一種對(duì)慢性酒精性肝損傷具保護(hù)作用的組合物及制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于功能食品及醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及包含趕黃草提取物制備以及該提取物與低 聚殼聚糖、蟲草多糖的一種對(duì)慢性酒精性肝損傷具保護(hù)作用組合物及制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 通過合理的功能食品來預(yù)防疾病的發(fā)生一直是人們關(guān)注的熱點(diǎn)，植物性食品中存 在大量的非營(yíng)養(yǎng)性生物活性物質(zhì)或者稱為植物化學(xué)物質(zhì)，具有廣泛的生物活性作用和促進(jìn) 健康及防治疾病的作用，酚酸和多糖則是其中非常重要的一類，具有抗氧化、抗炎以及調(diào)節(jié) 血脂等多種生理功能（Hu，2003 ;Loo, 2003)。
[0003] 近年來，我國(guó)因長(zhǎng)期飲酒造成的慢性肝損傷人群數(shù)量越來越多，慢性肝損傷進(jìn) 一步發(fā)展會(huì)導(dǎo)致酒精性肝炎、肝硬化及肝癌等嚴(yán)重疾病，酒精對(duì)肝臟損傷是一種眾所周 知的現(xiàn)象，明顯的肝損傷標(biāo)志是細(xì)胞酶滲入到血衆(zhòng)中（Baldi,Burra,Plebani,&Salvagni ni，1993)，威脅人們的健康。通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)期酒精攝入導(dǎo)致動(dòng)物體重降低，此與先 前報(bào)道一致（Lieber，1994)，這可能是由于食物攝入量減少和代謝紊亂所致。
[0004] 在肝細(xì)胞中，酒精性氧化壓力可引起酒精性肝病，酒精誘導(dǎo)肝臟病理變化包括 肝腫大和血清學(xué)變化，伴隨著谷丙轉(zhuǎn)氨酶（AST)，谷草轉(zhuǎn)氨酶（ALT)和γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶 (GGT)活性的增加。
[0005] ALT和AST是肝功能的可靠的指標(biāo)，人體組織內(nèi)雖然含有大量基質(zhì)特異性轉(zhuǎn)氨酶， 但血清中只發(fā)現(xiàn)兩種：天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST)和丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT)。在正常情況下，肝 細(xì)胞膜能將細(xì)胞內(nèi)的酶保持在細(xì)胞內(nèi)，維持肝細(xì)胞和肝竇狀間隙之間存在的一個(gè)明顯酶濃 度梯度（Gradient)。血清酶ALT和AST的增高表明細(xì)胞透性、損害或者肝細(xì)胞壞死的增加 (Goleberg&Watts，1965)。越來越多的證據(jù)表明酒精導(dǎo)致肝臟不正常，因?yàn)檠趸瘔毫χ苯訐p 害細(xì)胞膜（Halliwell, 1999)。Obi,Usenu, &0sayande(1998)研究H.Rosainensis趕黃草組 合物能顯著降低血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（AST)和谷草轉(zhuǎn)氨酶（ALT)的降低。GGT是細(xì)胞膜結(jié)合 酶，血清GGT增高是誘導(dǎo)劑使肝臟合成酶增加的結(jié)果。乙醇能增強(qiáng)酶的誘導(dǎo)。GGT在肝內(nèi)主 要位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，而酒精中毒的最早期作用為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)損傷，膜結(jié)合蛋白酶GGT被釋放到血液 中（Sillanaukee, 1996)〇
[0006] 脂質(zhì)過氧化是自由基引起的一系列的反應(yīng)。機(jī)體內(nèi)存在著大量多不飽和脂肪酸 (PUFA)，它極易受到氧化作用的損傷，產(chǎn)生有細(xì)胞毒性的脂質(zhì)過氧化物。酒精的脂質(zhì)過氧化 反應(yīng)的主要毒性是直接損傷細(xì)胞膜，使細(xì)胞內(nèi)PUFA過氧化，也使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)溶酶體和線粒體等 生物膜結(jié)構(gòu)破壞，導(dǎo)致一系列的功能紊亂。脂質(zhì)過氧化機(jī)制是八十年代后公認(rèn)的兩大酒精 性肝損傷機(jī)制之一。酒精性肝損傷與氧化壓力的增加和自由基介導(dǎo)組織傷害的密切相關(guān)性 在大鼠和人中已經(jīng)得到了廣泛的驗(yàn)證（Lieber，2000;Minanaetal.2002)。
[0007] 長(zhǎng)期酒精深入導(dǎo)致肝組織氧化應(yīng)激加劇，導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化和抗氧化酶活性降低。 自由基清除酶如SOD，GST和GSH-Px是對(duì)抗氧化傷害的第一道防線。
[0008] GSH-Px是細(xì)胞內(nèi)抗氧化防御體系的主要成員之一，是清除H202與許多有機(jī)氫過氧 化物的重要酶，與SOD-起，通過清除可以減輕和阻斷脂質(zhì)過氧化的引發(fā)作用。
[0009] GSTs是一種多基因家族同工酶，可催化GSH聚合為有害物質(zhì)，保護(hù)細(xì)胞免受活性 氧起重要作用（Wilce&Parker, 1994 ;Hayes&Pulford, 1995)。乙醇或者其代謝物可能是GST 同工酶的目標(biāo)物，GST酶活降低可能產(chǎn)生毒性（Alin,Danielson, &Mannervik, 1985)。
[0010] 丙二醛（MDA)水平被廣泛用于脂質(zhì)過氧化指標(biāo)。
[0011] 在抗氧化體系中，非酶促抗氧化劑例如GSH等在生物體系中保護(hù)細(xì)胞免受脂質(zhì)過 氧化起到了很大的作用。GSH耗竭被認(rèn)為是酒精性脂肪肝發(fā)生的重要機(jī)理之一。GSH的 降低可能是由于酒精等物質(zhì)引發(fā)自由基過多導(dǎo)致過度使用清除劑造成的（Lieber，1997 ; Bjorneboeetal. , 1986)〇
[0012] 脂肪肝已被定義為超過5%脂滴或者總脂肪超過5%肝重量（Salt，2004)。脂肪的 聚集是對(duì)酒精過多攝入最早最普通的反應(yīng)。酒精性脂肪肝的通常特點(diǎn)是肝臟腫大，血清和 肝組織的TG水平的增加，伴隨著脂滴的形成（Zengetal.，2008)。在目前的研究中，酒精 導(dǎo)致肝指標(biāo)顯著增加，血清和肝組織TG和TCH水平顯著升高（P〈0. 05)，這表明酒精造成典 型脂肪肝。
[0013] 通過開發(fā)研究安全的保肝護(hù)肝的功能食品，可以幫助酒精引起的慢性肝損傷人士 逐步恢復(fù)健康。目前的護(hù)肝產(chǎn)品大多是植物來源的粗提取或者植物粉碎做成的茶，雖然也 有一定的保健效果，但是其成分不能確定，質(zhì)量難以保證。
[0014] 趕黃草始載于明代《救荒本草》，具有清熱解毒、退黃化濕，活血散瘀，利水消腫之 功效，是苗族民間治療肝病的經(jīng)驗(yàn)方，苗族人世代習(xí)用，稱她為"神仙草"?，F(xiàn)代研究表明趕 黃草內(nèi)含多種有效成份均對(duì)肝損傷具保護(hù)作用，能恢復(fù)肝臟功能，減低飲酒及藥物對(duì)肝臟 的損害，抑制肝纖維化、肝硬化，并對(duì)甲肝、乙肝、慢性活動(dòng)性肝炎具有顯著的治療作用。
[0015] 殼寡糖（C0S)也叫殼聚寡糖，是將殼聚糖經(jīng)酶水解或化學(xué)法水解等方法處理而得 到的一種水溶性較好、分子量在2KD以下的低聚糖。殼寡糖克服了甲殼素不溶于水的缺點(diǎn)， 能很好地經(jīng)腸道被人體吸收。大量的研究證明，殼寡糖具有很好的免疫調(diào)節(jié)功能，其可增強(qiáng) 單核巨噬細(xì)胞NK細(xì)胞以及中性粒細(xì)胞的吞噬功能、淋巴細(xì)胞增殖分化等功能，具有一定的 抗炎性。研究表明殼寡糖還具有一定的酒精肝損傷的保護(hù)作用（劉紅云等，[J]殼寡糖對(duì) 急性酒精性肝損傷保護(hù)作用的研究，中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，20 (3) :350-353)
[0016] 蟲草多糖為冬蟲夏草主要效用成分，具有抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、降血糖等活 性，由于冬蟲夏草資源稀缺價(jià)格昂貴，大部分保健食品原料采用蟲草真菌經(jīng)生物發(fā)酵培養(yǎng)， 從菌絲體中提取有效成分，包括提取的蟲草菌絲體多糖具有與天然蟲草相同的作用，蟲草 菌絲體多糖具有提高免疫和抑制免疫損傷作用，同時(shí)研究發(fā)現(xiàn)蟲草多糖對(duì)化學(xué)性肝損傷具 有保護(hù)作用（方士英等，蟲草多糖對(duì)小鼠化學(xué)性肝損傷的保護(hù)作用，安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)， 2004, 39(3)201-203)。
[0017] 采用現(xiàn)代生物分離技術(shù)將天然產(chǎn)物進(jìn)行分離，對(duì)其組成進(jìn)行分析鑒定，確定具有 生物活性的組分，是開發(fā)新一代護(hù)肝功能食品的方法。本發(fā)明選用趕黃草、殼聚糖、蟲草菌 絲體等為原料，進(jìn)行制備工藝優(yōu)化，并對(duì)該功能食品組合進(jìn)行活性評(píng)價(jià)，確定最佳配方和制 備工藝。
[0018] 雖然趕黃草、殼寡糖、蟲草多糖都對(duì)肝損傷具有保護(hù)作用，但是彼此之間組合在一 起是否可以達(dá)到理想的保護(hù)效果還未有過研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0019] 本發(fā)明的目的在于提供一種對(duì)慢行酒精性肝損傷具有保護(hù)作用的組合物，該組合 物具有較強(qiáng)的抗氧化、抗炎及免疫活性。
[0020] 本發(fā)明的另一目的在于提供上述組合物的制備方法。
[0021] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種對(duì)慢性酒精性肝損傷具保護(hù)作用的組合物， 原料由如下重量份組成：趕黃草提取物1~5重量份、殼寡糖0. 5~1重量份、蟲草多糖1~ 2重量份和糊精1~2重量份。
[0022] 優(yōu)選地，原料由如下重量份組成：趕黃草提取物1重量份、殼寡糖0. 8重量份、蟲草 多糖1重量份和糊精1重量份。
[0023] 進(jìn)一步地，所述組合物中總酸酸含量為50mg/g~200mg/g，多糖含量為100mg/g~ 400mg/g〇
[0024] 進(jìn)一步地，所述殼寡糖的平均分子量為1500。
[0025] 本發(fā)明還提供一種上述對(duì)慢性酒精性肝損傷具保護(hù)作用的組合物的制備方法，包 括如下步驟：
[0026] 1)趕黃草提取物制備
[0027] 取趕黃草花或葉，粉碎機(jī)粉碎，加入與趕黃草重量等量的lw/v%氫氧化鈉溶液 浸泡2小時(shí)，然后加入醋酸調(diào)節(jié)pH到6,再用10倍趕黃草重量的90 %乙醇提取，提取溫 度50°C，提取