率86 %。 iHNMR(CDCl3)δ8.06 (s，2H)，7. 34-7. 25 (m，5H)，4.93 (s，2H)，3.45 (t，J= 6.59Hz，4田， 1. 58-1. 52(m，6H)。
[0099] 如圖5所示，通過(guò)化合物30和化合物31的反應(yīng)，獲得化合物，收率75 %。 iHNMR(CDCl3)δ8. 04(s，2H)，7. 33-7. 25(m，5H)，4. 94(s，2H)，3. 63(t，J= 4. 8細(xì)z，4H)， 1. 93-1. 90(m，4H)。
[0100] 如圖5所示，通過(guò)化合物29和化合物32的反應(yīng)，獲得化合物，收率80 %。 iHNMR(CDCl3) 5 7.47-7. 32 (m，5H)，4.84 (s，2H)，3.90 (S，細(xì)），3.51 (t，J= 6.59Hz，4田， 1. 95-1. 92(m，4H)。
[0101] 如圖5所示，通過(guò)化合物30和化合物32的反應(yīng)，獲得化合物，收率75%。 iHNMR(CDCl3) 5 7.46-7. 27 (m，5H)，4.85 (s，2H)，3.89 (S，細(xì)），3.69 (t，J= 5.49Hz，4田， 1. 66-1. 57 (m，6H)。
[0102] 實(shí)施例6
[0103] HK-10、HK-12、HK-14 和HK-16 的合成
[0104] 下面描述5-徑基-2-(化咯燒-1-基）喀晚（服-10)、5-徑基-4,6-二甲氧 基-2-(化咯燒-1-基）喀晚（HK-12)、5-徑基-2-(贓晚-1-基）喀晚（HK-14)W及5-徑 基-4, 6-二甲氧基-2-(贓晚-1-基）喀晚（HK-16)的一般制備方法。
[0105] 參照?qǐng)D5的反應(yīng)圖解，溶于350ml丙酬的化合物38(17. 6g，53. 4mmol)與4. 4g 10%Pd/C催化劑在室溫下氨化反應(yīng)12小時(shí)，過(guò)濾和溶劑蒸發(fā)后獲得淡紅色固體HK-16。 從化2〇 中重結(jié)晶獲得 12. 7gHK-16(收率 80% )，烙點(diǎn) 120. 1-120. 5°C。iHNMR(DMS0-d6) δ7. 63 化rs，IH)，3. 81 (s，6H)，3. 59 (t，J= 5. 25Hz，4H)，1. 60-1. 56 (m，2H)，1. 52-1. 47 (m， 4H) ;Ci孔術(shù)3〇3的分析計(jì)算值：C，55. 22 化 7. 16 ;N，17. 56。實(shí)驗(yàn)值：C，55. 15 化 7. 21 ;N， 17. 48。
[0106] 如圖5所示，用化合物37替代化合物38,從化2〇中重結(jié)晶后獲得黃色固體HK-12， 烙點(diǎn) 108. 7-109. 2°C，收率 78%。iHNMR(DMSO-de)δ7. 49(brs，lH)，3. 82(s，細(xì)），3. 41(t，J=6. 47Hz，4H)，1. 89-1. 86(m，4H) ;Ci化斯〇3的分析計(jì)算值：C，53. 32 化 6. 71 ;N，18. 66。實(shí) 驗(yàn)值：C，53. 51 ;H，6.80 ;N，18. 80。
[0107] 如圖5所示，用化合物35替代化合物38,從化2〇中重結(jié)晶后獲得淡黃色固體 HK-10,烙點(diǎn) 151.5-151.8°C，收率 84%。iHNMR(CDCl3)δ8. 05(s，2H)，3. 55-3. 75(m，4H)， 1. 96-1. 92 (m，4H)。C化的分析計(jì)算值：C，58. 17 化 6. 71 ;N，25. 44。實(shí)驗(yàn)值：C，57. 92 ; H，6. 67 ;N，25. 18。
[0108] 如圖5所示，用化合物36替代化合物38,從化2〇中重結(jié)晶后獲得淡紅色固體 HK-14,烙點(diǎn) 94. 3-94. 7°C，收率 79%。iHNMR(CDCl3)δ8. 06(S，2H)，3. 47 (t，J=6. 59Hz，4H)， 1. 70-1. 40(m，6H)。CgHi3W3 的分析計(jì)算值：C，60. 32 化 7. 31 ;N，23. 45。實(shí)驗(yàn)值：C，60. 15 ; H，7. 25 ;N，23. 26。
[0109] 實(shí)施例7
[0110] 5-氨基-2-氯喀晚的合成
[0111] (化合物 40)
[0112] 參照?qǐng)D6的反應(yīng)圖解，將140g化88mol) 2-氯-5-硝基喀晚（39)溶于700血化OH 后，加入到含有1400mL乙酸，700血水和197g鐵粉（70m目，<212μπι)的混合物中。將混合 物在70°C下加熱過(guò)夜，并冷卻至室溫后過(guò)濾。真空除去濾液中的化0Η，用12Ν的化0Η調(diào)節(jié) 抑至8，產(chǎn)物用化OAc連續(xù)液液萃取過(guò)夜。濾餅用化OAc洗涂，并將合并后的化OAc層經(jīng)水 洗，鹽洗，硫酸儀干燥后，過(guò)濾。真空除去溶劑并用化0H重結(jié)晶后，得到97. 2g(85%)淺棟 色固體產(chǎn)物。iHNMR(DMSO-de) 58. 94(s，2H)，5. 77(brs，2H)。
[011引實(shí)施例8
[0114] 2-氯喀晚-5-醇的合成
[011引（化合物41)
[011引參照?qǐng)D6的反應(yīng)圖解，化合物40(40g，0.31m0U在2N硫酸中回流2小時(shí)。將 反應(yīng)的混合物冷卻至室溫后，用化OAc連續(xù)快速液-液萃取。將合并后的化OAc層經(jīng)鹽 洗，硫酸儀干燥后，過(guò)濾。真空除去溶劑并用化0H重結(jié)晶后，得到10g(25 % )黃色固體 41。iHNMR(DMS0-d6)δ10. 93(brs，lH)，6. 45(t，J= 4. 8細(xì)z，lH)，3. 57(t，J= 4. 4Hz，4H)， 2. 01-1. 98(m，4H)。
[0117] 實(shí)施例9
[011引 2-氯-5-節(jié)氧基-喀晚的合成 [011引（化合物31)
[0120] 參照?qǐng)D6的反應(yīng)圖解，在含有l(wèi)Og所述醇40(76. 6mmol)的500血MeOH中依次加 入碳酸鐘（11. 6g，84. 3mmol)和芐基漠（10. 1血，84. 3mmol)。在室溫下攬拌14小時(shí)后，加入 水（300血）終止反應(yīng)。蒸去MeOH，將剩余的水層用C肥13萃取。合并后的C肥13層經(jīng)鹽洗， 硫酸儀干燥后，過(guò)濾。除去溶劑后，用硅膠色譜純化處理（洗脫劑為CHCl3:MeOH= 100 :1)， 得到 15g(89%)白色固體 2-氨基-5-節(jié)氧基-喀晚（31)。iHNMR(CDCl3)5 8. 27(s，2H)， 7. 37-7. 30(m，5H)，5. 09(s，2H)。
[0121] 實(shí)施例10
[0122] 金屬削弱一馨合活性
[012引化合物HK-1至HK-8很容易與氧化還原活性的金屬化1\Cu2\化2+，F(xiàn)e3嘴化2+形 成配合物，但不與Ca2+或Mg2+形成配合物（圖7)。使用連續(xù)變量法（工作曲線）確定的化 學(xué)計(jì)量關(guān)系，和多功能JHX化合物所得的結(jié)果類似。配制若干組每一種化合物和目標(biāo)金屬 離子的溶液，所配制的溶液在保持HK-1到HK-8和金屬離子總濃度不變的情況下，改變?nèi)芤?中每個(gè)組分的摩爾分?jǐn)?shù)。達(dá)到平衡后，每種化合物的最大吸收率的變化記為一個(gè)與金屬離 子摩爾分?jǐn)?shù)有關(guān)的函數(shù)?？蒞得出兩個(gè)線性相關(guān)性，一個(gè)屬于在金屬離子低摩爾分?jǐn)?shù)的情 形，另一個(gè)屬于高摩爾分?jǐn)?shù)的情形。通過(guò)計(jì)算趨勢(shì)線交點(diǎn)（或沒有交點(diǎn)）所在的摩爾分?jǐn)?shù)， 得出化學(xué)計(jì)量比。該過(guò)程對(duì)所有化合物和所有上述離子均重復(fù)進(jìn)行Ξ次。由圖7匯總得 HK-1到HK-8系列的結(jié)果可知，化合物W1 :2或2 :1的比例與金屬進(jìn)行結(jié)合，且與儀和巧均 沒有相互作用。
[0124]實(shí)施例11 [01巧]細(xì)胞培養(yǎng)研究
[0126] 用細(xì)胞活力研究（Cell Vi油ility Sadies)，超氧化物測(cè)定（Superoxide Assay),生 / 死愈存活力 / 毒性測(cè)定（LIVE/DEAD⑥Vi油ility/切totoxicity Assay) 考察MFAOs及其單功能類似物減少過(guò)氧化物、徑基自由基和超氧化物自由基所產(chǎn)生的ROS 的能力，其方法如下。
[0127] 根據(jù)前述，體外細(xì)胞活力研究使用SH-SY5Y神經(jīng)母細(xì)胞（ATCC)并根據(jù)ATCC 給出的步驟在含有Earle'S平衡鹽緩沖液的Eagles最小基本培養(yǎng)基EMEM和哈姆 F12(EMEM-F12)比例為1 :1培養(yǎng)基（包含10%胎牛血清FB巧中進(jìn)行培養(yǎng)，溫度為37°C，空 氣C〇2濃度為5%。細(xì)胞活力研究在96孔板上進(jìn)行，時(shí)間為24小時(shí)，使用CellTiter9色蠻 Aqueous單溶液細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒（MTS，Promega，Madison,WI)，并加入溶解于0. 16% DMS0的ImM的一種化合物或氯艦徑哇（PBT1)。氯艦徑哇購(gòu)自TCI(98 %，日本東京）并用 重結(jié)晶做進(jìn)一步純化。運(yùn)是一種比色法，用來(lái)在細(xì)胞增殖或細(xì)胞毒性分析中測(cè)定存活細(xì)胞 數(shù)量，其中OneSolution試劑包含MTS(3- (4, 5-二甲基嚷挫-2-基）-5- (3-簇甲氧基苯 基）-2- (4-橫酸苯基）-2H-四氮挫），并含有吩嗦硫酸甲醋（PM巧。
[0128] 化合物MTS被細(xì)胞生物還原成有色的甲臘產(chǎn)物，在490nm處測(cè)定得的甲臘產(chǎn)物 的吸光度量，直接與培養(yǎng)基中的存活細(xì)胞數(shù)量成正比。與DMS0處理過(guò)的細(xì)胞相比，當(dāng)與 Trolox接觸后，含有五元環(huán)的HK-2和HK-4 W及六元環(huán)的HK-6的24小時(shí)細(xì)胞活力下降大 約20%，但HK-8的細(xì)胞活力下降了30%。與氯艦徑哇接觸的細(xì)胞活力降低最多，達(dá)到50%。 檢驗(yàn)了運(yùn)些化合物對(duì)&〇2和由芬頓反應(yīng)生成的徑自由基的保護(hù)作用。在沒有氧化劑的情況 下，使用氯艦徑哇也觀察到細(xì)胞活力的相似的減小。然而，此效果沒有在氧化劑存在下那么 顯著。當(dāng)僅暴露于&化時(shí)，在所有已處理的細(xì)胞中氧化性損傷降低，并且與未處理的細(xì)胞 (僅DMS0和&〇2)相比觀察到存活力增強(qiáng)。在芬頓反應(yīng)中，在氯艦徑哇處理過(guò)的細(xì)胞中的 存活力低于DMS0對(duì)照組，運(yùn)表明除了在所使用的濃度下的氯艦徑哇的內(nèi)在毒性之外沒有 藥物作用。
[0129] 在甜-SY5Y神經(jīng)母細(xì)胞和ARPE-19視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞兩者中評(píng)估了多功能抗氧 劑化合物和單功能抗氧劑化合物的HK系列特別在減少活細(xì)胞中超氧化物自由基方面的能 力。使用MitoSOX?紅色試劑（紐約市格蘭德島Invitrogen Life Sciences)用巧光顯微 鏡來(lái)顯示線粒體產(chǎn)生超氧化物，其中MitoSOX?紅色試劑滲入活細(xì)胞并在其中選擇性祀向 線粒體。其通過(guò)超氧化物快速地氧化，但不是通過(guò)其他活性氧自由基（RO巧和活性氮自由 基（RN巧。氧化產(chǎn)物當(dāng)與核酸結(jié)合時(shí)是高巧光的。在運(yùn)些研究中，細(xì)胞被接種到96孔板并 且在37°C5%C〇2氣氛下在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基（對(duì)于人的甜-SY5Y神經(jīng)母細(xì)胞為具有厄爾平衡鹽 溶液與含有10%的胎牛血清（FB巧的哈姆F12(EMEM-F12)培養(yǎng)基的l:lEagles最小必需培 養(yǎng)基，或?qū)τ谌说腁RPE-19視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞為含有4%的FBS的杜比克改進(jìn)Eagles介 質(zhì)（DMEM))中生長(zhǎng)直到完成80%的融合（約24小時(shí)）。然后從每個(gè)孔中去除細(xì)胞培養(yǎng)基， 并用PBS沖洗孔。然后將溶解在DMSOa化L)中的化合物（HK系列和JHX系列W及抗氧劑 標(biāo)準(zhǔn)物（對(duì)苯二酪（冊(cè)