一種沒食子兒茶素棕櫚酸酯和酒精復(fù)合消毒液及制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯和酒精的復(fù)合消毒液及制備方法，由有機(jī)溶液與無(wú)機(jī)溶液混合而成。有機(jī)溶液含有甘油，酒精，維生素E，脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯。無(wú)機(jī)溶液含有無(wú)離子水，凝膠聚合物，表面活性劑，蘆薈提取物，酸堿調(diào)節(jié)物。步驟：1、配制有機(jī)溶液：加入脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯、酒精和輔料均勻混合后得到有機(jī)溶液。2、配制無(wú)機(jī)溶液：聚季銨鹽?10、苯扎氯銨、十六烷基三甲基氯化銨、卡波姆Ultrez 20、蘆薈提取物溶解無(wú)離子水。3、將有機(jī)溶液加入到無(wú)機(jī)溶液中，得到消毒液。配方合理，使用方便。長(zhǎng)效，高效，無(wú)毒，抗氧化。不含有污染物和有毒物質(zhì)，適用于人體皮膚表面和物體表面的消毒。
【專利說(shuō)明】
一種沒食子兒茶素棕櫚酸酯和酒精復(fù)合消毒液及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，更具體涉及一種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸 酯(￡口18&11〇〇3七6(311；[1183113七6-?31111；^3七6，￡6061)和酒精復(fù)合消毒液，同時(shí)還涉及一種 脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯和酒精復(fù)合消毒液的制備方法，作為表面消毒液可 用在家庭，醫(yī)院，學(xué)校，公共場(chǎng)所，禽類養(yǎng)殖場(chǎng)，畜牧業(yè)，及其他可能遭細(xì)菌或病毒感染的場(chǎng) 所。不但及時(shí)殺滅已存在的細(xì)菌與病毒，同時(shí)在長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)保持抑制病毒作用。
【背景技術(shù)】
[0002] 表沒食子兒茶素沒食子酸酯(Epigallocatechin gallate，EGCG)是茶多酚中最有 效的活性成分，屬于兒茶素。EGCG具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗動(dòng)脈硬化、抗血栓形成、抗血 管增生、抗炎以及抗腫瘤作用，由于其低毒性和存在于綠茶中的天然化合物，使它成為一種 具有極大吸引力的開發(fā)對(duì)象。表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)是從中國(guó)綠茶中提取的一 種成份，它是綠茶主要的活性和水溶性成份，是兒茶素中含量最高的組分，占綠茶毛重的 9%-13%，因?yàn)榫哂刑厥獾牧Ⅲw化學(xué)結(jié)構(gòu)，EGCG具有非常強(qiáng)的抗氧化活性，抗氧化活性至少 是維生素C的100多倍，是維生素E的25倍，能夠保護(hù)細(xì)胞和DNA受損害，這種損害相信與癌 癥、心臟疾病和其他重大疾病有關(guān)，EGCG的這些功效歸結(jié)于他們對(duì)氧自由基的清除（抗氧 化)能力。EGCG是作為安全消費(fèi)品出現(xiàn)在FDA的清單上。
[0003] 然而，EGCG為水溶性分子且不穩(wěn)定，極易被氧化，無(wú)法制成穩(wěn)定性強(qiáng)的藥物。徐德 博士早在2006年就提出對(duì)茶多酚/EGCG進(jìn)行改性，進(jìn)而增強(qiáng)其穩(wěn)定性，脂溶性，特別是對(duì)病 毒殺滅的活性。這一新理念在國(guó)際新藥開發(fā)領(lǐng)域得到了證實(shí)。改性EGCG對(duì)病毒的殺滅效果 比沒有改性過(guò)的EGCG要強(qiáng)幾十倍。
[0004] 此前人們已知道EGCG具有抑制病毒的作用，但直接飲用綠茶，EGCG會(huì)立刻在體內(nèi) 分解，無(wú)法發(fā)揮作用。EGCG在水中不穩(wěn)定，而且容易氧化導(dǎo)致?lián)p失。為此，我們用的是已經(jīng)被 證明具有抗病毒活性的經(jīng)過(guò)修飾的脂溶性的EGCG-p(結(jié)合了脂肪酸棕櫚酸酯Palmitate)。 不但將水溶性的EGCG改性成為脂溶性，同時(shí)提高了化合物的穩(wěn)定性。由于穩(wěn)定性的提高，降 低了分解和氧化從而導(dǎo)致的損失，EGCG-p大大提高了殺滅病毒的活性。
[0005] 中國(guó)消毒劑市場(chǎng)目前并沒有長(zhǎng)效防止病毒感染的產(chǎn)品。在禽流感，單純孢疹，手足 口癥，腸道感染，乙肝等頻發(fā)，導(dǎo)致患者死亡的環(huán)境中，我們研發(fā)的這種以EGCG-p為主要成 分之一的消毒液預(yù)防病毒感染的作用機(jī)制與目前任何市場(chǎng)上銷售的消毒劑都不同，其特點(diǎn) 是長(zhǎng)效，高效，無(wú)毒。長(zhǎng)效指的是每次用于皮膚涂抹或表面噴灑之后，脂溶性沒食子兒茶素 沒食子酸棕櫚酸酯殘留在2小時(shí)內(nèi)能防止多種病毒感染感染(酒精的作用時(shí)間為14秒）。高 效指的是其有效濃度非常低，即可對(duì)多種病毒進(jìn)行滅活。無(wú)毒是因?yàn)樾碌幕衔飦?lái)自天然 分子的酯化改性，其毒性甚至低于綠茶。所有上述的內(nèi)容都是通過(guò)前期大量的實(shí)驗(yàn)，包括人 體試驗(yàn)得來(lái)的，并有多篇徐德博士和其他研究團(tuán)隊(duì)發(fā)表在國(guó)際期刊上的研究報(bào)告作為根 據(jù)。
[0006] 采用新劑型的消毒液的特點(diǎn)為長(zhǎng)效，無(wú)毒，無(wú)污染。針對(duì)手足口病和腸道感染的預(yù) 防，在兒童聚集的場(chǎng)合，例如幼兒園，小學(xué)等推廣。對(duì)于流感的預(yù)防，將推廣到學(xué)校，醫(yī)院，單 位等場(chǎng)所。另一個(gè)重點(diǎn)預(yù)防的是通過(guò)性傳染的病毒，如單純孢疹，人類乳突瘤病毒，艾滋病 毒等。
[0007] 新型的長(zhǎng)效無(wú)毒無(wú)污染消毒液主要用于皮膚和表面消毒，防止脊髓灰質(zhì)炎病毒、 腸道病毒，手足口病毒，流感(包括禽流感)病毒，肝炎病毒，孢疹病毒，艾滋病毒等對(duì)人體的 感染。加上畜牧業(yè)消毒液產(chǎn)品市場(chǎng)的需求(2010年達(dá)每年217億美元）。這種產(chǎn)品將是一種全 新的防范多種病毒感染的長(zhǎng)效保護(hù)劑。其市場(chǎng)前景非常廣闊。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的是在于提供了一種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯和酒精 復(fù)合消毒液，配方合理，使用方便。其特點(diǎn)是長(zhǎng)效，高效，無(wú)毒。長(zhǎng)效指的是每次用于皮膚涂 抹或表面噴灑之后，脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯殘留在2小時(shí)內(nèi)能防止多種病 毒感染感染(單獨(dú)酒精的作用時(shí)間為14秒）。高效指的是其有效濃度非常低，即可對(duì)多種病 毒進(jìn)行滅活。無(wú)毒是因?yàn)樾碌幕衔飦?lái)自天然分子的酯化改性，其毒性甚至低于綠茶。而且 對(duì)皮膚具有保護(hù)作用，不會(huì)污染環(huán)境。
[0009] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是在于提供了一種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯 和酒精復(fù)合消毒液的制備方法，方法可行，操作簡(jiǎn)便，不含有污染物和有毒物質(zhì)，可制成消 毒液，含消毒液紙巾，噴灑劑，擦手液，皮膚涂抹劑，潤(rùn)滑劑等等。嬰兒，兒童，和成人均可安 全使用。與其他產(chǎn)品不同的是長(zhǎng)效，高效，無(wú)毒，而且起到保護(hù)皮膚，抗氧化的作用。
[001 0]為了實(shí)現(xiàn)上述的目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)措施：
[0011] 其技術(shù)構(gòu)思是:本發(fā)明為一種消毒液，一種以脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚 酸酯和酒精為主要作用成分的消毒液，由有機(jī)溶液與無(wú)機(jī)溶液混合而成。用于殺滅細(xì)菌和 病毒。有機(jī)溶液可以含有甘油，酒精，維生素E，脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯。無(wú) 機(jī)溶液可以含有無(wú)離子水，蘆薈提取物等。
[0012] -種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯和酒精復(fù)合消毒液，它由以下重量份 的原料制成：
[0013] 原料 重量份
[0014] 有機(jī)溶液占總體積的 65-90。
[0015]無(wú)機(jī)溶液占總體積的 10-35。
[0016] 所述的有機(jī)溶液為甘油、酒精、維生素E(抗氧化）、脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸 棕櫚酸酯其中的一種或二至四種的任意混合。
[0017] 所述的無(wú)機(jī)溶液為無(wú)離子水、蘆薈提取物其中的一至兩種的任意混合。
[0018] 無(wú)離子水占總體積的10-2 0，酒精（普通）占總體積的5 5 -7 5，甘油占總體積的 0.001-12,脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯占總體積的0.01-5。聚季銨鹽-10占總體 積的0.01 -5.0，苯扎氯銨占總體積的0.01 -5.0，十六烷基三甲基氯化銨占總體積的0.01 - 3.0,卡波姆Ultrez 20 0.1-3.0,蘆薈提取物（陜西中鑫生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)）占總體積 的0.001-0.5，維生素E占總體積0.001-0.5。
[0019] -種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯和酒精復(fù)合消毒液，它由以下重量份 的原料制成(優(yōu)選范圍）：
[0020] 原料 重量份
[0021]有機(jī)溶液占總體積的 68-88。
[0022]無(wú)機(jī)溶液占總體積的 12-32。
[0023] -種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯和酒精復(fù)合消毒液，它由以下重量份 的原料制成(最好范圍）：
[0024] 原料 重量份
[0025]有機(jī)溶液占總體積的 72-85。
[0026]無(wú)機(jī)溶液占總體積的 15-28。
[0027] -種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯和酒精復(fù)合消毒液，它由以下重量份 的原料制成(最佳值）：
[0028] 原料 重量份
[0029]有機(jī)溶液占總體積的 86。
[0030]無(wú)機(jī)溶液占總體積的 24。
[0031] -種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯消毒劑，它由以下重量份的原料制 成： 原料 重量份 無(wú)離子水 10-35 甘油 0.01-12 脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯 0.01-5 酒精 55-75
[0032] 聚季銨鹽-10 0. 01-4 0 苯扎氯銨 0. 01-2. 5 十六烷基三甲基氯化銨 0. 01-2. 5 卡波姆 Ultrez 2.0 0. 5-2. 5 蘆薈提取物 0.1-Q. 5 維生素E 0. 1-0.
[0033] -種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯消毒劑，它由以下重量份的原料制成 (優(yōu)選范圍）： 原料 重量份 無(wú)離子水 9. 7-3Q. 0
[0034] 甘油 0. 1-11 脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯 0 1-0 5 酒精 60-70 聚季銨鹽-10 0.1-3.0 苯扎氯銨 0.1-2.0
[0035] 十六烷基三甲基氯化銨 0? 1-2.0 卡波姆 Ultrez 20 (X 1-2. 0 蘆薈提取物 Q, 2-0. 4 維生素E 0. 2-0, 4C
[0036] -種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯消毒劑，它由以下重量份的原料制成 (最好范圍）： 原料 重量份 無(wú)離子水 10. 9-29. 3 甘油 1-10. .5 脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯 0.2-1 酒精 65-70
[0037] 聚季銨鹽-10 1, 5-2, S 苯扎氯銨 1. (M. 5 十六烷基三甲基氯化銨 1. 0-1. 5 卡波姆 Ultrez 20 1.. 6-:L .5 蘆薈提取物 0. 0025-0. 3 維生素E 0.:0:0雜-0.3。
[0038] -種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯消毒劑，它由以下重量份的原料制成 (最佳值）： 原料 重量份 無(wú)離子水 21. :5 甘油 0.4
[0039] 脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯 0 ! 酒精 W 聚季銨鹽-10 2.0 苯扎氯鉸 1.0 十六烷基三甲基氯化銨 1.0 丨.:?波姆 Ultrez20 1.0
[0040] 蘆薈提取物 0,001 維生素E 0, 〇Dlp
[0041 ] -種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯消毒劑的制備方法，其步驟是：
[0042] 1、配制有機(jī)溶液:取55~75ml酒精，加入脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯 0.1~5g和輔料均勻混合后再與0.1~15ml甘油混合得到有機(jī)溶液。
[0043] 2、配制無(wú)機(jī)溶液:聚季銨鹽-10、苯扎氯銨、十六烷基三甲基氯化銨、卡波姆Ultrez 20、蘆薈提取物溶解在15ml-25ml去離子水中。用三乙醇胺調(diào)節(jié)酸堿度到pH-7.0至pH-8.0。 [0044] 3、將無(wú)機(jī)溶液慢慢加入到有機(jī)溶液中，邊加邊攪拌至均勻的溶液，得到100ml的一 種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯和酒精消毒液。
[0045]所述的輔料為聚季銨鹽-10、苯扎氯銨、十六烷基三甲基氯化銨、卡波姆Ultrez 20、維生素E、蘆薈提取物中的一種至二種或六種的任意混合物；
[0046]本發(fā)明將脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯這種長(zhǎng)效、無(wú)毒的消毒劑成分溶 解在無(wú)毒、無(wú)污染的酒精中，制成具有長(zhǎng)效保護(hù)能力的無(wú)毒無(wú)刺激復(fù)合消毒液。本發(fā)明與現(xiàn) 有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)和效果：
[0047] A、配方合理，使用方便。其特點(diǎn)是長(zhǎng)效，高效，無(wú)毒。
[0048] B、長(zhǎng)效指的是每次用于皮膚涂抹或表面噴灑之后，2小時(shí)內(nèi)能防止多種病毒感染 感染(單獨(dú)酒精的作用時(shí)間為14秒）。對(duì)多種病毒進(jìn)行滅活。無(wú)毒是因?yàn)樾碌幕衔飦?lái)自天 然分子的酯化改性，其毒性甚至低于綠茶。而且對(duì)皮膚具有保護(hù)作用，不會(huì)污染環(huán)境。
[0049] C、方法可行，操作簡(jiǎn)便，不含有污染物和有毒物質(zhì)，可制成消毒液，含消毒液紙巾， 噴灑劑，擦手液，皮膚涂抹劑，潤(rùn)滑劑等等。
[0050] D、對(duì)嬰兒、兒童和成人均可安全使用。與其他產(chǎn)品不同的是長(zhǎng)效，高效，無(wú)毒，而且 起到保護(hù)皮膚，抗氧化的作用。
[0051] 此配方與其他產(chǎn)品最大的不同點(diǎn)是除了酒精的常規(guī)殺菌作用外還將強(qiáng)力殺滅病 毒的成分-脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯-長(zhǎng)期附著在皮膚細(xì)胞表面或其它物質(zhì) 表面，使病毒失活，無(wú)法感染細(xì)胞。制成的消毒產(chǎn)品具有高效殺滅細(xì)菌和病毒的作用，脂溶 性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯在皮膚表面形成保護(hù)膜，滅病毒效果超過(guò)兩小時(shí)，對(duì)皮 膚沒有刺激。
【具體實(shí)施方式】 [0052] 實(shí)施例1:
[0053] -種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯和酒精復(fù)合消毒液，它由以下重量份 的原料制成(最佳值）：
[0054] 原料 重量份
[0055]有機(jī)溶液占總體積的 88。
[0056]無(wú)機(jī)溶液占總體積的 22。
[0057]所述的有機(jī)溶液為甘油、酒精、維生素E(抗氧化）、脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸 棕櫚酸酯其中的一種或二至四種的任意混合。
[0058]所述的無(wú)機(jī)溶液為無(wú)離子水、聚季銨鹽-10、苯扎氯銨、十六烷基三甲基氯化銨、卡 波姆Ultrez 20和蘆薈提取物其中的一種至二種或六種的任意混合物。
[0059]所述的無(wú)離子水占總體積的10或12或14或16或18或20%，酒精(普通）占總體積的 55或60或65或70或75%，甘油占總體積的0.001或0.008或0.5或1.5或5或8或10或12%，月旨 溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯占總體積的〇 . 01或〇. 08或0.5或1.5或2.5或4.4或 5%。聚季銨鹽-10占總體積的0.01或0.09或0.6或1.8或2.8或3.6或4.6或5.0%，苯扎氯銨 占總體積的0.01或0.1或1.2或2.2或3.3或4.5或5.0%，十六烷基三甲基氯化銨占總體積的 0.01或0.1或 1或 1.6或2.4或3.0%，卡波姆Ultrez 20 0.1或0.1或 1.4或2或2.6或3.0%，蘆 薈提取物（陜西中鑫生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)）占總體積的0.001或0.007或0.01或0.07或 0.12或0.3或0.4或0.5%，維生素E占總體0.001或0.007或0.01或0.07或0.12或0.3或0.4或 0.5%〇
[0060] -種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯消毒液，它由以下重量份的原料制 成： 原料 重量份 無(wú)離子水 .15. _4
[0061] 甘油 9 脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯 02 酒精 70 聚季銨鹽-10 2, 0 苯扎氯銨 1. Q
[0062] 十六烷基三甲基氯化銨 LQ 卡波姆 Ultrez20 1, 0 蘆薈提取物 0. 3 維生素E 0. 1：〇
[0063] -種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯和酒精復(fù)合消毒液的制備方法，其步 驟是：
[0064] 1、配制有機(jī)溶液:取30或40或50或60或70ml酒精，加入脂溶性沒食子兒茶素沒食 子酸棕櫚酸酯0.1或0.5或1或2或3或4或5g和輔料均勻混合后再與10或12或13或15ml甘油 混合得到有機(jī)溶液。
[0065] 2、配制無(wú)機(jī)溶液:聚季銨鹽-10、苯扎氯銨、十六烷基三甲基氯化銨、卡波姆Ultrez 20和蘆薈提取物溶解在去10ml或11ml或12ml或13或14或15ml離子水中。用三乙醇胺調(diào)節(jié)酸 堿度到PH6.5或6.9或7.4.
[0066] 3、將無(wú)機(jī)溶液慢慢加入到有機(jī)溶液中，邊加邊攪拌至均勻的溶液，得到100ml的一 種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯和酒精復(fù)合消毒液。一種脂溶性沒食子兒茶素沒 食子酸棕櫚酸酯和酒精復(fù)合消毒液，它由以下重量份的原料制成：
[0069] 其制備步驟與實(shí)施例1相同。
[0070] 該產(chǎn)品含有脂溶性茶多酚-暨脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯和酒精的兩 種消毒成分。用于表面消毒劑。
[0071] 該產(chǎn)品含有脂溶性茶多酚-暨脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯和酒精的消 毒液用于預(yù)防微生物感染，特別是病毒對(duì)人類和動(dòng)物的感染。
[0072] 該產(chǎn)品含有脂溶性茶多酚-暨脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯和酒精的消 毒液作為長(zhǎng)效表面消毒劑用來(lái)防止微生物對(duì)人類和動(dòng)物的感染。
[0073] 該產(chǎn)品含有脂溶性茶多酚-暨脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯和酒精的消 毒液用于預(yù)防性傳播的病毒感染。
[0074] 該產(chǎn)品含有脂溶性茶多酚-暨脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯和酒精的消 毒劑用于已經(jīng)被病毒感染的皮膚，粘膜。達(dá)到后期消毒作用。
[0075]該產(chǎn)品含有脂溶性茶多酚-暨脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯和酒精的消 毒劑的配方用于不同產(chǎn)品種。例如擦手液，消毒紙巾，表面消毒噴灑劑，皮膚表面涂抹劑，皮 膚潤(rùn)滑劑，醫(yī)用消毒劑等等。
[0076]實(shí)施例9:消毒液儲(chǔ)存在25°C的穩(wěn)定性試驗(yàn)：
[0077]消毒劑48度保溫箱中（濕度75%)貯藏6個(gè)月，常溫貯藏2年，每半年檢測(cè)一次脂溶 性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯的含量，結(jié)果見表1
[0078]表1本發(fā)明實(shí)施例消毒液儲(chǔ)存在25°C的穩(wěn)定性試驗(yàn)如下表所示：
[0081]實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示本消毒劑性狀穩(wěn)定，有效消毒活性成分穩(wěn)定。
[0082]實(shí)施例10:消毒液對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的殺菌效果的檢測(cè)按原衛(wèi)生部頒 發(fā)的《消毒產(chǎn)品檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)范》中規(guī)定的方法進(jìn)行，具體如下：
[0083] 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?檢測(cè)消毒液對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的殺菌效果。
[0084]二、樣品來(lái)源:被檢樣品EGCG棕櫚酸酯和酒精復(fù)合消毒液為本發(fā)明實(shí)施例1、2、3、 4、5、6、7、8制備的產(chǎn)品。
[0085] 三、實(shí)驗(yàn)步驟 [0086] 1、試驗(yàn)器材
[0087] 1)菌種:金黃色葡萄球菌ATCC 6538、大腸桿菌8099、白色念珠菌ATCC10231
[0088] 2)磷酸鹽緩沖液:見附錄A。
[0089] 3)無(wú)菌蒸餾水。
[0090] 4)消毒劑稀釋用硬水:見附錄A。
[0091 ] 5)有機(jī)干擾物質(zhì):懸液試驗(yàn)用3 %BSA溶液。
[0092] 6) TSA培養(yǎng)基:胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基(TSA)見附錄A。
[0093] 7)含中和劑的胰蛋白胨大豆肉湯培養(yǎng)基（中和劑TSB)，中和劑經(jīng)鑒定合格。
[0094] 8)刻度吸管（1 ? 0ml、5 ? 0ml、10 ? 0ml)，毛細(xì)吸管。
[0095] 9)恒溫水浴箱。
[0096] 10)電動(dòng)混合器。
[0097] 11)秒表。
[0098] 12)數(shù)字可調(diào)移液器（10yl，20yl，100yl，200yl，lOOOyl)及配套用一次性塑料吸 頭。
[0099] 13)離心機(jī)。
[0100] 14)濁度計(jì)。
[0101] 2、細(xì)菌懸液制備：
[0102] 1)取凍干菌種管，在無(wú)菌操作下打開，以毛細(xì)吸管加入適量營(yíng)養(yǎng)肉湯，輕柔吹吸數(shù) 次，使菌種融化分散。取含5.0ml~10.0ml營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基試管，滴入少許菌種懸液，置37 °C 培養(yǎng)18h~24h。用接種環(huán)取第1代培養(yǎng)的菌懸液，劃線接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上，于37 °C培養(yǎng)18h~24h。挑取上述第2代培養(yǎng)物中典型菌落，接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面，于37°C培養(yǎng)18h ~24h，即為第3代培養(yǎng)物。
[0103] 2)取菌種第3代~14代的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面新鮮培養(yǎng)物（18h~24h)，用5.0ml吸 管吸取3.0ml~5.0ml稀釋液加入斜面試管內(nèi)，反復(fù)吹吸，洗下菌苔。隨后，用5.0ml吸管將洗 液移至另一無(wú)菌試管中，用電動(dòng)混合器混合(振蕩）20s，或在手掌上振敲80次，以使細(xì)菌懸 浮均勻。
[0104] 3)初步制成的菌懸液，先用細(xì)菌濃度比濁測(cè)定法粗測(cè)其含菌濃度，然后以稀釋液 稀釋至所需使用的濃度。
[0105] 4)細(xì)菌繁殖體懸液應(yīng)保存在4°C冰箱內(nèi)備用。應(yīng)當(dāng)天使用不得過(guò)夜。
[0106] 3、試驗(yàn)分組
[0107] 試驗(yàn)中應(yīng)分以下各組：
[0108] (1)試驗(yàn)組。選定試驗(yàn)菌和一個(gè)消毒劑濃度作用10min進(jìn)行試驗(yàn)。
[0109] (2)陽(yáng)性對(duì)照組。根據(jù)各種試驗(yàn)的規(guī)定，用稀釋液代替消毒劑溶液，按上述同樣的 步驟進(jìn)行試驗(yàn)。所得結(jié)果代表菌液原有濃度，以其作為計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)的初始濃度。
[0110] 4、懸液定量殺菌試驗(yàn)操作程序
[0111] 1)使用無(wú)菌硬水配制消毒液測(cè)試樣品，配制的濃度為待測(cè)濃度的1.25倍，置20°C ±rc水浴備用。
[0112] 2)按照2配制實(shí)驗(yàn)用菌懸液，濃度為lX108cfu/ml~5X108cfu/ml。
[0113] 3)取消毒試驗(yàn)用無(wú)菌大試管，先加入0.5ml試驗(yàn)用菌懸液，再加入0.5ml有機(jī)干擾 物質(zhì)，混勻，置20 °C ± 1°C水浴中5min后，用無(wú)菌吸管吸取上述濃度消毒液4.0ml注入其中， 迅速混勻并立即記時(shí)。
[0114] 4)待試驗(yàn)菌與消毒劑相互作用至各預(yù)定時(shí)間，分別吸取0.5ml試驗(yàn)菌與消毒劑混 合液加于4.5ml經(jīng)滅菌的中和劑中，混勾。
[0115] 5)各管試驗(yàn)菌與消毒劑混合液經(jīng)加中和劑作用lOmin后，分別吸取1.0ml樣液，按 活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測(cè)定存活菌數(shù)，每管樣液接種2個(gè)平皿即可。如平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)較多 時(shí)，可進(jìn)行系列10倍稀釋后，再進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
[0116] 6)同時(shí)用稀釋液代替消毒液，進(jìn)行平行試驗(yàn)，作為陽(yáng)性對(duì)照。
[0117] 7)所有試驗(yàn)樣本均在37 °C溫箱中培養(yǎng)，對(duì)細(xì)菌繁殖體培養(yǎng)48h觀察最終結(jié)果。
[0118] (8)試驗(yàn)重復(fù)3次，計(jì)算各組的活菌濃度(cfu/ml)，并換算為對(duì)數(shù)值(N)，然后按下 式計(jì)算殺滅對(duì)數(shù)值：
[0119] 殺滅對(duì)數(shù)值(KL) =對(duì)照組平均活菌濃度的對(duì)數(shù)值(No)-試驗(yàn)組活菌濃度對(duì)數(shù)值 (Nx)
[0120] 5、本發(fā)明實(shí)施例消毒液對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的殺菌效果見表2 [0121 ]表2:實(shí)施例消毒液對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的殺滅效果
[0122] 樣品 作用時(shí)間 對(duì)大腸桿菌殺對(duì)金黃色葡萄球?qū)Π咨钪榫?(min) 滅對(duì)數(shù)值 菌殺滅對(duì)數(shù)值 殺滅對(duì)數(shù)值 實(shí)施例 1 10 6. 1 6. 7 6.2 實(shí)施例 2 10 6.2 6. 8 6.1 實(shí)施例 3 10 6.0 6,6 6.3 實(shí)施例 4 10 6.3 6,5 6. 2 實(shí)施例 5 10 6. 1 6, 7 6. 1 實(shí)施例 6 10 6.2 6, 8 6.2 實(shí)施例 7 10 6.1 6, 7 6, 4 實(shí)施例 8 10 6.3 6, ; 8 6.3
[0123] 6、結(jié)果評(píng)定：
[0124] 本試驗(yàn)通過(guò)紙片試驗(yàn)方法評(píng)定溶液EGCG棕櫚酸脂消毒液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄 球菌和白色念珠菌的殺菌效果，所選三種菌株都是最常見的致病菌，也是革蘭氏陰性、革蘭 氏陽(yáng)性和真菌最普通的代表菌。從所做的實(shí)驗(yàn)觀察的結(jié)果可以看出，被檢測(cè)樣品EGCG棕櫚 酸脂消毒液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌有明確的抑菌效果，其抑菌作用對(duì) 革蘭氏陽(yáng)性(金黃色葡萄球菌）比革蘭氏陰性(大腸桿菌)似更強(qiáng)。結(jié)論:EGCG棕櫚酸脂和酒 精復(fù)合消毒液對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和白色念珠菌有明確的抑菌作用。
[0125] 消毒劑樣品對(duì)脊髓灰質(zhì)炎病毒滅活效果的檢測(cè)按原衛(wèi)生部頒發(fā)的《消毒產(chǎn)品檢驗(yàn) 技術(shù)規(guī)范》中規(guī)定的方法進(jìn)行，具體如下：
[0126] 實(shí)驗(yàn)原理：用細(xì)胞感染法測(cè)定消毒液作用實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組樣本中脊髓灰質(zhì)炎病毒 的量。以細(xì)胞病變作為判斷指標(biāo)，確定各組病毒的感染滴度，計(jì)算消毒液對(duì)脊髓灰質(zhì)炎病毒 的滅活率。由于本實(shí)驗(yàn)中消毒液的樣品沒有相應(yīng)的中和劑，所以這里用稀釋的物理方法來(lái) 中和消毒劑效果，選用細(xì)胞維持液作為稀釋溶劑。
[0127] 一、預(yù)備實(shí)驗(yàn)：
[0128] 1、細(xì)胞維持液+Vero細(xì)胞-培養(yǎng)
[0129] 加入細(xì)胞維持液，置37°C二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)，每天觀察細(xì)胞形態(tài)和生 長(zhǎng)情況。
[0130] 2、消毒劑+細(xì)胞-培養(yǎng)
[0131] 將實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞分別加入不同稀釋度的消毒液（用細(xì)胞維持液稀釋），作用2-3小時(shí) 后，吸去液體，另加入細(xì)胞維持液，置37°C二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72小時(shí)，每天觀察細(xì)胞形 態(tài)和生長(zhǎng)情況。
[0132] 注:通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)對(duì)消毒劑的最大耐受濃度。
[0133] 五、殺滅試驗(yàn)
[0134] 1、將待檢消毒液原液稀釋成待測(cè)的濃度梯度(暫定為原濃度，10-1，10- 2)置20°C 土 rc水浴備用。
[0135] 2、將病毒懸液置20°C ± 1°C水浴5min，取出0.2mL病毒懸液分別與三種濃度的消毒 劑等體積混勻計(jì)時(shí);作用至規(guī)定時(shí)間（先按l、2、5、10min，看看那個(gè)時(shí)間合適，以此時(shí)間為T， 再做時(shí)間梯度1/2T，T，3/2T)，立即取出0.11111，加入到0.91111中和劑中混勻作用1〇111111，適當(dāng) 稀釋接種于96孔細(xì)胞板，培養(yǎng)72h，每天觀察并記錄CPE。
[0136] 3、陽(yáng)性對(duì)照以PBS代替消毒劑，按上述步驟進(jìn)行操作，采用一個(gè)時(shí)間即可。陰性對(duì) 照就是平板上未加病毒的細(xì)胞孔。
[0137] 五數(shù)據(jù)整理
[0138] 根據(jù)公式（1)計(jì)算出各組病毒TCID50對(duì)數(shù)值：
[0139] 殺滅對(duì)數(shù)值= Log(陽(yáng)性對(duì)照TCID50)-Log(T組病毒TCID50) (1)
[0140] 結(jié)果見表4:
[0141] 表4:實(shí)施例消毒液對(duì)PV-I殺滅效果以下與實(shí)際數(shù)據(jù)有差別，應(yīng)該是6左右，作用時(shí) 間為30秒

[0144] 結(jié)果顯示EGCG棕櫚酸脂和酒精復(fù)合消毒液對(duì)脊髓灰質(zhì)炎病毒-I有很好的殺滅作 用。
[0145] 以上所述的實(shí)施例，只是本發(fā)明較優(yōu)選的【具體實(shí)施方式】的一種，本領(lǐng)域的技術(shù)人 員在本發(fā)明技術(shù)方案范圍內(nèi)進(jìn)行的通常變化和替換都應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯和酒精復(fù)合消毒液，它由以下重量份的 原料制成： 原料 重量份 有機(jī)溶液 65-90 無(wú)機(jī)溶液 10-35; 所述的有機(jī)溶液為甘油、酒精、維生素 E、脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯其中 的一種或二至四種的任意混合； 所述的無(wú)機(jī)溶液為無(wú)離子水、蘆薈提取物其中的一至兩種的任意混合； 所述的無(wú)離子水占總體積的10-20，酒精占總體積的55-75，甘油占總體積的0.001-12， 脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯占總體積的〇. 01-5，聚季銨鹽-10占總體積的0.01-5.0，苯扎氯銨占總體積的0.01-5.0，十六烷基三甲基氯化銨占總體積的0.01-3.0，卡波姆 Ultrez 20 0.1-3.0蘆薈提取物占總體積的0.001-0.5，維生素 E占總體積0.001-0.5。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯和酒精復(fù)合消毒 液，其特征在于： 原料 重量份 有機(jī)溶液 68-88 無(wú)機(jī)溶液 12-32。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯和酒精復(fù)合消毒 液，其特征在于： 原料 重量份 有機(jī)溶液占總體積的 72-85 無(wú)機(jī)溶液占總體積的 15-28。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯和酒精復(fù)合消毒 液，其特征在于： 原料 重量份 有機(jī)溶液占總體積的 86 無(wú)機(jī)溶液占總體積的 24。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯消毒劑，其特征 在于： 原料 重量份 無(wú)離子水 10-35 甘油 0.01-12 脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯 0.01-5 酒精 55-75 聚季銨鹽-10 0.01-4.0 苯扎氯銨 0.01-2.5 十六烷基三甲基氯化銨 0.01-2.5 卡波姆Ultrez 20 0.5-2.5 蘆薈提取物 0.1-0.5 維生素E 0.1-0.5。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯消毒劑，其特征 在于： 原料 重量份 無(wú)離子水 9.7-30.0 甘油 0.1-11 脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯 0.1-0.5 酒精 60-70 聚季銨鹽-10 0.1-3.0 苯扎氯銨 0.1-2.0 十六烷基三甲基氯化銨 0.1-2.0 卡波姆Ultrez 20 0.1-2.0 蘆薈提取物 0.2-0.4 維生素E 0.2-0.4。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯消毒劑，其特征 在于： 原料 重量份 無(wú)離子水 10.9-29.3 甘油 1-10.5 脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯 0.2-1 酒精 65-70 聚季銨鹽-10 1.5-2.5 苯扎氯銨 1.0-1.5 十六烷基三甲基氯化銨 1.0-1.5 卡波姆Ultrez 20 1.0-1.5 蘆薈提取物 0.0025-0.3 維生素 E 0.0025-0.3。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯消毒劑，其特征 在于： 原料 重量份 無(wú)離子水 24.5 甘油 0.4 脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯 0.1 酒精 70 聚季銨鹽-10 2.0 苯扎氯銨 1.0 十六烷基三甲基氯化銨 1.0 卡波姆Ultrez 20 1.0 蘆薈提取物 0.001 維生素 E 0.001。9.權(quán)利要求1所述的一種脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯消毒劑的制備方法， 其步驟是： 1 )、配制有機(jī)溶液：取55~75ml酒精，加入脂溶性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯0.1 ~5g和輔料均勻混合后再與0.1~15ml甘油混合得到有機(jī)溶液； 2) 、配制無(wú)機(jī)溶液：聚季銨鹽-10、苯扎氯銨、十六烷基三甲基氯化銨、卡波姆Ultrez 20、蘆薈提取物溶解在15ml-25ml去離子水中，用三乙醇胺調(diào)節(jié)酸堿度到pH-7.0至pH-8.0； 3) 、將無(wú)機(jī)溶液加入到有機(jī)溶液中，邊加邊攪拌至均勻的溶液，得到100ml的一種脂溶 性沒食子兒茶素沒食子酸棕櫚酸酯和酒精消毒液； 所述的輔料為聚季銨鹽-10、苯扎氯銨、十六烷基三甲基氯化銨、卡波姆U1 trez 20、維 生素 E、蘆薈提取物中的一種至二種或六種的任意混合物。
【文檔編號(hào)】A01N65/42GK105853676SQ201610216753
【公開日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年4月8日
【發(fā)明人】吳建國(guó), 徐德, 鄔開朗, 張祺, 楊慶雨, 劉映樂(lè), 譚秋萍, 劉芳
【申請(qǐng)人】武漢艾文斯生物科技有限公司