本發(fā)明屬于微生物肥料
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及一種防病促生的復(fù)合微生物菌肥及其制備方法。
背景技術(shù)：
：長(zhǎng)期不合理地施用化肥、農(nóng)藥，造成資源浪費(fèi)和生產(chǎn)成本增加，環(huán)境嚴(yán)重污染，農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量下降。國(guó)際農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易的綠色壁壘只是農(nóng)產(chǎn)品出口難度增加，農(nóng)民面臨增產(chǎn)不增收的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。近年來(lái)，隨著環(huán)保與健康意識(shí)的提高，全國(guó)范圍內(nèi)掀起了“綠色食品”熱。同時(shí)，隨著對(duì)外貿(mào)易的迅速發(fā)展，國(guó)際市場(chǎng)對(duì)無(wú)污染食品的需求也與日俱增。一些發(fā)達(dá)國(guó)家為了保護(hù)自國(guó)的農(nóng)業(yè)，采取綠色貿(mào)易壁壘。即大量使用化肥和農(nóng)藥的農(nóng)產(chǎn)品被拒之門(mén)外。因此，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上，具有重要經(jīng)濟(jì)效益，環(huán)境效益和社會(huì)效益的是開(kāi)辟新的微生物藥肥以減少甚至不用化肥與農(nóng)藥，生產(chǎn)出高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的農(nóng)產(chǎn)品，提高國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力，促進(jìn)農(nóng)村經(jīng)濟(jì)的可持續(xù)發(fā)展。微生物菌肥是一種環(huán)境友好型肥料，也是未來(lái)農(nóng)林業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要方向之一，能維持與提高土壤肥力，有利于微生物優(yōu)勢(shì)種的繁殖，保持生態(tài)平衡，減少環(huán)境污染，能源消耗低，運(yùn)輸量少，施用量少且使用方便等優(yōu)點(diǎn)。因此，微生物肥料越來(lái)越受人類(lèi)青睞。目前國(guó)內(nèi)對(duì)于微生物肥料的研究已經(jīng)取得了一定的進(jìn)展。但是，存在的主要問(wèn)題也是制約微生物肥料發(fā)展的關(guān)鍵。主要有，一、品種單一，目前應(yīng)用較多的有固氮菌、解磷菌、解鉀菌等，很多微生物菌肥是單一菌種發(fā)酵，其應(yīng)用效果受到限制。二、菌肥中微生物含量低。這是制約微生物菌肥發(fā)展的關(guān)鍵因素。目前國(guó)內(nèi)生產(chǎn)水平在發(fā)酵液活菌總數(shù)1-5億個(gè)/mL左右，發(fā)酵液中活菌數(shù)低是導(dǎo)致生產(chǎn)菌肥中微生物含量不足的瓶頸。三、生產(chǎn)工藝落后。四、市場(chǎng)混亂，魚(yú)目混珠。等等。另外，作物連作在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中及其普遍，由此引起的土傳病害非常嚴(yán)重，在設(shè)施栽培中土傳病害尤為突出，而這些問(wèn)題無(wú)法通過(guò)化肥或普通微生物肥料的施用加以克服。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是為了彌補(bǔ)化肥和目前微生物肥料的上述不足，突破連作障礙，克服土傳病害問(wèn)題，根據(jù)以菌治菌的原理選擇不同功效的優(yōu)良菌種的組合，研制出具有營(yíng)養(yǎng)、抗生和促生等功能的微生物菌肥。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明的復(fù)合微生物菌肥，其特征在于，制備該復(fù)合微生物菌肥的原料按重量份為：渾圓鏈霉菌粉20-60份，環(huán)狀芽孢桿菌Bacilluscirculans與崛越氏芽孢桿菌Bacillushorikoshii混合發(fā)酵菌粉20-60份，多孢木霉菌粉20-40份，巴氏梭菌菌粉20-40份，氨基酸原粉10-20份，黃腐酸鉀10-20份，棉粕粉10-20份；本發(fā)明選用了五個(gè)菌種組合。其中有的固氮，解磷，解鉀，可以促進(jìn)作物生長(zhǎng)的菌株，也有分泌抗生素物質(zhì)來(lái)抑制土壤中病原菌生長(zhǎng)的菌株。與普通的化學(xué)肥料和化學(xué)農(nóng)藥不同，微生物菌肥并不是直接給作物提供營(yíng)養(yǎng)，而是利用微生物菌肥里含有的活微生物的生命活動(dòng)來(lái)改善作物根際生態(tài)環(huán)境，轉(zhuǎn)化土壤中作物不可直接利用的營(yíng)養(yǎng)元素為作物可利用的速效營(yíng)養(yǎng)，菌株還可以分泌促生物質(zhì)來(lái)刺激作物生長(zhǎng)。在治病方面，微生物菌肥采用以菌治菌的原理，利用拮抗菌株分泌的抗生物質(zhì)來(lái)抑制土壤中病原菌的生長(zhǎng)，使病原菌在土壤中無(wú)法達(dá)到致病數(shù)量，從而無(wú)法侵染作物，使作物發(fā)病。經(jīng)過(guò)大規(guī)模田間試驗(yàn)，結(jié)果表明該微生物菌肥在煙草，水稻、草莓和瓜類(lèi)作物上，不但可以提高產(chǎn)量、改善品質(zhì)，還可以很好地防治農(nóng)作物的土傳病害，在設(shè)施農(nóng)業(yè)方面的功效更為顯著。為了達(dá)到上述目的，所述的一種復(fù)合微生物菌肥的制備方法，包括以下步驟：、渾圓鏈霉菌粉的制備取出渾圓鏈霉菌菌種保藏管，用高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)7天，在平板下挑取單個(gè)菌落劃線(xiàn)接種裝有150毫升高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)6-8天，待菌苔長(zhǎng)滿(mǎn)茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子粉即可用500毫升的無(wú)菌生理鹽水洗脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為渾圓鏈霉菌種子液；二級(jí)種子擴(kuò)培：將上述制備的渾圓鏈霉菌種子液以1%的接種量接種至滅菌的渾圓鏈霉菌液體二級(jí)種子培養(yǎng)基上，500L的發(fā)酵罐裝液量為350L，通氣量為每分鐘液氣比為1：0.8，28-30℃培養(yǎng)36-48小時(shí)，待菌體含量達(dá)到80g/L時(shí)，即可作為渾圓鏈霉菌二級(jí)種子液；發(fā)酵：將上述制備的渾圓鏈霉菌二級(jí)種子液以20%的接種量接種至滅菌的渾圓鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基上，菌種與渾圓鏈霉菌固體培養(yǎng)基混合均勻后，將接好種的渾圓鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基攤在發(fā)酵槽上，物料高度為5-8cm，控溫28-32℃，前兩天空氣濕度保持為60%-75%，過(guò)后空氣濕度保持為40%-50%，發(fā)酵4-6天，檢測(cè)其孢子含量不低于40億CFU/g，即可低溫風(fēng)干，即得到渾圓鏈霉菌菌粉；其中，所述的高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基：硝酸鉀：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氫二鉀：0.5克，硫酸鎂：0.5克，氯化鈉：0.5克，硫酸亞鐵：0.01克，瓊脂：20克，蒸餾水補(bǔ)足1000ml，PH7.2～7.4；其中，所述的渾圓鏈霉菌二級(jí)液體種子培養(yǎng)基：棉粕粉2%，玉米粉2%，氯化鈉0.2%，碳酸鈣1%，硫酸鎂0.1%，PH7﹒2～7﹒4；其中，所述的渾圓鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基：啤糟渣80%，棉粕5%，玉米粉1%，石粉6%，麩皮8%，硫酸錳0.004%，磷酸氫二鉀0.1%，硫酸鎂0.05%，固體培養(yǎng)基含水量為40%-60%，各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。、環(huán)狀芽孢桿菌與崛越氏芽孢桿菌混合發(fā)酵菌粉崛越氏芽孢桿菌種子液的制備取出崛越氏芽孢桿菌保藏管，用營(yíng)養(yǎng)肉汁固體培養(yǎng)基分別劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)48小時(shí)，在平板下挑取單個(gè)菌落接種至裝有營(yíng)養(yǎng)肉汁固體培養(yǎng)基，在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，用3000ml無(wú)菌水將三個(gè)茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L液體種子培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，開(kāi)攪拌120r/min，前10小時(shí)通氣量為200L/min，10小時(shí)后通氣量為320L/min，30℃培養(yǎng)16-24小時(shí)，待總菌含量不低于20億cfu/ml，即可作為崛越氏芽孢桿菌種子液；環(huán)狀芽孢桿菌種子液的制備取出環(huán)狀芽孢桿菌保藏管，用無(wú)氮固體培養(yǎng)基分別劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)48小時(shí)，在平板下挑取單個(gè)菌落接種至裝有無(wú)氮固體培養(yǎng)基，在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，用3000ml無(wú)菌水將三個(gè)茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L液體種子培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，開(kāi)攪拌120r/min，前10小時(shí)通氣量為200L/min，10小時(shí)后通氣量為350L/min，30℃培養(yǎng)16-24小時(shí)，待總菌含量不低于10億cfu/ml，即可作為環(huán)狀芽孢桿菌種子液；發(fā)酵：將上述制備的崛越氏芽孢桿菌種子液與環(huán)狀芽孢桿菌種子液以1：3-1：1的比例混勻，然后以總接種量的10%-20%的接種量加至芽孢固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，混勻，在淺盤(pán)上發(fā)酵，堆料厚度為5-10cm，控制發(fā)酵溫度為30-40℃，發(fā)酵36-48小時(shí)，待芽孢含量不低于100億cfu/g，其中環(huán)狀芽孢桿菌的芽孢含量不低于40億cfu/g，即可曬干，待水分含量低于10%，即得到環(huán)狀芽孢桿菌與崛越氏芽孢桿菌混合發(fā)酵菌粉；其中，所述無(wú)氮固體培養(yǎng)基：蔗糖5g，磷酸氫二鉀0.2g，硫酸鎂0.2g，氯化鈉0.2g，硫酸鈣0.1g，碳酸鈣5g，瓊脂20g，水1000mL，pH7.2；其中，所述液體種子培養(yǎng)基：糖蜜35g/L，豆粕粉20g/L，硫酸鎂0.6g/L，硫酸錳0.5g/L，磷酸二氫鉀0.3g/L，碳酸鈣5.0g/L，pH7.0；其中，所述的芽孢固體發(fā)酵培養(yǎng)基：甘蔗渣57%，麩皮35%，棉粕5%，石粉1%，粗玉米皮2%，尿素0.4%，磷酸氫二鉀0.4%，硫酸鎂0.05%，培養(yǎng)基含水量50%-60%；各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。、多孢木霉菌粉的制備多孢木霉種子液的制備：取出多孢木霉菌菌種保藏管，用PDA固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)6天，在平板下挑取單個(gè)菌落劃線(xiàn)接種裝有150毫升PDA固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)4-6天，待菌苔長(zhǎng)滿(mǎn)茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子即可用500毫升的無(wú)菌生理鹽水洗脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為多孢木霉種子液；發(fā)酵：將上述制備的多孢木霉種子液以3%的接種量接種至滅菌的多孢木霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基上，菌種與多孢木霉固體培養(yǎng)基混合均勻后，將接好種的多孢木霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基攤在發(fā)酵槽上，物料高度為5-10cm，控溫28-32℃，濕度保持為60%-75%，發(fā)酵4-6天，檢測(cè)其總孢子含量不低于30億CFU/g，即可低溫風(fēng)干，即得到多孢木霉菌粉；其中，所述的PDA固體培養(yǎng)基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，瓊脂20g；其中，所述的多孢木霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基：麩皮85%，芝麻渣粕2%，玉米芯5%，石粉4%，粗玉米皮2%，尿素0.4%，磷酸氫二鉀0.4%，硫酸鎂0.05%，培養(yǎng)基含水量50%-60%；各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。、巴氏梭菌菌粉的制備取-80℃甘油管保藏的菌種1mL接種于裝有999mLRCM培養(yǎng)基的厭氧瓶中，37℃條件下靜態(tài)厭氧活化64h，將活化好的菌種按1%(v/v)的接種量轉(zhuǎn)接到滅過(guò)菌的99L巴氏梭菌發(fā)酵培養(yǎng)基中，37℃條件下靜態(tài)厭氧培養(yǎng)64h~126h，芽孢含量超過(guò)30億CFU/ml，即可加入輕質(zhì)碳酸鈣，噴霧干燥，調(diào)節(jié)巴氏梭菌芽孢含量30億CFU/g，即為巴氏梭菌菌粉；其中，所述的RCM培養(yǎng)基：胰蛋白陳10g/L，牛肉膏10g，酵母膏10g/L，葡萄糖5g/L，氯化鈉5g/L，可溶性淀粉1g/L，半胱氨酸鹽酸鹽0.5g/L，醋酸鈉3g/L，pH7.0，121℃滅菌20min，其中，所述的巴氏梭菌發(fā)酵培養(yǎng)基：:酵母膏20g/L，牛肉膏10g/L，KH2PO42g/L硫酸鎂1g/L，半胱氨酸鹽酸鹽1g/L，NaHCO31g/L，CaCO31g/L，葡萄糖20g/L，PH7.0，121℃滅菌20min。、將上述步驟中的渾圓鏈霉菌粉20-60份，環(huán)狀芽孢桿菌Bacilluscirculans與崛越氏芽孢桿菌Bacillushorikoshii混合發(fā)酵菌粉20-60份，多孢木霉菌粉20-40份，巴氏梭菌菌粉20-40份，氨基酸原粉10-20份，黃腐酸鉀10-20份，棉粕粉10-20份混勻，檢測(cè)總菌含量不低于30億CFU/g，包裝即為復(fù)合微生物菌肥。本發(fā)明復(fù)合微生物菌肥中含有渾圓鏈霉菌，能產(chǎn)生灰霉素與白霉素的復(fù)合物等抗菌素，對(duì)植物病原菌有特別強(qiáng)大的抑制效果。鏈霉菌是產(chǎn)生抗生素的主要微生物來(lái)源。鏈霉菌的抗生作用體現(xiàn)在次級(jí)代謝產(chǎn)物即抗生素對(duì)病原菌直接的抑制和致死作用?？股貙?duì)病原菌細(xì)胞和大分子物質(zhì)合成的影響表現(xiàn)在抑制蛋白質(zhì)、核酸和質(zhì)膜的合成，或者干擾病原菌的代謝系統(tǒng)，從而抑制其生長(zhǎng)。并且，渾圓鏈霉菌能產(chǎn)生磷酸酶，增溶土壤中的P元素，更好地促進(jìn)植物吸收。本發(fā)明復(fù)合微生物菌肥中含有環(huán)狀芽孢桿菌與崛越氏芽孢桿菌；芽孢桿菌是一種較理想的生物肥料添加菌株，具有抗逆性強(qiáng)、營(yíng)養(yǎng)簡(jiǎn)單、繁殖速度快，有效活菌數(shù)量高、性能穩(wěn)定，儲(chǔ)存期長(zhǎng)等優(yōu)勢(shì)而成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。此外，多數(shù)菌種具有防病、促生、解磷、解鉀、固氮作用，對(duì)于發(fā)展生態(tài)農(nóng)業(yè)，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。本發(fā)明復(fù)合微生物菌肥中含有的環(huán)狀芽孢桿菌與崛越氏芽孢桿菌，可在作物表面、植株內(nèi)部或土壤中繁殖生長(zhǎng)的同時(shí)必定向植物根際分泌某些次生代謝產(chǎn)物，能夠提高植物對(duì)養(yǎng)分的吸收、刺激植株生長(zhǎng)和抑制病菌等綜合功能。崛越氏芽孢桿菌能夠防治植物病害源于其能夠產(chǎn)生多種抗菌物質(zhì)，包括脂肽類(lèi)、肽類(lèi)、磷脂類(lèi)、多烯類(lèi)、氨基酸類(lèi)和核酸類(lèi)等多種化合物,這些抗菌物質(zhì)能抑制真菌、細(xì)菌、病毒和菌原體等的正常生長(zhǎng)。崛越氏芽孢桿菌在自然生長(zhǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)后期產(chǎn)生的脂肽類(lèi)抗生素是其最重要的抗菌物質(zhì)。脂肽類(lèi)抗生素包括伊枯草菌素(iturins)、泛革素(fengycins)和表面活性素(surfactin),其中伊枯草菌素和泛革素具有很強(qiáng)的抗真菌活性，而表面活性素對(duì)病毒、腫瘤、支原體都有很高的抑制活性。長(zhǎng)期以來(lái)，根瘤菌和自生固氮菌等雖具有較強(qiáng)的固氮能力，但抗逆性低，不耐貯存，不利于我國(guó)生物固氮菌肥的商品化和推廣使用。自1958年Hin首次在口本分離得到一株具有高固氮活性的芽抱桿菌后，土壤中新發(fā)現(xiàn)的具有固氮作用的芽抱桿菌越來(lái)越多。具有固氮作用的芽孢桿菌添加到生物肥料中，可使生物肥料耐酸、耐鹽、耐高溫和耐高壓，為生物固氮肥料的研發(fā)、推廣和應(yīng)用將起著重要作用。本發(fā)明中的環(huán)狀芽孢桿菌具有較強(qiáng)的固氮作用，并且具有明顯的根跡促生作用。本發(fā)明復(fù)合微生物菌肥中含有兩類(lèi)固氮菌，一類(lèi)為好氧性的固氮菌--環(huán)狀芽孢桿菌，其能夠快速固定分子氮，為植物利用。另一類(lèi)厭氧固氮菌—巴氏梭菌，也具有較強(qiáng)的固氮能力，能在土壤較深層的土壤中進(jìn)行固氮（10-30cm）。環(huán)狀芽孢桿菌在發(fā)酵過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量的多糖物質(zhì)以及巴氏梭菌會(huì)產(chǎn)生大量的酸性物質(zhì)，其會(huì)降解土壤中固定的磷素與鉀素原素；增加土壤中可溶性磷與鉀，減少磷鉀肥的施入。本發(fā)明復(fù)合微生物菌肥中含有多孢木霉，多孢木霉在重寄生過(guò)程中產(chǎn)生立了一系列病原菌菌絲細(xì)胞壁的水解酶。木霉菌在侵入或穿透寄主菌絲細(xì)胞時(shí)，產(chǎn)生了幾丁質(zhì)酶(chitinases)、葡聚糖酶、纖維素酶(cellulases)、木聚糖酶(xylanaes)以及蛋白酶((proteinases)、脂酶等一系列水解酶類(lèi)，來(lái)消解病原菌的細(xì)胞壁。它們大都由多糖和真菌細(xì)胞壁誘導(dǎo)，并受代謝降解物，如高濃度葡萄糖的阻遏。在這些細(xì)胞壁降解酶中，幾丁質(zhì)酶和葡聚糖酶被公認(rèn)為是影響生防真菌重寄生能力的重要因子，并具有協(xié)同作用。幾丁質(zhì)酶包括內(nèi)切酶和外切酶兩類(lèi)，其中外切酶為N一乙酰-氨基葡萄糖普酶(N-acetylglucosaminidase)和幾丁二糖酶(chitobiosidase)。這兩類(lèi)酶對(duì)植物病原真菌的細(xì)胞壁有強(qiáng)烈的水解作用，從而抑制病原菌孢子萌發(fā)并引起菌絲以及抱子的消解，而且這兩類(lèi)酶之問(wèn)具有協(xié)同作用，同時(shí)也具有與殺菌劑及細(xì)菌等生防因子協(xié)同作用的功效。許多木霉菌株產(chǎn)生揮發(fā)性或非揮發(fā)性的抗菌素類(lèi)物質(zhì)，如木霉素(trichoderlnin)、膠霉素(gliotoxin)、綠木霉素(viridin)、抗菌肽((peptideantibiotic)等。多孢木霉可產(chǎn)生的多種抗生物質(zhì)，這些物質(zhì)包括抗生素和一些酶類(lèi)。這些抗生物質(zhì)的化學(xué)性質(zhì)各不相同，包括了戊酮、辛酮、類(lèi)菇、多膚和氨基酸衍生物等幾大類(lèi)。這些代謝物可以破壞菌絲細(xì)胞壁，使細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)外滲，引起立枯絲核菌菌絲的原生質(zhì)凝聚，菌絲斷裂解體，對(duì)病原菌菌落有不同程度的抑制作用，由于抗生物質(zhì)的種類(lèi)，化學(xué)性質(zhì)以及作用方式的差異，病原菌往往難以發(fā)展抗藥性。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明中的渾圓鏈霉菌，環(huán)狀芽孢桿菌，崛越氏芽孢桿菌，多孢木霉，巴氏梭菌，五種菌是從500多株微生物菌株中篩選得到的能共生共存，能在植株的根，莖，葉以及土壤中能夠生長(zhǎng)繁殖，能產(chǎn)生多種抗菌素如灰霉素與白霉素的復(fù)合物等來(lái)抑制植物病原菌；本發(fā)明的菌種能夠全面的利用微生物種間或種內(nèi)的抗生、競(jìng)爭(zhēng)、重寄生、溶菌作用，以及通過(guò)次級(jí)代謝產(chǎn)物誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗病性，增強(qiáng)其防病效果；再次，本發(fā)明中所使用的這5株菌株都是可從土壤中直接分離得到，具有固氮，解磷，解鉀與根跡促生作用，可在作物表面、植株內(nèi)部或土壤中繁殖生長(zhǎng)的同時(shí)，并定向植物根際分泌某些次生代謝產(chǎn)物，能夠提高植物對(duì)養(yǎng)分的吸收、刺激植株生長(zhǎng)起到肥料的效果；本發(fā)明復(fù)合微生物菌肥對(duì)人、畜安全，屬于環(huán)境友好型，利用本發(fā)明方法防治植物病害不易產(chǎn)生抗藥性，本發(fā)明制備方法穩(wěn)定、成本低、使用簡(jiǎn)單。本菌肥中的固氮菌環(huán)狀芽孢桿菌與巴氏梭菌—能自動(dòng)固定空氣中的氮?dú)?，轉(zhuǎn)化為農(nóng)作物必需的氮肥。同時(shí)它們通過(guò)產(chǎn)酸與多糖物質(zhì)能將大量沉積于土壤中的不可溶性磷鉀,分解成農(nóng)作物可以再吸收利用的磷肥和鉀肥。渾圓鏈霉菌與多孢木霉菌抗病菌可使病菌受到抑制,可減少病害的發(fā)生；還可利用微生物,削減、凈化土壤中重金屬或降低重金屬毒性,并且微生物肥料施入土壤后使有益微生物增加,有害微生物明顯減少。下面結(jié)合試驗(yàn)說(shuō)明本發(fā)明復(fù)合微生物菌肥的田間效果。（下面簡(jiǎn)稱(chēng)菌肥）一、復(fù)合微生物菌肥在煙草上的應(yīng)用效果1．試驗(yàn)地點(diǎn)：湖南省隆回縣灘頭鎮(zhèn)龍竹村某農(nóng)戶(hù)種植地；試驗(yàn)時(shí)間：2015年3-8月。2．試驗(yàn)方法：烤煙品種：中煙99-10-1，烤煙移栽苗時(shí)，用菌肥500倍稀釋液灌根一次；緩苗后20天用菌肥250倍液噴施第一次，然后連續(xù)每隔20天噴施第二次和第三次（總共每畝用菌肥4公斤）。對(duì)照區(qū)在每次用菌肥250倍液噴施的同時(shí)，用同樣用量的清水噴灑。3．試驗(yàn)結(jié)果：施用復(fù)合微生物菌肥后，株高、莖圍、節(jié)距、有效葉數(shù)、最大葉面積均大于噴施清水的對(duì)照，說(shuō)明可以有效改善煙株的農(nóng)藝性狀，促進(jìn)煙株健壯生長(zhǎng)。施用的煙株發(fā)病率和發(fā)病程度顯著降低，可以有效提高煙株的抗病性，特別對(duì)花葉病有很好的控制效果；從表1可以看出，根據(jù)田間調(diào)查的主要病害發(fā)生情況，黑脛病的發(fā)病率和病情指數(shù)明顯降低；青枯病在處理區(qū)上沒(méi)有發(fā)現(xiàn)，在對(duì)照上僅有少量發(fā)生；花葉病發(fā)病率和病情指數(shù)處理區(qū)非常的低，僅為5.3%和1.1，達(dá)到極顯著的控制效果。表1復(fù)合微生物菌肥對(duì)煙草病防治效果施用復(fù)合微生物菌肥后煙草提早成熟、提高品質(zhì)，很大程度上提高煙葉的產(chǎn)量、均價(jià)、產(chǎn)值、上中等煙比例。從表可以分析得出，試驗(yàn)示范區(qū)煙葉產(chǎn)量、產(chǎn)值、均價(jià)分別比對(duì)照區(qū)域高出58.1公斤/畝、1923.1元/畝、4.18元/公斤。減去增加的成本430元（其中人工310元），可凈增1493.1元/畝。表2復(fù)合微生物菌肥對(duì)煙草產(chǎn)量產(chǎn)值增收效果。處理產(chǎn)量（公斤/畝）產(chǎn)值（元/畝）均價(jià)（元/公斤）對(duì)照區(qū)208.22902.313.94處理區(qū)266.34825.418.12二、復(fù)合微生物菌肥在水稻上的試驗(yàn)效果1．試驗(yàn)地點(diǎn)：湖南省隆回縣灘頭鎮(zhèn)龍竹村某農(nóng)戶(hù)良田2．試驗(yàn)方法：⑴．用100倍復(fù)合微生物菌肥稀釋液浸種6-8小時(shí)；⑵．在秧苗期、分蘗期、孕穗期分別用1kg/畝的復(fù)合微生物菌肥施入水田中；3．試驗(yàn)結(jié)果：⑴.對(duì)水稻發(fā)芽率的影響效果最好.能促進(jìn)種子發(fā)芽、生根、提高發(fā)芽勢(shì)和發(fā)芽率，發(fā)芽勢(shì)增幅在10.78%，發(fā)芽率增幅為8.2%，發(fā)芽快而整齊，根系發(fā)達(dá)，粗白根多，成秧率高；⑵.對(duì)水稻育秧和大田生長(zhǎng)發(fā)育、提高單產(chǎn)均有明顯效果，尤其對(duì)提高秧苗素質(zhì)，高成活秧，提高千粒重等有顯著作用。小區(qū)試驗(yàn)隨著施用時(shí)期不同，每畝可增產(chǎn)稻谷88千克，增產(chǎn)幅度為15%，增加收益176元，扣除成本90元，畝凈增收益86元；⑶．提高水稻的抗旱、抗病、抗倒伏等抗逆性，對(duì)各種土傳病害與細(xì)菌性病害，尤其對(duì)稻瘟病、紋枯病、立枯病等病害的發(fā)生有較強(qiáng)的抑制和預(yù)防的作用。三、復(fù)合微生物菌肥在草莓上試驗(yàn)效果1．試驗(yàn)地點(diǎn)：湖南省隆回縣桃洪鎮(zhèn)某種植戶(hù)2．試驗(yàn)方法：在定植期，將苗栽好，用菌肥500倍稀釋液灌根1次，在草莓生長(zhǎng)期間，葉面噴施1：250倍菌肥，10d（天）1次，連噴3次；3．試驗(yàn)結(jié)果：結(jié)果發(fā)現(xiàn)，提前開(kāi)花結(jié)果，果實(shí)大而飽滿(mǎn)，結(jié)果數(shù)多，異形果少，口感好，著色鮮亮，草莓（豐香）的單株產(chǎn)量平均為127．26g，較對(duì)照（不噴菌肥）提高28．17％而且噴用菌肥后草莓果實(shí)的可溶性固形物含量達(dá)10.22％，較對(duì)照相對(duì)高14.2％，同時(shí)，施用菌肥后，酸含量降低，Vc含量提高，果實(shí)的風(fēng)味和品質(zhì)得到明顯改善，并且耐儲(chǔ)存，比不使用菌肥的草莓多儲(chǔ)存10天以上，草莓根部肥壯，消滅了草莓的白粉病和根腐病。使用菌肥的地塊比對(duì)照區(qū)提高產(chǎn)量28%，糖度比對(duì)照區(qū)提高2-3度。四、復(fù)合微生物菌肥在西紅柿的應(yīng)用效果1．試驗(yàn)時(shí)間：2011年6月-9月2．試驗(yàn)地點(diǎn)：河北省滄縣杜林鄉(xiāng)某種植戶(hù)3．試驗(yàn)方法：在移植前將幼苗用200倍菌肥稀釋液沾根30分種，在定植后10天后，用菌肥500倍稀釋液灌根1次，在西紅柿生長(zhǎng)期間，葉面噴施1：250倍菌肥，20天1次，連噴3次；4．試驗(yàn)結(jié)果：結(jié)果發(fā)現(xiàn)，提前開(kāi)花結(jié)果，果實(shí)大而飽滿(mǎn)，結(jié)果數(shù)多，異形果少，口感好，著色鮮亮，西紅柿平均株高較對(duì)照（不噴菌肥）提高11％，產(chǎn)量比對(duì)照增高23%，相比對(duì)照，可以有效地預(yù)防由缺鈣引起的西紅柿果實(shí)臍腐病。具體實(shí)施方式實(shí)施例1一種復(fù)合微生物菌肥，其特征在于，制備該復(fù)合微生物菌肥的原料按重量份為：渾圓鏈霉菌粉40份，環(huán)狀芽孢桿菌與崛越氏芽孢桿菌混合發(fā)酵菌粉40份，多孢木霉菌粉30份，巴氏梭菌菌粉30份，氨基酸原粉15份，黃腐酸鉀15份，棉粕粉15份；為了達(dá)到上述目的，該復(fù)合微生物菌肥的制備方法，包括以下步驟：、渾圓鏈霉菌粉的制備取出渾圓鏈霉菌菌種保藏管，用高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)7天。在平板下挑取單個(gè)菌落劃線(xiàn)接種裝有150毫升高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)6-8天，待菌苔長(zhǎng)滿(mǎn)茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子粉即可用500毫升的無(wú)菌生理鹽水洗脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為渾圓鏈霉菌一級(jí)種子液；二級(jí)種子擴(kuò)培：將上述制備的渾圓鏈霉菌種子液以1%的接種量接種至滅菌的渾圓鏈霉菌液體二級(jí)種子培養(yǎng)基上，500L的發(fā)酵罐裝液量為350L，通氣量為每分鐘液氣比為1：0.8，28-30℃培養(yǎng)36-48小時(shí)，待菌體含量達(dá)到80g/L時(shí)，即可作為渾圓鏈霉菌二級(jí)種子液；發(fā)酵：將上述制備的渾圓鏈霉菌二級(jí)種子液以20%的接種量接種至滅菌的渾圓鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基上，菌種與渾圓鏈霉菌固體培養(yǎng)基混合均勻后，將接好種的渾圓鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基攤在發(fā)酵槽上，物料高度為5-8cm，控溫28-32℃，前兩天空氣濕度保持為60%-75%，過(guò)后空氣濕度保持為40%-50%，發(fā)酵5天，檢測(cè)其孢子含量為48億CFU/g，即可低溫風(fēng)干，即得到渾圓鏈霉菌菌粉；其中，所述的高氏一號(hào)固體培養(yǎng)基：硝酸鉀：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氫二鉀：0.5克，硫酸鎂：0.5克，氯化鈉：0.5克，硫酸亞鐵：0.01克，瓊脂：20克，蒸餾水補(bǔ)足1000ml，PH7.2～7.4；其中，所述的渾圓鏈霉菌二級(jí)液體種子培養(yǎng)基：棉粕粉2%，玉米粉2%，氯化鈉0.2%，碳酸鈣1%，硫酸鎂0.1%，PH7﹒2～7﹒4；其中，所述的渾圓鏈霉菌固體發(fā)酵培養(yǎng)基：啤糟渣80%，棉粕5%，玉米粉1%，石粉6%，麩皮8%，硫酸錳0.004%，磷酸氫二鉀0.1%，硫酸鎂0.05%，固體培養(yǎng)基含水量為40%-60%。各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。、環(huán)狀芽孢桿菌與崛越氏芽孢桿菌混合發(fā)酵菌粉崛越氏芽孢桿菌種子液的制備取出崛越氏芽孢桿菌保藏管，用營(yíng)養(yǎng)肉汁固體培養(yǎng)基分別劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)48小時(shí)。在平板下挑取單個(gè)菌落接種至裝有營(yíng)養(yǎng)肉汁固體培養(yǎng)基，在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，用3000ml無(wú)菌水將三個(gè)茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L液體種子培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，開(kāi)攪拌120r/min，前10小時(shí)通氣量為200L/min，10小時(shí)后通氣量為320L/min，30℃培養(yǎng)16-24小時(shí)，待總菌含量不低于20億cfu/ml，即可作為崛越氏芽孢桿菌種子液；環(huán)狀芽孢桿菌種子液的制備取出環(huán)狀芽孢桿菌保藏管，用無(wú)氮固體培養(yǎng)基分別劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)48小時(shí)。在平板下挑取單個(gè)菌落接種至裝有無(wú)氮固體培養(yǎng)基，在30℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，用3000ml無(wú)菌水將三個(gè)茄子瓶中的菌苔洗脫，接種至裝有300L液體種子培養(yǎng)基的500L發(fā)酵罐中，開(kāi)攪拌120r/min，前10小時(shí)通氣量為200L/min，10小時(shí)后通氣量為350L/min，30℃培養(yǎng)16-24小時(shí)，待總菌含量不低于10億cfu/ml，即可作為環(huán)狀芽孢桿菌種子液；發(fā)酵：將上述制備的崛越氏芽孢桿菌種子液與環(huán)狀芽孢桿菌種子液以1：2的比例混勻，然后以總接種量的15%的接種量加至芽孢固體發(fā)酵培養(yǎng)基中，混勻，在淺盤(pán)上發(fā)酵，堆料厚度為5-10cm，控制發(fā)酵溫度為30-40℃，發(fā)酵44小時(shí)，檢測(cè)芽孢含量為115億cfu/g，其中環(huán)狀芽孢桿菌的芽孢含量為48億cfu/g，即可曬干，待水分含量低于10%，即得到環(huán)狀芽孢桿菌與崛越氏芽孢桿菌混合發(fā)酵菌粉；其中，所述無(wú)氮固體培養(yǎng)基：蔗糖5g，磷酸氫二鉀0.2g，硫酸鎂0.2g，氯化鈉0.2g，硫酸鈣0.1g，碳酸鈣5g，瓊脂20g，水1000mL，pH7.2；其中，所述液體種子培養(yǎng)基：糖蜜35g/L，豆粕粉20g/L，硫酸鎂0.6g/L，硫酸錳0.5g/L，磷酸二氫鉀0.3g/L，碳酸鈣5.0g/L，pH7.0，各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘；其中，芽孢固體發(fā)酵培養(yǎng)基：甘蔗渣57%，麩皮35%，棉粕5%，石粉1%，粗玉米皮2%，尿素0.4%，磷酸氫二鉀0.4%，硫酸鎂0.05%，培養(yǎng)基含水量50%-60%。各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。、多孢木霉菌粉的制備多孢木霉種子液的制備：取出多孢木霉菌菌種保藏管，用PDA固體培養(yǎng)基劃平板進(jìn)行復(fù)蘇，30℃培養(yǎng)6天。在平板下挑取單個(gè)菌落劃線(xiàn)接種裝有150毫升PDA固體培養(yǎng)基的茄子瓶中，在培養(yǎng)箱中30℃培養(yǎng)4-6天，待菌苔長(zhǎng)滿(mǎn)茄子瓶，產(chǎn)生大量孢子即可用500毫升的無(wú)菌生理鹽水洗脫，調(diào)節(jié)孢子濃度為0.1億cfu/ml，即為多孢木霉種子液；發(fā)酵：將上述制備的多孢木霉種子液以3%的接種量接種至滅菌的多孢木霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基上，菌種與多孢木霉固體培養(yǎng)基混合均勻后，將接好種的多孢木霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基攤在發(fā)酵槽上，物料高度為5-10cm，控溫28-32℃，濕度保持為60%-75%，發(fā)酵5天，檢測(cè)其總孢子含量為44億CFU/g，即可低溫風(fēng)干，即得到多孢木霉菌粉；其中，所述的PDA固體培養(yǎng)基：土豆200g，蔗糖20g，水1000mL，瓊脂20g；其中，所述的多孢木霉固體發(fā)酵培養(yǎng)基：麩皮85%，芝麻渣粕2%，玉米芯5%，石粉4%，粗玉米皮2%，尿素0.4%，磷酸氫二鉀0.4%，硫酸鎂0.05%，培養(yǎng)基含水量50%-60%；各培養(yǎng)基滅菌的條件為：0.10-0.15MPa，121℃滅菌30分鐘。、巴氏梭菌菌粉的制備取-80℃甘油管保藏的菌種1mL接種于裝有999mLRCM培養(yǎng)基的厭氧瓶中，37℃條件下靜態(tài)厭氧活化64h。將活化好的菌種按1%(v/v)的接種量轉(zhuǎn)接到滅過(guò)菌的99L巴氏梭菌發(fā)酵培養(yǎng)基中。37℃條件下靜態(tài)厭氧培養(yǎng)116h，檢測(cè)其芽孢含為40億CFU/ml，即可加入輕質(zhì)碳酸鈣，噴霧干燥，調(diào)節(jié)巴氏梭菌芽孢含量35億CFU/g，即為巴氏梭菌菌粉；其中，所述的RCM培養(yǎng)基：胰蛋白陳10g/L，牛肉膏10g，酵母膏10g/L，葡萄糖5g/L，氯化鈉5g/L，可溶性淀粉1g/L，半胱氨酸鹽酸鹽0.5g/L，醋酸鈉3g/L，pH7.0，121℃滅菌20min，其中，所述的巴氏梭菌發(fā)酵培養(yǎng)基：:酵母膏20g/L，牛肉膏10g/L，KH2PO42g/L硫酸鎂1g/L，半胱氨酸鹽酸鹽1g/L，NaHCO31g/L，CaCO31g/L，葡萄糖20g/L，PH7.0，121℃滅菌20min。、將上述步驟中的渾圓鏈霉菌粉40份，環(huán)狀芽孢桿菌與崛越氏芽孢桿菌混合發(fā)酵菌粉40份，多孢木霉菌粉30份，巴氏梭菌菌粉30份，氨基酸原粉15份，黃腐酸鉀15份，棉粕粉15份混勻，檢測(cè)其總菌含量為45億CFU/g，包裝即為復(fù)合微生物菌肥。根據(jù)上述說(shuō)明書(shū)的揭示和教導(dǎo)，本發(fā)明所屬領(lǐng)域的技術(shù)人員還可以對(duì)上述實(shí)施方式進(jìn)行變更和修改。因此，本發(fā)明并不局限于上面揭示和描述的具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的一些修改和變更也應(yīng)當(dāng)落入本發(fā)明的權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。此外，盡管本說(shuō)明書(shū)中使用了一些特定的術(shù)語(yǔ)，但這些術(shù)語(yǔ)只是為了方便說(shuō)明，并不對(duì)本發(fā)明構(gòu)成任何限制。當(dāng)前第1頁(yè)1 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