本發(fā)明涉及生物檢疫，具體地說，涉及一種特異性識別弓形蟲表面抗原的抗體及其應(yīng)用，更具體的涉及一種可以特異性識別弓形蟲表面抗原gra1和gra7重組蛋白的抗體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、弓形蟲寄生于包含人及許多哺乳動物組織細胞在內(nèi)的幾乎所有的有核細胞內(nèi)，它是一種機會性致病原蟲，中間宿主的范圍很廣，如哺乳動物，鳥類等。其中，貓科動物為其終末宿主，它被感染時會排出來許多的帶有高傳染性的卵囊，并且在外界環(huán)境中持久存在。為了研制一種可快速檢測弓形蟲的診斷試劑，需要對抗原標(biāo)志物進行篩選。以往國內(nèi)外學(xué)者多用從感染動物中收集或經(jīng)組織、細胞培養(yǎng)的弓形蟲速殖體作為抗原，該方法雖然特異性好，但抗原純度較低，成分復(fù)雜，價格昂貴。而在原核表達系統(tǒng)中表達出的特異性目的蛋白產(chǎn)量高、操作簡單、費用低廉，成為眾多學(xué)者研究的對象。發(fā)明人在前期研究中獲得了一種弓形蟲表面抗原gra1和gra7重組蛋白，將gra1和gra7中的信號肽和c端疏水序列排除，截取可溶性表達部位的b細胞抗原表位信息，對表達這兩個基因抗原表位的重組基因進行重構(gòu)，可用于全血、血清、血漿及腦脊液等標(biāo)本中弓形蟲的檢測(cn110423270b)。

2、臨床中對弓形蟲的檢測常采用pcr、elisa等方法，但多因操作繁瑣，耗時長，費用高等缺點，不適用與基層的推廣，因此，尋找一種簡便、快速、靈敏度高的診斷方法勢在必行。乳膠凝集試驗(lat)作為國際上公認的弓形蟲檢測“金標(biāo)準”，具有準確率高、特異性好等優(yōu)點，但該方法敏感度較低，為此，急切需要建立快速、靈敏的弓形蟲的檢測方法。雖然現(xiàn)有技術(shù)中已經(jīng)有多種間接elisa檢測方法，但是由于缺乏針對抗原蛋白的單克隆抗體，而單克隆抗體的制備是建立優(yōu)良elisa檢測方法的基礎(chǔ)，缺少適當(dāng)?shù)膯慰寺】贵w會導(dǎo)致建立的檢測體系的準確度和靈敏度不理想。如何能夠獲得用于弓形蟲感染檢測的單克隆抗體，以及建立高準確度和靈敏度的檢測體系，是現(xiàn)有技術(shù)中亟待解決的問題。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、為了解決上述問題，本發(fā)明首先提供一種新型單克隆抗體，該單克隆抗體針對的是可以特異性識別弓形蟲表面抗原gra1和gra7重組蛋白，該單克隆抗體由雜交瘤細胞株sh12-s7分泌，可以特異、靈敏和穩(wěn)定地識別弓形蟲。

2、所述單克隆抗體的制備過程為：申請人在前期研究成果的基礎(chǔ)上，將gra1和gra7中的信號肽和c端疏水序列排除，截取可溶性表達部位的b細胞抗原表位信息，對表達這兩個基因抗原表位的重組基因進行重構(gòu)，進而在大腸桿菌中表達，提取純化rgra重組蛋白；用rgra重組蛋白免疫小鼠，抗體上升后，用獲得的免疫鼠脾淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合，獲得一株雜交瘤細胞；進一步用rgra重組蛋白篩選，獲得能穩(wěn)定分泌高親合力的弓形蟲單克隆抗體的雜交瘤細胞。申請人將該細胞株命名為雜交瘤細胞株sh12-s7，其中所述rgra重組蛋白的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

3、進一步的，本發(fā)明所述的單克隆抗體sh12-s7的輕鏈可變區(qū)包含lcdr1-3，所述lcdr1的氨基酸序列如seq?id?no:2所示，所述lcdr2的氨基酸序列如seq?id?no:3所示，以及所述lcdr3的氨基酸序列如seq?id?no:4所示，且所述單克隆抗體sh12-s7的重鏈可變區(qū)包含hcdr1-3，所述hcdr1的氨基酸序列如seq?id?no:5所示；所述hcdr2的氨基酸序列如seqid?no:6所示；以及所述hcdr3的氨基酸序列如seq?id?no:7所示。

4、進一步，所述單克隆抗體sh12-s7的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:8所示，且重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:9所示。

5、進一步，本申請?zhí)峁┝朔蛛x的一種或多種核酸分子，其編碼本申請所述的抗體。

6、進一步，本申請?zhí)峁┝艘环N或多種載體，其包含本申請所述的一種或多種核酸分子。

7、進一步，本申請?zhí)峁┝艘环N或多種細胞，其包含本申請所述的一種或多種核酸分子或本申請所述的一種或多種載體。

8、進一步，本申請?zhí)峁┝艘环N藥物組合物，其包含本申請所述的抗體、本申請所述的核酸分子、本申請所述的載體、本申請所述的細胞和/或本申請所述的融合蛋白，以及任選地藥學(xué)上可接受的佐劑。

9、進一步，本申請?zhí)峁┝怂龅目贵w，和/或，所述的融合蛋白在制備診斷、預(yù)防或治療疾病或病癥的藥物中的用途。其中所述疾病為弓形蟲感染相關(guān)疾病。

10、本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠從下文的詳細描述中容易地洞察到本申請的其它方面和優(yōu)勢。下文的詳細描述中僅顯示和描述了本申請的示例性實施方式。如本領(lǐng)域技術(shù)人員將認識到的，本申請的內(nèi)容使得本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠?qū)λ_的具體實施方式進行改動而不脫離本申請所涉及發(fā)明的精神和范圍。相應(yīng)地，本申請的附圖和說明書中的描述僅僅是示例性的，而非為限制性的。

11、本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點：

12、本發(fā)明是將gra1和gra7中的信號肽和c端疏水序列排除，截取可溶性表達部位的b細胞抗原表位信息，對表達這兩個基因抗原表位的重組基因進行重構(gòu)，進而在大腸桿菌中表達，提取純化重組蛋白rgra重組蛋白，該蛋白具有免疫原性，制備了針對重組蛋白rgra的單克隆抗體；利用western?blot檢測證實，本發(fā)明制備的單抗能特異性地識別弓形蟲的不同階段的感染，而對其他微生物的感染沒有反應(yīng)，具有極強的特異性。利用本發(fā)明制備的單抗可應(yīng)用在一種免疫熒光法上，該方法可檢測診斷宿主或者樣本(離體樣本、水樣、食品、污染物等)中的弓形蟲的存在形式。

技術(shù)特征：

1.一種可以特異性識別弓形蟲表面抗原的單克隆抗體，其特征在于，所述該單克隆抗體由雜交瘤細胞株sh12-s7分泌，可以特異、靈敏和穩(wěn)定地識別弓形蟲。

2.權(quán)利要求1所述的單克隆抗體，所述單克隆抗體sh12-s7的輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:8所示，且重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no:9所示。

3.一種核酸分子，其特征在于所述的核酸分子編碼權(quán)利要求1或2所述的抗體。

4.一種載體，其特征在于所述的載體包含權(quán)利要求3所述的核酸分子。

5.一種細胞，其特征在于所述細胞包含權(quán)利要求3所述的核酸分子或權(quán)利要求4所述的載體。

6.一種藥物組合物，其特征在于包含權(quán)利要求1或2所述的抗體、權(quán)利要求3所述的核酸分子、權(quán)利要求4所述的載體和/或權(quán)利要求5所述的細胞，以及任選地藥學(xué)上可接受的佐劑。

7.權(quán)利要求1或2所述的抗體、權(quán)利要求3所述的核酸分子、權(quán)利要求4所述的載體、權(quán)利要求5所述的細胞和/或權(quán)利要求6所述的藥物組合物在制備診斷、預(yù)防或治療疾病或病癥的藥物中的用途，其中所述疾病為弓形蟲感染相關(guān)疾病。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了一種特異性識別弓形蟲表面抗原的抗體及其應(yīng)用。本發(fā)明通過雜交瘤技術(shù)采用Balb/C小鼠脾細胞與SP2/0細胞融合建立雜交瘤細胞株。由上述細胞通過體外培養(yǎng)法、動物體內(nèi)誘生腹水法制備單克隆抗體；獲得了單克隆抗體SH12?S7。本發(fā)明為臨床和科研機構(gòu)提供了一種特異性識別弓形蟲表面抗原的抗體，它既可用于ELISA試驗對臨床樣品進行檢測，也可用于免疫組化試驗對病理標(biāo)本進行臨床診斷，還可為弓形蟲病研究部門提供便利的研究工具，在終末宿主感染的診斷、檢測中有廣泛的應(yīng)用價值，為弓形蟲的流行病學(xué)調(diào)查和防控效果評估提供了技術(shù)支撐。

技術(shù)研發(fā)人員：周志平,冒麗,劉冀
受保護的技術(shù)使用者：尼沃諾斯（蘇州）生物工程有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/5/15