一種水紅花子果皮總黃酮提取物的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種藥物原料的提取制備方法，具體涉及水紅花子果皮總黃酮提取物 的制備新方法。本發(fā)明所述的方法是指水紅花子果皮經(jīng)乙醇溶液加熱回流提取，合并醇提 液，過濾，濃縮，濃縮液用大孔樹脂吸附，水洗柱后用不同濃度的乙醇溶液依次洗脫，洗脫液 回收溶劑，干燥，即得水紅花子果皮總黃酮提取物。
【背景技術(shù)】
[0002] 水紅花子為寥科植物紅寥（Polygonumorien2taleL?)的干燥成熟果實，呈 棕黑色扁圓形，有光澤，雙面微凹，中部略有縱向隆起.水紅花子歸肝、胃經(jīng)，具有散血消 徽、消積止痛的功效，善消氣血水互結(jié)之癥瘕積聚。主要含有槲皮素、花旗松素及三羥基二 氫黃酮等，主要存在于水紅花子的果皮中。黃酮類化合物具有廣泛的生物活性，作為一種功 能成分，其主要作用有：抗腫瘤，延緩衰老，增強(qiáng)心血管功能，治療慢性前列腺炎，增強(qiáng)免疫 力，調(diào)解內(nèi)分泌系統(tǒng)，護(hù)肝，抗炎，抗過敏，抑菌，抗病毒等.所以黃酮類化合物的研宄日益 引起了人們的重視。其中水紅花子果皮中黃酮類成分槲皮素具有較強(qiáng)的抗癌活性，對惡性 腫瘤生長和轉(zhuǎn)移具有良好的抑制作用，特別是作為化學(xué)預(yù)防劑能全面地作用于癌發(fā)生的始 發(fā)、促癌和演進(jìn)3個階段，兼有抗致癌、抗促癌和誘導(dǎo)分化的作用?；ㄆ焖伤鼐哂休^強(qiáng)的抗 氧化，抗影射作用。具有再生，解毒和抗體逆流的作用。能抑制過酸氧化脂化合物及細(xì)胞膜 的病變。阻滯自由基的破壞作用，阻礙細(xì)胞老化及各種疾病的發(fā)展過程。臨床上主要用于 抗菌消炎、保護(hù)肝臟性能治療和預(yù)防心腦血管疾病、呼吸系統(tǒng)疾病糖尿病的預(yù)防和治療等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的，是提供一種水紅花子果皮總黃酮提取物的制備方法。用本方法提 取的總黃酮提取物的純度高，方法簡便實用，價廉，安全，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
[0004] 采用的技術(shù)方案是： 一種水紅花子果皮總黃酮提取物的制備方法，包括下述工藝步驟： 1、取干燥的水紅花子果實，經(jīng)脫谷機(jī)脫皮，取其果皮用70%乙醇提取，3次，第一次加醇 8-10倍量，提取2小時，濾過；第二次加醇6-8倍量提取1. 5小時，濾過；第三次加醇5-6倍 量提取1. 5小時，濾過，合并3次濾液，回收乙醇至無醇味，得濃縮液備用。
[0005] 2、將步驟1制得的濃縮液，進(jìn)一步經(jīng)大孔樹脂純化。
[0006] 大孔吸附樹脂包括D101、AB-8、HP-20樹脂或其它類型的吸附樹脂吸附2-4小時， 用水洗脫至無色，再進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液濃度為30%、40%、50%、60%、70%的乙醇，依次洗 脫，收集乙醇洗脫液。
[0007] 3、將步驟2所得的乙醇洗脫液濃縮(常規(guī)或減壓)，50°C下干燥即得水紅花子果皮 總黃酮提取物。上述百分比為質(zhì)量百分比。
[0008] 上述干燥可采用真空干燥、噴霧干燥或冷凍干燥。
[0009] 應(yīng)用本方法得到的水紅花子果皮總黃酮提取物的收率為5. 0%以上，總黃酮的含 量不低于40%。
[0010] 本提取物可單獨或與其它藥物組合作為原料藥應(yīng)用于各種相關(guān)疾病治療的藥劑 中。
[0011] 本發(fā)明選用的水紅花子果皮原料為寥科植物紅寥（Polygonumorien2taleL.) 的干燥成熟果皮。
[0012] 本發(fā)明工藝簡單，收率高，適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
【具體實施方式】
[0013] 實施例一 一種水紅花子果皮總黃酮提取物的制備方法，其特征是包括下述工藝步驟： 1、取干燥的水紅花子果實，經(jīng)脫谷機(jī)脫皮，取其果皮用70%乙醇提取，3次，第一次加醇 10倍量，提取2小時，濾過；第二次加醇8倍量，提取1. 5小時，濾過；第三次加醇6倍量，提 取1. 5小時，濾過，合并3次濾液，回收乙醇至無醇味，得濃縮液備用。
[0014] 2、將步驟1制得的濃縮液，進(jìn)一步經(jīng)大孔樹脂純化。
[0015] 3、步驟2的方法是大孔吸附樹脂采用D101、AB-8或HP-20的吸附樹脂吸附2-4小 時，用水洗脫至無色，再用不同濃度（30%、40%、50%、60%、70%)的乙醇依次洗脫，收集乙醇洗 脫液。
[0016] 4、將步驟3所得的乙醇洗脫液濃縮(常規(guī)或減壓)，50°C下干燥即得水紅花子果皮 總黃酮提取物，總黃酮大于40%。
[0017] 實施例二 一種水紅花子果皮總黃酮提取物的制備方法，取水紅花子果皮500g，用70%乙醇提取3 次，第一次加醇10倍量，提取2小時，濾過；第二次加醇8倍量，提取1. 5小時，濾過；第三次 加醇6倍量，提取1. 5小時，濾過，合并3次濾液，回收乙醇至無醇味，濃縮液用D101大孔樹 脂吸附，水洗至無色，依次用30%、40%、50%、60%、70%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙 醇，減壓濃縮，50°C以下真空干燥，得水紅花子果皮總黃酮提取物28克(收率5. 6%)，總黃酮 含量為42. 5%。
[0018] 實驗實施例一 1、水紅花子果皮總黃酮提取物對小鼠肝腫瘤H22的體內(nèi)抗癌活性研宄。
[0019] 1. 1H22腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)與傳代 H22細(xì)胞接種前與DMEM+10%小牛血清培養(yǎng)液中37°C、5%C02傳代培養(yǎng)至狀態(tài)良好，制 成2X107個/ml的細(xì)胞懸液，接種于健康昆明種小鼠腹腔，腹水傳代。
[0020] 1. 2建立H22肝癌小鼠實體瘤模型 無菌條件下用注射器抽取接種7-9天的H22小鼠腹水，以滅菌生理鹽水稀釋調(diào)整細(xì)胞 量為1X107個/ml，接種到30只小鼠腋下，每只0. 2ml，觀察小鼠生長情況，制作實體瘤 模型。
[0021] 1.3動物分組與給藥 24h后隨機(jī)分成3組，每組10只：①陰性對照組，每天上午生理鹽水0. 2ml灌胃。② 陽性對照組，每天上午環(huán)磷酰胺（20mg/kg)灌胃0.2mL;③給藥組，依據(jù)人的給藥劑量折 合每天上午水紅花子總黃酮提取物（4. 5mg/kg)，各組連續(xù)灌胃10d，每天觀察實體瘤的生 長情況。
[0022] 1. 4抑瘤率檢測 小鼠經(jīng)實驗處理后，于第11d脫頸椎處死，鑷子鑷住小鼠右腋腫瘤生長部位皮膚后，用 手術(shù)剪子剪開皮膚，暴露腫瘤，手術(shù)剪鈍性剝離腫瘤，用天平稱瘤重，計算抑制率。以抑瘤率 來判斷抑瘤作用。
[0023] 腫瘤抑制率（％ ) = [1_(平均實驗組瘤重/平均對照組瘤重）]X100% 1.5統(tǒng)計學(xué)處理 實驗數(shù)據(jù)采用SPSS11. 5統(tǒng)計軟件中Dnuent單因素方差分析進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理若P< 0. 01表明組間有顯著性差異，結(jié)果如下表。
[0024] 表1水紅花子總黃酮提取物對H22小鼠的瘤重的影響（X土s，n=10)
【主權(quán)項】
1. 一種水紅花子果皮總黃酮提取物的制備方法，其特征是包括下述工藝步驟： (1) 取干燥的水紅花子果實，經(jīng)脫谷機(jī)脫皮，取其果皮用70%乙醇提取，3次，第一次加 醇10倍量，提取2小時，濾過；第二次加醇8倍量，提取1. 5小時，濾過；第三次加醇6倍量， 提取1. 5小時，濾過，合并3次濾液，回收乙醇至無醇味，得濃縮液備用； (2) 將步驟（1)制得的濃縮液，進(jìn)一步經(jīng)大孔樹脂純化； 大孔吸附樹脂包括D101、AB-8、HP-20 ;吸附樹脂吸附2-4小時，用水洗脫至無色，再用 濃度為30%、40%、50%、60%、70%的乙醇依次洗脫，收集乙醇洗脫液； (3) 將步驟（2)所得的乙醇洗脫液經(jīng)常規(guī)或減壓濃縮，50°C以下干燥即得水紅花子果皮 總黃酮提取物。
【專利摘要】一種水紅花子果皮總黃酮提取物的制備方法，是取水紅花子果皮500g，用70%乙醇提取3次，第一次加醇10倍量，提取2小時，濾過；第二次加醇8倍量，提取1.5小時，濾過；第三次加醇6倍量，提取1.5小時，濾過，合并3次濾液，回收乙醇至無醇味，濃縮液用D101大孔樹脂吸附，水洗至無色，依次用30%、40%、50%、60%、70%的乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，回收乙醇，減壓濃縮，50℃以下真空干燥，得水紅花子果皮總黃酮提取物28克（收率5.6%），總黃酮含量為42.5%。本發(fā)明工藝簡單，收率高，適合于工業(yè)化生產(chǎn)。
【IPC分類】A61K131-00, A61P35-00, A61K36-70
【公開號】CN104523851
【申請?zhí)枴緾N201410721423
【發(fā)明人】翟延君, 初正云, 孟憲生, 張慧, 王添敏, 英錫相, 李本俊
【申請人】遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【公開日】2015年4月22日
【申請日】2014年12月3日