1.一種通用熒光探針,其特征在于:包括正鏈探針、負(fù)鏈探針以及特異性下游引物;其中,
所述正鏈探針包括由5’端至3’端依次相連的寡聚核苷酸正鏈序列、連接序列和特異性上游引物序列;
所述負(fù)鏈探針包括與寡聚核苷酸正鏈序列互補(bǔ)的寡聚核苷酸負(fù)鏈序列,所述寡聚核苷酸負(fù)鏈序列的5’端和3’端分別連接有熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán);
所述特異性上游引物序列和特異性下游引物與目標(biāo)基因的靶點(diǎn)序列相互互補(bǔ)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通用熒光探針,其特征在于:所述連接序列包括TA Box序列,所述TA Box序列為包括但不限于AA、TT、AAA、TTT、AT、TA、ATA、TAT、AAT、TAA、ATTT、TAAA、TATT、AATA、TTAT、TATA、ATAT、ATATA、TATATA、TTTAA、TATTT、TTATT、TTTAT、TAATT、TTAAT、AAATT、ATAAA、AATAA或AAATA的序列。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通用熒光探針,其特征在于:所述寡聚核苷酸正鏈序列與采用該通用熒光探針進(jìn)行檢測(cè)的目的生物的序列相比無(wú)同源性或序列相似度小于30%。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的通用熒光探針,其特征在于:所述目的生物為真核生物,所述寡聚核苷酸正鏈序列根據(jù)酵母菌基因組序列設(shè)計(jì)而成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通用熒光探針,其特征在于:所述寡聚核苷酸正鏈序列采用如SEQ ID NO:1-6中任一項(xiàng)所示的核苷酸序列,所述寡聚核苷酸負(fù)鏈序列采用如SEQ ID NO:7-12中所示的核苷酸序列。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通用熒光探針,其特征在于:所述熒光基團(tuán)包括但不限于FAM、TET、Texas Red、VIC或Cy5,所述淬滅基團(tuán)包括但不限于BHQ1或BHQ2。
7.一種采用根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)的通用熒光探針的檢測(cè)方法,其特征在于:包括以下步驟:
S1、提取樣品的基因組DNA;
S2、將通用熒光探針中正鏈探針、負(fù)鏈探針以及特異性下游引物按一定比例混合;
S3、配制PCR反應(yīng)體系,進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增;
S4、根據(jù)實(shí)時(shí)檢測(cè)的熒光信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行結(jié)果分析。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測(cè)方法,其特征在于:對(duì)于低豐度目標(biāo)樣品或者低回收率的核酸樣本,在步驟S1之后還包括采用上游引物和下游引物對(duì)樣品的基因組DNA預(yù)擴(kuò)增的步驟,然后再將通用熒光探針中正鏈探針、負(fù)鏈探針以及特異性下游引物按一定比例混合,然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增;對(duì)于高豐度目標(biāo)樣品或者高回收率的核酸樣本,直接將通用熒光探針中正鏈探針、負(fù)鏈探針以及特異性下游引物按一定比例混合,然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測(cè)方法,其特征在于:所述上游引物和下游引物、以及通用熒光探針均設(shè)置為多組以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)基因,或者,所述通用熒光探針設(shè)置為多組以檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)基因、或單個(gè)目標(biāo)基因的多個(gè)基因型。
10.一種根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)的通用熒光探針,在基因分型和突變基因檢測(cè)上的應(yīng)用。