專利名稱：二色桌片參中新的抗腫瘤化合物Intercedenside D～H的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，是從海洋動(dòng)物二色桌片參中分離到的5種新的抗腫瘤化合物Intercedenside D、E、F、G、H。
背景技術(shù)：
二色桌片參(Mensamaria intercedens Lampert)是一種大量生長(zhǎng)于福建沿海的海參綱動(dòng)物，屬瓜參科桌片參屬。體形較小，體長(zhǎng)不足10cm，直徑不足3cm，體壁薄。含有豐富的蛋白質(zhì)、維生素A和維生素E，有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。文獻(xiàn)報(bào)道該動(dòng)物還含有豐富的蛋白多糖、多糖和皂苷類物質(zhì)(吳萍茹等，二色桌片參化學(xué)成分研究，中國(guó)海洋藥物，2000，19(1)17)。有關(guān)所含的皂苷類成分的化學(xué)結(jié)構(gòu)及抗腫瘤活性迄今尚未見(jiàn)有過(guò)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是從生長(zhǎng)于中國(guó)福建海域的二色桌片參中提取分離到的一種新的皂苷類化合物，分別命名為Intercedenside D，Intercedenside E，Intercedenside F，Intercedenside G，Intercedenside H，它們的化學(xué)結(jié)構(gòu)式通式如下
本發(fā)明化合物的制備方法如下(1)提取將新鮮二色桌片參洗凈、切碎，用5倍量(重量)95％乙醇浸泡提取7天，濾出提取液，再用85％的乙醇浸泡提取2次，每次7天。合并3次提取液，減壓回收乙醇，得到流浸膏。將流浸膏溶于水中過(guò)濾，將濾液通過(guò)大孔樹(shù)脂柱，依次用水和50％乙醇洗脫。收集50％乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得到總皂苷提取物。
(2)分離上述總皂苷提取物進(jìn)行硅膠柱層析，以二氯甲烷∶甲醇∶水(8～5∶1～4∶1)混合溶劑洗脫，薄層層析檢測(cè)，收集含有皂苷的流分，再經(jīng)過(guò)ODS反相柱層析，以甲醇∶水(5～10∶5～0)梯度洗脫，收集不同濾液，薄層層析檢測(cè)，得到Intercedenside D～H純品。經(jīng)多種現(xiàn)代光譜分析，特別是綜合應(yīng)用多種先進(jìn)的二維核磁共振波譜的解析，確定了這些化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和立體構(gòu)型。
1.Intercedenside D為無(wú)色結(jié)晶性粉末，熔點(diǎn)214-216℃，分子式C55H83O27SNa；Liebermann-Burchard反應(yīng)和α-萘酚反應(yīng)陽(yáng)性。電噴霧陽(yáng)離子質(zhì)譜ESI-MS+m/z1253[M+Na]+；電噴霧陰離子質(zhì)譜ESI-MS-m/z1207[M-Na]-。IR(KBr)cm-13436(羥基)，1745(羰基)，1653(雙鍵)，1235，1068(硫酸酯基)。13C NMR與1H NMR數(shù)據(jù)見(jiàn)表1和表2。以15％HCl水解皂苷后得到組成皂苷糖鏈的單糖，將其制備成糖腈乙酸酯衍生物，進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析，經(jīng)與標(biāo)準(zhǔn)糖的糖腈乙酸酯衍生物對(duì)照，確定Intercedenside D的糖鏈由木糖、葡萄糖、3-O-甲基葡萄糖組成，比例為2∶1∶1。
2.Intercedenside E為無(wú)色結(jié)晶性粉末，熔點(diǎn)242-244℃，分子式C54H81O26SNa；Liebermann-Burchard反應(yīng)和α-萘酚反應(yīng)陽(yáng)性。電噴霧陽(yáng)離子質(zhì)譜ESI-MS+m/z1223[M+Na]+；電噴霧陰離子質(zhì)譜ESI-MS-m/z1177[M-Na]-。IR(KBr)cm-13442(羥基)，1734(羰基)，1659(雙鍵)，1237，1071(硫酸酯基)。13C NMR與1H NMR數(shù)據(jù)見(jiàn)表3和表4。以15％HCl水解皂營(yíng)后得到組成皂苷糖鏈的單糖，將其制備成糖腈乙酸酯衍生物，進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析，經(jīng)與標(biāo)準(zhǔn)糖的糖腈乙酸酯衍生物對(duì)照，確定Intercedenside E的糖鏈由木糖、3-O-甲基葡萄糖組成，比例為3∶1。
3.Intercedenside F為無(wú)色結(jié)晶性粉末，熔點(diǎn)226-228℃，分子式C55H85O27SNa；Liebermann-Burchard反應(yīng)和α-萘酚反應(yīng)陽(yáng)性。電噴霧陽(yáng)離子質(zhì)譜ESI-MS+m/z1255[M+Na]+；電噴霧陰離子質(zhì)譜ESI-MS-m/z1209[M-Na]-。IR(KBr)cm-13437(羥基)，1731(羰基)，1660(雙鍵)，1241，1069(硫酸酯基)。13C NMR與1H NMR數(shù)據(jù)見(jiàn)表5和表6。以15％HCl水解皂苷后得到組成皂苷糖鏈的單糖，將其制備成糖腈乙酸酯衍生物，進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析，經(jīng)與標(biāo)準(zhǔn)糖的糖腈乙酸酯衍生物對(duì)照，確定Intercedenside F的糖鏈由木糖、葡萄糖、3-O-甲基葡萄糖組成，比例為2∶1∶1。
4.Intercedenside G為無(wú)色結(jié)晶性粉末，熔點(diǎn)241.5-243.2℃，分子式C54H81O25SNa；Liebermann-Burchard反應(yīng)和α-萘酚反應(yīng)陽(yáng)性。電噴霧陽(yáng)離子質(zhì)譜ESI-MS+m/z1207[M+Na]+；電噴霧陰離子質(zhì)譜ESI-MS-m/z1161[M-Na]-。IR(KBr)cm-13443(羥基)，1729(羰基)，1665(雙鍵)，1242，1071(硫酸酯基)。13C NMR與1H NMR數(shù)據(jù)見(jiàn)表7和表8。以15％HCl水解皂苷后得到組成皂苷糖鏈的單糖，將其制備成糖腈乙酸酯衍生物，進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析，經(jīng)與標(biāo)準(zhǔn)糖的糖腈乙酸酯衍生物對(duì)照，確定Intercedenside G的糖鏈由木糖、3-O-甲基葡萄糖組成，比例為3∶1。
5.Intercedenside H為無(wú)色結(jié)晶性粉末，熔點(diǎn)188-190℃，分子式C55H83O26SNa；Liebermann-Burchard反應(yīng)和α-萘酚反應(yīng)陽(yáng)性。電噴霧陽(yáng)離子質(zhì)譜ESI-MS+m/z1237[M+Na]+；電噴霧陰離子質(zhì)譜ESI-MS-m/z1191[M-Na]-。IR(KBr)cm-13437(羥基)，1732(羰基)，1671(雙鍵)，1245，1069(硫酸酯基)。13C NMR與1H NMR數(shù)據(jù)見(jiàn)表9和表10。以15％HCl水解皂苷后得到組成皂苷糖鏈的單糖，將其制備成糖腈乙酸酯衍生物，進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析，經(jīng)與標(biāo)準(zhǔn)糖的糖腈乙酸酯衍生物對(duì)照，確定Intercedenside H的糖鏈由木糖、奎諾糖、3-O-甲基葡萄糖組成，比例為2∶1∶1。
表1.Intercedenside D苷元部分的13C NMR與1H NMR數(shù)據(jù)Position δCδH(m，Jin Hz) HMBC1 35.21.25(1H，m，α)，1.33(1H，m，β)2 26.71.82(1H，m，β)，1.97(1H，m，α)3 88.93.15(1H，dd，3.6，12) C1xyl14 39.15 47.80.84(1H，m) C4，30，316 22.81.86(2H，m)7 119.6 5.59(1H，bs)8 147.59 47.53.34(1H，d，9.6)10 35.711 22.31.49(1H，m)，1.77(1H，m)12 25.41.98(1H，m)，2.64(1H，m)13 58.014 48.415 43.31.69(1H，m)，2.53(1H，dd，α，4.8，8.4)16 82.86.07(1H，m)C17，CH3COO17 87.418 178.419 23.81.07(3H，s)C9，1020 86.021 26.51.74(3H，s)C17，20，2222 128.3 5.80(1H，d，12)C20，2423 121.0 6.08(1H，t，12)C20，2524 122.0 6.73(1H，d，12)C26，27，25 135.426 26.01.58(3H，s)C23，24，25，2727 17.21.57(3H，s)C23，24，25，2630 17.00.98(3H，s)C3，4，5，3131 28.41.10(3H，s)C3，4，5，3032 30.91.44(3H，s)C13，14CH3COO170.6CH3COO21.01.93(3H，s)
表2.Intercedenside D糖鏈部分的13C NMR與1H NMR數(shù)據(jù)Position δCδH(m，Jin Hz) HMBCxyl1(1→C-3)1104.7 4.66(1H，d，7.2) CC-3281.1 4.12(1H，m) C1glc374.9 4.25(1H，m) C2xyl1475.9 5.01(1H，m)563.8 3.72(1H，m)，4.75(1H，m)glc(1→2xyl1)1104.3 5.13(1H，d，7.2) C2xyl1275.6 3.88(1H，m)380.0 4.08(1H，m) C1xyl2471.8 4.04(1H，m)576.0 3.69(1H，m)660.7 4.26(1H，m)，4.31(1H，m)xyl2(1→3glc)1104.1 4.91(1H，d，7.8) C3glc273.2 3.86(1H，m)386.4 4.06(1H，m) C1Meglu468.6 3.93(1H，m)565.8 3.53(1H，t，10.8)，4.05(1H，m)Meglu(1→3xyl2)1104.4 5.15(1H，d，7.2) C3xyl2274.4 3.84(1H，m) C3 Meglu386.9 3.64(1H，m) C2，4 Meglu，OMe470.2 3.87(1H，m) COMe577.4 3.91(1H，m) C4 Meglu661.6 4.02(1H，m)，4.36(1H，m)OMe 60.4 3.78(3H，s) C3 Meglu
表3. Intercedenside E苷元部分13C NMR與1H NMR數(shù)據(jù)Position δCδH(m，Jin Hz)HMBC1 35.4 1.28(1H，m，α)，1.37(1H，m，β)2 26.6 1.83(1H，m，β)，1.97(1H，m，α)3 88.8 3.18(1H，dd，4.2，12) C1xyl14 39.25 47.9 0.90(1H，m)C4，30，316 22.9 1.89(2H，m)7 119.7 5.61(1H，bs)8 147.69 47.7 3.38(1H，d，14.4)10 35.911 22.4 1.45(1H，m)，1.79(1H，m)12 25.5 1.99(1H，m)，2.65(1H，m)13 58.214 48.615 43.4 1.70(1H，m)，2.55(1H，dd，α，4.8，8.4)16 82.8 6.09(1H，m)C17，CH3COO17 87.518 178.519 24.0 1.10(3H，s)C9，1020 86.221 26.8 1.75(3H，s)C17，20，2222 128.5 5.83(1H，d，12)C20，2423 121.1 6.10(1H，t，12)C20，2524 122.1 6.77(1H，d，12)C26，27，25 136.126 26.1 1.59(3H，s)C23，24，25，2727 17.3 1.58(3H，s)C23，24，25，2630 16.8 1.0(3H，s) C3，4，5，3131 28.3 1.15(3H，s)C3，4，5，3032 31.0 1.48(3H，s)C13，14CH3COO170.5CH3COO21.1 1.94(3H，s)
表4. Intercedenside E糖鏈部分的13C NMR與1H NMR數(shù)據(jù)Position δCδH(m，Jin Hz) HMBCxyl1(1→C-3)1 104.8 4.60(1H，d，7.2)CC-32 82.34.00(1H，m) C1xyl23 75.44.26(1H，m) C2xyl14 75.95.06(1H，m)5 64.13.71(1H，m)，4.79(1H，m)xyl2(1→2xyl1)1 105.7 5.02(1H，d，7.2)C2xyl12 74.73.88(1H，m)3 74.94.03(1H，m)4 77.04.11(1H，m) C1xyl35 64.23.50(1H，m)，4.34(1H，m)Xyl3(1→4xyl2)1 102.8 4.76(1H，d，7.2)C4xyl22 72.63.90(1H，m)3 86.44.09(1H，m) C1 Meglu4 68.83.97(1H，m)5 68.03.53(1H，m)，4.14(1H，m)Meglu(1→3xyl3)1 104.5 5.22(1H，d，7.8)C3xyl32 75.63.95(1H，m) C3 Meglu3 87.23.66(1H，m) C2，4 Meglu，OMe4 70.43.94(1H，m) COMe5 77.73.87(1H，m) C4 Meglu6 61.84.06(1H，m)，4.40(1H，m)OMe 60.63.79(3H，s) C3 Meglu
表5. Intercedenside F苷元部分的13C NMR與1H NMR數(shù)據(jù)PositionδCδH(m，Jin Hz) HMBC1 35.7 1.25(1H，m，α)，1.35(1H，m，β)2 26.8 1.80(1H，m，β)，1.94(1H，m，α)3 88.8 3.16(1H，m) C1xyl14 39.25 47.3 0.86(1H，m) C4，30，316 22.9 1.85(2H，m)7 119.45.64(1H，bs)8 147.89 47.1 3.37(1H，d，14.4)10 35.311 22.3 1.45(1H，m)，1.75(1H，m)12 25.8 1.92(1H，m)，2.60(1H，m)13 59.614 48.715 43.4 1.71(1H，m)，2.63(1H，dd，α，4.8，8.4)16 85.2 6.16(1H，m) C17，CH3COO17 87.218 178.419 23.9 1.04(3H，s)C9，1020 87.021 25.4 1.68(3H，s)C17，20，2222 37.4 2.03(1H，m)，2.50(1H，m) C20，2423 23.6 2.20(1H，m)，2.28(1H，m) C20，2524 124.55.04(1H，m)C26，27，25 131.626 25.3 1.55(3H，s)C23，24，25，2727 17.4 1.43(3H，s)C23，24，25，2630 17.1 0.98(3H，s)C3，4，5，3131 28.5 1.07(3H，s)C3，4，5，3032 30.4 1.45(3H，s)C13，14CH3COO 169.9CH3COO 20.8 1.95(3H，s)
表6. Intercedenside F糖鏈部分的13C NMR與1H NMR數(shù)據(jù)Position δCδH(m，Jin Hz) HMBCxyl1(1→C-3)1 104.8 4.65(1H，d，7.2) CC-32 81.44.13(1H，m) C1glc3 75.14.26(1H，m) C2xyl14 75.95.05(1H，m)5 63.93.72(1H，m)，4.76(1H，m)glc(1→2xyl1)1 104.5 5.14(1H，d，7.2) C2xyl12 75.83.95(1H，m)3 80.14.12(1H，m) C1xyl24 71.44.04(1H，m)5 76.13.69(1H，m)6 60.84.28(1H，m)，4.37(1H，m)xyl2(1→3glc)1 104.2 4.95(1H，d，7.8) C3glc2 73.33.90(1H，m)3 86.44.07(1H，m) C1Meglu4 68.63.93(1H，m)5 66.03.53(1H，m)，4.08(1H，m)Meglu(1→3xyl2)1 104.6 5.18(1H，d，7.2) C3xyl22 74.53.86(1H，m) C3 Meglu3 86.63.65(1H，m) C2，4Meglu，OMe4 70.33.92(1H，m) COMe5 77.63.88(1H，m) C4Meglu6 61.74.05(1H，m)，4.40(1H，m)OMe 60.53.78(3H，s) C3Meglu
表7. Intercedenside G苷元部分的13C NMR與1H NMR數(shù)據(jù)Position δCδH(m，Jin Hz) HMBC1 35.9 1.33(2H，m)2 26.7 1.80(1H，m，β)，1.99(1H，m，α)3 88.8 3.19(1H，m) C1xyl14 39.25 47.6 0.91(1H，dd，4.2，10.2) C4，30，316 23.0 1.95(2H，m)7 120.25.57(1H，bs)8 145.69 47.2 3.33(1H，bd，13.8)10 35.311 22.3 1.44(1H，m，α)，1.76(1H，m，β)12 30.6 2.09(1H，m)13 58.314 47.915 43.8 1.59(1H，dd，β，7.2，11.4)，2.42(1H，dd，α，7.8，12)16 72.7 5.91(1H，m) C17，CH3COO17 57.2 3.12(1H，d，8.4) C13，2118 179.519 23.7 1.09(3H，s) C9，1020 84.021 28.9 1.60(3H，s) C17，20，2222 131.75.69(1H，d，12) C20，2423 120.36.03(1H，t，12) C20，2524 121.06.42(1H，d，12) C26，2725 137.026 26.0 1.66(3H，s) C23，24，25，2727 17.5 1.61(3H，s) C23，24，25，2630 16.8 1.00(3H，s) C3，4，5，3131 28.2 1.16(3H，s) C3，4，5，3032 32.4 1.08(3H，s) C13，14CH3COO170.2CH3COO21.2 1.92(3H，s)
表8. Intercedenside G糖鏈部分的13C NMR與1H NMR數(shù)據(jù)Position δCδH(m，Jin Hz)HMBCxyl1(1→C-3)1 104.74.66(1H，d，7.2)CC-32 82.4 4.01(1H，m) C1xyl23 75.3 4.24(1H，m) C2xyl14 75.8 5.07(1H，m)5 64.1 3.73(1H，m)，4.79(1H，m)xyl2(1→2xyl1)1 105.85.01(1H，d，7.2)C2xyl12 74.7 3.89(1H，m)3 74.9 4.05(1H，m)4 77.0 4.13(1H，m) C1Xyl35 64.2 3.49(1H，m)，4.31(1H，m)xyl3(1→4xyl2)1 102.84.76(1H，d，7.8)C4xyl22 72.6 3.90(1H，m)3 86.2 4.09(1H，m) C1 Meglu4 68.8 3.97(1H，m)5 66.0 3.54(1H，m)，4.12(1H，m)Meglu(1→3xyl3)1 104.65.22(1H，d，7.8)C3xyl32 75.6 3.95(1H，m) C3 Meglu3 87.2 3.68(1H，m) C2，4 Meglu，OMe4 70.4 3.94(1H，m) COMe5 77.7 3.86(1H，m) C4 Meglu6 61.8 4.06(1H，m)，4.40(1H，m)OMe 60.5 3.78(3H，s) C3 Meglu
表9. Intercedenside H苷元部分的13C NMR與1H NMR數(shù)據(jù)Position δCδH(m，Jin Hz)1 35.3 1.26(1H，m，β)，1.34(1H，m，α)2 26.5 1.80(1H，m，β)，1.98(1H，m，α)3 88.3 3.20(1H，dd，4.2，12)4 39.55 47.9 0.93(1H，m)6 23.0 1.91(2H，m)7 120.15.62(1H，bs)8 147.99 47.5 3.37(1H，d，13.8)10 35.611 22.5 1.44(1H，m)，1.72(1H，m)12 25.7 1.98(1H，m)，2.65(1H，m)13 58.514 48.315 43.6 1.72(1H，β)，2.53(1H，dd，α，8.4，4.8)16 82.8 6.10(1H，m)17 87.618 179.019 24.1 1.12(3H，s)20 85.921 27.0 1.79(3H，s)22 128.65.77(1H，d，12)23 121.36.20(1H，t，12)24 122.56.69(1H，d，12)25 136.426 26.2 1.60(3H，s)27 17.7 1.57(3H，s)30 17.0 1.08(3H，s)31 28.3 1.15(3H，s)32 31.5 1.49(3H，s)CH3COO170.1CH3COO21.2 1.94(3H，s)
表10. Intercedenside H糖鏈部分的13C NMR與1H NMR數(shù)據(jù)Position δCδH(m，Jin Hz)xyl1(1→C-3)1 105.3 4.70(1H，d，7.2)2 83.2 3.97(1H，m)3 75.2 4.26(1H，m)4 75.8 5.10(1H，m)5 64.0 3.70(1H，m)，4.74(1H，m)qui(1→2xyl1)1 105.2 4.71(1H，d，6.6)2 76.1 3.91(1H，m)3 75.3 4.12(1H，m)4 86.0 3.59(1H，m)5 71.8 4.12(1H，m)6 18.0 1.64(3H，d，6.2)xyl2(1→4qui)1 105.0 4.84(1H，d，7.8)2 73.6 4.01(1H，m)3 87.2 4.18(1H，m)4 68.8 4.12(1H，m)5 66.6 3.56(1H，m)，4.27(1H，m)Meglu(1→3xyl2)1 105.6 5.32(1H，d，7.2)2 74.7 3.98(1H，m)3 88.0 3.63(1H，m)4 70.5 4.07(1H，m)5 78.1 3.94(1H，m)6 62.0 4.23(1H，m)，4.41(1H，m)OMe 60.8 3.84(3H，s)Xyl木糖；Glc葡萄糖；Qui奎諾糖；J偶合常數(shù)本發(fā)明化合物intercedenside D～H經(jīng)體外抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)，表明這些化合物有明顯的抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的效果。實(shí)驗(yàn)所用的細(xì)胞株為國(guó)際通用的腫瘤細(xì)胞株，即
A-549(肺癌)MCF-7(乳腺癌)IA-9(卵巢癌)CAKI-1(腎癌)U-87-MG(神經(jīng)母細(xì)胞癌)PC-3(前列腺癌)KB(鼻咽癌)KB-VIN(鼻咽癌)SK-MEL-2(黑色素瘤)HCT-8(腸癌)實(shí)驗(yàn)方法為國(guó)際通用的SRB法根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)速率，將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的腫瘤細(xì)胞以90μl/孔接種于96孔培養(yǎng)板，貼壁生長(zhǎng)24小時(shí)再加藥10μl孔。每個(gè)濃度設(shè)3復(fù)孔。并設(shè)相應(yīng)濃度的生理鹽水溶媒對(duì)照及無(wú)細(xì)胞調(diào)零孔。腫瘤細(xì)胞在37℃、5％CO2的條件下培養(yǎng)72小時(shí)，然后傾去培養(yǎng)液，用10％冷TCA固定細(xì)胞，4℃放置1小時(shí)后，用蒸餾水洗滌5次，空氣干燥。最后加入150μl/孔的Tris溶液，酶標(biāo)儀520nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表11。
表11. Intercedenside D～H對(duì)腫瘤細(xì)胞株的抑制作用(ED50，μg/ml)樣品A549 MCF-7IA9 CAKI-1 U-87-MG PC-3 KB KB-VIN SK-MEL-2 HCT-8Int.D1.82.42.4＞54.13.33.74.34.22.9Int.E1.41.41.71.62.11.71.92.01.61.1Int.F1.72.11.71.73.32.33.23.22.11.9Int.G1.62.01.93.83.32.03.33.92.41.8Int.H1.41.80.96 1.03.32.23.03.72.21.9ED50半數(shù)有效抑制濃度從表11可見(jiàn)，這五種化合物對(duì)10種腫瘤細(xì)胞株的半數(shù)有效抑制濃度(ED50)均小于4.3μg/ml，通常ED50＜10μg/ml濃度為有效。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Intercedenside D～H對(duì)10種不同的腫瘤細(xì)胞株均顯示明顯的抑制作用。因而可用于制備抗腫瘤藥物。
本發(fā)明為研制新的抗腫瘤藥物提供了新的先導(dǎo)化合物，對(duì)開(kāi)發(fā)利用中國(guó)的海洋藥用生物資源具有重要意義。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1Intercedenside D～H的分離制備選擇生長(zhǎng)于中國(guó)福建海域的新鮮二色桌片參1000克，洗滌切碎后分別用5倍量(重量)95％、85％、85％的乙醇依次浸泡提取，每次浸泡7天。合并乙醇提取液，減壓回收乙醇，得流浸膏。將流浸膏溶于3倍量的水中，過(guò)濾，濾液通過(guò)D101大孔樹(shù)脂柱，依次用水和50％乙醇各5000ml洗脫。收集50％乙醇洗脫液，減壓回收溶劑至干，得到總皂苷4.6克。將總皂苷進(jìn)行硅膠柱層析，以配比為7∶3∶1的二氯甲烷∶甲醇∶水混合溶劑(下層)約1500ml洗脫，收集含有皂苷的部分，再進(jìn)行ODS反相柱層析，以甲醇∶水(9～7∶1～3)進(jìn)行梯度洗脫，薄層層析檢測(cè)，得到intercedenside D～H純品，其得量分別為0.13克、0.15克、0.09克、0.23克、0.21克。
權(quán)利要求
1.抗腫瘤化合物Intercedenside D～H，其特征在于化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下
2.權(quán)利要求1所述抗腫瘤化合物Intercednside D～H的制備方法，其具體步驟如下(1)提取將新鮮二色桌片參洗凈、切碎，用5倍量(重量)95％乙醇浸泡提取7天，濾出提取液，再用85％的乙醇浸泡提取2次，每次7天，合并3次提取液，減壓回收乙醇，得到流浸膏，將流浸膏溶于水中，通過(guò)大孔樹(shù)脂柱，依次用水和50％乙醇洗脫，收集50％乙醇洗脫液，減壓回收乙醇，得到總皂苷提取物；(2)分離將上述總皂苷提取物進(jìn)行硅膠柱層析，以二氯甲烷∶甲醇∶水(8～5∶1～4∶1)混合溶劑洗脫，薄層層析檢測(cè)，收集含有皂苷的流分，再經(jīng)過(guò)ODS反相柱層析，以甲醇∶水(5～10∶5～0)梯度洗脫，薄層層析檢測(cè)，分別得到Intercedenside D～H純品。
3.權(quán)利要求1所述抗腫瘤化合物Intercedenside D～H在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體為從二色桌片參中分離的5種抗癌化合物Intercedenside D～H，分子式分別為C
文檔編號(hào)C07J71/00GK1528781SQ20031010804
公開(kāi)日2004年9月15日 申請(qǐng)日期2003年10月21日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月21日
發(fā)明者易楊華, 鄒崢嶸, 吳久鴻, 吳厚銘 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)