一種蕎麥殼黃酮類提取物及作為dpp4抑制劑的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬保健食品和藥品領(lǐng)域，具體涉及一種蕎麥殼黃酮類提取物及作為DPP4 抑制劑的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿病是以糖代謝紊亂為主的全身性代謝紊亂疾病，被列為世界第三大疾病。按 發(fā)病特點可分為I型(胰島素依賴型）和II型(非胰島素依賴型）糖尿病，其中II型糖尿病患 者數(shù)量占九成以上。目前口服降糖藥以雙胍類、磺脲類、a-葡萄糖苷酶抑制劑等藥物為主， 這些藥物容易導(dǎo)致患者低血糖，副作用大且耐受性有限。近年來隨著研宄不斷深入，出現(xiàn)了 一系列可作用于新靶點并且能持續(xù)控制血糖水平的新型抗糖尿病藥物。
[0003] DPP4,二肽基肽酶IV，是一種細(xì)胞表面的絲氨酸蛋白酶，廣泛存在于腎臟、結(jié)締組 織、胃腸道和淋巴結(jié)等組織中。GLP-1，胰高血糖素樣肽-1，在體內(nèi)主要由腸道L細(xì)胞分泌。 其主要的功能是刺激胰島素的分泌，所以圍繞GLP-I開發(fā)的藥物已成為II型糖尿病新藥研 發(fā)的一個重要靶點。由于GLP-I在體內(nèi)的半衰期很短，很快就能被DPP4為主的酶降解而 失活，故難于臨床應(yīng)用。DPP4抑制劑的結(jié)構(gòu)與DPP4的天然底物的結(jié)構(gòu)相似，可以競爭性的 與DPP4活化部位結(jié)合，但其親和力卻遠(yuǎn)大于它的天然底物，從而改變DPP4的構(gòu)象，降低其 催化活性。故能有效延長GLP-I半衰期，增強(qiáng)葡萄糖誘導(dǎo)的胰島素分泌，調(diào)節(jié)血糖濃度，因 此，導(dǎo)致DPP4失活從而不分解GLP-I的DPP4抑制劑已成為糖尿病新藥研宄的一個熱點。
[0004] 目前研宄最為深入并已應(yīng)用于臨床的DPP4抑制劑有西格列?。⊿itagliptin)、維 格列?。╒ildagliptin)和沙格列?。⊿axagliptin)。這些抑制劑均為化學(xué)合成藥物，價格 昂貴，不利于投入日常消費。同時，像磷酸西格列汀這類藥物具有很多副作用，如出現(xiàn)超敏 反應(yīng)、肝酶升高、上呼吸道感染；血管性水腫、剝脫性皮膚損害，以及皮瘆、蕁麻瘆、胰腺炎 等。因此，研發(fā)一種新型、經(jīng)濟(jì)、安全的DPP4抑制劑是目前普遍受到關(guān)注的問題。
[0005] 黃酮類化合物是天然植物的生物活性成分之一，具有良好的降低血糖、血脂的功 效。蕎麥殼中黃酮類化合物含量豐富，且作為輔助降糖藥更為安全。但蕎麥殼通常作為蕎 麥加工的副產(chǎn)物被廢棄，沒有得到充分重視和利用，而且造成資源的浪費。本試驗以蕎麥殼 提取物為原材料，考察其對II型糖尿病大鼠的胰島素水平的影響以及對DPP4的抑制活性， 旨在以詳實可靠的數(shù)據(jù)證明蕎麥殼黃酮在改善II型糖尿病和對DPP4抑制作用中潛在的開 發(fā)價值，為蕎麥殼的開發(fā)和應(yīng)用提供科學(xué)堅實的理論依據(jù)，為防治II型糖尿病的輔助藥物 提供新的原材料資源。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是為解決市場上DPP4抑制劑均為化學(xué)合成藥物，價格昂貴、副作用 大的問題，而提供一種純天然、價格便宜的蕎麥殼黃酮類提取物。
[0007] -種蕎麥殼黃酮類提取物，它是由下述方法制備的： 將蕎麥殼干燥、粉碎、加水，加熱提?。贿^濾，濾液真空濃縮或冷凍干燥，得蕎麥殼黃酮 提取物； 所述的高溫為121°C，高壓加熱20min后過濾； 所述的濾液，再經(jīng)大孔樹脂動態(tài)吸附-洗脫，蒸發(fā)去除溶劑制得； 所述的大孔樹脂為DlOl型大孔樹脂。
[0008] -種蕎麥殼黃酮類提取物在制備DPP4抑制劑藥物方面的應(yīng)用； 一種蕎麥殼黃酮類提取物在制備預(yù)防治療糖尿病的保健品或藥物方面的應(yīng)用。
[0009] 本發(fā)明提供了一種蕎麥殼黃酮類提取物，它是將蕎麥殼干燥、粉碎、加水，高溫高 壓提?。贿^濾，濾液大孔樹脂動態(tài)吸附-洗脫，制得；經(jīng)實驗證實，II型糖尿病大鼠給藥后， 具有降糖作用?？墒笽I型糖尿病大鼠血清中INS水平顯著升高，證明了蕎麥殼提取物對胰 島0細(xì)胞的保護(hù)作用非常明顯，促進(jìn)胰島素的分泌達(dá)到正常水平。蕎麥殼黃酮類提取物對 DPP4酶表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制活性，效果優(yōu)于蘆丁，槲皮素和異槲皮苷，蕎麥殼黃酮類提取物是 混合物，說明其除黃酮類化合物外還含有其它有效成份，可作為天然的DPP4抑制劑。蕎麥 殼為防治II型糖尿病的輔助藥物提供新的原材料資源，同時純化的蕎麥殼黃酮類化合物可 為成為新型的、安全的、天然的治療II型糖尿病的靶點藥物。
【附圖說明】
[0010] 圖1為蕎麥殼提取物BHEs的HPLC分析結(jié)果；其中（A)標(biāo)品檢測結(jié)果.（1)蘆丁 (2)異槲皮苷（3)槲皮素；（B)蕎麥殼提取物檢測結(jié)果； 圖2為樣品對DPP4的濃度依賴型抑制曲線。
【具體實施方式】
[0011] 實施例1 將干燥后的蕎麥殼用高速粉碎機(jī)粉碎、過60目篩后放入干凈的燒杯中，加入粗粉質(zhì)量 10倍的蒸餾水，在121°C條件下，高壓加熱20min后過濾，濾渣重復(fù)提取2次。將濾液合并， 在60°C條件下真空濃縮至膏狀，冷凍干燥24h后即獲得蕎麥殼黃酮粗提物（BHEs)，其顏色 為棕色。上清液配制成1%濃度的母液，試驗時稀釋使用。
[0012] 取25mgBHEs加入50ml蒸餾水溶解，加入常規(guī)方法處理的DlOl型大孔樹脂2g， 在常溫下置于100r/min搖床中24h后；將吸附有效成分的大孔樹脂用70%乙醇50ml浸 泡，在常溫下置于100r/min搖床中24h后，將大孔樹脂濾出，剩余液體即為吸附。吸附和 未吸附的液體分別在60°C條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，用恒溫水浴鍋在KKTC條件下水浴干 燥直至固體析出，最后真空干燥處理得到干燥的吸附物（BHEs-A)和未吸附物（BHEs-NA)。
[0013] 采用已經(jīng)公布的NaNO2-Al(NO3) 3比色法和常規(guī)HPLC法分別對BHEs、BHEs-A、 BHEs-NA中的總黃酮含量和黃酮類物質(zhì)進(jìn)行檢測分析。結(jié)果表明，三種樣品的黃酮含量呈 現(xiàn)顯著性差異，其中BHEs為（390. 28±26. 61)mg/g，占蕎麥殼粗提取物的39. 03% ;BHEs-A 為（643. 18±43. 95)mg/g，占蕎麥殼粗提物的64. 32%，BHEs-NA中殘留的總黃酮含量較少， 僅為（106.88±3.47)mg/g。如圖1所示，根據(jù)圖I(A)中標(biāo)準(zhǔn)品蘆?。?)、異槲皮苷（2)、槲 皮素（3)出現(xiàn)峰的時間分析蕎麥殼提取物中是否含有該物質(zhì)，由圖I(B)可知，蕎麥殼提取 物中主要含有蘆丁和異槲皮苷，槲皮素并未在BHEs中檢測到。
[0014] 實施例2 -種蕎麥殼黃酮提取物BHEs-A對DPP4抑制活性的測定 將BHEs-A抑制劑藥液、標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行梯度稀釋，分別配制成I. 0、0. 5、0.I、0. 05、 0. 01mg/mL，備用。按照SIGMA公司DPP4抑制劑試劑盒使用方法測定。分別設(shè)置空白組、陰 性對照組、陽性對照組、陽性空白組、試驗組和顏色對照組。Sitagliptin抑制劑、DPP4酶 以及底物用buffer稀釋。使用黑色96孔板檢測，總反應(yīng)體系為IOOyL。各組先分別加樣 品25yL，空白組及陰性對照組用buffer代替，陽性對照與陽性空白組加Sitagliptin抑