阿掏比克酸三唑基與1h?四氮唑基衍生物的組合物用于制備抗菌藥物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種阿掏比克酸即Artalbic acid的O?(三唑基)乙基與O?(1H?四氮唑基)乙基衍生物的組合物在抗菌藥物中的應用，本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領域，具體涉及阿掏比克酸即Artalbic acid的O?(三唑基)乙基與O?(1H?四氮唑基)乙基衍生物的組合物、制備方法及其在制備抗菌藥物上的用途。本發(fā)明公開了一種阿掏比克酸即Artalbic acid的O?(三唑基)乙基與O?(1H?四氮唑基)乙基衍生物的組合物及其制備方法。藥理學實驗表明，本發(fā)明的阿掏比克酸即Artalbic acid的O?(三唑基)乙基與O?(1H?四氮唑基)乙基衍生物的組合物具有抗菌作用，具有開發(fā)抗菌藥物的價值。
【專利說明】
阿掏比克酸三唑基與1H-四氮唑基衍生物的組合物用于制備 抗菌藥物
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術】
[0002] 致病菌的擴散及其耐藥性的增強嚴重威脅著人類的健康和生命，抗菌藥物已作為 常規(guī)用藥廣泛用于艾滋病、器官移植以及慢性消耗性疾病(如癌癥、糖尿病、尿毒癥等)的治 療，雖然目前臨床上使用的抗菌藥劑(如酮康唑、阿米卡星、慶大霉素、活力康唑、伊曲康唑、 特比萘芬、二性霉素、氟康唑等)對皮膚及淺表部位感染的療效較好，但這些抗菌藥物的蓄 積毒性較強，常常引起肝腎損傷、消化道刺激、頭暈、過敏等，所以尋找作用機理獨特的新型 抗菌藥物成為當今藥物研發(fā)的熱點之一。
[0003] 幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)是一種革蘭氏陰性螺旋狀細菌。研究顯 示，幽門螺桿菌是急、慢性胃炎以及胃、十二指腸潰瘍的主要致病原因，并可能與胃癌和胃 粘膜相關性淋巴樣組織(MALT)惡性淋巴瘤發(fā)病有關。最近，世界衛(wèi)生組織將Hp歸為I類致癌 物，它在胃癌發(fā)展中起主導作用。目前流行的治療Hp感染的方案是同時服用質子栗抑制劑 (PPI)加兩種抗生素(克拉霉素，阿莫西林、四環(huán)素、甲硝唑等選二種）的三聯(lián)療法。影響三聯(lián) 療法的最主要因素被認為是Hp對抗菌劑的耐藥性;另一嚴重問題是質子栗抑制劑會誘發(fā)消 化不良，大量抗菌劑則導致消化道內菌群的嚴重毀滅。因此，尋找高效、安全的抗Hp活性一 類新藥物成為一個重要和迫切的任務。
[0004] 近年來全球結核病的發(fā)病呈增高趨勢，據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)估計，目前全球受結 核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)感染的人口占世界人口的三分之一，其中 5~10%的感染者成為結核病患者。我國每年出現(xiàn)活動性肺結核病人130萬例，其中傳染性 肺結核約60萬例，其中傳染性肺結核約60萬例，是全球結核病高負擔國家之一。
[0005] 自抗結核藥物相繼問世，使結核病的治療起到劃時代的變化。然而由于結核病患 者的治療管理尚不十分規(guī)范，不規(guī)則化療，濫用抗結核藥物，使結核病耐藥情況日益嚴重， 且耐藥性的變化更趨向于多種藥物同時耐藥，這給結核病的防治工作造成極大困難。因此 尋找新的抗結核藥物，尤其是抗多藥耐藥性的抗結核藥物對保護人民身體健康，具有重要 意義。
[0006] 從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導化合物并進行結構修飾獲得其衍生物，從而得到 高效低毒的潛在藥物最有重要價值。
[0007] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個2011年發(fā)表（Antonella Maggio et al ·， 2011.Artalbic acid，a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba( As teraceae) from Sicily .Tetrahedron Letters ,52(2011 )4543-4545)的化合物，我 們對化合物I進行了結構修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合 物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物抗菌活性進行了評價，其具有抗菌活性。

【發(fā)明內容】

[0008] 本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物 中化合物III和化合物IV的質量百分數(shù)分別為50%和50%。
[0009]
[0010] IT
[0011] 本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學上可接受的鹽或藥學上可接受的載體。
[0012] 藥效學實驗表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗菌作用。本發(fā)明的藥學上可接受 的鹽具有同樣的藥效。
[0013] 進一步的，組合物的體外實驗表明，組合物具有很強的抗人體真菌活性，因此本發(fā) 明的組合物有望被用于制備新型抗人體真菌藥物。
[0014] 進一步的，組合物的體外實驗表明，組合物具有很強的抗幽門螺旋桿菌活性，說明 對于與幽門螺旋桿菌密切相關的急、慢性胃炎、胃、十二脂腸潰瘍等疾病來講，組合物是一 個極具開發(fā)潛力的化合物。它可直接用于相應疾病的治療以及相關藥物的制備。
[0015] 進一步的，組合物的體外實驗表明，組合物具有很強的抑制大腸桿菌、熒光假單孢 菌、金黃色葡萄球、變形桿菌、新生隱球菌的作用，所以組合物可作為具有抗細菌作用的化 合物，并有望在制備抗細菌藥物中得到應用。
[0016]進一步的，根據(jù)初步試驗的結果，本發(fā)明用固體培養(yǎng)基稀釋法測定了組合物對卡 介苗、結核分枝桿菌標準株H37Rv株和耐多藥結核分枝桿菌(MDR MTB)三種結核菌的最小抑 菌濃度，實驗結果證實組合物具有很強的抗結核菌和抗耐藥性結核菌活性，可作為治療結 核菌感染疾病的先導化合物，也可用于制備治療結核病藥物。
[0017]以下通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明，但本發(fā)明的保護范圍不受具體實 施例的任何限制，而是由權利要求加以限定。
【具體實施方式】
[0018] 實施例1化合物Artalbic acid的制備
[0019] 化合物Artalbic acid(I)的制備方法參照Antonella Maggio等人發(fā)表的文獻 (Antonella Maggio et al.,2011.Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily. Tetrahedron Letters ,52 (2011 )4543-4545)的方法。
[0020]
[0021] 實施例2Artalbic acid的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0022] 將化合物I(266mg，l.OOmmol)溶于IOmL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0.088)，1，2-二溴乙燒(3.76(^，20.00_〇1)和61]1]^的50%氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?0攝氏 度攪拌Iehieh之后將反應液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機相溶液。然 后對有機相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌5次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除 溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100:1.0，v/V)， 收集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(272mg，73% )。
[0023] 1H NMR(500MHz,DMS0-d6)5ll.41(s,lH),6.06(s,lH),5.76(s,lH),4.99(s,lH), 4.71(s,1H),4.56(s,1H),3.86(s,2H),3.54(s,2H),2.65(s,1H),2.43(s,2H),2.33(s,2H), 2.10(s,lH),1.64(s,3H),1.54(s,lH),1.44(s,2H),0.95(s,3H).
[0024] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)S201.95(s),175.93(s),149.13(s),148.15(s),117.05 (s),109.43(s),81.86(s),70.27(s),57.68(s),41.26(s),39.07(s),38.86(s),35.69(s), 33.36(s),30.72(s),20.44(s),18.42(s).
[0025] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for Ci7H26BrO4:373.1014；found 373.1017.
[0026]
[0027] 實施例3Artalbic acid的0-(三唑基）乙基衍生物（III)的合成 [0028] 將化合物II(187mg，0.5mmo 1)溶于25mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg， 2 · 5mmol)，鵬化鉀（84mg，0 · 5mmol)和 1，2，3-三氮挫（2760mg，40mmol)，混合物加熱回流3h。 反應結束后將反應液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取三次，合并有機相。依次用水和飽和 食鹽水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn) 物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100: l.〇，v/v)，收集淡黃色集中洗脫 帶即得到化合物III的淡黃色膠狀固體(124.5mg，69% )。
[0029] 1H NMR(500MHz,DMS0-d6)5l6.23(s,lH) ,7.99(d,J = 29.4Hz,2H) ,6.11(s,lH), 5.82(s,lH),4.76(d J=17.3Hz,2H),4.62(s,1H),4.24(s,1H),4.18(s,1H),3.84(s,2H), 2.70(s,lH),2.52(d J=16.3Hz,4H),2.02(s,lH),1.69(s,3H),1.62(s,2H),1.51(s,lH), 1.02(s,3H).
[0030] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)5201.95(s),175.95(s),149.17(s),148.18(s),136.99 (s),120.76(s),117.09(s),109.44(s),81.89(s),65.54(s),57.72(s),46.43(s),41.30 (s),39.08(s),38.89(s),35.71(s),30.77(s),20.46(s),18.43(s).
[0031] HRMS(ESI) :m/z[M+H].calcd for Ci9H28N3〇4:362.2080;found:362.2085〇
[0032]
[0033] 實施例4Artalbic acid的0_(IH-四氮唑基）乙基衍生物的合成
[0034] 將化合物II(187mg，0.5mmoI)溶于20mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀(345mg， 2 · 5mmo 1)，碘化鉀（84mg，O · 5mmo 1)和IH-四氮唑（140 Img，20mmo 1)，混合物加熱回流5h。反應 結束后將反應液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取三次，合并有機相。依次用水和飽和食鹽 水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。因為互 變異構作用，在反應條件下會生成IH-四氮唑基和2H-四氮唑基兩種取代產(chǎn)物。產(chǎn)物粗品用 硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100:1.5，v/v)，收集黃色集中洗脫帶，再將洗脫 帶濃縮，用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮=100: 〇. 5，v/v)，依次收集兩個淡黃色 的洗脫帶，濃縮前1個洗脫帶即得到化合物IV的淡黃色固體(41.6mg，23%)。
[0035] 1H NMR(500MHz，DMS0-d6)Sll.50(s，lH)，10.04(s，lH)，6.07(s，lH)，5.78(s，lH)， 4.69(d ,J=11.0Hz,2H) ,4.58(s, 1H) ,4.22(s , 1H) ,4.15(s, 1H), 3.84(s , 2H), 2.66(s, 1H), 2.52(s,2H),2.45(s,2H),2.20(s,lH),1.65(d,J=8.0Hz,5H),1.44(s,lH),0.98(s,3H).
[0036] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)5201.92(s),175.93(s),149.14(s),148.15(s),145.18 (s) ,117.08(s) ,109.40(s),81.85(s),65.53(s),57.68(s),46.71(s),41.29(s),39.04 (s),38.85(s),35.70(s),30.73(s),20.42(s),18.42(s).
[0037] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for Ci8H27N4〇4:363.2032;found:363.2029〇
[0038]
[0039] 實施例5組合物抗人體真菌活性
[0040] 組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的50mg化合物III的粉末和研磨之后過200 目網(wǎng)的50mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到IOOmg組合物， 使用時用水溶解這IOOmg的組合物即得到組合物的溶液。
[0041] 抗人體真菌活性實驗是采用濃度稀釋的方法，每次測定重復三次，測試的病原菌 有紅色毛癬菌、羊毛狀小孢子菌和斷發(fā)癬菌，菌液濃度為IO 5個/mL。藥物的起始濃度為 50.00yg/mL(5%二甲基亞砜DMS0)，梯度稀釋至0.10yg/mL，等量體積的菌液和測試樣品混 合培養(yǎng)在96孔板中（形成的最終濃度有：25·00、12·50、6·25、3·13、1·56、0·78、0·39、0·20、 0.10和0.05yg/mL)，人體真菌培養(yǎng)溫度分別為28°C，培養(yǎng)時間24h后觀察，若發(fā)現(xiàn)沒有菌落 形成的處理孔中最低的那個濃度為樣品最低抗菌濃度，即MIC值。該實驗陽性對照為酮康 唑，組合物抗人體真菌結果見表1。
[0042]表1組合物抗人體真菌MIC值(yg/mL)
[0045] 結論:組合物具有很強的抗人體真菌活性，因此本發(fā)明的組合物有望被用于制備 新型抗人體真菌藥物?；衔铴癐和化合物IV無抗人體真菌活性，因此不能用于制備新型抗 人體真菌藥物。
[0046] 實施例6組合物抗幽門螺桿菌活性
[0047] 1)供試菌株
[0048] 幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)標準菌株ATCC 43504購于美國菌種保存 中心(American Type Culture Collectior^ATCC)。]^株Hp臨床菌株采自南京市鼓樓醫(yī)院 胃鏡室接受胃鏡檢查的患者;在連續(xù)胃鏡檢查中對消化性潰瘍、十二指腸球炎或疣狀胃炎 的患者，先經(jīng)快速尿素酶實驗確定為Hp陽性者，再取胃竇黏膜1-2塊，切碎后接種于含8%馬 血清、三甲氧節(jié)氨啼啶（1：1'；[11161:111'(^;[11，110 3)1.258凡、多粘菌素(。0150115^;[11)1325001]凡、萬古 霉素(vancomycin) 10mg/L的CoIumbia選擇性瓊脂培養(yǎng)基中，于37°C在微氧環(huán)境下（5%〇2， 10%〇)2和85%他)培養(yǎng)72小時。收集細菌，經(jīng)涂片革蘭氏染色，氧化酶、觸酶和尿素酶鑒定為 陽性后，傳代純培養(yǎng)，所得菌株作為實驗菌株。
[0049] 2)菌株培養(yǎng)
[0050] 我們采用微需氧袋(購自上海醫(yī)科大學)進行HP的菌株培養(yǎng)，它可通過化學反應產(chǎn) 生Hp所需要的微需氧環(huán)境。
[0051 ] 3)生物活性測定
[0052] 采用紙片法(Microbiological paper method)測定藥物對幽門螺桿菌的抑制作 用，用瓊脂稀釋法來測定供試樣品的最低抑菌濃度(minimal inhibitory concentration, MIC)〇
[0053] I.紙片法實驗
[0054] (A)準備培養(yǎng)基將配制好的Columbia培養(yǎng)基經(jīng)高壓蒸汽滅菌后，冷卻至50-60°C， 加8 %馬血清或綿羊血，混勾傾注于已經(jīng)滅菌的培養(yǎng)皿中，每皿7-10ml，培養(yǎng)基厚度為1.5mm (無菌操作）。
[0055] (B)轉接實驗菌(涂菌)用微量取樣器取稀釋好的I O8CFlVml (I OD66q = I O8CFlVml) Hp 的菌懸液0.1ml均勻地涂抹在適宜的培養(yǎng)皿表面。倒置于37°C烘干箱中15min后取出，目的 使瓊脂表面干燥，備用。
[0056] (C)貼樣品紙片用微量取樣器取6μ1待測樣品（質量濃度2mg/ml)注入已經(jīng)滅菌的 圓濾紙片上。用無菌鑷子鑷取含樣品的紙片和對照空白紙片，按無菌操作分別紙片緊貼于 含菌瓊脂表面，每隔一定距離貼一張紙片。每種菌做3皿，所得結果求其平均值。
[0057] (D)培養(yǎng)將各平皿置于微需氧袋中，封口，打開氣體發(fā)生器，再置于37°C培養(yǎng)箱中 培養(yǎng)72h。
[0058] (E)測抑菌圈直徑取出平板后，分別測量各紙片周圍抑菌圈直徑的大小。參照對照 組的結果，可得出待測樣品敏感實驗的結果。重復三次。
[0059] II.瓊脂稀釋法測定MIC
[0060] (A)藥物平板的制備首先將測試的藥物用二甲基亞砜(DMSO)溶液配制成0.5mg/ml 的母液，再用無菌水稀釋，最終配成 100·0,80·0,60·0,45·0,40·0,35·0,30·0,25·0,20·0， 15.0,10.0,5.0和2.5μg/ml的濃度系列，DMSO在介質中的濃度小于1 %。將Iml配制好的測試 藥物溶液與保溫于50°C的8ml哥倫比亞培養(yǎng)基，另加 Iml保溫于50°C的馬血清充分混勻，澆 制入培養(yǎng)皿中冷卻即成(培養(yǎng)皿中藥物的終濃度為10.0,8.0,6.0,4.5,4.0,3.5,3.0,2.5， 2.0，1.5，1.0,0.5和0.25μg/ml，如果有抑菌作用，則MIC值即這些值當中的一個）。
[00611 (B)轉接實驗菌（涂菌）用微量取樣器吸取稀釋好的IX 108CFU/ml Hp的菌懸液 0.1ml均勻地涂抹在培養(yǎng)皿表面，倒置于37°C烘干箱中15min后取出，目的使瓊脂表面干燥， 備用。
[0062] (C)確定MIC將待測培養(yǎng)皿在微需氧袋(含:85%N2，10%C〇2和5%0 2)中，保溫37°C 培養(yǎng)72小時，觀察Hp生長情況，與空白組相對照，以完全沒有菌生長的樣品最低濃度為最低 抑菌濃度（minimal inhibitory concentration ,MIC)值。陽性對照為氨節(jié)西林 (Ampicillin)0 [0063]實驗結果
[0064] 體外實驗表明，組合物具有很強的抗幽門螺旋桿菌活性，紙片法顯示其抑菌圈直 徑為32mm(ATCC43504)。用瓊脂稀釋法顯示它能完全抑制5個隨機的臨床菌株和1個標準菌 株(ATCC43504)的生長，最小抑菌濃度(MIC)均為1.5μg/ml。用氨芐西林作陽性對照，其對6 株測試菌完全抑制的最小濃度(MIC)為I.Oμg/ml?；衔颕II和化合物IV無抗幽門螺旋桿菌 活性。
[0065] 結論:組合物具有較強的抑制幽門螺旋桿菌活性，說明對于與幽門螺旋桿菌密切 相關的急、慢性胃炎、胃、十二脂腸潰瘍等疾病來講，組合物是一個極具開發(fā)潛力的藥物。它 可直接用于相應疾病的治療以及相關藥物的制備?；衔颕II和化合物IV無抗幽門螺旋桿 菌活性，不可以用于相應疾病的治療以及相關藥物的制備。
[0066]實施例7組合物抗細菌活性
[0067]抗菌活性實驗是采用濃度稀釋的方法，每次測定重復三次，測試病原菌有大腸桿 菌、熒光假單孢菌、金黃色葡萄球、變形桿菌、新生隱球菌，菌液濃度為IO5個/mL。藥物起始 濃度為50.00yg/mL(5%二甲基亞砜DMS0)，梯度稀釋至0.10yg/mL，等量體積的菌液和測試 樣品混合培養(yǎng)在96孔板中（形成的最終濃度有:25.00、12.50、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39、 0.20、0.10和0.05yg/mL)，細菌培養(yǎng)溫度分別為37°C，培養(yǎng)時間24h后觀察，若發(fā)現(xiàn)沒有菌落 形成的處理孔中最低的那個濃度為樣品最低抗菌濃度，即MIC值。組合物抗菌結果見表2。 [0068] 表2組合物抗細菌MIC值(yg/mL)
[0070]結論:組合物具有很強的抗細菌活性，因此本發(fā)明的組合物有望被用于制備新型 抗細菌藥物?；衔颕II和化合物IV無抗細菌活性，不能被用于制備新型抗細菌藥物。
[0071 ]實施例8組合物抗結核菌活性
[0072] (1)固體培養(yǎng)基稀釋法測定組合物抗卡介苗(BCG)絕對濃度
[0073] 從斜面上刮取卡介苗培養(yǎng)物，加入到3ml Middlebrook7H9肉湯培養(yǎng)基中，加入少 量玻璃珠，旋緊試管蓋，于漩渦振蕩器上劇烈振動研磨，與標準麥氏比濁管(MacFarland No. 1)比池，即配成lmg/ml的卡介苗(BCG)菌懸液。
[0074] 將藥物用DMSO配成高濃度的原液，用含5 %的吐溫-80無菌超純水稀釋原液至所需 濃度，將稀釋好的藥物按所需劑量加入到4ml Middlebr〇〇k7Hll瓊脂培養(yǎng)基(該培養(yǎng)基已經(jīng) 12TC高壓蒸汽滅菌15分鐘、冷卻至50~55°C )，混勻，制成含藥物，濃度分別為6. Oug/ml， 4.Oug/ml，3 ·Oug/ml，2·Oug/ml，1 · 5ug/ml，I .Oug/ml，0· 75ug/ml，0 · 5ug/ml等濃度的斜面培 養(yǎng)基。
[0075] 將濃度為lmg/ml的卡介苗(BCG)菌懸液用接種環(huán)蘸取數(shù)環(huán)，分別接種于含各個藥 物系列濃度的培養(yǎng)基和空白對照培養(yǎng)基斜面上，置于37°C培養(yǎng)4~8周，觀察實驗結果，結果 如表3所示。
[0076] 本實施例中所用Middlebrook7H9肉湯培養(yǎng)基和Middlebrook7Hll瓊脂培養(yǎng)基為本 領域技術人員進行結核菌培養(yǎng)時的常用培養(yǎng)基，其配方采用常規(guī)配方即可。
[0077] (2)固體培養(yǎng)基稀釋法測定組合物抗結核分枝桿菌標準株H37Rv株絕對濃度
[0078] 從斜面上刮取結核分枝桿菌標準株H37Rv株培養(yǎng)物，加入到3ml Middlebrook7H9 肉湯培養(yǎng)基中，加入少量玻璃珠，旋緊試管蓋，于漩渦振蕩器上劇烈振動研磨，與標準麥氏 比池管(MacFarland No. 1)比池，即配成lmg/ml的H37Rv株菌懸液。
[0079] 將藥物分別用DMSO配成高濃度的原液，用含5 %的吐溫-80無菌超純水稀釋原液至 所需濃度，將稀釋好的藥物按所需劑量加入到4ml Middlebr〇〇k7Hll瓊脂培養(yǎng)基(該培養(yǎng)基 已經(jīng)121°C高壓蒸汽滅菌15分鐘、冷卻至50~55°C)，混勻，制成含藥物，濃度分別為6.Oug/ ml，4·Oug/ml，3 ·Oug/ml，2 ·Oug/ml，1 · 5ug/ml，1 ·Oug/ml，0· 75ug/ml，0· 5ug/ml等濃度的斜 面培養(yǎng)基。
[0080]將濃度為lmg/ml的H37RV株菌懸液用接種環(huán)蘸取數(shù)環(huán)，分別接種于含藥物系列濃 度的培養(yǎng)基和空白對照培養(yǎng)基斜面上，置于37°C培養(yǎng)4~8周，觀察實驗結果，結果如表3所 不。
[0081 ] (3)固體培養(yǎng)基稀釋法測定藥物抗結核分支桿菌臨床分離耐ISRE MTB株絕對濃度
[0082]從斜面上刮取結核分枝桿菌臨床分離耐ISRE MTB株(耐異煙肼、鏈霉素、利福平、 乙胺丁醇結核分枝桿菌臨床分離柱)培養(yǎng)物，加入到3ml Middlebrook7H9肉湯培養(yǎng)基中，加 入少量玻璃珠，旋緊試管蓋，于漩渦振蕩器上劇烈振動研磨，與標準麥氏比濁管 (MacFarland No. 1)比池，即配成lmg/ml的菌懸液。
[0083] 將藥物分別用DMSO配成高濃度的原液，用含5 %的吐溫-80無菌超純水稀釋原液至 所需濃度，將稀釋好的藥物按所需劑量加入到4ml Middlebr〇〇k7Hll瓊脂培養(yǎng)基(該培養(yǎng)基 已經(jīng)121°C高壓蒸汽滅菌15分鐘、冷卻至50~55°C)，混勻，制成含藥物，濃度分別為6.Oug/ ml，4·Oug/ml，3 ·Oug/ml，2 ·Oug/ml，1 · 5ug/ml，1 ·Oug/ml，0 · 75ug/ml，0 · 5ug/ml等濃度的斜 面培養(yǎng)基。
[0084]將濃度為lmg/ml的結核分枝桿菌臨床分離耐ISRE MTB株菌懸液用接種環(huán)蘸取數(shù) 環(huán)，分別接種于含各個藥物系列濃度的培養(yǎng)基和空白對照培養(yǎng)基斜面上，置于37°C培養(yǎng)4~ 8周，觀察實驗結果，結果如表3所示。 「00851 丟3因優(yōu)掊羔甚蒱蟶法測宙鉑會物抗結核茴雒對濃麼結里
[0091] 結論:組合物具有很強的抗結核菌和抗耐藥性結核菌活性，可作為治療結核菌感 染疾病的先導化合物，也可用于制備治療結核病藥物?；衔颕II和化合物IV無抗結核菌和 抗耐藥性結核菌活性，不能作為治療結核菌感染疾病的先導化合物，也不能用于制備治療 結核病藥物。
[0092] 實施例9本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0093] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機制成100片。
[0094] 實施例10本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0095] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。
【主權項】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物HI和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質量百分數(shù)分別為50%和50%，2. 如權利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為:將化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照質量百分數(shù)分別為50%和50%充分混合。3. -種如權利要求1所述的組合物在抗菌藥物中的應用。4. 如權利要求3所述的組合物在抗菌藥物中的應用，其特征為:所述菌為細菌。5. 如權利要求3所述的組合物在抗菌藥物中的應用，其特征為:所述菌為真菌。6. 如權利要求3所述的組合物在抗菌藥物中的應用，其特征為:所述菌為幽口螺桿菌。7. 如權利要求3所述的組合物在抗菌藥物中的應用，其特征為:所述菌為結核菌。8. 如權利要求5所述的組合物在抗菌藥物中的應用，其特征為：所述真菌為紅色毛癖 菌、羊毛狀小抱子菌或者斷發(fā)癖菌。9. 如權利要求4所述的組合物在抗菌藥物中的應用，其特征為:所述細菌為大腸桿菌、 巧光假單抱菌、金黃色葡萄球、變形桿菌或者新生隱球菌。10. 如權利要求7所述的組合物在抗菌藥物中的應用，其特征為:所述結核菌為卡介苗、 結核分枝桿菌標準株H37RV株和耐多藥結核分枝桿菌。
【文檔編號】A61P31/04GK106074538SQ201610349130
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年5月24日
【發(fā)明人】丁秋菊
【申請人】南京海澳斯生物醫(yī)藥科技有限公司