本發(fā)明屬于生化分離技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及提高印度辣木籽脫脂率的方法。

背景技術(shù)：

辣木又稱鼓槌樹，白花菜目辣木科，是多年生熱帶喬木，原產(chǎn)于印度。辣木籽為辣木樹的種子，在食品、醫(yī)藥、保健、化妝品等領(lǐng)域都有著良好的應(yīng)用價(jià)值，因?yàn)楦缓蹦咀延?，其在降低血脂、血壓，減肥瘦身，調(diào)節(jié)腸胃，護(hù)肝戒酒，增強(qiáng)人體免疫力方面都具有顯著療效。

現(xiàn)有技術(shù)提供多種脫脂方法，例如，中國(guó)發(fā)明授權(quán)專利文獻(xiàn) 一種采用超聲波輔助脫脂提取厥麻多糖的方法 授權(quán)公告號(hào)：CN104231096B 該發(fā)明提供一種采用超聲波輔助脫脂提取厥麻多糖的方法，它以厥麻為原料，加入石油醚后，采用不同溫度回流脫脂，揮干溶媒后用乙醇常溫浸泡洗滌，加入蒸餾水，轉(zhuǎn)入超聲波提取設(shè)備，超聲提取過濾，收集水提液，濾渣再加水超聲提取兩次，合并水提液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后加入木瓜蛋白酶液酶解，離心后取上清液，用微抽濾儀抽濾，進(jìn)一步除去較細(xì)的濾渣，濃縮收集到的濾液，再用正丁醇和氯仿的混合液,萃取3～5次,收集上層水相，向水相中加入乙醇，靜置后離心收集沉淀，冷凍干燥將得到純化的蕨蔴多糖。

現(xiàn)有技術(shù)采用超聲波輔助脫脂，可縮短提取過程的時(shí)間，提取率有所提高，但工藝復(fù)雜且脫脂率和提取率有待提升。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明針對(duì)上述技術(shù)問題提供一種脫脂率高的的提高印度辣木籽脫脂率的方法。

本發(fā)明針對(duì)上述技術(shù)問題所采取的方案為：提高印度辣木籽脫脂率的方法，制備步驟如下：

1）預(yù)處理：將辣木籽曬干，去皮，得到白色球狀的內(nèi)子，去離子水浸泡，干燥，超微粉碎，過篩；去離子水可充分的將去皮后的內(nèi)子表面可溶雜質(zhì)與內(nèi)子分離，避免在后續(xù)步驟中雜質(zhì)對(duì)提取的影響，保證提取過程無雜質(zhì)干擾。

2）脫脂：往內(nèi)子粉末中加入脫脂劑和活性劑，攪拌，靜置，過濾得塊狀粉末，再將粉末風(fēng)干后過篩；內(nèi)子中的油脂會(huì)影響活性蛋白的提取率故用脫脂劑對(duì)內(nèi)子粉末進(jìn)行脫脂，添加的活性劑可保證脫脂過程中內(nèi)子粉末中活性蛋白的活性。

3）提取活性蛋白：往過篩后的粉末中加入Tris—HCl緩沖液，攪拌，水浴加熱，加入酶解劑和助溶劑，繼續(xù)攪拌，離心取上清液，上清液中加入析出劑，靜置過濾得印度辣木籽中活性蛋白；將粉末中的活性蛋白充分酶解出來，提高活性蛋白的提取率。

4）凍干保存，由于活性蛋白對(duì)環(huán)境的要求很高，常溫下高濃度的生物蛋白很容易失去活性，為確?；钚圆捎脙龈晒に嚒?/p>

脫脂劑劑體積為內(nèi)子粉末2~4倍，可保證充分脫脂，攪拌靜置1~2天后用50~150目篩子過篩，便于后續(xù)步驟提取活性蛋白。

脫脂劑由以下成分及重量份組成：正己烷68~80份、硼氫化鉀5~15份和環(huán)烯醚萜3~8份。將內(nèi)子粉末中的油脂充分脫離，脫脂效果優(yōu)異，使用脫脂劑獲得的內(nèi)子粉末蛋白含量高、脂肪充分去除，經(jīng)過濾風(fēng)干可使水分也降低且易篩，提升后續(xù)的酶解的效果?；钚詣┯梢韵鲁煞旨爸亓糠萁M成：脂肪酸甲酯乙氧基化物8~15份、烷基酚聚氧乙烯醚2~10份、異丙醇2~10份、丁基二甘醇3~10份、氯化鈉1~4份、N-乙酰鄰氨基苯酸1~3份、三聚磷酸鈉2~4份。在脫脂的過程中肯會(huì)對(duì)蛋白的活性產(chǎn)生影響，加入活性劑保證蛋白活性，同時(shí)起到提升蛋白活性，效果優(yōu)異。

Tris-Hcl緩沖液pH值為8.6~8.9，濃度為1.3~1.6mol/L，pH值和濃度在此范圍緩沖液效果優(yōu)異。

步驟3中離心機(jī)轉(zhuǎn)速為3000~4000r/min，離心時(shí)間10~20min，進(jìn)行固液分離將雜質(zhì)去除便于活性蛋白的提取。

步驟1中內(nèi)子在去離子水中浸泡30~50min后置于干燥器內(nèi)干燥，充分將內(nèi)子表面雜質(zhì)浸泡出來，再進(jìn)行干燥保證雜質(zhì)充分去除。

有益效果：本發(fā)明采用的去離子水可充分的將去皮后的內(nèi)子表面可溶雜質(zhì)與內(nèi)子分離，避免在后續(xù)步驟中雜質(zhì)對(duì)提取的影響，保證提取過程無雜質(zhì)干擾，內(nèi)子中的油脂會(huì)影響活性蛋白的提取率，用脫脂劑將內(nèi)子粉末中的油脂充分脫離，脫脂效果優(yōu)異，使用脫脂劑獲得的內(nèi)子粉末蛋白含量高、脂肪充分去除，經(jīng)過濾風(fēng)干可使水分也降低且易篩，提升后續(xù)的酶解的效果。添加的活性劑可保證脫脂過程中內(nèi)子粉末中活性蛋白的活性，由于活性蛋白對(duì)環(huán)境的要求很高，常溫下高濃度的生物蛋白很容易失去活性，為確?；钚圆捎脙龈晒に?，本發(fā)明制備的脫脂劑顯著提高了印度辣木籽的油脂脫脂率，且脫脂率較高，從而提高了提取到的活性蛋白含量。

具體實(shí)施例

以下結(jié)合具體實(shí)施例作進(jìn)一步詳細(xì)描述：

實(shí)施例1：

提高印度辣木籽脫脂率的方法，制備步驟如下：

1）預(yù)處理：將辣木籽曬干，去皮，得到白色球狀的內(nèi)子，去離子水浸泡，干燥，超微粉碎，過篩；去離子水可充分的將去皮后的內(nèi)子表面可溶雜質(zhì)與內(nèi)子分離，避免在后續(xù)步驟中雜質(zhì)對(duì)提取的影響，保證提取過程無雜質(zhì)干擾。

2）脫脂：往內(nèi)子粉末中加入脫脂劑和活性劑，攪拌，靜置，過濾得塊狀粉末，再將粉末風(fēng)干后過篩；內(nèi)子中的油脂會(huì)影響活性蛋白的提取率故用脫脂劑對(duì)內(nèi)子粉末進(jìn)行脫脂，添加的活性劑可保證脫脂過程中內(nèi)子粉末中活性蛋白的活性。

3）提取活性蛋白：往過篩后的粉末中加入Tris—HCl緩沖液，攪拌，水浴加熱，加入酶解劑和助溶劑，繼續(xù)攪拌，離心取上清液，上清液中加入析出劑，靜置過濾得印度辣木籽中活性蛋白；將粉末中的活性蛋白充分酶解出來，提高活性蛋白的提取率。

4）凍干保存，由于活性蛋白對(duì)環(huán)境的要求很高，常溫下高濃度的生物蛋白很容易失去活性，為確?；钚圆捎脙龈晒に嚒?/p>

脫脂劑劑體積為內(nèi)子粉末2~4倍，可保證充分脫脂，攪拌靜置1~2天后用50~150目篩子過篩，便于后續(xù)步驟提取活性蛋白。

脫脂劑由以下成分及重量份組成：正己烷68~80份、硼氫化鉀5~15份和環(huán)烯醚萜3~8份。將內(nèi)子粉末中的油脂充分脫離，脫脂效果優(yōu)異，使用脫脂劑獲得的內(nèi)子粉末蛋白含量高、脂肪充分去除，經(jīng)過濾風(fēng)干可使水分也降低且易篩，提升后續(xù)的酶解的效果。

活性劑由以下成分及重量份組成：脂肪酸甲酯乙氧基化物8~15份、烷基酚聚氧乙烯醚2~10份、異丙醇2~10份、丁基二甘醇3~10份、氯化鈉1~4份、N-乙酰鄰氨基苯酸1~3份、三聚磷酸鈉2~4份。在脫脂的過程中肯會(huì)對(duì)蛋白的活性產(chǎn)生影響，加入活性劑保證蛋白活性，同時(shí)起到提升蛋白活性，效果優(yōu)異。

Tris-Hcl緩沖液pH值為8.6~8.9，濃度為1.3~1.6mol/L，pH值和濃度在此范圍緩沖液效果優(yōu)異。

步驟3中離心機(jī)轉(zhuǎn)速為3000~4000r/min，離心時(shí)間10~20min，進(jìn)行固液分離將雜質(zhì)去除便于活性蛋白的提取。

步驟1中內(nèi)子在去離子水中浸泡30~50min后置于干燥器內(nèi)干燥，充分將內(nèi)子表面雜質(zhì)浸泡出來，再進(jìn)行干燥保證雜質(zhì)充分去除。

實(shí)施例2：

提高印度辣木籽脫脂率的方法，制備步驟如下：

1）預(yù)處理：將辣木籽曬干，去皮，得到白色球狀的內(nèi)子，去離子水浸泡，干燥，超微粉碎，過篩；內(nèi)子在去離子水中浸泡優(yōu)選時(shí)間為50min后置于干燥器內(nèi)干燥，充分將內(nèi)子表面雜質(zhì)浸泡出來，再進(jìn)行干燥保證雜質(zhì)充分去除，去離子水可充分的將去皮后的內(nèi)子表面可溶雜質(zhì)與內(nèi)子分離，避免在后續(xù)步驟中雜質(zhì)對(duì)提取的影響，保證提取過程無雜質(zhì)干擾。

2）脫脂：往內(nèi)子粉末中加入脫脂劑和活性劑，攪拌，靜置，過濾得塊狀粉末，再將粉末風(fēng)干后過篩；內(nèi)子中的油脂會(huì)影響活性蛋白的提取率故用脫脂劑對(duì)內(nèi)子粉末進(jìn)行脫脂，添加的活性劑可保證脫脂過程中內(nèi)子粉末中活性蛋白的活性。

3）提取活性蛋白：往過篩后的粉末中加入Tris—HCl緩沖液，Tris-Hcl緩沖液pH值優(yōu)選為8.8，濃度優(yōu)選為1.5mol/L，pH值和濃度在此范圍緩沖液效果優(yōu)異。攪拌，水浴加熱，加入酶解劑和助溶劑，繼續(xù)攪拌，離心取上清液，放入離心機(jī)進(jìn)行離心，離心轉(zhuǎn)速優(yōu)選為4000r/min，離心時(shí)間優(yōu)選為15min，進(jìn)行固液分離將雜質(zhì)去除便于活性蛋白的提取。上清液中加入析出劑，靜置過濾得印度辣木籽中活性蛋白；將粉末中的活性蛋白充分酶解出來，提高活性蛋白的提取率。

4）凍干保存，由于活性蛋白對(duì)環(huán)境的要求很高，常溫下高濃度的生物蛋白很容易失去活性，為確?；钚圆捎脙龈晒に嚒?/p>

脫脂劑劑體積為內(nèi)子粉末優(yōu)選3倍，可保證充分脫脂，攪拌靜置優(yōu)選2天后優(yōu)選用80目篩子過篩，便于后續(xù)步驟提取活性蛋白。

脫脂劑由以下成分及重量份組成：優(yōu)選正己烷75份、優(yōu)選硼氫化鉀10份和優(yōu)選環(huán)烯醚萜7份。將內(nèi)子粉末中的油脂充分脫離，脫脂效果優(yōu)異，使用脫脂劑獲得的內(nèi)子粉末蛋白含量高、脂肪充分去除，經(jīng)過濾風(fēng)干可使水分也降低且易篩，提升后續(xù)的酶解的效果。

活性劑由以下成分及重量份組成：優(yōu)選脂肪酸甲酯乙氧基化物10份、優(yōu)選烷基酚聚氧乙烯醚8份、優(yōu)選異丙醇8份、優(yōu)選丁基二甘醇8份、優(yōu)選氯化鈉3份、優(yōu)選N-乙酰鄰氨基苯酸2份、優(yōu)選三聚磷酸鈉2份。在脫脂的過程中肯會(huì)對(duì)蛋白的活性產(chǎn)生影響，加入活性劑保證蛋白活性，同時(shí)起到提升蛋白活性，效果優(yōu)異。實(shí)驗(yàn)表明0.1-0.5重量份的磷脂酰膽堿在試劑體系中起到了耦合增效的效果。本發(fā)明采用的去離子水可充分的將去皮后的內(nèi)子表面可溶雜質(zhì)與內(nèi)子分離，避免在后續(xù)步驟中雜質(zhì)對(duì)提取的影響，保證提取過程無雜質(zhì)干擾，內(nèi)子中的油脂會(huì)影響活性蛋白的提取率，用脫脂劑將內(nèi)子粉末中的油脂充分脫離，脫脂效果優(yōu)異，使用脫脂劑獲得的內(nèi)子粉末蛋白含量高、脂肪充分去除，經(jīng)過濾風(fēng)干可使水分也降低且易篩，提升后續(xù)的酶解的效果。添加的活性劑可保證脫脂過程中內(nèi)子粉末中活性蛋白的活性，由于活性蛋白對(duì)環(huán)境的要求很高，常溫下高濃度的生物蛋白很容易失去活性，為確保活性采用凍干工藝，本發(fā)明制備的脫脂劑顯著提高了印度辣木籽的油脂脫脂率，且脫脂率較高，從而提高了提取到的活性蛋白含量。

以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并非對(duì)本發(fā)明作任何限制。凡是根據(jù)發(fā)明技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、變更以及等效變化，均仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍內(nèi)。