖酵解抑制劑的質(zhì)量比為（15-20）:（1-3）:（1-5）：2；

18、作為優(yōu)選，所述糖酵解抑制劑為氯尼達明（lnd）。

19、根據(jù)本發(fā)明的原理，即糖酵解時空間組學數(shù)據(jù)顯示宮頸癌糖酵解異常表達，故，本發(fā)明的脂質(zhì)體納米藥物遞送系統(tǒng)中可以使用現(xiàn)有技術(shù)中的常用糖酵解抑制劑，即可以利用該系統(tǒng)進行各種糖酵解抑制劑的遞送。由于氯尼達明是臨床上二期的藥物，且臨床結(jié)果顯示生物利用度低，所以本發(fā)明在實施例中選用其進行納米脂質(zhì)體的包載，以更好的研究本發(fā)明的脂質(zhì)體的效果。

20、本發(fā)明還提供上述的脂質(zhì)體納米藥物遞送系統(tǒng)的制備方法，采用薄膜分散法、超聲分散法、反相蒸發(fā)法、冷凍干燥法、凍融法、復乳法或注入法制備脂質(zhì)體納米藥物遞送系統(tǒng)；

21、作為優(yōu)選，所述薄膜分散法包括以下步驟：

22、（1）將磷脂、膽固醇、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-谷氨酰胺與糖酵解抑制劑按照比例溶于有機溶劑中，得到溶液，將溶液減壓蒸發(fā)成膜，加入去離子水，超聲水化，得到脂質(zhì)體原液；

23、（2）采用脂質(zhì)體擠出器，將步驟（1）得到的脂質(zhì)體原液通過薄膜進行擠出，得到脂質(zhì)體納米藥物遞送系統(tǒng)。

24、作為優(yōu)選，步驟（1）中，所述減壓蒸發(fā)的參數(shù)為：旋蒸速度：70rpm、溫度：45℃；和/或

25、所述超聲水化的參數(shù)為：超聲的功率為150w，采用超聲脈沖模式：在冰浴上2-10秒開，2-10秒關(guān)；優(yōu)選為在冰浴上3秒開，6秒關(guān)。

26、作為優(yōu)選，步驟（2）中，所述薄膜包括聚碳酸酯膜；優(yōu)選將陽離子脂質(zhì)體原液依次通過孔徑為450nm-100nm的聚碳酸酯膜的多張聚碳酸脂膜，每張膜進行10個循環(huán)。

27、作為優(yōu)選，還包括在步驟（2）制備的脂質(zhì)體溶液中加入凍干劑進行凍干的步驟；

28、作為優(yōu)選，所述凍干劑包括海藻糖；所述凍干劑為脂質(zhì)體重量的5%；和/或

29、所述凍干的參數(shù)為：溫度為：-80℃，真空度：0.01mbar。

30、本發(fā)明還提供上述的脂質(zhì)體或脂質(zhì)體納米藥物遞送系統(tǒng)在制備治療宮頸癌的藥物中的應(yīng)用。

31、本發(fā)明利用宮頸癌細胞和正常細胞之間的差異，通過在脂質(zhì)體表面修飾谷氨酰胺，實現(xiàn)藥物對宮頸癌的精確靶向。本發(fā)明的脂質(zhì)體納米藥物遞送系統(tǒng)具有下述優(yōu)點：1）有良好的生物相容性；2）低免疫原性；3）藥物高負載量；4）可降解性；5）有良好的穩(wěn)定性，可延長在血液中的循環(huán)時間，同時提高宮頸癌治療效果。