阿霉素脂質(zhì)體的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥品技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種阿霉素脂質(zhì)體的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]脂質(zhì)體由于具有良好的靶向性、緩釋性、細(xì)胞親和性等優(yōu)點，已廣泛用于抗腫瘤藥物、抗寄生蟲藥物、抗結(jié)核、抗菌藥物、激素類、蛋白多肽以及基因治療藥物等的載體。然而由磷脂和膽固醇組成的脂質(zhì)體為熱力學(xué)不穩(wěn)定體系，在體內(nèi)外的穩(wěn)定性很差。為此，近年來很多學(xué)者采用各種高聚物來修飾脂質(zhì)體以提高其穩(wěn)定性，取得了良好的效果。擬采用維生素E聚乙二醇1000琥珀酸酯(TPGS)來修飾脂質(zhì)體，考察其對阿霉素脂質(zhì)體理化性能的影響。TPGS是一種維生素E的水溶性衍生物，由維生素E琥珀酸和聚乙二醇酯化而成，是一種性能優(yōu)良的非離子型表面活性劑，在制劑中可作為增溶劑、吸收促進劑、乳化劑、增塑劑以及固體分散體的載體對P-gp有抑制作用，可有效地逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥性，已廣泛用于抗腫瘤藥物的傳遞系統(tǒng)中。
[0003]但這類材料存在制備困難:且產(chǎn)量低，并且制備藥力無法掌控的缺點。嚴(yán)重限制了其臨床應(yīng)用和工業(yè)化生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明就是針對上述問題，提供一種克服材料在釋藥動力學(xué)上的缺限的一種阿霉素脂質(zhì)體的制備方法。
[0005]為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案。
[0006]阿霉素脂質(zhì)體的制備方法，包括下步驟。
[0007](1)精密稱取卵磷脂400mg，TPGS200mg，膽固醇lOOmg，用20mL乙醇超聲溶解，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)成膜，加入0.3M硫酸銨溶液10mL，劇烈震搖使膜脫落，50°C水化2h，冰浴下用細(xì)胞破碎儀探頭超聲200次，室溫冷卻并放置4h后，轉(zhuǎn)移至透析袋中，在1000mL含10%蔗糖水溶液中室溫透析24h，用10%蔗糖的水溶液稀釋至25mL，與2mg.mL-1鹽酸阿霉素的10%蔗糖溶液等體積混合，40°C孵育1.5h，即制得含TPGS修飾的阿霉素脂質(zhì)體。
[0008](2)精密吸取 0.750,0.625,0.500,0.375,0.250,0.125mL 鹽酸阿霉素標(biāo)準(zhǔn)貯備液于25mL量瓶中，加80%的酸性乙醇(含0.1MHC1)至刻度，配成濃度分別為30，25，20，標(biāo)準(zhǔn)溶液，以80%酸性乙醇為空白，在495nm處測其吸光度。
[0009](3)精密吸取lmg.mL-1鹽酸阿霉素標(biāo)準(zhǔn)貯備液，并加入0.5mL空白脂質(zhì)體，用酸性乙醇溶液溶解稀釋成10，20，30 μ g -mL-1溶液，每一濃度配制3份，以酸性乙醇溶液為空白，在495nm測定吸收度。
[0010](4)取制備的阿霉素脂質(zhì)體用激光粒度測定儀測定其粒徑分布和Zeta電位，測定條件和參數(shù)。
[0011]作為一種優(yōu)選方案，取脂質(zhì)體滴加于銅網(wǎng)上，用濾紙從銅網(wǎng)邊緣吸去多余液體，滴加3%的磷鎢酸溶液進行負(fù)染，吸干負(fù)染液，自然風(fēng)干，置于透射電鏡下觀察脂質(zhì)體的形態(tài)。
[0012]本發(fā)明有益效果。
[0013]本發(fā)明本研究過程中還發(fā)現(xiàn)外水相介質(zhì)對阿霉素脂質(zhì)體的穩(wěn)定性有較大的影響，當(dāng)選用PH7.4的HBS作為外水相介質(zhì)時，一星期內(nèi)的泄漏率超過40%，而用10%蔗糖作為外水相時，其滲漏率大大減小，這可能是與蔗糖溶液的粘度，密度，“水置換”等作用有關(guān)。另外蔗糖可作為脂質(zhì)體的凍干保護劑，可將制得的脂質(zhì)體直接凍干，而無需加入其它保護劑，減少凍干添加劑對脂質(zhì)體性能的影響。
[0014]【具體實施方式】阿霉素脂質(zhì)體的制備方法，包括下步驟。
[0015](1)精密稱取卵磷脂400mg，TPGS200mg，膽固醇lOOmg，用20mL乙醇超聲溶解，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)成膜，加入0.3M硫酸銨溶液10mL，劇烈震搖使膜脫落，50°C水化2h，冰浴下用細(xì)胞破碎儀探頭超聲200次，室溫冷卻并放置4h后，轉(zhuǎn)移至透析袋中，在1000mL含10%蔗糖水溶液中室溫透析24h，用10%蔗糖的水溶液稀釋至25mL，與2mg.mL-1鹽酸阿霉素的10%蔗糖溶液等體積混合，40°C孵育1.5h，即制得含TPGS修飾的阿霉素脂質(zhì)體。
[0016](2)精密吸取 0.750,0.625,0.500,0.375,0.250,0.125mL 鹽酸阿霉素標(biāo)準(zhǔn)貯備液于25mL量瓶中，加80%的酸性乙醇(含0.1MHC1)至刻度，配成濃度分別為30，25，20，標(biāo)準(zhǔn)溶液，以80%酸性乙醇為空白，在495nm處測其吸光度。
[0017](3)精密吸取lmg.mL-1鹽酸阿霉素標(biāo)準(zhǔn)貯備液，并加入0.5mL空白脂質(zhì)體，用酸性乙醇溶液溶解稀釋成10，20，30 μ g -mL-1溶液，每一濃度配制3份，以酸性乙醇溶液為空白，在495nm測定吸收度。
[0018](4)取制備的阿霉素脂質(zhì)體用激光粒度測定儀測定其粒徑分布和Zeta電位，測定條件和參數(shù)。
[0019]作為一種優(yōu)選方案，取脂質(zhì)體滴加于銅網(wǎng)上，用濾紙從銅網(wǎng)邊緣吸去多余液體，滴加3%的磷鎢酸溶液進行負(fù)染，吸干負(fù)染液，自然風(fēng)干，置于透射電鏡下觀察脂質(zhì)體的形態(tài)。
[0020]脂質(zhì)體包封率的測定方法有分子排阻法(凝膠柱分離法)，超速離心法，超濾法，透析法等。葡聚糖凝膠柱分離法存在藥品稀釋大、耗時長等缺點，冷凍超速離心法需要設(shè)備要求高，而超濾法對于易變形或小粒徑的脂質(zhì)體也有不同程度的濾過。本實驗采用陽離子交換樹脂吸附游離藥物，使含藥脂質(zhì)體和游離藥物有效分離而測得藥物包封率，具有操作簡單、耗時短、成本低等優(yōu)點，可用于弱堿性藥物脂質(zhì)體包封率的測定，但需要注意的是所用的磷脂必須是中性或負(fù)電性，不可用于陽離子型脂質(zhì)。
[0021]把制好的脂質(zhì)體置于冰箱4°C保存，3個月后重新測定阿霉素的包封率，普通脂質(zhì)體中阿霉素的包封率急劇下降，滲漏非常嚴(yán)重，而TPGS修飾的脂質(zhì)體中阿霉素的包封率幾無改變，表明TPGS能顯著提高阿霉素的穩(wěn)定性。
【主權(quán)項】
1.阿霉素脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，包括下步驟； (1)精密稱取卵磷脂400mg，TPGS200mg，膽固醇lOOmg，用20mL乙醇超聲溶解，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓蒸發(fā)成膜，加入0.3M硫酸銨溶液10mL，劇烈震搖使膜脫落，50°C水化2h，冰浴下用細(xì)胞破碎儀探頭超聲200次，室溫冷卻并放置4h后，轉(zhuǎn)移至透析袋中，在1000mL含10%蔗糖水溶液中室溫透析24h，用10%蔗糖的水溶液稀釋至25mL，與2mg *niL-l鹽酸阿霉素的10%蔗糖溶液等體積混合，40°C孵育1.5h，即制得含TPGS修飾的阿霉素脂質(zhì)體； (2)精密吸取0.750,0.625,0.500,0.375,0.250,0.125mL鹽酸阿霉素標(biāo)準(zhǔn)貯備液于25mL量瓶中，加80%的酸性乙醇(含0.1MHC1)至刻度，配成濃度分別為30，25，20，標(biāo)準(zhǔn)溶液，以80%酸性乙醇為空白，在495nm處測其吸光度； (3)精密吸取lmg.mL-1鹽酸阿霉素標(biāo)準(zhǔn)貯備液，并加入0.5mL空白脂質(zhì)體，用酸性乙醇溶液溶解稀釋成10，20，30 μ g.mL-1溶液，每一濃度配制3份，以酸性乙醇溶液為空白，在495nm測定吸收度； (4)取制備的阿霉素脂質(zhì)體用激光粒度測定儀測定其粒徑分布和Zeta電位，測定條件和參數(shù)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述阿霉素脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，取脂質(zhì)體滴加于銅網(wǎng)上，用濾紙從銅網(wǎng)邊緣吸去多余液體，滴加3%的磷鎢酸溶液進行負(fù)染,吸干負(fù)染液，自然風(fēng)干，置于透射電鏡下觀察脂質(zhì)體的形態(tài)。
【專利摘要】阿霉素脂質(zhì)體的制備方法屬于藥品技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種阿霉素脂質(zhì)體的制備方法。本發(fā)明提供一種克服材料在釋藥動力學(xué)上的缺限的一種阿霉素脂質(zhì)體的制備方法。阿霉素脂質(zhì)體的制備方法，包括下步驟。（1）精密稱取卵磷脂400mg，TPGS200mg，膽固醇100mg，用20mL乙醇超聲溶解。（2）精密吸取0.750，0.625，0.500，0.375，0.250，0.125mL鹽酸阿霉素標(biāo)準(zhǔn)貯備液于25mL量瓶中，加80%的酸性乙醇至刻度。（3）精密吸取1mg·mL-1鹽酸阿霉素標(biāo)準(zhǔn)貯備液，并加入0.5mL空白脂質(zhì)體，用酸性乙醇溶液溶解稀釋成10，20，30μg·mL-1溶液，每一濃度配制3份，以酸性乙醇溶液為空白，在495nm測定吸收度。（4）取制備的阿霉素脂質(zhì)體用激光粒度測定儀測定其粒徑分布和Zeta電位，測定條件和參數(shù)。
【IPC分類】A61P35/00, A61K9/127, A61K47/26, A61K31/704, A61K47/34
【公開號】CN105287378
【申請?zhí)枴緾N201410376256
【發(fā)明人】孫仁
【申請人】孫仁
【公開日】2016年2月3日
【申請日】2014年8月3日