一種高濃度靈芝三萜及三萜皂苷復(fù)合提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明涉及靈芝有效成分提取技術(shù)，特別涉及一種高濃度靈芝三萜及三萜皂苷復(fù)合提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002]靈芝又稱林中靈、瓊珍，外形呈傘狀，菌蓋腎形、半圓形或近圓形，為多孔菌科真菌靈芝的子實(shí)體。具有補(bǔ)氣安神、止咳平喘的功效，用于眩暈不眠、心悸氣短、神經(jīng)衰弱、虛勞咳喘，延年益壽。靈芝在中國有上千年的藥用歷史，藥王孫思邈從35歲開始一生長服靈芝，101歲無疾而終，用自己的一生見證靈芝的長壽之道。靈芝中主含氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、真菌溶菌酶以及糖類、麥角留醇、三萜類、香豆精甙、揮發(fā)油、硬脂酸、苯甲酸、生物堿、維生素B2及C等;孢子還含甘露醇、海藻糖。三萜類化合物是靈芝的主要化學(xué)和藥效成分之一。靈芝中所含三萜類化合物具有特別顯著的生理活性。隨著現(xiàn)代科學(xué)對靈芝研究的深入，至目前為止，總共分離到350余種化學(xué)成分，其中不少化學(xué)成分在抗腫瘤、保肝、降血糖、降血脂、增強(qiáng)單核吞噬細(xì)胞系與NK細(xì)胞功能、增強(qiáng)體液免疫功能、抗放射、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗衰老等方面顯示出了較強(qiáng)的活性。目前，公知的靈芝三萜類化合物的提取方法可以分為有機(jī)溶劑提取法和超臨界C02萃取法，有機(jī)溶劑提取法是以氯仿或甲醇等有機(jī)試劑對靈芝藥材或孢子粉提取而得粗提物，再用飽和碳酸氫鈉溶液萃取取出其中的酸性成分，鹽酸酸化，氯仿萃取出游離的酸性成分，得到含量較高的三萜類成分，這種方法通常需要較長的提取時間并消耗大量的提取溶劑，同時大量有機(jī)溶劑的使用會給人體和環(huán)境帶來不利的影響；因此現(xiàn)在多數(shù)有條件的企業(yè)都米用超臨界C02萃取法，超臨界C02萃取技術(shù)是以超臨界狀態(tài)的C02為萃取劑，從液體或固體中萃取有效成分并進(jìn)行分離的方法，該方法對許多物質(zhì)特別是親脂性成分具有較好的滲透性和較強(qiáng)的溶解能力，與傳統(tǒng)溶劑萃取法相比，具有適用范圍廣泛、對原料成分無破壞、對產(chǎn)品和環(huán)境無污染、提取效率高和操作方便等優(yōu)點(diǎn)，申請?zhí)枮?01410243422.1的發(fā)明專利公開了一種靈芝三萜類和多糖類有效成分多重提取工藝及其保健食品，由超臨界C02萃取靈芝三萜類成分，水提取靈芝多糖等成分，調(diào)配混合制粒，計(jì)量填充膠囊，包裝這些步驟制得的，本發(fā)明產(chǎn)品富含靈芝的精華成分及多種生物活性成分；申請?zhí)枮?00710094452.0的發(fā)明專利公開了一種靈芝三萜類化合物的快速制備方法及其產(chǎn)品，主要步驟包括C02超臨界流體萃取技術(shù)萃取，萃取物乙醇溶解，葡聚糖凝膠色譜柱富集、純化、減壓濃縮，制備方法快速、簡單，產(chǎn)品中有效的三萜類化合物種類和含量都有明顯提高。但是上述的超臨界C02萃取技術(shù)提取靈芝三萜類化合物的方法均存在一個缺陷，即對靈芝沒有進(jìn)行預(yù)處理，直接將靈芝子實(shí)體粉碎后加入超臨界C02萃取設(shè)備的萃取釜中控制相關(guān)參數(shù)進(jìn)行萃取，而靈芝子實(shí)體由纖維素、半纖維素和木質(zhì)素等主要成分構(gòu)成，結(jié)構(gòu)緊密，因而直接將簡單粉碎處理的靈芝粉進(jìn)行⑶2超臨界萃取，其得率也必定受影響。因此亟需開發(fā)一種能夠高效提取靈芝三萜類化合物的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明提供了一種高濃度靈芝三萜及三萜皂苷復(fù)合提取方法，克服目前市場超臨界co2萃取技術(shù)提取靈芝三萜類化合物時對靈芝沒有進(jìn)行預(yù)處理，直接將靈芝子實(shí)體粉碎后加入超臨界co2萃取設(shè)備的萃取釜中控制相關(guān)參數(shù)進(jìn)行萃取，而靈芝子實(shí)體由纖維素、半纖維素和木質(zhì)素等主要成分構(gòu)成，結(jié)構(gòu)緊密，因而直接將簡單粉碎處理的靈芝粉進(jìn)行0)2超臨界萃取，其得率受影響的缺陷，本發(fā)明提供一種工藝簡單，適宜推廣的可以提取到高濃度靈芝三萜及三萜皂苷的提取方法。
[0004]本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:一種高濃度靈芝三萜及三萜皂苷復(fù)合提取方法，包括如下步驟:
(1)粉碎:選取上品靈芝，將其切片，粉碎后并過100目篩；
(2)還原處理:將步驟(1)獲得的靈芝粉加入1%抗壞血酸溶液中還原處理l-2h即得還原靈芝混合物，所述靈芝粉與1%抗壞血酸溶液的比例為m: V為1:3-5 ；
(3)凍融:將步驟(2)處理好的還原靈芝混合物放置凍融箱內(nèi)，加入液氮反復(fù)凍融6-8
次；
(4)破壁:使用40%乙醇溶液對步驟(3)凍融處理的還原靈芝混合物進(jìn)行超聲波空泡化破壁，超聲輸出功率400-440W、采用50-60kHz的超聲頻率，超聲處理30-45min，停滯8-12min，再次超聲處理28-32min，濃縮超聲液得破壁濃縮靈芝液；
(5)超臨界C02萃取:取步驟(4)獲得的破壁濃縮靈芝液進(jìn)行超臨界C02萃取，萃取條件為壓力14MPa、溫度30-32°C、動態(tài)萃取時間100-110min、C02流量lmL/min，背壓閥溫度45°C，將萃取液分級收集；
(6)冷凍干燥。
[0005]與現(xiàn)有的技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下突出優(yōu)點(diǎn)和效果:本發(fā)明應(yīng)用了目前國際上最先進(jìn)的超臨界C02萃取技術(shù)獲得靈芝有效生物活性物質(zhì)，在進(jìn)行超臨界C02萃取前分別對靈芝粉進(jìn)行還原、反復(fù)凍融以及破壁處理，采用抗壞血酸對靈芝粉進(jìn)行抗氧化處理以防止靈芝三萜及三萜皂苷物質(zhì)的氧化作用，進(jìn)而結(jié)合反復(fù)凍融與超聲破壁技術(shù)將靈芝子實(shí)體緊密的結(jié)構(gòu)徹底破壞從而保證了高濃度的生物活性成分，而且工業(yè)化生產(chǎn)成本低，便于實(shí)施，市場前景非常樂觀。
【具體實(shí)施方式】
[0006]
下列實(shí)例進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不應(yīng)當(dāng)作為本發(fā)明的限制:
實(shí)施例1: 一種高濃度靈芝三萜及三萜皂苷復(fù)合提取方法，包括如下步驟:
(1)粉碎:選取上品靈芝，將其切片，粉碎后并過100目篩；
(2 )還原處理:稱取300g步驟(1)獲得的靈芝粉加到1200ml的1%抗壞血酸溶液中還原處理2h即得還原靈芝混合物；
(3)凍融:將步驟(2)處理好的還原靈芝混合物放置凍融箱內(nèi)，加入液氮反復(fù)凍融8次；
(4)破壁:使用40%乙醇溶液對步驟(3)凍融處理的還原靈芝混合物進(jìn)行超聲波空泡化破壁，超聲輸出功率440W、采用50kHz的超聲頻率，超聲處理35min，停滯lOmin，再次超聲處理28min，濃縮超聲液得破壁濃縮靈芝液；
(5)超臨界C02萃取:取步驟(4)獲得的破壁濃縮靈芝液進(jìn)行超臨界C02萃取，萃取條件為壓力14MPa、溫度30°C、動態(tài)萃取時間100min、C02流量lmL/min，背壓閥溫度45°C，將萃取液分級收集；
(6)冷凍干燥。
[0007]實(shí)施例2:—種高濃度靈芝三萜及三萜皂苷復(fù)合提取方法，包括如下步驟:
(1)粉碎:選取上品靈芝，將其切片，粉碎后并過100目篩；
(2)還原處理:稱取200g步驟(1)獲得的靈芝粉加到1000ml的1%抗壞血酸溶液中還原處理lh即得還原靈芝混合物；
(3)凍融:將步驟(2)處理好的還原靈芝混合物放置凍融箱內(nèi)，加入液氮反復(fù)凍融6次；
(4)破壁:使用40%乙醇溶液對步驟(3)凍融處理的還原靈芝混合物進(jìn)行超聲波空泡化破壁，超聲輸出功率440W、采用60kHz的超聲頻率，超聲處理30min，停滯8min，再次超聲處理32min，濃縮超聲液得破壁濃縮靈芝液；
(5)超臨界C02萃取:取步驟(4)獲得的破壁濃縮靈芝液進(jìn)行超臨界C02萃取，萃取條件為壓力14MPa、溫度32°C、動態(tài)萃取時間110min、C02流量lmL/min，背壓閥溫度45°C，將萃取液分級收集；
(6)冷凍干燥。
[0008]實(shí)施例3:—種高濃度靈芝三萜及三萜皂苷復(fù)合提取方法，包括如下步驟:
(1)粉碎:選取上品靈芝，將其切片，粉碎后并過100目篩；
(2 )還原處理:稱取400g步驟(1)獲得的靈芝粉加到1200ml的1%抗壞血酸溶液中還原處理1.5h即得還原靈芝混合物；
(3)凍融:將步驟(2)處理好的還原靈芝混合物放置凍融箱內(nèi)，加入液氮反復(fù)凍融7次；
(4)破壁:使用40%乙醇溶液對步驟(3)凍融處理的還原靈芝混合物進(jìn)行超聲波空泡化破壁，超聲輸出功率420W、采用55kHz的超聲頻率，超聲處理30min，停滯12min，再次超聲處理32min，濃縮超聲液得破壁濃縮靈芝液；
(5)超臨界C02萃取:取步驟(4)獲得的破壁濃縮靈芝液進(jìn)行超臨界C02萃取，萃取條件為壓力14MPa、溫度30°C、動態(tài)萃取時間105min、C02流量lmL/min，背壓閥溫度45°C，將萃取液分級收集；
(6)冷凍干燥。
[0009]以上所述，僅為本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此，任何熟悉本領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明所揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，可不經(jīng)過創(chuàng)造性勞動想到的變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種高濃度靈芝三萜及三萜皂苷復(fù)合提取方法，其特征在于包括如下步驟: (1)粉碎:選取上品靈芝，將其切片，粉碎后并過100目篩； (2)還原處理:將步驟(1)獲得的靈芝粉加入1%抗壞血酸溶液中還原處理l-2h即得還原靈芝混合物，所述靈芝粉與1%抗壞血酸溶液的比例為m: V為1:3-5 ； (3)凍融:將步驟(2)處理好的還原靈芝混合物放置凍融箱內(nèi)，加入液氮反復(fù)凍融6-8次； (4)破壁:使用40%乙醇溶液對步驟(3)凍融處理的還原靈芝混合物進(jìn)行超聲波空泡化破壁，超聲輸出功率400-440W、采用50-60kHz的超聲頻率，超聲處理30-45min，停滯8-12min，再次超聲處理28-32min，濃縮超聲液得破壁濃縮靈芝液； (5)超臨界C02萃取:取步驟(4)獲得的破壁濃縮靈芝液進(jìn)行超臨界C02萃取，萃取條件為，壓力14MPa、溫度30-32°C、動態(tài)萃取時間100-110min、C02流量lmL/min，背壓閥溫度45°C，將萃取液分級收集； (6)冷凍干燥。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高濃度靈芝三萜及三萜皂苷復(fù)合提取方法，涉及靈芝有效成分提取技術(shù)。本發(fā)明包括粉碎、還原處理、凍融、破壁、超臨界CO2萃取以及冷凍干燥六大步驟。本發(fā)明在進(jìn)行超臨界CO2萃取前分別對靈芝粉進(jìn)行還原、反復(fù)凍融以及破壁處理，采用抗壞血酸對靈芝粉進(jìn)行抗氧化處理以防止靈芝三萜及三萜皂苷物質(zhì)的氧化作用，進(jìn)而結(jié)合反復(fù)凍融與超聲破壁技術(shù)將靈芝子實(shí)體緊密的結(jié)構(gòu)徹底破壞從而保證了高濃度的生物活性成分，而且工業(yè)化生產(chǎn)成本低，便于實(shí)施，市場前景非常樂觀。
【IPC分類】A61K36/074
【公開號】CN105477024
【申請?zhí)枴緾N201510957448
【發(fā)明人】張英, 魏道智, 毛德春, 毛帥, 林文津, 寧書菊, 錢和
【申請人】福建省健神生物工程有限公司
【公開日】2016年4月13日
【申請日】2015年12月21日