一種靶向乳腺癌干細(xì)胞的洛伐他汀硅質(zhì)體的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種靶向乳腺癌干細(xì)胞的洛伐他汀硅質(zhì) 體
【背景技術(shù)】
[0002] 乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。北美和西方發(fā)達(dá)國家是乳腺癌的高發(fā)區(qū)， 居女性惡性腫瘤發(fā)病的第1、2位。在我國，乳腺癌發(fā)病率近年以每年3~4%的速度遞增。盡 管現(xiàn)有治療手段對(duì)早期乳腺癌有較好的療效，但對(duì)于轉(zhuǎn)移性乳腺癌特別是雌激素受體 (ER)、孕激素受體(PR)、HER2三陰性的乳腺癌效果很不理想，探索針對(duì)轉(zhuǎn)移性乳腺癌特別是 受體陰性乳腺癌的藥物是乳腺癌治療學(xué)研究中一項(xiàng)非常緊迫的任務(wù)。
[0003] 腫瘤干細(xì)胞除具有自我更新、多譜系分化、高致瘤性等特征外，還具有對(duì)于化療、 放療等治療的抵抗性，是腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的主要根源。乳腺癌干細(xì)胞(breast cancer stem cellS，BCSCS)是乳腺癌耐藥、轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的主要根源，治療乳腺癌需要根除BCSCs才能達(dá)到 理想的效果。靶向BCSCs的新型治療乳腺癌的藥物的研究具有重大科學(xué)意義和潛在臨床應(yīng) 用價(jià)值。
[0004] 植物源性天然化合物洛伐他汀，是從食物如大米和山藥經(jīng)土曲霉菌或紅曲霉菌發(fā) 酵后產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物中提取的天然化合物。洛伐他汀是美國Π )Α批準(zhǔn)的第一個(gè)他汀類降血 脂藥物，1987年Merck公司率先將其應(yīng)用于臨床。作為一個(gè)羥甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還 原酶抑制劑，其具有毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)，因而在臨床被廣泛應(yīng)用于心血管疾病的預(yù)防和治 療。由于心血管疾病和腫瘤在發(fā)病機(jī)制上存在某些相似之處，如都具有脂類代謝異常和炎 性反應(yīng)等，洛伐他汀的抗腫瘤作用也逐漸被關(guān)注。
[0005] 但洛伐他汀為脂溶性藥物，目前市面商品化的洛伐他汀都為口服藥物，其生物利 用率低。而納米藥物載體的出現(xiàn)，可以保護(hù)藥物在靜脈注射之后免受體內(nèi)清除系統(tǒng)的清除， 延長藥物在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間，并且通過腫瘤組織的高通透性和滯留效應(yīng)(EPR)，更多地使藥 物在靶部位富集而提高療效。近幾年，硅質(zhì)體作為一種優(yōu)于脂質(zhì)體的脂質(zhì)囊泡，其表面覆蓋 一層只有原子厚度的以共價(jià)鍵連接形成的Si-O-Si網(wǎng)格結(jié)構(gòu)。硅質(zhì)體結(jié)合了傳統(tǒng)的二氧化 硅納米粒子和脂質(zhì)體的優(yōu)勢(shì)，具有很高的穩(wěn)定性以及優(yōu)良的生物相容性，可以克服藥物過 早釋放而產(chǎn)生的毒副作用。同時(shí)它又克服了二氧化硅納米粒子體內(nèi)難降解以及脂質(zhì)體穩(wěn)定 性差的缺點(diǎn)。
[0006] 本發(fā)明合成的洛伐他汀硅質(zhì)體，具有納米材料共有的被動(dòng)靶向腫瘤的特性，可增 加腫瘤局部藥物濃度，并實(shí)現(xiàn)緩慢釋放、長期作用的特點(diǎn)，提高了對(duì)乳腺癌細(xì)胞的殺傷能 力，達(dá)到最大治療效果、最小毒副作用的目的。本方法所合成的洛伐他汀硅質(zhì)體具有較好的 靶向乳腺癌干細(xì)胞的特性，可抑制乳腺癌細(xì)胞尤其三陰性乳腺癌干細(xì)胞的增殖與迀移能 力、可抑制干細(xì)胞表型的表達(dá)。這一源自于天然植物、靶向乳腺癌干細(xì)胞的藥物新劑型處于 乳腺癌治療的國際前沿，極有可能為三陰性乳腺癌提供可行的治療策略，具有極大的應(yīng)用 前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明旨在克服現(xiàn)有技術(shù)中洛伐他汀藥物生物利用率低的問題，提供一種靶向乳 腺癌干細(xì)胞的洛伐他汀硅質(zhì)體。
[0008] 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：
[0009] 所述靶向乳腺癌干細(xì)胞的洛伐他汀硅質(zhì)體含有如下重量百分比的組分：
[0010] 洛伐他汀：2%-30%
[0011]有機(jī)-無機(jī)復(fù)合脂質(zhì)（不限于含有磷脂長鏈和烷氧基結(jié)構(gòu)的分子）：20%-70%
[0012] 磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000: 1%-20%
[0013] 二硬脂?；字Ｄ憠A：1〇%-60%。
[0014] 優(yōu)選地，所述洛伐他汀硅質(zhì)體含有如下重量百分比的組分：
[0015] 洛伐他?。?%-10%
[0016] 有機(jī)-無機(jī)復(fù)合脂質(zhì)：36.46% -60.42%
[0017] 磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000: 10%-15%
[0018] 二硬脂?；字Ｄ憠A：16.67 % - 41.67 %。
[0019] 優(yōu)選地，所述有機(jī)-無機(jī)復(fù)合脂質(zhì)為含有磷脂長鏈和烷氧基結(jié)構(gòu)的分子，更優(yōu)選 地，所述有機(jī)-無機(jī)復(fù)合脂質(zhì)的結(jié)構(gòu)如式I所示：
[0020]
[0021]所述洛伐他汀硅質(zhì)體粒徑范圍為20nm-500nm。洛伐他汀硅質(zhì)體囊泡表面共價(jià)覆 蓋Si-O-Si網(wǎng)格結(jié)構(gòu)。
[0022]上述靶向乳腺癌干細(xì)胞的洛伐他汀硅質(zhì)體的制備方法包括如下步驟：
[0023] (1)按上述各組分的配比準(zhǔn)備組分材料；
[0024] (2)將有機(jī)-無機(jī)復(fù)合脂質(zhì)加入酸性乙醇溶液35-45°C，優(yōu)選40°C下水解，孵育 25-35min，優(yōu)選30min，得溶液A;所述有機(jī)-無機(jī)復(fù)合脂質(zhì)與酸性乙醇溶液的質(zhì)量體積比為 (2-5): 1，質(zhì)量體積比中質(zhì)量單位為mg，體積單位為mL;
[0025] (3)將磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000以及二硬脂?；字Ｄ憠A溶解于氯仿溶液 中，得溶液B，所述磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000與氯仿溶液的質(zhì)量體積比為1:1，所述二硬 脂?；字Ｄ憠A與氯仿溶液的質(zhì)量體積比為1:1，所述質(zhì)量體積比中質(zhì)量單位為mg，體積 單位為mL;將洛伐他汀溶解到無水乙醇中中配成質(zhì)量濃度為12.14mg/mL的溶液，得溶液C; 將溶液B和溶液C加入到溶液A中，得溶液D;
[0026] (4)將溶液D裝于茄型瓶中并于30-45°C下水浴30min-lh，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)8-12min，優(yōu) 選IOmin去除有機(jī)溶劑，使容器壁上形成均勻的固體脂質(zhì)薄膜，然后繼續(xù)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)25min- 35min除盡痕量的氯仿；
[0027] (5)將去離子水加入到步驟(4)所述的固體脂質(zhì)薄膜中配成脂質(zhì)濃度為1 一 2mg/ mL，于50-65°C下水浴，旋渦震蕩得到均勻的混懸液，再超聲處理后，得到負(fù)載洛伐他汀硅 質(zhì)體；
[0028] (6)將負(fù)載洛伐他汀硅質(zhì)體離心，去除未包裹的藥物，得到洛伐他汀硅質(zhì)體。
[0029]優(yōu)選地，步驟(2)所述酸性乙醇溶液的pH值為1.0-3.0。
[0030]優(yōu)選地，步驟(5)所述旋渦震蕩的時(shí)間為1 一 5min;所述超聲處理是依次進(jìn)行水浴 超聲處理和探頭超聲處理，所述水浴超聲處理的時(shí)間為10-60min，所述探頭超聲處理是在 30%的輸出振幅下超聲處理5-IOmin(振3s，停2s)。
[0031 ] 優(yōu)選地，步驟(6)所述離心條件為6000rpm，10-20min。
[0032] 三陰性乳腺癌目前沒有理想的治療手段，本發(fā)明改造了洛伐他汀的劑型。洛伐他 汀為脂溶性藥物，目前市面商品化的洛伐他汀都為口服藥物，其生物利用率低。經(jīng)硅質(zhì)體包 裹后改造為洛伐他汀硅質(zhì)體，則可通過靜脈注射給藥，提高生物利用率。此外，洛伐他汀硅 質(zhì)體為納米級(jí)藥物，具有納米級(jí)藥物的所有優(yōu)勢(shì)。如:具有更好的腫瘤靶向性，主要是通過 EPR效應(yīng)達(dá)到一個(gè)被動(dòng)靶向的效果，具有藥物緩釋效果。針對(duì)三陰性乳腺癌干細(xì)胞，有效抑 制三陰性乳腺癌，而毒副作用小。
[0033] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的相關(guān)問題，本發(fā)明將脂溶性抗腫瘤藥物洛伐他汀包裹 到硅脂體內(nèi)部，靜脈注射藥物之后延長藥物在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間，并且通過腫瘤組織的EPR效 應(yīng)在靶部位富集，為了提高洛伐他汀的釋放速率，本發(fā)明在硅脂體的組成成分中摻雜一定 比例的磷脂，提高硅脂體表面的孔隙率，降低致密度，從而提高洛伐他汀的擴(kuò)散率。該洛伐 他汀硅質(zhì)體不僅能夠提高游離洛伐他汀藥物的利用率，而且使得洛伐他汀得到很好地釋 放，從而達(dá)到有效的藥物治療效果。
[0034] 洛伐他汀硅質(zhì)體的優(yōu)勢(shì)主要有以下幾個(gè)方面，一個(gè)是減少毒副作用，降低藥物到 達(dá)腫瘤組織的過程中對(duì)正常組織的損傷;其次硅質(zhì)體其結(jié)構(gòu)類似于生物膜，包裹藥物后可 以延長藥物體內(nèi)循環(huán)時(shí)間并且通過實(shí)體瘤的高通透性和滯留效應(yīng)(EPR效應(yīng))被動(dòng)靶向腫瘤 組織;第三是硅質(zhì)體包裹藥物后可以達(dá)到藥物的緩慢釋放，提高藥物的利用率，增強(qiáng)療效； 第四是相比于傳統(tǒng)的脂質(zhì)體，洛伐他汀硅質(zhì)體引起表面的Si-O-Si網(wǎng)格結(jié)構(gòu)，具有更好的穩(wěn) 定性。第五是在復(fù)合脂質(zhì)中摻雜磷脂，改變表面的致密度后更有效地釋放內(nèi)部包載的藥物。
[0035] 本發(fā)明合成的洛伐他汀硅質(zhì)體，具有納米材料共有的被動(dòng)靶向腫瘤的特性，可增 加腫瘤局部藥物濃度，并實(shí)現(xiàn)緩慢釋放、長期作用的特點(diǎn)，提高了對(duì)乳腺癌細(xì)胞的殺傷能 力，達(dá)到最大治療效果、最小毒副作用的目的。本方法所合成的洛伐他汀硅質(zhì)體具有較好的 靶向乳腺癌干細(xì)胞的特性，可抑制乳腺癌細(xì)胞尤其三陰性乳腺癌干細(xì)胞的增殖與迀移能 力、可抑制干細(xì)胞表型的表達(dá)。這一源自于天然植物、靶向乳腺癌干細(xì)胞的藥物新劑型處于 乳腺癌治療的國際前沿，極有可能為三陰性乳腺癌提供可行的治療策略，具有極大的應(yīng)用 前景。
【附圖說明】
[0036]圖1洛伐他汀娃質(zhì)體合成示意圖；
[0037] 圖2洛伐他汀硅質(zhì)體照片(左)及藥物釋放性能測(cè)定結(jié)果圖（右）；
[0038] 圖3納米粒徑及Zeta電位分析
[0039]圖4不同濃度DSPC所合成的洛伐他汀硅質(zhì)體的藥物包封率與載藥量；
[0040]圖5洛伐他汀硅質(zhì)體與洛伐他汀體外比較結(jié)果圖；
[0041 ]圖6洛伐他汀硅質(zhì)體與洛伐他汀體內(nèi)比較結(jié)果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0042]洛伐他汀硅質(zhì)體及其制備 [0043] 實(shí)施例1
[0044] 所述靶向乳腺癌干細(xì)胞的洛伐他汀硅質(zhì)體含有如下重量百分比的組分： 洛伐他汀 0.64mg 有機(jī)-無機(jī)復(fù)合脂質(zhì) 4.64mg
[0045] 磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000 1.12mg 二硬脂?；字Ｄ憠A L28mg;
[0046] 制備方法：
[0047] (1)稱取處方量的有機(jī)-無機(jī)復(fù)合脂質(zhì)按照比例為2:1~5:1(質(zhì)量mg:體積mL)加入 酸性乙醇溶液中40°C下水解30min;其中所述的酸性乙醇溶液的pH為3.0，制備方法是通過 將稀鹽酸加入到無水乙醇溶液中，用PH計(jì)調(diào)節(jié)pH至3.0，得溶液A;
[0048] (2)稱取處方量的磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000、二硬脂?；字Ｄ憠A溶于7mL 的氯仿溶液中，得溶液B;將洛伐他汀粉末溶于54yL的無水乙醇中，得溶液C;將溶液B和溶液 C加入到溶液A中，得溶液D，并裝入25mL的茄形瓶中；
[0049] (3)在溫度的40°C的水浴中抽真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)IOmin去除有機(jī)溶劑，使其在瓶壁形成 均勾的脂質(zhì)薄膜，繼續(xù)旋蒸30min以除去痕量氯仿；
[0050] (4)在(4)中獲得的固體薄膜中加入7mL的去離子水并置于溫度為55°C的水浴中水 化Ih。禍旋振蕩Imin后進(jìn)行水浴超聲20min，最后在輸出振幅為30 %的條件下超聲5min (振 3s，停2s);
[0051 ] (5)將得到的娃質(zhì)體懸液在轉(zhuǎn)速為6000rpm的條件下離心15min去除未包裹的藥 物，即可得到洛伐他汀的硅質(zhì)體溶液；
[0052] 在進(jìn)行洛伐他汀硅質(zhì)體各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)之前，先將所得到