使用cbp/連環(huán)蛋白的抑制劑治療肝纖維化的制作方法
【專利摘要】本公開(kāi)一般地涉及α?螺旋模擬結(jié)構(gòu)并具體地涉及作為β?連環(huán)蛋白的抑制劑的α?螺旋模擬結(jié)構(gòu)。本公開(kāi)還涉及肝纖維化，包括與肝炎相關(guān)的肝纖維化、與乙型肝炎感染相關(guān)的肝纖維化和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的治療中的應(yīng)用，以及包含這樣的α螺旋模擬β?連環(huán)蛋白抑制劑的藥物組合物。
【專利說(shuō)明】使用CBP/連環(huán)蛋白的抑制劑治療肝纖維化
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)的交叉參考 本申請(qǐng)是2013年10月18日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/892,606的實(shí)用會(huì)話(utility conversation)。
【背景技術(shù)】
[0002] 乙型肝炎是一種由乙型肝炎病毒化BV)引起的肝臟的感染性炎癥疾病。該感染通 常是無(wú)癥狀的，但是慢性感染可W導(dǎo)致肝臟的癒痕形成并最終導(dǎo)致肝硬化，而運(yùn)通常在多 年W后才變得明顯。在一些病例中，患有肝硬化的人將會(huì)繼續(xù)發(fā)展成肝衰竭、肝癌或威脅生 命的食管和胃的血管曲張。
[0003] 肝纖維化的發(fā)展是慢性乙型肝炎病毒感染的自然史中的一個(gè)關(guān)鍵性的事件。纖維 化是運(yùn)一疾病的發(fā)病率和死亡率的主要原因，并且導(dǎo)致慢性感染的個(gè)體的一定百分比的肝 代償失調(diào)、肝細(xì)胞癌和死亡的發(fā)展。
[0004] 非酒精性的脂肪性肝炎或NA細(xì)是一種常見(jiàn)的、通常是"沉默的"肝病。它類(lèi)似于酒 精性的肝病，但是卻發(fā)生在幾乎不或者不飲用酒精的人中。NASH的主要特征是肝臟中的脂 肪，W及炎癥和損傷?；加蠳ASH的大部分人感覺(jué)良好，并且沒(méi)有意識(shí)到他們有肝臟問(wèn)題。然 而，NASH可W是嚴(yán)重的并且可W導(dǎo)致肝硬化，其中肝臟被永久性地?fù)p傷和形成癒痕并且不 再能夠適當(dāng)?shù)毓ぷ鳌ASH可W緩慢地惡化，導(dǎo)致癒痕形成或"纖維化在肝臟中出現(xiàn)和累 積。隨著纖維化加重，肝硬化也在發(fā)展；肝臟變得形成癒痕、硬化，并且不能正常工作。
[0005] 肝纖維化通過(guò)肝臟中的纖維組織的累積而表征和定義。纖維癒痕組織的形成是針 對(duì)損傷的正常身體應(yīng)答，但是在纖維化中，運(yùn)一愈合過(guò)程卻是錯(cuò)誤的。當(dāng)肝細(xì)胞（功能性的 肝細(xì)胞）由于被病毒感染、大量酒精消耗、毒素、創(chuàng)傷或其它因素而損傷時(shí)，免疫系統(tǒng)被激活 W修復(fù)損傷。肝細(xì)胞的損傷或死亡(壞死)刺激炎性免疫細(xì)胞釋放細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子和其 它化學(xué)物質(zhì)。運(yùn)些化學(xué)信使引導(dǎo)肝臟中的支持細(xì)胞(稱為肝臟星狀細(xì)胞)活化并產(chǎn)生膠原、 糖蛋白（諸如纖連蛋白）、蛋白聚糖類(lèi)和其它物質(zhì)。運(yùn)些物質(zhì)在肝臟中儲(chǔ)存，導(dǎo)致細(xì)胞外基質(zhì) (非功能性結(jié)蹄組織）的聚集。與此同時(shí)，分解或降解膠原的過(guò)程受損。在健康的肝臟中，基 質(zhì)組織的合成(纖維發(fā)生)和分解(纖維溶解)是平衡的。當(dāng)過(guò)度的癒痕組織聚集的速度快于 其可W被分解和從肝臟中移除的速度時(shí)，發(fā)生纖維化。
[0006] Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)傳遞新近作為先驅(qū)而呈現(xiàn)，運(yùn)歸因于其在人生物學(xué)的許多方 面中的關(guān)鍵性的角色。運(yùn)一信號(hào)傳遞途徑在胚胎發(fā)生、器官發(fā)生和維持組織和器官內(nèi)環(huán)境 穩(wěn)態(tài)中，W及在病理學(xué)狀況諸如癌癥和其它人病癥諸如炎性病癥和纖維化中具有作用。在 肝臟中，其牽設(shè)若干生理學(xué)事件，諸如發(fā)育、再生和生長(zhǎng)。然而，該途徑的異?；罨苍诟闻K 的多種不同的腫瘤中顯現(xiàn)，并且最近的研究開(kāi)始鑒別出其在其它肝臟病理學(xué)狀況中的作 用。它通過(guò)調(diào)節(jié)各種基礎(chǔ)的細(xì)胞事件，包括分化、增殖、存活、氧化應(yīng)激、形態(tài)發(fā)生等對(duì)肝臟 生理學(xué)和病理學(xué)做出貢獻(xiàn)。
[0007] Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)傳遞的作用在星狀細(xì)胞中也變得越發(fā)明顯。盡管β-連環(huán)蛋白 在星狀細(xì)胞的細(xì)胞-細(xì)胞接觸中的表達(dá)是未知的，但最近已經(jīng)在肝再生的過(guò)程中報(bào)道有細(xì) 胞核和細(xì)胞質(zhì)的β-連環(huán)蛋白。星狀細(xì)胞活化在多種病況中牽設(shè)于肝纖維化中，包括酒精性 脂肪性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎和病毒性肝炎，并且是代謝性肝病的結(jié)果。諸多研究現(xiàn)在 開(kāi)始觀察Wnt/β-連環(huán)蛋白信號(hào)傳遞在星狀細(xì)胞活化中的作用。最近，休眠的和活化的大鼠 肝星狀細(xì)胞的DNA微列分析顯示在非經(jīng)典的Wnt途徑中設(shè)及的基因的上調(diào)，但不存在β-連 環(huán)蛋白活化。盡管運(yùn)需要進(jìn)一步表征，但是檢查所有Wnt和frizzled基因的存在與否的另一 個(gè)研究顯示其在活化或休眠的星狀和枯否細(xì)胞中的總體表達(dá)沒(méi)有差異。然而，該研究鑒別 了Fzb (sFRPl)僅在活化的細(xì)胞中存在，運(yùn)暗示了Wnt信號(hào)傳遞在星狀或枯否細(xì)胞活化中的 調(diào)節(jié)（Thompson, M.和Monga, S., Hepatology 45: 1298-1305, 2007)。
[0008] 肝星狀細(xì)胞化sc)的活化(肝纖維化中的一個(gè)關(guān)鍵性的事件)是由弱化的成脂轉(zhuǎn) 錄所的導(dǎo)致的。最近的研究觀察了是否Wnt信號(hào)傳遞促進(jìn)了"抗成脂的巧SC的活化和肝纖 維發(fā)生（化eng J.等人，Am. J. F*hysiol. Gastrointest. Liver Physiol. 294:G39- G49, 2008)。在運(yùn)些研究中，通過(guò)定量PCR檢查了培養(yǎng)活化的來(lái)自正常大鼠的HSC和膽汁渺 積的大鼠肝的HSC的Wnt, Frizzled (Fz)受體和共同受體的表達(dá)。Wnt信號(hào)傳遞通過(guò)細(xì)胞 核β-連環(huán)蛋白和T細(xì)胞因子(TCF)啟動(dòng)子活性評(píng)估。通過(guò)腺病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)Dickkopf-1 (D化- 1)(一種Wnt共同受體括抗劑）W評(píng)價(jià)Wnt括抗對(duì)小鼠中的HSC的培養(yǎng)活化和膽汁渺積性肝纖 維化的作用。與休眠的HSC相比，在培養(yǎng)活化的HSC中，經(jīng)典的（Wnt：3a和10b)和非經(jīng)典的 (Wnt4和5a) Wnt基因、Fz-1和2和共同受體[低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白化RP)6和Ryk]的 信使RNA增加了大約3-12倍。細(xì)胞核β-連環(huán)蛋白水平和TCF DNA結(jié)合在活化的HSC中顯著增 加。
[0009] TCF啟動(dòng)子活性受Wntl刺激但卻受化化by(-種阻斷β-連環(huán)蛋白與TCF相互作用 的蛋白）抑制和受Dkk-1抑制。D化-1增強(qiáng)過(guò)氧化物酶體增殖子活化的受體-丫（PPAR- 丫）-驅(qū) 動(dòng)的PPAR應(yīng)答元件(PPRE)啟動(dòng)子活性(一種關(guān)鍵的成脂轉(zhuǎn)錄參數(shù)）、消除激動(dòng)劑刺激的收 縮，并恢復(fù)培養(yǎng)中的HSC靜默。D化-1的高表達(dá)增加了培養(yǎng)的HSC的調(diào)亡。Wnt和Fz基因的表 達(dá)也在從實(shí)驗(yàn)性的膽汁渺積性肝纖維化分離的HSC中被誘導(dǎo)，并且Dkk-1表達(dá)改善小鼠中 的運(yùn)一形式的肝纖維化。由此，已經(jīng)鑒別出了HSC活化中的抗成脂的Wnt信號(hào)傳遞，W及Wnt 括抗對(duì)肝纖維化的治療潛力（化eng J.等人，Am. J.曲ysiol. Gastrointest. Liver Physiol. 294:G39-G49, 2008)〇

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本公開(kāi)提供了通過(guò)施用β-連環(huán)蛋白信號(hào)傳遞的抑制劑治療肝纖維化，包括與肝炎 相關(guān)的肝纖維化、與乙型肝炎感染相關(guān)的肝纖維化和非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的方法。 本公開(kāi)還提供了 α螺旋模擬β-連環(huán)蛋白抑制劑化合物，和包含β-連環(huán)蛋白的抑制劑的組合 物。
[0011] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的α螺旋模擬β-連環(huán)蛋白抑制劑化合物包括4-(((6S， 9S，9aS)-1-(芐基氨基甲酯基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(哇嘟-8-基甲基)八氨-1H-化 嗦并[2，1-C ] [ 1，2，4]Ξ嗦-6-基）甲基)苯基二氨憐酸醋或(6S，9S，9aS)-N-芐基-6-(4-?基 芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(哇嘟-8-基甲基）八氨-1H-化嗦并[2，l-c][l，2,4]S 嗦-1-甲酯胺。
[0012] 附圖簡(jiǎn)述 附圖1.用化合物A治療減少ΝΑ甜大鼠模型中的纖維化。
[0013] 附圖2.天狼星紅染色的肝切片的代表性顯微照片。
[0014] 公開(kāi)內(nèi)容詳述 已經(jīng)開(kāi)發(fā)了非膚化合物，其模擬在生物活性的蛋白或膚中發(fā)現(xiàn)的反向轉(zhuǎn)角的二級(jí)結(jié) 構(gòu)。例如，美國(guó)專利號(hào)5,440,013和公開(kāi)的？(：1'申請(qǐng)?zhí)柵?94/03494、胖001/002104巧抓001/ 16135Α2各自公開(kāi)了構(gòu)象限制性的、非膚的化合物，其模擬反向轉(zhuǎn)角的Ξ維結(jié)構(gòu)。此外，美 國(guó)專利號(hào)5,929,237及其部分繼續(xù)美國(guó)專利號(hào)6,013,458公開(kāi)了構(gòu)象限制性的化合物，其模 擬生物活性的膚和蛋白的反向轉(zhuǎn)角區(qū)域的二級(jí)結(jié)構(gòu)。對(duì)于反向轉(zhuǎn)角模擬物，W02007/056513 和W02007/056593中已經(jīng)公開(kāi)了構(gòu)象限制性的化合物，其模擬生物活性的膚和蛋白的α-螺 旋區(qū)域的二級(jí)結(jié)構(gòu)。
[0015] 本公開(kāi)提供了新穎的化合物、藥物組合物和治療肝纖維化的方法。發(fā)明人已經(jīng)確 定，抑制β-連環(huán)蛋白信號(hào)傳遞是治療纖維化性肝病的一個(gè)有效的途徑。
[0016] 本發(fā)明的α螺旋模擬β-連環(huán)蛋白抑制劑的結(jié)構(gòu)和化合物公開(kāi)于W0 2010/044485、 W0 2010/128685、W0 2009/148192和US 2011/0092459,其中任一篇通過(guò)引用W其整體并入 本文中。現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)運(yùn)些化合物可用于治療腎纖維化。
[0017]本發(fā)明的α螺旋模擬β-連環(huán)蛋白抑制劑的優(yōu)選結(jié)構(gòu)具有下式(I):
其中 Λ 是-CHR7-, 其中 R7是任選取代的芳基烷基、任選取代的雜芳基烷基、任選取代的環(huán)烷基烷基或任選取 代的雜環(huán)烷基烷基； G 是-NH-、-NR6-或-0- 其中 R6是低級(jí)烷基或低級(jí)締基； r1 是-fci-RiD; 其中 Ra是任選取代的低級(jí)亞烷基和 RW是任選取代的二環(huán)稠合芳基或任選取代的二環(huán)稠合雜芳基； 尺2是-(〇))-畑-肺-尺2*\ 其中 肺是鍵或任選取代的低級(jí)亞烷基；和 rw是任選取代的芳基或任選取代的雜芳基；和 R3是Cl-4烷基。
[0018] 運(yùn)些化合物尤其可用于預(yù)防和/或治療肝纖維化。
[0019] 本發(fā)明的α螺旋模擬β-連環(huán)蛋白抑制劑的更優(yōu)選的結(jié)構(gòu)在上述式（I)中具有下述 取代基： Λ 是-CHR7-， 其中 R7是任選被徑基或Cl-4烷基取代的芳基烷基； G 是-NH-、-NR6-或-0- 其中 R6是Cl-4烷基或Cl-4締基； r1 是-fci-RiD; 其中 Ra是Cl-4亞烷基和 rw是任選被面素或氨基取代的二環(huán)稠合芳基或二環(huán)稠合雜芳基； 尺2是-(〇))-畑-肺-尺2*\ 其中 肺是鍵或Cl-4亞烷基；和 rw是芳基或雜芳基；和 R3是Cl-4烷基。
[0020] 運(yùn)些化合物尤其可用于預(yù)防和/或治療肝纖維化。
[0021] 本發(fā)明的最優(yōu)選的α螺旋模擬β-連環(huán)蛋白抑制劑如下： (6S，9S)-N-芐基-6-(4-?基芐基)-2,9-二甲基-8-(糞-1-基甲基)-4,7-二氧代八氨- 1H-化嗦并[2，1-。][1，2,4]^嗦-1-甲酯胺， (6S，9S)-2-締丙基-N-芐基-6-(4-?基芐基)-9-甲基-8-(糞-1-基甲基)-4,7-二氧代 八氨-1H-化嗦并[2，1-。][1，2,4]^嗦-1-甲酯胺， (6S，9S)-N-芐基-6-(4-?基芐基)-9-甲基-8-(糞-1-基甲基)-4,7-二氧代六氨化嗦并 [2，1-。][1，2,4]嗯二嗦-1(6^-甲酯胺， (6S，9S)-8-((2-氨基苯并[d]嚷挫-4-基）甲基)-N-芐基-6-(4-?基芐基)-2,9-二甲 基-4，7-二氧代八氨-1H-化嗦并[2，1-C] [ 1，2，4]Ξ嗦-1-甲酯胺， (6S，9S)-N-芐基-6-(4-?基芐基）-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(哇嘟-8-基甲基）八 氨-1H-化嗦并[2，1-。][1，2,4]^嗦-1-甲酯胺， (6S，9S)-2-締丙基-N-芐基-6-(4-?基芐基)-9-甲基-4,7-二氧代-8-(哇嘟-8-基甲 基)八氨-1H-化嗦并[2，1-。][1，2,4]^嗦-1-甲酯胺， 4-(((6S，9S)-1-(芐基氨基甲酯基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(哇嘟-8-基甲基)八 氨-1H-化嗦并[2，1-(3][1，2,4]^嗦-6-基）甲基)苯基二氨憐酸醋， 4-(((6S，9S)-1-(芐基氨基甲酯基)-2,9-二甲基-8-(糞-1-基甲基)-4,7-二氧代八氨- 1H-化嗦并[2，1-C ] [ 1，2，4 ] Ξ嗦-6-基）甲基)苯基二氨憐酸醋， 4-(((6S，9S)-1-(芐基氨基甲酯基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(哇嘟-8-基甲基)八 氨-IH-化嗦并[2，1 -c ] [ 1，2，4 ] Ξ嗦-6-基）甲基)苯基憐酸鋼， 4-(((6S，9S)-1-(芐基氨基甲酯基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(糞-8-基甲基)八氨- 1H-化嗦并[2，1-。][1，2,4]^嗦-6-基）甲基)苯基憐酸鋼， (6S，9S)-2-締丙基-6-(4-?基芐基)-9-甲基-4,7-二氧代-N-((R)-1-苯基乙基)-8- (哇嘟-8-基甲基)八氨-lH-化嗦并[2，l-c][l，2,4]Ξ嗦-1-甲酯胺， (6S，9S)-2-締丙基-6-(4-?基芐基)-9-甲基-4,7-二氧代-N-((S)-1-苯基乙基)-8- (哇嘟-8-基甲基)八氨-1H-化嗦并[2，1-。][1，2,4]^嗦-1-甲酯胺， (6S，9S)-N-芐基-6-(4-? 基-2,6-二甲基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(哇嘟-8- 基甲基)八氨-1H-化嗦并[2，1-。][1，2,4]^嗦-1-甲酯胺， (6S，9S)-8-(苯并[b]嚷吩-3-基甲基)-N-芐基-6-(4-?基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二 氧代八氨-1H-化嗦并[2，1-C] [ 1，2，4]Ξ嗦-1-甲酯胺， (6S，9S)-8-(苯并k][l，2,5]嚷二挫-4-基甲基)-Ν-芐基-6-(4-? 基芐基)-2,9-二甲 基-4，7-二氧代八氨-1H-化嗦并[2，1-C] [ 1，2，4]Ξ嗦-1-甲酯胺， (6S，9S)-N-芐基-6-(4-?基芐基)-8-(異哇嘟-5-基甲基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代八 氨-1H-化嗦并[2，1-。][1，2,4]^嗦-1-甲酯胺， (6S,9S)-N-芐基-8-( (5-氯嚷吩并[3,2-b]R比晚-3-基）甲基)-6-(4-? 基芐基)-2,9-二 甲基-4，7-二氧代八氨-1H-化嗦并[2，1-C] [ 1，2，4]Ξ嗦-1-甲酯胺， (6S，9S)-N-芐基-6-(4-?基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(哇嗯嘟-5-基甲基)八 氨-1H-化嗦并[2，1-。][1，2,4]^嗦-1-甲酯胺，和 (6S，9S)-6-(4-^基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(哇嘟-8-基甲基)-N-(嚷吩-2- 基甲基)八氨-1H-化嗦并[2，1-。][1，2,4]^嗦-1-甲酯胺。
[0022] 運(yùn)些化合物尤其可用于預(yù)防和/或治療肝纖維化。
[0023] 在一個(gè)最優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述化合物是： 4-(((6S，9S，9aS)-1-(芐基氨基甲酯基）-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(哇嘟-8-基甲 基)八氨-1護(hù)化嗦并[2，1-(：][1，2,4]^嗦-6-基）甲基)苯基二氨憐酸醋（化合物4)，或 (6S，9S，9aS)-N-芐基-6-(4-?基芐基)-2，9-二甲基-4，7-二氧代-8-(哇嘟-8-基甲基） 八氨-1H-化嗦并[2，1-。][1，2,4]^嗦-1-甲酯胺。
[0024] 運(yùn)些化合物尤其可用于預(yù)防和/或治療肝纖維化。
[0025] 盡管不希望受到限制，運(yùn)些化合物在治療運(yùn)些病況中的有效性部分地基于運(yùn)些化 合物通過(guò)抑制環(huán)狀A(yù)MP應(yīng)答-元件結(jié)合蛋白（CBP)阻斷TCF4/i3-連環(huán)蛋白轉(zhuǎn)錄途徑，由此改 變wnt途徑信號(hào)傳遞(已經(jīng)發(fā)現(xiàn)運(yùn)會(huì)改善結(jié)果)的能力。
[0026] "β-連環(huán)蛋白抑制劑"是運(yùn)樣的物質(zhì)：其可W減少或防止0-連環(huán)蛋白活性。0-連環(huán) 蛋白活性包括向細(xì)胞核遷移、與TCF (Τ細(xì)胞因子)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，W及共活化TCF轉(zhuǎn)錄因子 誘導(dǎo)的TCF祀基因的轉(zhuǎn)錄。巧-連環(huán)蛋白抑制劑"還可W干擾CBP和β-連環(huán)蛋白的相互作用。 因此，β-連環(huán)蛋白抑制劑抑制或減少CBP/β-連環(huán)蛋白信號(hào)傳遞和CBP/β-連環(huán)蛋白信號(hào)傳遞 途徑的活性，包括減少一個(gè)或多個(gè)下游信號(hào)傳遞事件。
[0027] 本文公開(kāi)的是用于治療肝纖維化的α螺旋模擬β-連環(huán)蛋白抑制劑化合物。
[0028] 如本文中所用，"肝纖維化"被限定為肝內(nèi)的結(jié)蹄或癒痕組織的過(guò)度累積。肝纖維 化中的結(jié)蹄/癒痕組織的累積相比于正常健康肝臟中的結(jié)蹄組織水平是過(guò)度的。該纖維化 經(jīng)常伴隨肝組織的壞死和/或炎癥。特別地，在正常肝中的儲(chǔ)存維生素 A的肝星狀細(xì)胞 化SCs)通過(guò)急性和慢性肝損傷被轉(zhuǎn)化成肌纖維母細(xì)胞，通過(guò)細(xì)胞外基質(zhì)諸如膠原、蛋白聚 糖或透明質(zhì)酸的合成和遷移的增加快速地增殖和合成過(guò)量的結(jié)蹄組織，運(yùn)導(dǎo)致刺激肝纖維 化的進(jìn)展[Frie血an 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 82: 8681 (1985) Gressner 等人，Biochem. Biophys. Res. Commun., 151: 222 (1988) Gressner 等人，J. Hepatol.，22: 28 (1995)LCBP/連環(huán)蛋白信號(hào)傳遞可W誘導(dǎo)肝星狀細(xì)胞的增殖和發(fā)育， 從而在誘導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)諸如膠原的過(guò)度生產(chǎn)和過(guò)度累積中發(fā)揮作用。
[0029] 術(shù)語(yǔ)"肝炎"是指肝的炎癥。該炎癥通常與免疫細(xì)胞向肝組織中的浸潤(rùn)有關(guān)。肝炎 可W是急性的，持續(xù)小于六個(gè)月，或者是慢性的，持續(xù)長(zhǎng)于六個(gè)月。如果沒(méi)有逆轉(zhuǎn)的話，肝炎 將會(huì)進(jìn)展成纖維化，形成過(guò)量的結(jié)蹄/癒痕組織并可W進(jìn)一步進(jìn)展成肝硬化，其中癒痕組織 的發(fā)展代替了正常的實(shí)質(zhì)，阻斷了通過(guò)器官的口靜脈血流并擾亂正常的肝功能。
[0030] 在急性肝炎的肝樣本的組織學(xué)檢查中，損傷(異常組織區(qū)域)主要含有彌散的竇狀 的和口靜脈的單核浸潤(rùn)物(淋己細(xì)胞、漿細(xì)胞、枯否細(xì)胞)和腫脹的肝細(xì)胞。嗜酸性的細(xì)胞是 常見(jiàn)的。通常會(huì)存在肝細(xì)胞再生和膽汁渺積（小管膽汁堵塞）。也可能會(huì)出現(xiàn)橋連的肝壞死 (連接兩個(gè)或更多個(gè)口靜脈區(qū)段的壞死區(qū)域）?？蒞有一些小葉狀的雜亂排列。盡管可W發(fā) 生淋己細(xì)胞在口靜脈區(qū)域的聚集，但運(yùn)些情況通常即不是常見(jiàn)的也不是主要的。急性肝炎 與肝纖維化的關(guān)聯(lián)性不強(qiáng)，但也可W通過(guò)本發(fā)明的方法來(lái)治療。
[0031] 在慢性肝炎中，肝的炎癥根據(jù)W下因素來(lái)評(píng)估:致病媒介（如果已知的話)和基于 炎癥程度的等級(jí)、片狀或橋連的壞死(界面肝炎）和纖維化的階段。組織學(xué)檢查可W掲示與 急性肝炎等同的或更嚴(yán)重的浸潤(rùn)的損傷、增加的小葉狀的雜亂排列、增加的淋己細(xì)胞在口 靜脈區(qū)域的聚集和增加的纖維化和/或肝硬化。
[0032] 術(shù)語(yǔ)"乙型肝炎"是指乙型肝炎病毒（一種單鏈RNA病毒，其具有含有脂質(zhì)的包 膜，并且被認(rèn)為是黃病毒科的成員）的感染。該術(shù)語(yǔ)涵蓋了所有形式的乙型肝炎，包括急性 乙型肝炎和所有形式的慢性乙型肝炎（例如，慢性活動(dòng)性乙型肝炎和慢性持續(xù)性乙型肝 炎)。
[0033] 脂肪性肝炎（也稱之為脂肪肝疾?。┦且环N類(lèi)型的肝病，其特征在于肝的炎癥， 同時(shí)伴有肝中的脂肪累積。脂肪在肝中的沉積被稱為脂肪變態(tài)，并且所有運(yùn)些構(gòu)成了脂肪 肝變化。當(dāng)與過(guò)度酒精攝取無(wú)關(guān)時(shí)，其被稱作非酒精性脂肪性肝炎或NASH,并且是非酒精性 脂肪肝病的進(jìn)展形式。脂肪性肝炎可W進(jìn)展成肝硬化，并且現(xiàn)在認(rèn)為NASH是未得到解釋的 肝硬化的常見(jiàn)原因（至少在西方社會(huì)中）。在NASH中，脂肪在肝中累積并最終導(dǎo)致癒痕組織。 運(yùn)一類(lèi)型的肝炎似乎與糖尿病、蛋白營(yíng)養(yǎng)不足、肥胖、冠狀動(dòng)脈疾病和用皮質(zhì)類(lèi)固醇藥物治 療有關(guān)。本文公開(kāi)的α螺旋模擬β-連環(huán)蛋白抑制劑化合物可W治療脂肪性肝炎。
[0034] ΝΑ細(xì)可W在評(píng)分系統(tǒng)上評(píng)級(jí)，所述評(píng)分系統(tǒng)組合了若干組織學(xué)特征：壞死、多形 核白細(xì)胞浸潤(rùn)、馬洛里小體和澄清。該評(píng)分系統(tǒng)也可用于在一般意義上診斷肝炎。采用四級(jí) 別評(píng)分系統(tǒng)，每一特征從0-2進(jìn)行評(píng)分，總分從0-8(Mathu;rin Ρ,等人Gastroenterology 110:1847-53 (1996); Bedossa P,等人 Alcohol Clin. Exp. Res. 12:173-8 (1988)): ΝΑ甜可W在從化unt評(píng)分改編的4級(jí)別評(píng)分系統(tǒng)上進(jìn)行評(píng)級(jí)(Angulo P. N.化gl. J. Med. 346(16):1221-31, 2002): 0級(jí)：評(píng)分=0，無(wú) ΝΑ細(xì)；1級(jí)：評(píng)分=1-2，輕度/輕度脂肪變 態(tài)：主要是大泡性，包含至多66%的小葉，氣球樣變：偶然觀察到；3區(qū)肝細(xì)胞，小葉炎 癥：分散的和輕度的急性炎癥（多形核白細(xì)胞細(xì)胞)和偶然的慢性炎癥（單核細(xì)胞），口靜 脈炎癥：無(wú)或輕度；2級(jí)：評(píng)分=3-4,中度的：脂肪變態(tài)：任何程度；通?；旌系拇笈菪?和微泡性，氣球樣變：明顯的并且存在于3區(qū)中，小葉炎癥：可W注意到與氣球樣變的肝 細(xì)胞、細(xì)胞外周纖維化聯(lián)合出現(xiàn)的多形核白細(xì)胞細(xì)胞；可見(jiàn)輕度的慢性炎癥，Π 靜脈炎癥： 輕度的至中度的；3級(jí)：評(píng)分=5-8,嚴(yán)重的脂肪變態(tài)：通常包含>66%的小葉（全小葉性）； 通?；旌系闹咀儜B(tài)，氣球樣變：主要在3區(qū)；顯著的小葉炎癥：分散的急性和慢性炎 癥；多形核白細(xì)胞細(xì)胞可W集中于3區(qū)氣球樣變區(qū)域和竇周纖維化；口靜脈炎癥：輕度的 至中度的。
[0035] 如本文中所用，"治療"是指嘗試改變被治療的個(gè)體或細(xì)胞的疾病過(guò)程的臨床干 預(yù)，并且可W在臨床病理學(xué)過(guò)程中進(jìn)行。治療的治療性作用包括但不限于限制、預(yù)防疾病復(fù) 發(fā)、緩和癥狀，消除疾病的任何直接或間接的病理學(xué)后果，降低疾病進(jìn)展的速率，緩和或減 輕疾病狀態(tài)，W及豁免或改善的預(yù)后。
[0036] 如本文中所用，術(shù)語(yǔ)"治療有效量"和"有效量"可互換地使用W指本發(fā)明的組合物 的量:其足W導(dǎo)致肝纖維化或其一種或多種癥狀的發(fā)展或發(fā)病的預(yù)防，增強(qiáng)或改善另一種 治療的效果，和/或緩和肝纖維化的一種或多種癥狀。對(duì)于遭受肝纖維化的對(duì)象，優(yōu)選的治 療有效量是有效減少纖維化和/或改善肝功能的量。
[0037] 可W在一個(gè)或多個(gè)劑量中將治療有效量施用給患者，所述劑量足W減輕、緩和、穩(wěn) 定、逆轉(zhuǎn)或減緩疾病的進(jìn)展，或者W其它方式減輕疾病的病理學(xué)后果，或者減輕疾病的癥 狀。所述緩和或減輕不需要是持久的，但卻可W是在一定時(shí)間范圍（至少一個(gè)小時(shí)，至少一 天，或者至少一周或更長(zhǎng)）內(nèi)。有效量通常由醫(yī)生按照個(gè)案情況確定，并且屬于本領(lǐng)域的技 術(shù)人員的技能范圍內(nèi)。當(dāng)確定實(shí)現(xiàn)有效量的適當(dāng)劑量時(shí)，通常會(huì)考慮若干因素。運(yùn)些因素包 括患者的年齡、性別和體重、被治療的病況、所述病況的嚴(yán)重程度、W及施用途徑、劑型和方 案W及所期望的結(jié)果。
[0038] 如本文中所用，術(shù)語(yǔ)"對(duì)象"和"患者"可互換地使用并且是指動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物 諸如非靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物(例如牛、豬、馬、貓、狗、大鼠等)和靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物(例如猴和人），并且最優(yōu) 選是人。
[0039] 本文所述的α螺旋模擬β-連環(huán)蛋白抑制劑可用于預(yù)防或治療疾病。具體而言，本公 開(kāi)提供了預(yù)防性和治療性的治療有(或易感)肝纖維化風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)象的方法。因此，本方法為 預(yù)防和/或治療對(duì)象中的肝纖維化而提供，所述方法通過(guò)向有此需要的對(duì)象施用有效量的α 螺旋模擬β-連環(huán)蛋白抑制劑。例如，在致力于改善一種或多種肝纖維化病況的因素的努力 中，對(duì)象可W被施用α螺旋模擬β-連環(huán)蛋白抑制劑。
[0040] 本發(fā)明還涵蓋運(yùn)樣的方法，其中在組合療法中給予所述化合物。即，所述化合物可 W與可用于治療肝炎和皿V感染的其它藥劑聯(lián)合(但分開(kāi))使用。在運(yùn)些組合療法中，所述化 合物將通常W1-100 mg/kg體重/日的每日劑量與其它藥劑聯(lián)合給予。其它藥劑將通常W臨 床上使用的量給予。然而，具體的給藥方案由醫(yī)生使用合理的醫(yī)學(xué)判斷來(lái)確定。
[0041] 適合于設(shè)及與本文公開(kāi)的抑制性化合物的組合療法的組合物和方法的化合物的 一些實(shí)例包括但不限于下述：ICG-001 ; Ω IFN IFN-. ω . Intarcia Therapeutics ; BILN-2061 絲氨酸蛋白酶抑制劑 Boehringer Inge化eim Pharma KG, Ingelheim, Germany; Summetrel antiviral Endo Pharmaceuticals Holdings Inc., Chadds Ford, PA;羅擾素 A IFN-.α,2a F. Hoffmann-La Roche LTD, Basel，Switzerland;派羅欣聚 乙二醇化IFN-.α.2a F. Hoffmann-La Roche LTD, Basel, Switzerland;派羅欣和SP坐 核骨聚乙二醇化IFN- F. Hoffmann-La Roche .a.2a/ribavirin LTD，Basel， Switzerland;聽(tīng)悉HCV IgG F. Hoffmann-La 民oche immunosuppressant LTD, Basel, Switzerland;惠福仁成淋己細(xì)胞樣IFN- GlaxoSmitliKline pic, ·α·η1 Uxbridge, UK; Albuferon - .a.白蛋白 IFN-.a.2b Human Genome Sciences Inc.，Rockville, MD; Levovirin利己韋林ICN Pharmaceuticals, Costa Mesa, CA; IDN-6556 半脫天冬酶抑制 劑 Idun Pharmaceuticals Inc·，San Diego, CA; IP-501 抗纖維化劑Indevus Pharmaceuticals Inc.， Lexington, MA; Actimmune INF-, γ . InterMune Inc.， Brisbane, CA;干復(fù)津A IFN a-1 InterMune Pharmaceuticals Inc.，Brisbane, CA; ISIS 14803反義ISIS Pharmaceuticals Inc, Carlsbad, CA/Elan Phamaceuticals Inc.，New York, NY; JTK-003 R 服p 抑制劑 Japan Tobacco Inc·，Tokyo, Japan;派羅 斤義和Ceplene 聚乙二酉享化IFN-.a.2a/ Maxim Pharmaceuticals immune modulator Inc.， San Diego, CA; Ceplene免疫調(diào)節(jié)齊l」Maxim Pharmaceuticals Inc.， San Diego, CA; Civacir HCV IgG Nabi免疫抑制劑BioPharmaceuticals Inc·，Boca Raton, FL 內(nèi)含子 A和曰達(dá)仙IFN-.α.2b/.α.l-民egΘnΘ民x thymosin Biopharmiceuticals Inc.， Bethesda， MD/ SciClone Pharmaceuticals Inc, San Mateo, CA; Levovirin IMPDH抑制劑 民ibapharm Inc.， Costa Mesa, CA; Viramidine 民ibavirin Prodrug 民ibapharm Inc.， Costa Mesa, CA; Heptazyme核酶Ribozyme Pharmaceuticals Inc·，Boulder, CO;內(nèi)含 子A IFN-.a.2b Schering-Plou組 Coi^poration, Kenilwoi'th, NJ; PEG-內(nèi)含子聚乙二醇 化IFN-.a.2b Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ;民ebetron IFN-.a.2b/ 利己韋林Schering-Plough Coloration，Kenilworth，NJ;利己韋林利己韋林Schering- Plough Coi^poration, Kenilworth, NJ; PEG-內(nèi)含子/利己韋林聚乙二醇化IFN- Schering-Plough .α. 2b/ribavirin Corporation, Kenilworth, NJ; Zadazim免疫調(diào)節(jié) 劑SciClone Pharmaceuticals Inc.，San Mateo, CA;利比IFN-.β.la Serono, Geneva, Switzerland; IFN-.β.和EMZ701 IFN-.β.和EMZ701 Transition Therapeutics Inc·， Ontario, Canada;己他布林（T67) ·β·-微管蛋白抑制劑 Tularik Inc·，South San Francisco，CA;美泊地布IMPDH抑制劑 Vertex Pharmaceuticals (VX-497) Inc·， Cambridge, MA;替控瑞韋NS3 絲氨酸蛋白酶 Vertex Pharmaceuticals (VX-950, LY- 570310) inhibitor Inc.， Cambridge， MA/ Eli Lilly and Co. Inc.， Indianapolis， IN; Omniferon天然IFN-.a. Viragen Inc·，Plantation, FL Χ?1-6865 (Χ?1-002)單 克隆抗體XTL BioPharmaceuticals Ltd.，Rehovot，Israel。
[0042] 肝纖維化的治療是指施用本文所述的化合物或組合^治療患有肝纖維化的對(duì)象。 肝纖維化的治療的一種結(jié)果是減少結(jié)蹄組織的形成。肝纖維化的治療的另一種結(jié)果是減少 炎癥和免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)。肝纖維化的治療的仍另一種結(jié)果是減少肝組織壞死。肝纖維化的 治療的仍另一種結(jié)果是改善肝功能。
[0043] 本文所述的α螺旋模擬目-連環(huán)蛋白抑制劑可W被慘入至藥物組合物中^用于單獨(dú) 地或組合地施用給對(duì)象來(lái)治療或預(yù)防本文所述的病癥。這樣的組合物通常包括活性劑和藥 學(xué)上可接受的載體。本文所使用的術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)上可接受的載體"包括與藥物施用相容的鹽 水、溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗細(xì)菌劑和抗真菌劑、等張劑和吸收延遲劑等。補(bǔ)充性的活性化 合物也可W滲入至所述組合物中。
[0044] 可W采用任何適合的施用途徑W給哺乳動(dòng)物，尤其是人提供有效劑量的本文所述 的化合物。例如，可W采用口服、直腸、局部、胃腸外、眼、肺、鼻等途徑。劑型包括片劑、糖錠、 分散體、混懸劑、溶液、膠囊、乳膏、軟膏、氣霧劑等。
[0045] 所采用的活性成分的有效劑量可W根據(jù)所采用的特定化合物、施用途徑、被治療 的病況和被治療的病況的嚴(yán)重程度而變化。運(yùn)樣的劑量可W經(jīng)由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地確 定。
[0046] 當(dāng)治療或控制肝纖維化和/或本文所述的化合物所適應(yīng)的其它疾病時(shí)，令人滿意 的結(jié)果通常在當(dāng)本文所述的化合物W約0.01毫克至約100毫克/千克的動(dòng)物體重的每日劑 量施用時(shí)獲得，所述劑量?jī)?yōu)選W單次每日劑量或W每日2-6次的分份劑量或W緩釋形式給 予。對(duì)于大多數(shù)大型哺乳動(dòng)物而言，總的每日劑量為約1.0毫克至約1000毫克。在70 kg成人 的情況下，總的每日劑量將通常為約1毫克至約500毫克。對(duì)于特別有效的化合物而言，成人 的劑量可W低至0.1 mg。在一些情況下，每日劑量可W高達(dá)1 gram。劑量方案可W在該范圍 內(nèi)調(diào)節(jié)或者甚至在該范圍W外，從而提供最佳的治療應(yīng)答。
[0047] 口服施用將通常使用片劑或膠囊劑進(jìn)行。片劑和膠囊劑中的劑量的例子為0.1 mg、0.25 mg、0.5 mg、l mg、2 mg、5 mg、10 mg、15 mg、20 mg、25 mg、30 mg、40 mg、50 mg、 100 mg、200 mg、250 mg、300 mg、400 mg、500 mg和750 mg。其它口服形式也具有相同或類(lèi) 似的劑量。
[0048] 本文還描述了藥物組合物，其包含本文所述的化合物和藥學(xué)上可接受的載體。本 文所述的藥物組合物包含本文所述的化合物或藥學(xué)上可接受的鹽作為活性成分，W及藥學(xué) 上可接受的載體和任選的其它治療性成分。如果施用前藥的話，藥物組合物還可W包含前 藥或其藥學(xué)上可接受的鹽。
[0049] 所述組合物可W適合用于口服、直腸、局部、胃腸外(包括皮下、肌內(nèi)和靜脈內(nèi)）、眼 (眼部）、肺(鼻或口腔吸入)或鼻施用，盡管在任何給定的情況下最適合的途徑將取決于被 治療的病況的性質(zhì)和嚴(yán)重程度和取決于活性成分的性質(zhì)。它們可W方便地W單位劑型的形 式呈現(xiàn)并且可W通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域公知任何一種方法來(lái)制備。
[0050] 在實(shí)際用途中，根據(jù)常規(guī)的藥物混合技術(shù)，可W將本文所述的化合物作為活性成 分與藥物載體W緊密混合的方式組合。載體可W采用各種形式，運(yùn)取決于期望用于施用的 制劑的形式，例如口服或胃腸外(包括靜脈內(nèi)）。在制備作為口服劑型的組合物中，可W采用 任何常用的藥物介質(zhì)，諸如，例如，水、二醇、油、醇、矯味劑、防腐劑、著色劑等(在口服液體 制劑諸如，例如，混懸劑、馳劑和溶液劑的情況下）;或載體，諸如淀粉、糖、微晶纖維素、稀釋 劑、制粒劑、潤(rùn)滑劑、粘合劑、崩解劑等(在口服固體制劑諸如，例如，粉末、硬和軟膠囊和片 劑的情況下），其中固體口服制劑相對(duì)于液體制劑而言是優(yōu)選的。
[0051] 由于其施用的容易性，片劑和膠囊劑代表最有利的口服劑量單位形式，在此情況 下采用固體藥物載體。如果需要的話，可W通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)的水性或非水性技術(shù)將片劑包衣。運(yùn)樣 的組合物和制劑應(yīng)當(dāng)含有至少0.1%的活性化合物?；钚曰衔镌谶\(yùn)些組合物中的百分比當(dāng) 然可W變化，并且可W方便地在所述單位的重量的約2%至約60%之間?；钚曰衔镌谶\(yùn)樣 的治療上有用的組合物中的量為獲得有效劑量的量?；钚曰衔镆部蒞作為例如液體滴劑 或噴霧劑鼻內(nèi)施用。
[0052] 片劑、丸劑、膠囊劑等也可W含有粘合劑，諸如西黃著膠、阿拉伯膠、玉米淀粉或明 膠；賦形劑諸如憐酸二巧；崩解劑諸如玉米淀粉、馬鈴馨淀粉、海藻酸；潤(rùn)滑劑諸如硬脂 酸儀；和甜味劑諸如薦糖、乳糖或糖精。當(dāng)劑量單位形式是膠囊劑時(shí)，除了上述類(lèi)型的物質(zhì) W外，它可W含有液體載體諸如脂肪油。
[0053] 各種其它物質(zhì)可W作為包衣或者為了改變劑量單位的物理形式而存在。例如，片 劑可W用蟲(chóng)膠、糖或兩者進(jìn)行包衣。除了活性成分W外，糖漿或馳劑可W含有薦糖作為甜味 劑，尼泊金甲醋和丙醋作為防腐劑，染料和矯味劑諸如樓桃或相橘香料。
[0054] 本文所述的化合物也可W胃腸外施用。運(yùn)些活性化合物的溶液或混懸劑可W配制 在水中，所述水適當(dāng)?shù)嘏c表面活性劑或表面活性劑的混合物(諸如徑丙基纖維素、聚山梨醋 80W及中鏈和長(zhǎng)鏈脂肪酸的單和二甘油醋)混合。分散體也可W制備在甘油、液體聚乙二醇 及其在油中的混合物中。在通常的膽存和使用條件下，運(yùn)些制劑含有防腐劑W防止微生物 的生長(zhǎng)。
[0055] 適合于注射使用的藥物形式包括無(wú)菌水溶液或分散體和無(wú)菌粉末，后者用于用前 臨時(shí)制備無(wú)菌注射溶液或分散體。在所有情況下，形式必須是無(wú)菌的并且必須是處于容易 注射程度的流體。在制造和膽存的條件下，它必須是穩(wěn)定的，并且必須被防腐W避免微生物 諸如細(xì)菌和真菌的污染作用。載體可W是溶劑或分散介質(zhì)，其含有例如水、乙醇、多元醇(例 如甘油、丙二醇和液體聚乙二醇）、其合適的混合物和植物油。 實(shí)施例
[0化6] 實(shí)施例1.材料和方法 縮寫(xiě)： ALT:丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 a-SM:a-平滑肌肌動(dòng)蛋白 BCA:二哇嘟甲酸 cDNA:互補(bǔ) DNA 肥:蘇木精和曙紅 HFD:高脂肪飲食 Hyp:徑基脯氨酸 MMLV-RT:莫洛尼鼠白血病病毒逆轉(zhuǎn)錄酶 NAFLD:非酒精性脂肪肝病 NAS:NA化D活性評(píng)分 NASH:非酒精性脂肪性肝炎 NTP:核巧Ξ憐酸 化IpO:核糖體蛋白，大，P0 RT-PCR:逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng) QD:每日一次 SD:標(biāo)準(zhǔn)差 SPF:無(wú)特定病原體 TG:甘油Ξ醋 ΤΙΜΡ-1:金屬蛋白酶-1的組織抑制劑。
[0057]動(dòng)物.C57I3L/6J 小鼠（15-天懷孕母鼠）得自化arles River Laboratories Japan (Kana邑awa, Japan)。豐良據(jù)Japanese Pharmacological Society Guidelines for Animal Use圈養(yǎng)和護(hù)理在該研究中使用的所有動(dòng)物。在溫度（23 ± 2°C)、濕度（45 ± 10%)、光照（12-小時(shí)人造光照和黑暗循環(huán)；光照從8:00到20:00)和空氣交換的受控條件下 將動(dòng)物飼養(yǎng)在SP的受備中。在實(shí)驗(yàn)室中維持高壓(20 ± 4 Pa)W防止設(shè)備的污染。將動(dòng)物圈 養(yǎng)在聚碳酸醋籠KN-600 (Pfetsume Seisakusho, Japan)中，每籠最多4只小鼠。將滅菌的 PULMA^i (Material Research Center, Japan)用作墊層，并每周換一次。提供隨意享用 的滅菌的固體HFD，其被放在籠的頂部的金屬蓋中。從裝配有橡膠塞子和吸管的水瓶提供隨 意享用的純凈水。水瓶每周一換，清潔并在高壓蓋中滅菌和重新使用。通過(guò)刻在耳環(huán)上的數(shù) 字鑒別小鼠。每個(gè)籠子標(biāo)記有特定的鑒別代碼。
[0化引測(cè)試物質(zhì).測(cè)試物質(zhì)化合物A(為β-連環(huán)蛋白抑制劑4-(((6S，9S，9aS)-1-(節(jié) 基氨基甲酯基)-2，9-二甲基-4，7-二氧代-8-(哇嘟-8-基甲基)八氨-1H-化嗦并[2，1-C ] [ 1， 2,4]Ξ嗦-6-基）甲基)苯基二氨憐酸醋）和媒介物(憐酸鹽緩沖鹽水，pH 7.6)儲(chǔ)存在4°C。 在即將施用之前用媒介物稀釋化合物A。替米沙坦（MICARDIS?)購(gòu)自Boehringer Inge化eim GmbH并溶解在純凈水中。
[0059] NA甜的誘導(dǎo).通過(guò)W下方法在40只雄性小鼠中誘導(dǎo)NA甜:在出生后2天單次皮下 注射200 yg鏈脈霉素（Sigma-Aldrich, USA)并在4周齡后喂養(yǎng)高脂肪飲食（冊(cè)D，57 kcal%脂肪，cat# Η抑32，化EA化pan, Japan)。在9周齡時(shí)將小鼠隨機(jī)分配至5個(gè)8只小 鼠的組中。將用正常飲食(cat# CE-2,化EA化pan)喂養(yǎng)(不用鏈脈霉素處理）的八只雄性 同胞仔用作正常組。
[0060] 藥物施用途徑.W0.11 pL/hr (2.64 μL動(dòng)物/天）的輸注速率將化合物A和媒 介物通過(guò)用滲透累(ALZET累，cat# 1004，DURECT Co巧oration, USA)連續(xù)皮下輸注施 用。在治療開(kāi)始(第0天)時(shí)，W基于個(gè)體的體重確定的濃度將測(cè)試物質(zhì)溶液填充至滲透累 中。通過(guò)口服途徑W10 mL/kg體重的體積施用替米沙坦。
[0061] 治療劑量.mg/kg/天(低劑量)或3 mg/kg/天(高劑量)的劑量連續(xù)輸注化合 物AdWIO mg/kg體重的劑量每日一次地施用替米沙坦。
[0062] 全血和血清生物化學(xué)的測(cè)量.在全血中使用Life化eck化IDIA，化pan)測(cè)量非 禁食血糖。對(duì)于血清生物化學(xué)，在無(wú)抗凝劑的聚丙締管中收集血液，并在室溫下保持30分 鐘，隨后在4°C保持1小時(shí)。然后將血液樣品在4°C下在1，000 xg離屯、15分鐘。收集上清液并 膽存在-80°C下直至使用。通過(guò)即JI DRI-CHEM 7000 (Fujifilm,化pan)測(cè)量血清ALT和 TG水平。
[0063] 肝徑基脯氨酸含量的測(cè)量.為了定量肝徑基脯氨酸含量，將冷凍的肝樣品（35-45 mg)通過(guò)如下的堿-酸水解方法進(jìn)行處理：將肝用100%丙酬脫脂，風(fēng)干，在65°C下溶解于2N 化0H中，并在12rC下在高壓蓋中處理20分鐘。將裂解的樣品（400化）用400化6N HC1 在121°C下酸水解20分鐘，并用400 pL含有10 mg/血活性炭的4N化0H中和。向樣品中加 入AC緩沖液(2.2M乙酸/0.48M巧樣酸，400 pL)，隨后離屯、W收集上清液。為了構(gòu)建徑基脯 氨酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線，W16 pg/mL為起始制備反式-4-徑基-L-脯氨酸(Sigma-Aldrich)的系列 稀釋液。將制備的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品（各400化）與400 yL氯胺Τ溶液（Wako Pure畑emical Industries,化pan)混合并在室溫溫育25分鐘。然后將樣品與化rlich氏溶液(400 pL) 混合并在65°C加熱20分鐘W顯色。在將樣品在冰上冷卻并離屯、W除去沉淀物之后，在560 nm測(cè)量每一上清液的光密度。從徑基脯氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)量徑基脯氨酸的濃度。肝樣品的蛋 白濃度使用BCA蛋白測(cè)定試劑盒(Thermo Fisher Scientific, USA)確定，并用于將測(cè)量的 徑基脯氨酸值標(biāo)準(zhǔn)化。徑基脯氨酸水平被表達(dá)為yg/mg總蛋白。
[0064]肝TG含量的測(cè)量.肝總脂質(zhì)提取物用Folch氏方法(Folch J.等人，J. Biol. 化em. 1957; 226 (1): 497)從右葉獲得。將肝在氯仿-甲醇(2:1，v/v)中勻漿化，并在室 溫溫育過(guò)夜。在用氯仿-甲醇-水(8:4:3, v/v/v)洗涂后，將提取物蒸發(fā)至干燥，并且溶解在 異丙醇中。肝TG水平通過(guò)甘油Ξ醋E-測(cè)試(Wako Pure化emical Indushies)測(cè)量。當(dāng)TG 含量超過(guò)檢測(cè)限時(shí)，將提取物2-至4-倍稀釋在異丙醇中。
[00化]組織病理學(xué)分析.對(duì)于肥染色，從在Bouin氏溶液中預(yù)先固定并用Lillie-Mayer 氏蘇木精（Muto Pure Chemicals, Japan)和曙紅溶液（Wako Pure Chemical Industries)染色的肝組織的石蠟塊切制切片。根據(jù)Kleiner (Kleiner DE.等人， Hepatology, 2005 (41) :1313)的標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算NAFID活性評(píng)分（NAS)。為了將膠原沉積可視 化，將Bouin氏固定的肝切片使用苦天狼星紅溶液(Waldeck Gm地& Co., Germany)染色。 對(duì)于定量分析，圍繞中央靜脈使用數(shù)碼照相機(jī)(DFC280, Leica, Germany) W200倍放大獲 取天狼星紅染色的切片的亮視野圖像，并使用ImageJ軟件（ImageJ,化tional Institute of Health, USA)ii量5個(gè)視野/切片中的陽(yáng)性區(qū)域。
[0066] 定量RT-PCR.根據(jù)制造商的說(shuō)明書(shū)使用RNAiso (Takara Bio,化pan)從肝樣品 中提取將RNA。使用在20 yL的終體積中含有4.4 mM MgC12 (Roche, Switzerland)、40 U R化se抑制劑（Toyobo，化pan)、0.5mMdNTP(Promega，USA)、6.28μM隨機(jī)六聚物 (Promega), 5 X 第一鏈緩沖液（PromegaKlO ml 二硫蘇糖醇（Invitrogen, USA)和200 U 匪LV-RT (Invitrogen)的反應(yīng)混合物逆轉(zhuǎn)錄1 pg的RNA。反應(yīng)在37°C進(jìn)行1小時(shí)，隨后在99 °C進(jìn)行5分鐘。使用實(shí)時(shí)PCR DICE和SYBR預(yù)混物Taq (Takara Bio)進(jìn)行實(shí)時(shí)PCR。為了計(jì) 算相對(duì)mRNA表達(dá)水平，將每個(gè)基因的表達(dá)標(biāo)準(zhǔn)化至參照基因36B4 (基因符號(hào)：化IpO)的表 達(dá)。PCR-引物集合和板布局的信息描述在表1中。
[0067] 統(tǒng)計(jì)分析.使用Bonferroni多重比較檢驗(yàn)在Prism 4軟件（Graph化d Software, USA)上進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。P值< 0.05被認(rèn)為是統(tǒng)計(jì)上顯著的。結(jié)果表達(dá)為平均值± SD。
[0068] 實(shí)施例2.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和處理 研究組.治療計(jì)劃的概述提供在表1中。
[0069] 組1:正常.從第9-12周齡，給8只正常小鼠喂養(yǎng)隨意享用的正常飲食而無(wú)任何治 療。
[0070] 組2:疾病對(duì)照.從第9-12周齡，給8只NA甜小鼠喂養(yǎng)隨意享用的Η抑而無(wú)任何治 療。
[0071] 組3:替米沙坦.從第9-12周齡，給8只ΝΑ細(xì)小鼠口服施用補(bǔ)充有替米沙坦 10 mg/kg每日的劑量)的純凈水。
[0072] 組4:媒介物.從第9-13周齡，通過(guò)經(jīng)由滲透累W0.11 pL/hr的速率連續(xù)輸注給8 只NASH小鼠皮下施用媒介物(憐酸鹽緩沖鹽水）。
[0073] 組5:化合物A低劑量.從第9-13周齡，通過(guò)經(jīng)由滲透累mg/kg/天的劑量連 續(xù)輸注給8只NASH小鼠皮下施用補(bǔ)充有化合物A的媒介物。
[0074] 組6:化合物A高劑量.從第9-13周齡，通過(guò)經(jīng)由滲透累W3 mg/kg/天的劑量連續(xù) 輸注給8只NASH小鼠皮下施用補(bǔ)充有化合物A的媒介物。
[0075] 表1.治療計(jì)劃的概述 _^^^
* W0.11 μ1/虹（2.64 μ1/動(dòng)物/天)的速率連續(xù)輸注。
[0076] 動(dòng)物監(jiān)測(cè)和處死.每天監(jiān)測(cè)活力、臨床跡象和行為。在藥物施用前每日記錄體重。 在每次施用后大約60分鐘，觀察到小鼠的顯著的毒性、垂死和死亡的臨床跡象。通過(guò)在乙 酸麻醉下直接屯、臟穿刺(Wako化re Qiemical Industries)驅(qū)血法處死物。
[0077] 實(shí)施例3.結(jié)果 天狼星紅染色.與正常組相比，來(lái)自疾病對(duì)照組的肝切片顯示了肝小葉中屯、周?chē)鷧^(qū)域 中的增加的膠原沉積。與正常組相比，纖維化區(qū)域(天狼星紅-陽(yáng)性區(qū)域)的百分比在疾病對(duì) 照組中顯著增加（正常：0.27 ± 0.05%，疾病對(duì)照：1.09 ± 0.27%)。與疾病對(duì)照組相 比，纖維化區(qū)域在替米沙坦組中顯著減少(替米沙坦：0.50 ± 0.10%)。在媒介物組和化合 物A低-劑量組(媒介物：1.02 ± 0.33%，化合物A低-劑量：0.82 ± 0.31%)之間的纖 維化區(qū)域沒(méi)有顯著差異。參見(jiàn)表2。如附圖1中可見(jiàn)，與媒介物組相比，化合物A高-劑量組的 纖維化區(qū)域顯著減少（化合物A高-劑量：0.67 ± 0.21%)。天狼星紅-染色的切片的顯微 照片展示在附圖2中。
[0078] 體重變化和一般狀況.除了替米沙坦組外，在治療期間所有組的體重都逐漸增 加。在整個(gè)治療期間，疾病對(duì)照組的平均體重低于正常組。從第6天到第21天(處死）（除第7 天外）替米沙坦組的平均體重顯著低于疾病對(duì)照組。在治療期間，媒介物組和化合物A低- 劑量或高-劑量組之間的平均體重沒(méi)有顯著差異。在整個(gè)治療期間，在任一動(dòng)物中沒(méi)有觀察 到一般狀況的惡化。
[00巧]處死當(dāng)天的體重.疾病對(duì)照組的處死時(shí)的平均體重顯著低于正常組(正常：26.3 ± 0.8 g，疾病對(duì)照：23.0 ± 1.2 g)。與疾病對(duì)照組相比，替米沙坦組顯示了平均體重 的顯著下降（替米沙坦：20.0 ± 1.3 g)。媒介物組和化合物A低-劑量或高-劑量組之間 的平均體重沒(méi)有顯著差異(媒介物：22.9 ± 2.9 g，化合物A低-劑量：22.6 ± 2.6 g， 化合物A高-劑量：23.7 ± 1.1 g)。
[0080] 肝重和肝/體重比.與正常組相比，疾病對(duì)照組的平均肝重顯著增加(正常：1128 ± 44 mg,疾病對(duì)照：1867 ± 183 mg)。與疾病對(duì)照組相比，替米沙坦組顯示了平均肝重 的顯著下降（替米沙坦：1376 ± 80 mg)。媒介物組和化合物A低-劑量或高-劑量組的平 均肝重之間沒(méi)有顯著差異(媒介物：1870 ± 418 mg，化合物A低-劑量：1803 ± 219 mg，化合物A高-劑量：2024 ± 159 mg)。與正常組相比，疾病對(duì)照組的肝/體重比顯著增 加 (正常：4.3 ± 0.2%，疾病對(duì)照：8.1 ± 0.6%)。與疾病對(duì)照組相比，替米沙坦組顯示 了肝/體重比的顯著下降（替米沙坦：6.9 ± 0.7%)。媒介物組和化合物A低-劑量或高-劑 量組的肝/體重比之間沒(méi)有顯著差異(媒介物：8.1 ± 1.1%，化合物A低-劑量：8.0 ± 0.8%，化合物A高-劑量：8.5 ± 0.6%)。
[0081 ] 全血血糖.與正常組相比，疾病對(duì)照組的血糖水平顯著增加（正常：198 ± 30 mg/化，疾病對(duì)照：682 ± 63 mg/化）。與疾病對(duì)照組相比，替米沙坦組的血糖水平顯著增 加(替米沙坦：880 ± 39 mg/化）。媒介物組和化合物A低-劑量組之間的血糖水平?jīng)]有顯 著差異(媒介物：605 ± 134 mg/化，化合物A低-劑量：677 ± 36 mg/化）。與媒介物組 相比，化合物A高-劑量組的血糖水平有增加傾向（化合物A高-劑量：791 ± 54 mg/化)。
[0082] 血清ALT.與正常組相比，疾病對(duì)照組的血清ALT水平有增加傾向（正常：22 ± 4 U/L，疾病對(duì)照：38 ± 8 U/L)。疾病對(duì)照組和替米沙坦組或媒介物組和化合物A低-劑量 或高-劑量組之間的血清ALT水平?jīng)]有顯著差異（替米沙坦：35 ± 6 U/L，媒介物：58 ± 29 U/L，化合物A低-劑量：45 ± 17 U/L，化合物A高-劑量：49 ± 17 U/L)。
[0083] 血清TG.與正常組相比，疾病對(duì)照組的血清TG水平有增加傾向（正常：137 ± 22 mg/化，疾病對(duì)照：558 ± 256 mg/化）。疾病對(duì)照組和替米沙坦組的血清TG水平之間沒(méi)有 顯著差異（替米沙坦：843 ± 609 mg/化）。媒介物組和化合物A低-劑量組之間的血清TG 水平?jīng)]有顯著差異(媒介物：391 ± 175 mg/dL，化合物A低-劑量：815 ± 754 mg/ 化）。與媒介物組相比，化合物A高-劑量組的血清TG水平增加(化合物A高-劑量：1145 ± 580 mg/化）。
[0084] 肝徑基脯氨酸含量.與正常組相比，疾病對(duì)照組的肝徑基脯氨酸含量有增加傾向 (正常：0.74 ± 0.22 yg/mg,疾病對(duì)照：1.09 ± 0.42 yg/mg)。疾病對(duì)照組和替米沙坦 組或媒介物組和化合物A低-劑量或高-劑量組的肝徑基脯氨酸含量之間沒(méi)有顯著差異 (替米沙坦：0.95 ± 0.25 pg/mg，媒介物：0.79 ± 0.19 pg/mg，化合物A低-劑量： 0.90 ± 0.26 yg/mg，化合物 A 高-劑量：0.95 ± 0.22 yg/mg)。
[00化]肝TG含量.與正常組相比，疾病對(duì)照組的肝TG含量顯著增加（正常：8.8 ± 3.8 mg/g,疾病對(duì)照：67.7 ± 17.7 mg/g)。與疾病對(duì)照組相比，替米沙坦組顯示了肝TG 含量的顯著下降（替米沙坦：30.6 ± 5.6 mg/g)。媒介物組和化合物A低-劑量或高-劑 量組的肝TG含量之間沒(méi)有顯著差異(媒介物：58.8 ± 26.9 mg/g，化合物A低-劑量： 64.8 ± 25.6 mg/g，化合物 A 高-劑量：67.8 ± 24.0 mg/g)。
[0086] 肥染色和NAFLD活性評(píng)分.來(lái)自疾病對(duì)照組的肝切片顯示了嚴(yán)重的微泡性和大 泡性脂肪沉積，肝細(xì)胞氣球樣變和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。與運(yùn)些觀察相一致地，與正常組相比，疾 病對(duì)照組的NAS顯著增加(正常：0.0 ± 0.0，疾病對(duì)照：5.1 ± 1.1)。與疾病對(duì)照組相 比，替米沙坦組顯示了脂肪沉積、肝細(xì)胞氣球樣變和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)的顯著改善，具有NAS的 顯著降低（替米沙坦：2.6 ± 1.2)。與媒介物組相比，在化合物A低-劑量組中，小葉炎癥 得到改善。在媒介物組和化合物A高-劑量組的皿-染色的切片之間沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明顯差異。與 媒介物組相比，NAS在化合物A低-劑量和高-劑量組中降低傾向（媒介物：5.9 ± 1.0,化 合物A低-劑量：4.8 ± 0.9,化合物A高-劑量：5.1 ± 0.6)。
[0087] 基因表達(dá)分析. TIMP-1.與正常組相比，疾病對(duì)照組的TIMP-1 mRNA表達(dá)水平顯著上調(diào)(正常：1.00 ±0.25，疾病對(duì)照：7.04±2.13)。與疾病對(duì)照組相比，替米沙坦組的1'這?-11111?^4表 達(dá)水平有下調(diào)傾向（替米沙坦：4.10 ± 1.18)。媒介物組和化合物A低-劑量或高-劑量組 的TIMP-1 mRNA表達(dá)水平之間沒(méi)有顯著差異(媒介物：7.74 ± 4.15,化合物A低-劑量： 5.35 ± 2.82,化合物 A 高-劑量：6.73 ± 2.23)。
[008引 a-SMA.與正常組相比，疾病對(duì)照組的a-SMA mRNA表達(dá)水平有上調(diào)傾向（正常： 1.00 ± 0.60,疾病對(duì)照：2.43 ± 1.33)。疾病對(duì)照組和替米沙坦組的a-SMA mRNA表達(dá) 水平之間沒(méi)有顯著差異(替米沙坦：1.83 ± 0.36)。與媒介物組相比，化合物A低-劑量組 的a-SMA mRNA表達(dá)水平有下調(diào)傾向（媒介物：3.19 ± 1.81，化合物A低-劑量：1.88 ± 0.60)。媒介物組和化合物A高-劑量組的a-SMA mRNA表達(dá)水平之間沒(méi)有顯著差異(化 合物A高-劑量：2.23 ± 1.23)。
[0089] 3型膠原.與正常組相比，疾病對(duì)照組的3型膠原mRNA表達(dá)水平顯著上調(diào)（正常： 1.00 ± 0.16，疾病對(duì)照：2.27 ± 0.35)。與疾病對(duì)照組相比，替米沙坦組的3型膠原 mRNA表達(dá)水平有下調(diào)傾向（替米沙坦：1.73 ± 0.33)。與媒介物組相比，化合物A低-劑 量組的3型膠原mRNA表達(dá)水平顯著下調(diào)（媒介物：3.09 ± 1.51，化合物A低-劑量： 1.93 ± 0.37)。與媒介物組相比，化合物A高-劑量組的3型膠原mRNA表達(dá)水平有下調(diào)傾 向（化合物A高-劑量：2.22 ± 0.46)。
[0090] 化合物A低-劑量組顯示了纖維化相關(guān)基因（3型膠原，TIMP-1和a-SMA)的表達(dá)水 平的顯著下降或下降傾向，而化合物A高-劑量組顯示了肝組織學(xué)的纖維化區(qū)域的顯著減 少。參見(jiàn)，表3。
[0091] 實(shí)施例4.綜述和討論 運(yùn)些結(jié)果顯示了化合物A對(duì)肝臟具有抗纖維化作用。低劑量組還顯示了肝中的小葉炎 癥減少，NAS有下降趨勢(shì)。運(yùn)指示了除了抗纖維化作用之外化合物A對(duì)脂肪性肝炎的抗炎作 用。施用W化合物A為代表的β-連環(huán)蛋白抑制劑的運(yùn)些抗纖維化和抗炎活性的協(xié)同作用在 肝纖維化的纖維發(fā)生前階段可W是特別有效的。
【主權(quán)項(xiàng)】
1用于、治療月干?千維化的治士??廿IR_4左TX疋? 士 |17電1女||/^入編甘具有下式(I) ·其中： A 是-CHR7-， 其中R7是氫、任選取代的烷基、任選取代的烯基、任選取代的炔基、任選取代的芳基烷 基、任選取代的雜芳基烷基、任選取代的環(huán)烷基烷基、任選取代的雜環(huán)烷基烷基、任選取代 的芳基、任選取代的雜芳基、任選取代的環(huán)烷基或任選取代的雜環(huán)烷基； G 是-NH-、-NR6-、-〇-、-CHR6-或-C (R6) 2_， 其中R6獨(dú)立地選自任選取代的烷基、任選取代的烯基和任選取代的炔基； R1是任選取代的芳基烷基、任選取代的雜芳基烷基、任選取代的環(huán)烷基烷基或任選取代 的雜環(huán)烷基烷基； R2 是-W21-W22-Rb-R20, 其中W21是-(CO)-或-(SO2)-; W22是鍵、-〇-、-NH-或任選取代的低級(jí)亞烷基；Rb是鍵或 任選取代的低級(jí)亞烷基；和R2t3是任選取代的烷基、任選取代的烯基、任選取代的炔基、任 選取代的芳基、任選取代的雜芳基、任選取代的環(huán)烷基或任選取代的雜環(huán)烷基；和 R3是任選取代的烷基、任選取代的烯基或任選取代的炔基； 或其藥學(xué)上可接受的鹽。2.權(quán)利要求1的化合物，其選自： (6S，9S)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲基-8-(萘-1-基甲基)-4,7-二氧代八氫-IH-R比嗪并[2, l_c][l，2,4]二嗪-1-甲酰胺， (6S，9S)-2-烯丙基-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-9-甲基-8-(萘-1-基甲基)-4,7-二氧代 八氫-IH-吡嗪并[2，1-(：][1，2,4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-9-甲基-8-(萘-1-基甲基)-4,7-二氧代六氫吡嗪并 [2，1-。][1，2,4]噁二嗪-1(6!〇-甲酰胺， (6S，9S)-8-((2-氨基苯并[d]噻唑-4-基）甲基）-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲 基-4，7-二氧代八氫-IH-吡嗪并[2，1-c] [ 1，2，4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S)-N-芐基-6-(4-羥基芐基）-2,9-二甲基-4，7_二氧代-8-(喹啉-8-基甲基）八 氫-IH-吡嗪并[2，1-(：][1，2,4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S)-2-烯丙基-N-芐基-6-(4-羥基芐基）-9-甲基-4，7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲 基)八氫-IH-吡嗪并[2，1-(：][1，2,4]三嗪-1-甲酰胺， 4-(((6S，9S)-1-(芐基氨基甲酰基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基)八 氫-IH-吡嗪并[2，I-c ][ I，2，4]三嗪-6-基）甲基)苯基二氫磷酸酯， 4-(((65,95)-1-(芐基氨基甲?；?-2,9-二甲基-8-(萘-1-基甲基)-4,7-二氧代八氫-IH-吡嗪并[2，I-C ][ 1，2，4]三嗪-6-基）甲基)苯基二氫磷酸酯， 4-(((6S，9S)-1-(芐基氨基甲?；?-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基)八 氫-IH-吡嗪并[2，I-C ][ 1，2，4]三嗪-6-基）甲基)苯基磷酸鈉， 4-(((65,95)-1-(芐基氨基甲?；?-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(萘-8-基甲基)八氫-IH-吡嗪并[2，l-c][l，2,4]三嗪-6-基）甲基)苯基磷酸鈉， (6S，9S)-2-烯丙基-6-(4-羥基芐基)-9-甲基-4,7-二氧代-N-( (R)-I-苯基乙基）-8-(喹啉-8-基甲基)八氫-IH-吡嗪并[2，l-c][l，2,4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S)-2-烯丙基-6-(4-羥基芐基)-9-甲基-4,7-二氧代-N-( (S)-I-苯基乙基）-8-(喹啉-8-基甲基)八氫-IH-吡嗪并[2，l-c][l，2,4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S)-N-芐基-6-(4-羥基-2，6-二甲基芐基)-2，9-二甲基-4，7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基)八氫-IH-吡嗪并[2，1-(：][1，2,4]三嗪-1-甲酰胺， (63,93)-8-(苯并[13]噻吩-3-基甲基)-1芐基-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二 氧代八氫-IH-吡嗪并[2，1-c] [ 1，2，4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S)-8-(苯并[c][l，2,5]噻二唑-4-基甲基)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲 基-4，7-二氧代八氫-IH-吡嗪并[2，1-c] [ 1，2，4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-8-(異喹啉-5-基甲基)-2，9-二甲基-4，7-二氧代八 氫-IH-吡嗪并[2，1-(：][1，2,4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S)-N-芐基-8-( (5-氯噻吩并[3，2-b]吡啶-3-基）甲基)-6-(4-羥基芐基)-2,9-二 甲基-4，7-二氧代八氫-IH-吡嗪并[2，1-c] [ 1，2，4]三嗪-1-甲酰胺， (6S，9S) -N-芐基-6- (4-羥基芐基)-2，9-二甲基-4，7-二氧代-8-(喹噁啉-5-基甲基)八 氫-IH-吡嗪并[2，1-(：][1，2,4]三嗪-1-甲酰胺，和 (6S，9S)-6-(4-羥基芐基)-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲基)-N-(噻吩-2-基甲基)八氫-IH-吡嗪并[2，1-(：][1，2,4]三嗪-1-甲酰胺。3. 權(quán)利要求1的化合物，其選自： 4-(((63,93,9&3)-1-(芐基氨基甲?；?-2,9-二甲基-4,7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲 基)八氫-IH-吡嗪并[2，1-〇][1，2,4]三嗪-6-基）甲基)苯基二氫磷酸酯， 或(6S，9S，9aS)-N-芐基-6-(4-羥基芐基)-2，9-二甲基-4，7-二氧代-8-(喹啉-8-基甲 基)八氫-IH-吡嗪并[2，1-(：][1，2,4]三嗪-1-甲酰胺。4. 藥物組合物，其包含權(quán)利要求1、2或3的化合物。5. 治療肝纖維化的方法，包含給有此需要的患者施用有效量的權(quán)利要求1、2或3的化合 物。6. 權(quán)利要求5的方法，其中肝纖維化由乙型肝炎感染引起。7. 權(quán)利要求5的方法，其中肝纖維化由非酒精性脂肪性肝炎（NASH)引起。
【文檔編號(hào)】C07F9/6561GK105899211SQ201480057194
【公開(kāi)日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2014年10月17日
【發(fā)明人】小路弘行, 小田上剛直
【申請(qǐng)人】小路弘行, 小田上剛直