Artalbic acid的衍生物的組合物用于制備防治胰腺纖維化藥物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種Artalbic acid的O?(二氯乙胺基)乙基與O?(二(2?甲硫基乙基)胺基)乙基衍生物的組合物在預防或治療胰腺纖維化藥物中的應用，本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領(lǐng)域，具體涉及Artalbic acid的O?(二氯乙胺基)乙基與O?(二(2?甲硫基乙基)胺基)乙基衍生物的組合物、制備方法及其在制備預防或治療胰腺纖維化藥物上的用途。本發(fā)明公開了一種Artalbic acid的O?(二氯乙胺基)乙基與O?(二(2?甲硫基乙基)胺基)乙基衍生物的組合物及其制備方法。藥理學實驗表明，本發(fā)明的Artalbic acid的O?(二氯乙胺基)乙基與O?(二(2?甲硫基乙基)胺基)乙基衍生物的組合物具有預防或治療胰腺纖維化的作用，具有開發(fā)預防或治療胰腺纖維化藥物的價值。
【專利說明】
Arta I b i c ac i d的衍生物的組合物用于制備防治胰腺纖維化 藥物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 胰腺纖維化是各種原因所致慢性胰腺炎的共同特征，同時也是與其伴隨的組織病 理學特點，表現(xiàn)為大量成纖維細胞增生和富含連接組織的細胞外基質(zhì)。是多種原因?qū)е乱?腺損傷修復的結(jié)果，近期發(fā)現(xiàn)胰腺星狀細胞和多種細胞因子與胰腺纖維化有關(guān)，胰腺纖維 化目前發(fā)病率愈來愈高，急需研發(fā)高效低毒的抗胰腺纖維化藥物。
[0003] 胰腺纖維化的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產(chǎn)物中 尋找化合物或先導化合物并進行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物最 有重要價值。
[0004] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個2011年發(fā)表（Antonella Maggio et al ·， 2011.Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily·Tetrahedron Letters,52(2011 )4543-4545)的化合物，我 們對化合物I進行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合 物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物抗胰腺纖維化活性進行了評價，其具有抗胰 腺纖維化活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物 中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分數(shù)分別為90%和10%。
[0006]
[0007] 本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學上可接受的鹽或藥學上可接受的載體。
[0008] 藥效學實驗表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗胰腺纖維化作用。本發(fā)明的藥學 上可接受的鹽具有同樣的藥效。
[0009] 以下通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明，但本發(fā)明的保護范圍不受具體實 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
【具體實施方式】
[0010] 實施例1化合物Artalbic acid的制備
[0011] 化合物Artalbic acid(I)的制備方法參照Antonella Maggio等人發(fā)表的文獻 (Antonella Maggio et al.,2011.Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily. Tetrahedron Letters ,52 (2011 )4543-4545)的方法。
[0012]
[0013] 實施例2 Artalbic acid的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0014] 將化合物I(266mg，l .OOmmol)溶于IOmL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0.088)，1，2-二溴乙燒(3.76(^，20.00_〇1)和61]1]^的50%氫氧化鈉溶液。混合物在40攝氏 度攪拌Iehieh之后將反應液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機相溶液。然 后對有機相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌5次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除 溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100:1.0，v/V)， 收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(272mg，73% )。
[0015] 1H NMR(500MHz,DMS0-d6)5ll.41(s,lH),6.06(s,lH),5.76(s,lH),4.99(s,lH), 4.71(s,1H),4.56(s,1H),3.86(s,2H),3.54(s,2H),2.65(s,1H),2.43(s,2H),2.33(s,2H), 2.10(s,lH),1.64(s,3H),1.54(s,lH),1.44(s,2H),0.95(s,3H).
[0016] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)S201.95(s),175.93(s),149.13(s),148.15(s),117.05 (s),109.43(s),81.86(s),70.27(s),57.68(s),41.26(s),39.07(s),38.86(s),35.69(s), 33.36(s),30.72(s),20.44(s),18.42(s).
[0017] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for Ci7H26BrO4:373.1014；found 373.1017.
[0018]
結(jié)束后將反應液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機相。依次用水和飽和 食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn) 物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100: l.〇，v/v)，收集黃色集中洗脫帶 并揮去溶劑即得到化合物ArtaIbi c ac id的O-(二輕乙胺基）乙基衍生物的淡黃色固體 (146.9mg,74%)〇
[0022] 1H NMR(500MHz，DMS0-d6)Sl8.72(s，lH)j6.11(s，lH)，5.80(s，lH)，5.14(s，lH)， 4.73(s,lH),4.63(s,lH),3.57(s,2H),3.45(s,4H),2.70(d,J=15.6Hz,3H),2.60(s,4H), 2.50(s,2H),2.46(s,2H),2.33(s,lH),1.88(s,2H),1.68(s,3H),1.62(d,J=19.9Hz,3H), 1.02(s,3H).
[0023] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)5202.01(s),176.11(s),149.21(s),148.55(s),117.15 (s),109.60(s),81.93(s),67.25(s),59.28(s),57.88(s),56.83(s),53.74(s),41.36(s), 39.24(s),38.93(s),35.88(s),30.82(s),20.61(s),18.49(s).
[0024] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C2iH36Ni〇6:398.2543;found:398.2547〇
[0025]
[0026] Artalbic acid的0_(二輕乙胺基）乙基衍生物
[0027] 2、Artalbic acid的0_(二氯乙胺基）乙基衍生物（III)的合成
[0028] 合成足夠多的Artalbic acid的0_(二輕乙胺基）乙基衍生物，將Artalbic acid的 〇-(二輕乙胺基）乙基衍生物(0. l〇〇g，〇. 5mmol)溶于4mL氯仿，逐滴加入氯化亞砜(0.238g， 2mmol)，反應物加熱回流2h。將反應物冷卻至室溫，滴加甲醇分解過量的氯化亞砜，減壓濃 縮除去溶劑。產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱層析純化(石油醚/丙酮100:0.2，v/v)，得到化合物III的淡黃色 固體（145.4mg，67%)。
[0029] 1H NMR(500MHz，DMS0-d6)Sl3.05(s，lH)，S6.05(s，lH)，5.75(s，lH)，4.67(s，2H)， 4.58((1, J = 7.5Hz，1H)，3.68(s，4H)，3.50(s，2H) ,2.86(s，2H)，2.74(s，2H)，2.62((1, J = 0.9Hz，3H)，2.44(s，2H)，2.38(s，2H)，2.22(s，lH)，1.61(s，3H)，1.49(s，lH)，1.42(s，2H), 0.95(s,3H).
[0030] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)S201.68(s),175.56(s),148.88(s),147.80(s),116.82 (s),109.05(s),81.60(s),66.70(s),57.44(s),55.79(s),53.30(s),41.03(s),39.21(s), 38.80(s),38.49(s),35.44(s),30.38(s),20.17(s),18.05(s).
[0031] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C2iH34Cl2N〇4+:434.1865;found:434.1861。
[0032]
[0033] 實施例4 Artalbic acid的0-(二(2-甲硫基乙基)胺基）乙基衍生物（III)的合成
[0034] 制備足夠多的化合物III，將化合物III(0.217g，0.5mmo 1)溶于IOmL乙醇，室溫下 加入甲硫醇鈉 (〇.21g，3mmol)，反應物加熱回流2h。減壓濃縮除去溶劑，所得產(chǎn)物用硅膠柱 層析進行純化(石油醚/丙酮1 〇〇: 〇. 3，v/v)，得到黃色固體物，即化合物IV(0.158g，69%)。
[0035] 1H MMR(500MHz，Chloroform-dl)Sl8.86(s，lH)，6·14(s，lH)，5.82(s，lH),5.33 (s，lH)，4.75(s，lH)，4.62(s，lH)，3.54(s，2H)，2.86(s，lH)，2.72(dd，J=18.2,6·8Ηζ, 11H),2.50(s,2H),2.39(s,2H),2.12(s,6H),1.71(s,3H),1.56(s,2H),1.41(s,lH),1.06 (s,3H).
[0036] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)S201.96(s),175.97(s),149.17(s),148.22(s),117.11 (s),109.47(s),81.85(s),67.07(s),57.69(s),53.56(s),52.49(s),41.29(s),39.00(s), 38.79(s),35.63(s),32.15(s),30.74(s),20.43(s),18.43(s),14.87(s).
[0037] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C23H40NO4S2":434.1865；found:434.1863〇
[0038]
[0039] 實施例5組合物抗胰腺纖維化活性
[0040] 1 材料
[0041 ] 1 · 1動物Wistar大鼠，雄性，體重180-200g。
[0042] 1.2組合物劑量:0.911^/1^。
[0043] 組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的90mg化合物III的粉末和研磨之后過200 目網(wǎng)的IOmg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到IOOmg組合物， 使用時用水溶解這IOOmg的組合物即得到組合物的溶液。
[0044] 2實驗方法
[0045] 2.1造模方法:Wistar大鼠以腹腔注射dl-乙硫氨酸250mg/天，連續(xù)2個月，可出現(xiàn) 胰臟腺細胞減少，間質(zhì)內(nèi)脂肪及結(jié)締組織的增生。
[0046] 2.2分組及給藥方法
[0047]模型大鼠隨機分為模型組，組合物0.9mg/kg組、化合物III 0.9mg/kg組和化合物 IV 0.9mg/kg組，另設空白對照組。給藥組于造模開始后給藥，口服連續(xù)30天;60天時解剖動 物。
[0048] 2.3檢測指標
[0049] 2.3.1實驗結(jié)束時取胰臟稱重。
[0050] 2.3.2胰臟羥脯氨酸含量測定取IOOmg樣本在水中勻漿，110°C ION HCl中水解20小 時。HCl用氮氣揮發(fā)，水解產(chǎn)物用雙蒸水溶解后過濾。取0.5ml液體與3ml枸櫞酸磷酸緩沖液 (0.15M枸櫞酸加0.6M磷酸氫二鈉)和0.5ml溶于9M磷酸的IM過碘酸混合。加1.75ml提取緩沖 液(5份甲苯:5份2-甲基-卜丙醇:2份1-丙醇），震蕩30min，離心。組織相(0.6ml)與Ehrlich, s試劑混合放置15min。在565nm測定吸收度，用4-輕-1-脯氨酸制作標準曲線計算濃度，含量 以ug/g組織表示。
[0051] 2.3.3組織學檢查胰臟組織用10%福爾馬林固定，石蠟包埋，染色后鏡檢。對纖維 化情況評分(0-3分）。
[0052] 3 結(jié)果
[0053] 3.1組合物對大鼠胰臟臟器系數(shù)的影響
[0054] 實驗結(jié)束時，將大鼠處死、解剖，稱量體重和胰臟重并計算其與體重的比值(胰臟 臟器系數(shù)），結(jié)果見表1。組合物對胰臟臟器系數(shù)的影響，與模型組比較有顯著性差異?；?物III和化合物IV對胰臟臟器系數(shù)的影響，與模型組比較無顯著性差異。
[0055] 表 1
[0058] *表示p〈0.05,與模型組比較
[0059] 3.2胰臟羥脯氨酸含量測定
[0060] 實驗結(jié)束時，對各組大鼠進行肺部羥脯氨酸含量測定，結(jié)果如表2。組合物對羥脯 氨酸含量的影響，與模型組比較有顯著性差異?；衔颕II和化合物IV對羥脯氨酸含量的影 響，與模型組比較無顯著性差異。
[0061] 表 2
[0063] *表示ρ〈0·05,與模型組比較
[0064] 3.3組織學檢查
[0065] 實驗結(jié)束時，將大鼠處死、解剖;標本常規(guī)包埋、固定、HE染色，鏡檢。
[0066]結(jié)果:模型組第60天可見胰導管周圍嚴重炎癥反應;嗜中粒細胞核淋巴細胞浸潤， 間質(zhì)水腫，出血以及偶見胰泡細胞壞死;胰泡細胞消失位置及胰泡間出現(xiàn)纖維化。
[0067] 組合物可減少炎癥反應和纖維化。評分結(jié)果見表3。組合物對評分的影響，與模型 組比較有顯著性差異。
[0068] 表 3
[0071] *表示p〈0.05,與模型組比較;空白對照組的炎癥細胞浸潤和纖維化評分都為0.
[0072] 結(jié)論:本發(fā)明通過組合物對大鼠胰腺纖維化的影響，證實了組合物具有抗胰腺纖 維化的作用。因此，組合物可作為活性成分用于制備抗胰腺纖維化的藥物。而化合物III和 化合物IV無此活性，不能用于制備抗胰腺纖維化的藥物。
[0073] 實施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0074] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機制成100片。
[0075] 實施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0076] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。
【主權(quán)項】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物HI和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分數(shù)分別為90%和10%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為:將化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照質(zhì)量百分數(shù)分別為90%和10%充分混合。3. -種如權(quán)利要求1所述的組合物在治療膜腺纖維化藥物中的應用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療膜腺纖維化藥物中的應用，其特征為:所述組合物 逆轉(zhuǎn)膜腺纖維化所引起的膜臟臟器系數(shù)下降。5. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療膜腺纖維化藥物中的應用，其特征為:所述組合物 逆轉(zhuǎn)膜腺纖維化所引起的徑脯氨酸含量升高。6. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療膜腺纖維化藥物中的應用，其特征為:所述組合物 逆轉(zhuǎn)膜腺纖維化所引起的炎癥細胞浸潤升高。
【文檔編號】C07C217/12GK106074480SQ201610473712
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月24日
【發(fā)明人】丁秋菊
【申請人】南京海澳斯生物醫(yī)藥科技有限公司